一种环草石斛提取物及其抗糖尿病用途.pdf

《一种环草石斛提取物及其抗糖尿病用途.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种环草石斛提取物及其抗糖尿病用途.pdf（6页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710013103.5 (22)申请日 2017.01.09 (71)申请人 中山大学 地址 510006 广东省广州市番禺区广州大 学城外环东路132号 (72)发明人 王军 林永成 胡海燕 陈慧萍 (74)专利代理机构 广州市天河区倪律专利代理 事务所(普通合伙) 44348 代理人 倪小敏 张玉颖 (51)Int.Cl. A61K 36/8984(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A23L 33/105(2016.01) (54)发明名称 一种环。

2、草石斛提取物及其抗糖尿病用途 (57)摘要 本发明涉及一种环草石斛提取物及其抗糖 尿病用途。 所述环草石斛提取物是将环草石斛的 茎冷浸于丙酮水溶液中， 提取物经树脂分离纯化 得到。 经实验证实， 本发明的环草石斛提取物有 显著的降血糖活性， 可用于糖尿病的治疗和保 健。 本发明还提供包含本发明的环草石斛提取物 的抗糖尿病药物组合物和保健食品。 权利要求书1页 说明书4页 CN 106822599 A 2017.06.13 CN 106822599 A 1.一种环草石斛提取物， 所述提取物的提取方法包括： （a） 将粉碎后的环草石斛冷浸于50-80 v/v %丙酮水溶液中1-5天， 每天超声辅助。

3、1-2 次， 每次30-40分钟， 重复提取3-4次； （b） 将步骤 （a） 所得丙酮-水提取物浓缩， 用反相硅胶、 大孔吸附树脂或MCI树脂吸附， 再 以水、 70%、 80%、 90%、 100%甲醇或乙醇依次洗脱， 每个梯度溶剂用量为2-4个柱体积， 收集70% 90%甲醇或乙醇洗脱部分， 得环草石斛提取物。 2.根据权利要求1所述的环草石斛提取物， 其中步骤 （a） 中丙酮-水溶液的加入量为环 草石斛药材质量的1015倍。 3.根据权利要求1所述的环草石斛提取物， 其中步骤 （b） 中用反相硅胶吸附， 再以水、 70%、 80%、 90%、 100%甲醇依次洗脱。 4.根据权利要求1。

4、所述的环草石斛提取物， 其中步骤 （b） 中用大孔吸附树脂吸附， 再以 水、 70%、 80%、 90%、 100%乙醇依次洗脱。 5.根据权利要求1所述的环草石斛提取物， 其中步骤 （b） 中用MCI树脂吸附， 再以水、 70%、 80%、 90%、 100%甲醇依次洗脱。 6.一种抗糖尿病药物组合物， 其包含治疗有效量的权利要求1-5任一项所述的环草石 斛提取物及药学上可接受的载体。 7.一种抗糖尿病保健食品， 其包含有效量的权利要求1-5任一项所述的环草石斛提取 物及食品添加剂。 8.一种制备环草石斛提取物的方法， 其包括： （a） 将粉碎后的环草石斛冷浸于50-80%丙酮水溶液中1-5。

5、天， 每天超声辅助1-2次， 每次 30-40分钟； 重复提取3-4次； （b） 将步骤 （a） 所得丙酮-水提取物浓缩， 用反相硅胶、 大孔吸附树脂或MCI树脂吸附， 再 以70%、 80%、 90%、 100%甲醇或乙醇依次洗脱， 每个梯度溶剂用量为2-4个柱体积， 收集70% 90%甲醇洗脱部分， 得环草石斛提取物。 9.权利要求1-5任一项所述的环草石斛提取物在制备治疗糖尿病药物或保健食品中的 应用。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106822599 A 2 一种环草石斛提取物及其抗糖尿病用途 技术领域 0001 本发明属于药物技术领域， 具体地， 涉及一种环草石斛提取物及。

6、其在抗糖尿病药 品和食品中的应用。 背景技术 0002 中药治疗糖尿病在我国具有几千年的悠久历史， 有较西医毒性较小的优点。 石斛 在中医临床上常用于治疗热病津伤， 口干烦渴， 胃阴不足， 食少干呕， 病后虚热不退， 阴虚火 旺， 骨蒸劳热， 目暗不明， 筋骨痿软等症。 有报道石斛与多味中药共煎煮， 对降低II型糖尿病 患者的血糖、 血脂、 减轻胰岛素抵抗有确切的疗效。 环草石斛也叫小环钗石斛、 美花石斛、 粉 花石斛， 主要分布于贵州、 广西、 云南和广东等省， 自2000年起被中国药典收载， 是中医临床 上广泛应用的石斛药材的代表。 已有文献公开了提取自环草石斛的某些单体具有一定的 -葡萄。

7、糖苷酶抑制活性， 但是这些单体不是环草石斛的主要成分， 获得性不稳定， 而且体内 抗糖尿病效果也未能得到证实。 发明内容 0003 本发明的目的在于提供一种环草石斛提取物， 所述提取物的提取方法包括：（a） 将 粉碎后的环草石斛冷浸于50-80 v/v %丙酮水溶液中1-5天， 每天超声辅助1-2次， 每次30- 40分钟， 重复提取3-4次；（b） 将步骤 （a） 所得丙酮-水提取物浓缩， 用反相硅胶、 大孔吸附树 脂或MCI树脂吸附， 再以水、 70%、 80%、 90%、 100%甲醇或乙醇依次洗脱， 每个梯度溶剂用量为 2-4个柱体积， 收集70%90%甲醇或乙醇洗脱部分， 得环草石斛。

8、提取物。 0004 本发明另一方面提供一种抗糖尿病药物组合物， 其包含治疗有效量的本发明所述 的环草石斛提取物及药学上可接受的载体。 0005 本发明再一方面提供一种抗糖尿病保健食品， 其包含有效量的本发明所述的环草 石斛提取物及食品添加剂。 0006 本发明再一方面提供一种制备环草石斛提取物的方法， 其包括 （a） 将粉碎后的环 草石斛冷浸于50-80%丙酮水溶液中1-5天， 每天超声辅助1-2次， 每次30-40分钟， 重复提取 3-4次；（b） 将步骤 （a） 所得丙酮-水提取物浓缩， 用反相硅胶、 大孔吸附树脂或MCI树脂吸附， 再以70%、 80%、 90%、 100%甲醇或乙醇依次。

9、洗脱， 每个梯度溶剂用量为2-4个柱体积， 收集70% 90%甲醇洗脱部分， 得环草石斛提取物。 0007 本发明再一方面提供本发明所述的环草石斛提取物在制备治疗糖尿病药物或保 健食品中的应用。 0008 本发明的药物组合物或保健食品可制备成适当的剂型， 包括但不限于， 片剂、 胶囊 剂、 口服液、 软胶囊、 颗粒剂等固体制剂或液体制剂。 本发明的药物组合物以单位体重服用 量的形式使用。 使用量可根据患者年龄、 体重、 所治疗疾病的类型和严重程度等变化进行一 次或多次使用。 0009 在一些实施方式中， 本发明的环草石斛提取物的步骤 （a） 中丙酮-水溶液的加入量 说 明 书 1/4 页 3 。

10、CN 106822599 A 3 为环草石斛药材质量的1015倍 （质量比） 。 在一些实施方式中， 本发明的环草石斛提取物的 步骤 （a） 提取后， 过滤， 取滤液， 回收丙酮-水溶液， 浓缩得浸膏。 0010 在一些实施方式中， 本发明的环草石斛提取物的步骤 （b） 中用反相硅胶吸附， 再以 水、 70%、 80%、 90%、 100%甲醇依次洗脱。 反相硅胶是在正相硅胶 （普通硅胶， 官能团为OH） 的基 础上进行化学反应把OH取代为OR （R是碳氢链或称作碳链， CH） 的硅胶， 如C18反相硅胶， 可购 自日本富士。 0011 在一些实施方式中， 本发明的环草石斛提取物的步骤 （b）。

11、 中用大孔吸附树脂吸附， 再以水、 70%、 80%、 90%、 100%乙醇依次洗脱。 大孔吸附树脂是一类不含交换基团且有大孔结 构的高分子吸附树脂， 具有良好的大孔网状结构和较大的比表面积， 可以有选择地通过物 理吸附水溶液中的有机物， 可选自D101, D201， D301， HPD100、 HPD400、 HPD500、 HPD600、 AB-8 和NKA-9。 0012 在一些实施方式中， 本发明的环草石斛提取物的步骤 （b） 中用MCI树脂吸附， 再以 水、 70%、 80%、 90%、 100%甲醇依次洗脱。 MCI 树脂选自CHP20/P20、 CHP20/P30、 CHP20。

12、/P50、 CHP20/P70、 CHP20/P120、 CHP50/P30、 CHP50/P20、 CHP50/P30、 CSP50/P10、 CHP07/P120、 CMG20/P10、 CMG20/P30和CMG20/P150。 优选地， 所述MCI 树脂选自CHP20/P20、 CHP20/P30、 CHP20/P50、 CHP20/P70、 CHP20/P120、 CHP50/P30、 CHP50/P20、 CHP50/P30、 CSP50/P10和 CHP07/P120。 更优选地， 所述MCI 树脂为CHP20/P20、 CHP20/P30、 CHP20/P50、 CHP20/P。

13、70、 CHP20/P120中的一种。 所述MCI树脂可购自例如三菱化学株式会社 （日本， 东京） 。 0013 在一些实施方式中， 本发明的环草石斛为兰科植物环草石斛 （Dendrobium loddigesii Rolfe） 的茎， 分布于广东、 广西、 云南、 贵州、 海南， 优选云南产Dendrobium loddigesii Rolfe植物。 0014 本发明环草石斛提取物可以单独直接应用， 可以相互组合应用， 也可以与其他药 物包括植物提取物组成复方的形式使用。 经动物药效学实验证实， 本发明的环草石斛提取 物的具有明确的降血糖药效， 其显著促胰岛素分泌， 减轻胰岛素抵抗。 具体实。

14、施方式 0015 下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容， 但并不以此来限定本 发明， 根据本发明的实质性， 对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。 0016 实施例1 本发明环草石斛提取物的制备 取干燥的环草石斛 （Dendrobium loddigesii Rolfe） ， 粉碎， 称取1000g置于容器内， 用 V丙 酮： V水=8： 1的丙酮-水溶液冷浸3次， 第一次浸泡5天， 第二次、 第三次各浸泡1天， 浸泡期间 采用超声辅助提取， 每次采用10倍的丙酮-水溶液， 过滤， 取滤液， 回收丙酮， 并减压浓缩得 干燥浸膏55g。 将该环草石斛干燥浸膏用适量甲醇溶。

15、解， 将样品上柱体积为10cm40cm （i.d. ） C-18反相硅胶柱， 然后用水， 70%， 80%， 90%， 100%甲醇依次洗脱， 每个梯度用量为5个 柱体积， 收集70%、 80%甲醇洗脱液， 减压旋干得到干燥的环草石斛提取物18 g。 0017 实施例2 本发明环草石斛提取物的制备 环草石斛干燥浸膏制备同实施例1。 将环草石斛干燥浸膏用适量乙醇溶解， 将样品上至 柱体积为10cm 100cm （i.d. ） D101大孔吸附树脂吸附柱， 然后用水， 70%， 80%， 90%， 100%乙醇 依次洗脱， 每个梯度溶剂用量为3个柱体积， 收集70%90%乙醇洗脱部分， 得环草石斛。

16、提取 说 明 书 2/4 页 4 CN 106822599 A 4 物。 0018 实施例3本发明环草石斛提取物的制备 环草石斛干燥浸膏制备同实施例1。 将环草石斛干燥浸膏用适量甲醇溶解， 将样品上至 柱体积为10cm 80cm （i.d. ） MCI GEL树脂吸附柱， 然后用水， 70%， 80%， 90%， 100%甲醇依次洗 脱， 每个梯度溶剂用量为3个柱体积， 收集70%90%甲醇洗脱部分， 得环草石斛提取物。 0019 实施例4 药物组合物的制备 （片剂） 取实施例1的方法制得的环草石斛提取物60 mg、 乳糖130mg、 淀粉55mg、 硬脂酸镁5mg， 将环草石斛提取物、 乳糖。

17、、 淀粉混合， 用水湿润， 把湿润后的混合物过筛并干燥， 再过筛， 加 入硬脂酸镁， 然后将混合物压片， 每片重250mg， 环草石斛提取物含量60mg。 0020 实施例5 保健食品的制备 （胶囊剂） 取实施例2的方法制得的环草石斛提取物60 mg、 乳糖137mg、 硬脂酸镁3mg。 将环草石斛 提取物与助剂混合， 过筛， 均匀混合， 将得到的混合物装入硬明胶胶囊， 每个胶囊重200mg， 环草石斛提取物含量为60mg。 0021 实验例1 - 环草石斛提取物的抗糖尿病作用 实验原理： dbdb小鼠是典型的单基因突变导致2 型糖尿病的动物模型 （BKS.Cg- Dock7m +/+Lepr。

18、db/Nju） ， 该系小鼠由4 号常染色体瘦素受体( LEPR) 的Janus 蛋白酪氨 酸激酶( JAK) 基因位点发生突变衍生而来。 dbdb小鼠具肥胖， 高血糖、 高度胰岛素抵抗的 自发性II 型糖尿病特性， 在C57BLKS背景下， 能够观察到很多特征， 比如血糖不受控制的增 高， 产生胰岛素的beta细胞缺失， 外源胰岛素无法控制血糖浓度且糖异生作用酶活性升高。 在C57BLKS-Leprdb纯合子中可以观察到外周神经病变和心肌病变， 伤愈速度减慢， 代谢增 加等， 是常用的研究II 型糖尿病药物及机制的动物模型。 0022 实验方法： db /db 小鼠， 5周龄， 适应性饲养一。

19、周后， 随机分为3组： 模型对照组、 环 草石斛提取物组 （实施例1-3制备） (100m g /kg) 、 二甲双胍组( 130 mg /kg) ， 每组8 只， 另取C57小鼠作为正常对照组。 每天灌胃给药， 给药时间9: 00 10: 00 am， 每周给药7 天， 连续给药7周， 每7天检测小鼠体重及血糖值1次。 实验期间小鼠自由进食、 饮水。 0023 糖耐量测试方法： 在给药第6周， 各组小鼠空腹12 小时后， 灌胃给葡萄糖溶液 （2g/ kg） ， 分别测试小鼠给糖后0.5、 1、 1.5、 2h血糖值。 血糖测试方法： 采用试纸法。 血糖仪型号： ACCU-CHEK Perfo。

20、rma。 血糖试纸型号： ACCU-CHEK Performa。 0024 环草石斛提取物降血糖实验结果见表1， 实验结果表示为每周检测的小鼠血糖值 平均值， 其中给药组为环草石斛提取物组， 阳性药组为二甲双胍组， 模型组及正常对照组。 环草石斛提取物对dbdb小鼠糖耐量影响实验结果见表2， 实验结果表示为小鼠空腹12小时 血糖值平均值及口服葡萄糖液 （2g/kg） 后0.5、 1、 1.5、 2小时血糖值平均值， 其中给药组为环 草石斛提取物组， 阳性药组为二甲双胍组， 模型组及正常对照组。 0025 从表1、 表2实验结果可以得出， 环草石斛提取物有较好的体内降糖效果， 体内降糖 药效接近临床降糖药二甲双胍。 0026 表1 - 环草石斛提取物dbdb小鼠体内降血糖实验 说 明 书 3/4 页 5 CN 106822599 A 5 表2 - 环草石斛提取物对dbdb小鼠体糖耐量影响实验a a: 各实验组小鼠口服葡萄糖剂量为2 g/kg。 说 明 书 4/4 页 6 CN 106822599 A 6 。