书签 分享 收藏 举报 版权申诉 / 27

旋转异构酶活性抑制剂.pdf

  • 上传人:a3
  • 文档编号:8329046
  • 上传时间:2020-04-28
  • 格式:PDF
  • 页数:27
  • 大小:935.90KB
  • 摘要
    申请专利号:

    CN96199127.5

    申请日:

    19960826

    公开号:

    CN1205635A

    公开日:

    19990120

    当前法律状态:

    有效性:

    失效

    法律详情:

    IPC分类号:

    A61K31/445,A61K31/40

    主分类号:

    A61K31/445,A61K31/40

    申请人:

    吉尔福特药品有限公司

    发明人:

    J·P·斯泰纳,G·S·哈米尔顿

    地址:

    美国马里兰州

    优先权:

    08/551,026,08/645,149

    专利代理机构:

    中国专利代理(香港)有限公司

    代理人:

    卢新华;齐曾度

    PDF完整版下载: PDF下载
    内容摘要

    本发明涉及用对FKBP型亲免蛋白具有亲和力的特别配制的神经营养哌可酸衍生物作为与亲免蛋白有关的酶活性的抑制剂,特别是肽基-脯氨酸基异构酶或旋转异构酶活性的抑制剂,以刺激或促进神经元生长或再生。

    权利要求书

    1.治疗动物神经活性的方法,其中包括给动物使用有效量的下式的哌可酸衍生物及其药用盐,其中其中A是CH、O、NH或N-(C1-C4烷基);其中B和D独立地是Ar、(C5-C7)环烷基取代的(C1-C6)直链或支链烷基或链烯基、(C5-C7)环烯基取代的(C1-C6)直链或支链烷基或链烯基、或者Ar取代的(C1-C6)直链或支链烷基或链烯基,其中在每种情况下,直链或支链烷基或链烯基中的一个或两个碳原子可以以化学容许的取代方式被1-2个杂原子取代,杂原子选自氧原子、硫原子、SO及SO,或者其中Q是氢原子、(C1-C6)直链或支链烷基或(C1-C6)直链或支链链烯基;其中T是Ar或取代基在3位和4位的取代的5-7元环烷基,取代基独立地选自氢原子、羟基、O-(C1-C4)烷基或O-(C1-C4)链烯基及羰基;其中Ar选自1-萘基、2-萘基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基和苯基,单环及每个环为5或6元的二环杂环系统,其中在两个环之一或两个环上可含有总共1-4个杂原子,这些杂原子独立地选自氧原子、氮原子和硫原子;其中Ar可以含有一至三个取代基,这些取代基独立地选自氢原子、卤原子、羟基、羟甲基、硝基、CF3、三氟甲氧基、(C1-C6)直链或支链烷基或(C1-C6)直链或支链链烯基、O-(C14-C4)直链或支链烷基或O-(C1-C4)直链或支链链烯基、O-苄基、O-苯基、氨基、1,2-亚甲二氧基、羰基及苯基;其中L是氢原子或U;M是氧原子或CH-U,条件是如果L是氢原子,那么M是CH-U,或如果M是氧原子,则L是U;其中U是氢原子、O-(C1-C4)直链或支链烷基或O-(C1-C4)直链或支链链烯基、(C1-C6)直链或支链烷基或(C1-C6)直链或支链链烯基、(C5-C7)环烷基、取代有(C1-C4)直链或支链烷基或(C1-C4)直链或支链链烯基的(C5-C7)环烯基、[(C1-C4)烷基或(C1-C4)链烯基]-Ar或Ar(Ar如上所述);其中J是氢原子或C1或C2烷基或苄基;K是(C1-C4)直链或支链烷基、苄基或环己基乙基;或者其中J和K可以一起形成5-7元杂环,该杂环上可以含氧原子、硫原子、SO或SO;其中n是0-3;其中所述哌可酸衍生物对FKBP型亲免蛋白具有亲和力,所述给药刺激损伤的外周神经的生长或促进神经元再生,此FKBP型亲免蛋白具有旋转异构酶活性,且此哌可酸衍生物抑制所述亲免蛋白的旋转异构酶活性。 2.权利要求1的方法,其中神经元活性选自刺激损伤的神经元,促进神经元再生,防止神经退化和治疗神经紊乱。 3.权利要求2的方法,其中所述神经紊乱选自由物理损伤或疾病、脑物理损伤、脊髓物理损伤、与脑损伤有关的休克及与神经退化有关的神经紊乱引起的外周神经疾病。 4.权利要求3的方法,其中神经紊乱选自阿尔茨海默病和帕金森病。 5.权利要求1的方法,其中哌可酸衍生物化合物是免疫抑制或非免疫抑制剂。 6.治疗动物神经活性的方法,包括给动物使用有效量的、对FKBP型亲免蛋白具有亲和力的、权利要求1所述的哌可酸衍生物,该衍生物与有效量的神经营养因子结合使用,以刺激损伤的外周神经的生长或促进神经元再生,其中神经营养因子选自神经营养生长因子、脑来源的生长因子、神经胶质来源的生长因子、睫神经营养因子及神经营养蛋白-3,其中FKBP型亲免蛋白具有旋转异构酶活性而哌可酸衍生物抑制所述亲免蛋白的旋转异构酶活性。 7.权利要求6的方法,其中神经元活性选自刺激损伤的神经元,促进神经元再生,防止神经退化和治疗神经紊乱。 8.权利要求7的方法,其中所述神经紊乱选自由物理损伤或疾病、脑物理损伤、脊髓物理损伤、与脑损伤有关的休克及与神经退化有关的神经紊乱引起的外周神经疾病。 9.权利要求6的方法,其中神经紊乱选自阿尔茨海默病和帕金森病。 10.权利要求6的方法,其中哌可酸衍生物化合物是免疫抑制或非免疫抑制剂。 11.刺激损伤的外周神经生长的方法,包括给损伤的外周神经使用有效量的、对FKBP型亲免蛋白具有亲和力的、权利要求1所述的哌可酸衍生物,以刺激或促进损伤的外周神经的生长,其中FKBP型亲免蛋白具有旋转异构酶活性而哌可酸衍生物抑制所述亲免蛋白的旋转异构酶活性。 12.权利要求11的方法,其中进一步包括使用神经营养因子刺激或促进损伤的外周神经的生长,其中神经营养因子选自神经营养生长因子、脑来源的生长因子、神经胶质来源的生长因子、睫神经营养因子及神经营养蛋白-3。 13.权利要求11的方法,其中哌可酸衍生物化合物是免疫抑制或非免疫抑制剂。 14.促进动物神经元再生和生长的方法,包括给动物使用有效量的、对FKBP型亲免蛋白具有亲和力的、权利要求1所述的哌可酸衍生物,以促进神经元再生,其中FKBP型亲免蛋白具有旋转异构酶活性而哌可酸衍生物抑制所述亲免蛋白的旋转异构酶活性。 15.权利要求14的方法,其中进一步包括使用有效量的神经营养因子促进神经元再生,其中神经营养因子选自神经营养生长因子、脑来源的生长因子、神经胶质来源的生长因子、睫神经营养因子及神经营养蛋白-3。 16.权利要求14的方法,其中哌可酸衍生物化合物是免疫抑制或非免疫抑制剂。 17.防止动物神经退化的方法,包括给动物使用有效量的、对FKBP型亲免蛋白具有亲和力的、权利要求1所述的哌可酸衍生物,以防止神经退化,其中FKBP型亲免蛋白具有旋转异构酶活性而哌可酸衍生物抑制所述亲免蛋白的旋转异构酶活性。 18.权利要求17的方法,其中进一步包括使用有效量的神经营养因子防止神经退化,其中神经营养因子选自神经营养生长因子、脑来源的生长因子、神经胶质来源的生长因子、睫神经营养因子及神经营养蛋白-3。 19.权利要求17的方法,其中哌可酸衍生物化合物是免疫抑制或非免疫抑制剂。 20.权利要求1所述的治疗神经活性的方法,其中包括给动物使用有效量的下式哌可酸衍生物及其药用盐,其中A是O、NH或N-(C1-C4烷基);其中B氢原子、CHL-Ar、(C1-C6)直链或支链烷基、(C1-C6)直链或支链烷基或链烯基、(C5-C7)环烷基、(C5-C7)环烯基或者Ar取代的(C1-C6)直链或支链烷基或链烯基,或者其中L和Q独立地是氢原子、(C1-C6)直链或支链烷基或(C1-C6)直链或支链链烯基;其中T是Ar或取代基在3位和4位的取代的环己基,取代基独立地选自氢原子、羟基、O-(C1-C4)烷基或O-(C1-C4)链烯基及羰基;其中Ar选自1-萘基、2-萘基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基和苯基,其上有1至3个取代基,这些取代基独立地选自氢原子、卤原子、羟基、硝基、CF3、(C1-C6)直链或支链烷基或(C1-C6)直链或支链链烯基、O-(C1-C4)烷基或O-(C1-C4)链烯基、O-苄基、O-苯基、氨基和苯基;其中D是氢原子或U;E是氧原子或CH-U,条件是如果D是氢原子,那么E是CH-U,或如果E是氧原子,则D是U;其中U是氢原子、O-(C1-C4)直链或支链烷基或O-(C1-C4)直链或支链链烯基、(C1-C6)直链或支链烷基或(C1-C6)直链或支链链烯基、(C5-C7)环烷基、取代有(C1-C4)直链或支链烷基或(C1-C4)直链或支链链烯基的(C5-C7)环烯基、2-吲哚基、3-吲哚基、[(C1-C4)烷基或(C1-C4)链烯基]-Ar或Ar(Ar如上所述);其中J是氢原子或C1或C2烷基或苄基;K是(C1-C4)直链或支链烷基、苄基或环己基乙基;或者其中J和K可以一起形成5-7元杂环,该杂环上可以含氧原子、硫原子、SO或SO。

    说明书

    

    相关申请

    本申请是美国专利申请08/551026(1995年10月31)的部分继 续申请。

    发明背景 1.发明领域

    本发明涉及将神经营养FK506结合蛋白(FKBP)抑制剂化合物 用作与亲免蛋白有关的酶活性的抑制剂,这些化合物对FKBP型的亲 免蛋白具有亲和性,具体地讲,本发明涉及肽基脯氨酰基异构酶或旋 转异构酶活性的抑制剂。 2.先有技术

    术语亲免蛋白指作为主要的免疫抑制药物(环孢菌素A(CsA)、 FK506和雷帕霉素)受体的一些蛋白质。已知的亲免蛋白类型有亲环 蛋白和FK506结合蛋白,如FKBP。环孢菌素A结合亲环蛋白而FK506 和雷帕霉素结合FKBP。这些亲免蛋白-药物复合物干预特别是免疫 系统和神经系统的多种细胞间信号传导系统。

    已知亲免蛋白具有肽基-脯氨酰基异构酶(PPIase)或旋转异构 酶活性。已确定旋转异构酶活性在亲免蛋白的顺反异构体互变中起催 化作用。

    起初亲免蛋白是在免疫系统中发现并研究的。本领域技术人员原 来推断亲免蛋白旋转异构酶活性的抑制导致T细胞增殖的抑制,于是 引起免疫抑制药物如环孢菌素A、FK506和雷帕霉素表现出的免疫抑 制作用。进一步研究表明旋转异构酶活性的抑制,其本身不足以发挥 免疫抑制活性。相反,免疫抑制药物和亲免蛋白的复合制剂似乎产生 免疫抑制作用。已表明亲免蛋白-药物复合物的作用方式是作用于三 元靶蛋白。对于FKBP-FK506和FKBP-CsA来说,药物-亲免蛋白 复合物结合钙调磷酸酶,抑制导致T细胞增殖的T细胞受体信号。同 样,雷帕霉素和FKBP的复合物与RAFT1/FRAP蛋白作用并抑制IL-2 受体产生的信号。

    已发现在中枢神经系统中存在高浓度的亲免蛋白。在中枢神经系 统中亲免蛋白浓度比免疫系统中的高10-50倍。在神经组织中,亲 免蛋白似乎影响一氧化氮的合成、神经递质的释放及神经元突起的延 伸。

    FK506也能增强生长相关蛋白-43(GAP43)的磷酸化作用。GAP43 参与神经元突起的延伸,且其磷酸化作用似乎增强此活性。因此,用 PC12细胞已检测了FK506、雷帕霉素和环孢菌素在神经元突起延伸中 的作用。PC12细胞是神经元样的不死性细胞系,它们受神经生长因 子(NGF)刺激时延伸轴突。

    令人惊奇的是,已发现皮摩尔浓度的免疫抑制剂如FK506和雷帕 霉素刺激PC12细胞和感觉神经元即背根神经节细胞(DRGs)中轴突 的突起。在全身动物试验中,已表明面部神经损伤后FK506刺激神经 再生并导致动物坐骨神经损伤的功能恢复。

    更具体地讲,已发现对FKBP具高亲和性的药物是强旋转异构酶 抑制剂并表现出神经营养作用。Snyder等,“亲免蛋白及神经系统”, Nature Medicine,第1卷,No.1,1995年1月,32-37页。这些 发现表明可使用免疫抑制剂治疗多种外周神经疾病并促进中枢神经 系统(CNS)中的神经元再生。研究表明神经退化性紊乱如阿尔茨海 默病和帕金森病会因在这些紊乱中受侵袭的特定神经元群是由特异 性神经营养物质的损失或利用率降低而发病。

    已确定了中枢神经系统中作用于特定神经元群的若干神经营养 因子。例如,已假设阿尔茨海默病是由于神经生长因子(NGF)的降 低或损失。因而,也建议用外源性神经生长因子或其它神经营养蛋白 治疗SDAT患者以增加正在退化的神经元群的存活时间,其它神经营 养蛋白如脑来源生长因子、神经胶质来源的生长因子、睫神经营养因 子及神经营养蛋白-3。

    这些蛋白在多种神经性疾病中的临床应用,受到对靶神经系统给 药困难及大分子蛋白质的生物利用度低的阻碍。相反,建议神经营养 活性的免疫抑制药物相对较小并具有优异的生物利用度和特异性。但 是,当长期给药时,免疫抑制药物具有一些可能的严重副作用,包括 肾毒性,如肾小球过滤作用的损害及不可逆性间质纤维化(Kopp等, 1991,美国肾病学联合会杂志1∶162);神经缺损,如不自主震颤, 或者非特异性脑绞痛如部位不定的头痛(De Groen等,1987,N.Engl. J.Med.317∶861);以及伴有由此产生的并发症的血管性高血压 (Kahan等,1989新英格兰医学杂志321∶1725)。

    本发明提供了用于治疗与神经退化有关的神经紊乱(包括帕金森 病和阿尔茨海默病)的非免疫抑制性的FKBP抑制剂化合物,其中含 有小分子FKBP旋转异构酶抑制剂,它们在神经元修复可以被促进的 多种神经疾病状态中,极强地加强轴突突起、促进神经元生长和再 生。这些疾病包括由物理损伤或疾病如糖尿病引起的外周神经损伤、 中枢神经系统(脊髓和脑)的物理损害、与休克有关的脑损害。

    发明概述

    本发明涉及将神经营养FKBP抑制剂化合物用作与亲免蛋白有关 的酶活性的抑制剂,这些化合物对FKBP型的亲免蛋白具有亲和性, 具体地讲,本发明涉及肽基脯氨酰基异构酶或旋转异构酶活性的抑制 剂。

    本发明优选的实施方案是调节动物神经活性的方法,包括给动物 使用有效量的具有FKBP型亲免蛋白亲和性的FKBP抑制剂,以刺激损 伤的外周神经的生长或促进神经元再生,其中FKBP型亲免蛋白表现 有旋转异构酶活性而哌可酸衍生物抑制所述亲免蛋白的旋转异构酶 活性。

    本发明的另一个优选的实施方案是治疗动物神经紊乱的方法,包 括给动物使用有效量的具有FKBP型亲免蛋白的FKBP抑制剂和有效量 的神经营养因子以刺激损伤的外周神经的生长或促进神经元再生,该 神经营养因子选自神经生长因子、脑来源的生长因子、神经胶质来源 的生长因子、睫神经营养因子和神经营养蛋白-3,其中FKBP型亲免 蛋白表现有旋转异构酶活性而哌可酸衍生物抑制所述亲免蛋白的旋 转异构酶活性。

    本发明的另一个优选的实施方案是刺激损伤的外周神经生长的 方法,包括给损伤的外周神经使用有效量的具有FKBP型亲免蛋白亲 和性的FKBP抑制剂化合物,以刺激或促进损伤的外周神经的生长, 其中FKBP型亲免蛋白表现有旋转异构酶活性而哌可酸衍生物抑制所 述亲免蛋白的旋转异构酶活性。

    本发明的另一个优选的实施方案是刺激损伤的外周神经生长的 方法,包括给损伤的外周神经使用有效量的具有FKBP型亲免蛋白亲 和性的FKBP抑制剂化合物,以刺激损伤的外周神经的生长,其中FKBP 型亲免蛋白表现有旋转异构酶活性而哌可酸衍生物抑制所述亲免蛋 白的旋转异构酶活性。

    本发明的另一个优选的实施方案是促进动物神经元再生和生长 的方法,包括给动物使用有效量的具有FKBP型亲免蛋白亲和性的 FKBP抑制剂化合物,以促进神经元再生,其中FKBP型亲免蛋白表现 有旋转异构酶活性而哌可酸衍生物抑制所述亲免蛋白的旋转异构酶 活性。

    本发明的另一优选的实施方案是防止动物神经退化的方法,包括 给动物使用有效量的具有FKBP型亲免蛋白亲和性的FKBP抑制剂化合 物以防止神经退化,其中FKBP型亲免蛋白表现有旋转异构酶活性而 哌可酸衍生物抑制所述亲免蛋白的旋转异构酶活性。

    附图简述

    图1是实施例15的量效曲线。图1给出了用6-10个不同的浓 度的数据得到典型的量效曲线,从其中计算ED50值。

    图2是实施例22的量效曲线。图2给出了用6-10个不同的浓 度的数据得到典型的量效曲线,从其中计算ED50值。

    图3是感觉神经元对药物营养作用的反应的典型显微照片。图3 显示了在培养的感觉神经元中实施例21的量效曲线。

    图4是感觉神经元对药物营养作用的反应的典型显微照片。图4 显示了在培养的感觉神经元中300pM的实施例15对轴突突起的作 用。

    图5是感觉神经元对药物营养作用的反应的典型显微照片。图5 显示了在培养的感觉神经元中1nM的实施例22对轴突突起的作用。

    发明详述

    本发明的新的神经营养FKBP抑制剂化合物对FK506结合蛋白如 FKBP-12具有亲和力。当本发明的神经营养化合物结合FKBP时,已 发现它们抑制结合蛋白的脯氨酰基肽基顺反异构酶活性或旋转异构 酶活性并出人意料地刺激轴突生长。

    本发明的化合物可以以与无机酸或有机酸或碱形成的盐的形式 使用。这样的酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、 苯甲酸盐、苯磺酸盐、酸式硫酸盐、丁酸盐、枸橼酸盐、樟脑酸盐、 樟脑磺酸盐、环戊基丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基磺酸盐、乙磺酸 盐、富马酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸 盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、马来 酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐、果胶 酸盐、丙酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一 烷酸盐。碱加成盐包括铵盐、碱金属盐如钠盐和钾盐、碱土金属盐如 钙盐和镁盐,与有机碱形成的盐如二环己胺盐、N-甲基-D-葡糖胺盐, 及与氨基酸如精氨酸、赖氨酸等形成的盐。同样,碱性含氮基团可以 被如下试剂季胺化,如低级烷基卤代物,如甲基、乙基、丙基和丁基 的氯化物、溴化物及碘化物;二烷基硫酸盐如二甲基、二乙基、二丁 基和二戊基硫酸盐;长链卤代物如癸基、十二烷基、十四烷基和硬脂 基氯化物、溴化物和碘化物;芳烷基卤代物如苄基和苯乙基溴化物; 等等。于是,得到水或油溶性或分散性产品。

    本发明的神经营养化合物可定期给进行神经紊乱治疗或因其它 原因需要刺激神经元再生和生长的患者使用,如用于与神经退化有关 的多种外周神经营养和神经紊乱。本发明的化合物也可给人以外的动 物使用以治疗哺乳动物的多种神经紊乱。

    本发明的新化合物是旋转异构酶的强力抑制剂并具有优异的神 经营养活性。此活性对刺激损伤的神经元、促进神经元再生、防止神 经退化及治疗已知与神经元退化及外周神经疾病有关的若干神经紊 乱是有益的。可治疗的神经紊乱包括但不限于三叉神经痛、舌咽神经 痛、贝尔麻痹、重症肌无力、肌营养不良、渐进性肌萎缩、渐进性延 髓遗传性肌萎缩、突出的、破裂的或下垂的椎间盘综合征、颈脊关节 强硬、神经丛紊乱、胸廓出口破坏综合征、如由铅、达普宋、蜱引起 的外周神经疾病、卟啉症或林-巴二氏多神经综合征、阿尔茨海默病 及帕金森病。

    为此,本发明的化合物可以口服、非肠道、喷雾吸入、局部、直 肠、鼻内、口腔、阴道或通过埋植储药器给药,其制剂中含有常规无 毒药用载体、辅剂和赋形剂。本文中术语非肠道给药包括皮下、静脉、 肌肉、腹膜内、鞘内注射或输液技术。

    为了对靶中枢神经系统有疗效,当外周给药时,亲免蛋白-药物 复合物应容易地通过血脑屏障。不能通过血脑屏障的本发明的化合物 可通过心室内有效地给药。

    药物组合物可以是灭菌注射制剂,例如,含水或含油灭菌注射混 悬液。此混悬液可以按照本领域已知技术使用适宜的分散剂或湿润剂 及混悬剂配制。此灭菌注射制剂也可以是存在于无毒非肠道给药用稀 释剂或溶剂(如作为溶液,在1,3-丁二醇中)的灭菌注射溶液或混 悬液。在可接受的载体和溶剂中,可以使用水、Ringer溶液及等渗 氯化钠溶液。此外,灭菌的固定油可方便地用作溶剂或混悬基质。为 此,可使用任何刺激性小的固定油,包括合成的单或二甘油酯。脂肪 酸如油酸及其甘油酯衍生物可用于注射剂中,橄榄油或蓖麻油,特别 是以其聚氧乙烯化的形式。这些油溶液或混悬液中也可含有长链醇稀 释剂或分散剂。

    这些化合物可以以胶囊、片剂或含水混悬液或溶液等形式口服。 对于口服用片剂,通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。一般也加入 润滑剂,如硬脂酸镁。口服给药的胶囊形式中,可使用的稀释剂包括 乳糖和干燥的玉米淀粉。当需要口服含水混悬液时,活性成分与乳化 剂和混悬剂结合。如果需要,可加入某些甜味剂和/或调味剂和/或着 色剂。

    本发明的化合物也可以栓剂的形式直肠给药。这些组合物可以通 过将药物与适宜的无刺激赋形剂混合,该赋形剂在室温是固体而在直 肠温度熔化以释放药物。这样的物质包括可可油、蜂蜡和聚乙二醇 类。

    本发明的化合物也可局部给药,特别是当所治疗的发病部位或器 官可容易地通过局部给药接近时,包括眼部、皮肤或近端肠道的神经 紊乱。适宜的局部给药制剂对这些领域的每个技术人员来说是容易制 备的。

    为了眼科使用,这些化合物可以在等渗的、pH适当的灭菌盐水, 配制成微粒化的混悬液,或优选配制成等渗的、pH适当的灭菌盐水 溶液,其中含或不含防腐剂如氯苄烷胺。或者为了眼科使用,这些化 合物可以在膏如凡士林中配制。

    为了皮肤局部使用,这些化合物可以在适宜的膏中配制,其中化 合物悬浮或溶解在,例如,一种或多种下列物质的混合物中:矿物油、 液体石蜡、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蜡和 水。或者,这些化合物可以在适宜的洗剂或霜中配制,其中所含化合 物悬浮或溶解在,例如,一种或多种下列物质的混合物中:矿物油、 脱水山梨醇单硬脂酸酯、多乙氧基醚60、鲸腊酯、十六烷基硬脂醇、 2-辛基十二醇、苄醇和水。

    为了近端肠道局部使用,可以配制成直肠栓剂(见上)或使用的 灌肠剂。

    在治疗损伤疾病中,活性化合物组份剂量水平为约0.1mg至约 10000mg是有利的,优选剂量为约0.1mg至约1000mg。可以与载体 物质混合制成单剂量形式的活性组份的量可根据接受治疗的患者及 特定的给药方式变化。

    但是,应理解的是,对任何特定患者的特定剂量应依赖于多种因 素,包括所用特定化合物的活性、年龄、体重、总的健康状况、性别、 饮食、给药时间、排泄途径、联合用药及所治疗特定疾病的严重程度 以及给药形式。

    这些化合物可以与其它神经营养试剂如神经营养生长因子 (NGF)、神经胶质来源的生长因子、脑来源的生长因子、睫神经营 养因子及神经营养蛋白-3。其它神经营养药物的剂量可依赖于上述 因素及药物组合的神经营养作用。

    方法和步骤 在小鸡背根神经节中由亲免蛋白的非免疫抑制配体引起神经延伸

    在以前的研究中,已观察到在鼠背根神经节的外植物中免疫抑制 药物的神经营养作用,FK506浓度低至1皮摩尔也能显著加强神经突 起(Lyons等,1994)。在此鼠神经节中,即使在NGF不存在时也观 察到了FK506的神经营养作用。在现在的工作中,使用了小鸡背根神 经节,它们是较早用来研究神经突起的物质。不存在NGF时,我们观 察到亲免蛋白配体药物的最小作用。小鸡细胞比PC-12细胞对NGF 更敏感,故我们使用0.1ng/ml NGF产生最小的轴突突起并显示亲免 蛋白配体的神经营养作用(图5)。

    突起数量的最大增加,其长度和分支在亲免蛋白配体和NGF (100ng/ml)的最有效浓度非常近似。随着不同药物的浓度逐渐增 加,观察到较大数量的突起、更延伸的分支和较长的个体突起。

    我们通过检测肽基-脯氨酰基异构酶活性的抑制和3H-FK506 结合重组FKBP-12的抑制(表1)评价药物结合FKBP-12的能力。 在刺激轴突突起及抑制旋转异构酶活性的能力之间存在显著的平行 性。

    在药物结合亲免蛋白、抑制其旋转异构酶活性和刺激轴突突起的 能力之间存在非常紧密的联系,说明旋转异构酶活性的抑制是药物的 神经营养作用的直接原因。药物在刺激轴突突起和结合亲免蛋白方面 的超常高的能力使其与任何其它可引起神经营养作用的手段极不相 同。

    由于这些药物超常的能力及旋转异构酶抑制和神经营养作用之 间的紧密联系,我们推断旋转异构酶抑制也参与神经营养作用。已报 道了一些蛋白是亲免蛋白的旋转异构酶活性的底物,包括胶原 (Steinmann等,1991)和转移酶(transferring)(Lodish and King, 1991)。最近,已报道高度纯化的ryanodine受体和IP-3受体(主 要细胞间钙离子通道)制剂,存在于与FKBP-12的复合物中。由这 些复合物中解离FKBP-12引起钙离子通道变得“泄漏”(Cameron 等,1995)。钙离子流参与轴突的延伸,故IP-3受体和ryanodine 受体可能参与药物的神经营养作用。因为药物与IP-3受体和 ryanodine受体在FKBP-12上结合同样的位点,人们可推断这些药 物从FKBP-12上置换了通道。尚未有报道说明这些钙离子通道与亲 环蛋白的相互作用,故此模型不能解释环孢菌素A的神经营养作用。

    本文中,在极低的浓度进行药物的神经营养作用的研究,这表明 其较如脑来源的生长因子、神经营养蛋白-3及神经营养生长因子等 神经营养蛋白能力更强。

    下列实施例举例说明了本发明一些的实施方案,并不是以此来限 制本发明。所有聚合物分子量是平均分子量。除非另外说明所有百分 比是基于最后给药系统或制剂的治疗百分比,而所有总量等于100% (重量)。

    可用于本发明目的的示例性一般FKBP抑制剂化合物包括: 及其药用盐,

    其中A是CH2、O、NH或N-(C1-C4烷基);

    其中B和D独立地是Ar、(C5-C7)环烷基取代的(C1-C6)直 链或支链烷基或链烯基、(C5-C7)环烯基取代的(C1-C6)直链或支 链烷基或链烯基、或者Ar取代的(C1-C6)直链或支链烷基或链烯基, 其中在每种情况下,直链或支链烷基或链烯基中的一个或两个碳原子 可以以化学容许的取代方式被1-2个杂原子取代,杂原子选自氧原 子、硫原子、SO及SO2,或者

    其中Q是氢原子、(C1-C6)直链或支链烷基或(C1-C6)直链 或支链链烯基;

    其中T是Ar或取代基在3位和4位的取代的5-7元环烷基,取 代基独立地选自氢原子、羟基、O-(C1-C4)烷基或O-(C1-C4)链烯基 及羰基;

    其中Ar选自1-萘基、2-萘基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、 3-噻吩基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基和苯基,单环及每个环为 5或6元的二环杂环系统,其中在两个环之一或两个环上可含有总共 1-4个杂原子,这些杂原子独立地选自氧原子、氮原子和硫原子; 其中Ar可以含有一至三个取代基,这些取代基独立地选自氢原子、 卤原子、羟基、羟甲基、硝基、CF3、三氟甲氧基、(C1-C6)直链 或支链烷基或(C1-C6)直链或支链链烯基、O-(C1-C4)直链或支链 烷基或O-(C1-C4)直链或支链链烯基、O-苄基、O-苯基、氨基、1,2- 亚甲二氧基、羰基及苯基;

    其中L是氢原子或U;M是氧原子或CH-U,条件是如果L是氢原 子,那么M是CH-U,或如果M是氧原子,则L是U;

    其中U是氢原子、O-(C1-C4)直链或支链烷基或O-(C1-C4)直链 或支链链烯基、(C1-C6)直链或支链烷基或(C1-C6)直链或支链 链烯基、(C5-C7)环烷基、取代有(C1-C4)直链或支链烷基或(C1 -C4)直链或支链链烯基的(C5-C7)环烯基、[(C1-C4)烷基或(C1-C4) 链烯基]-Ar或Ar(Ar如上所述);

    其中J是氢原子或C1或C2烷基或苄基;K是(C1-C4)直链或 支链烷基、苄基或环己基乙基;或者其中J和K可以一起形成5-7 元杂环,该杂环上可以含氧原子、硫原子、SO或SO2;而

    其中n是0-3。

    在1位(式I)的立体化学构型是(R)或(S),优选(S)。2 位的立体化学构型是(R)或(S)。

    可以用于本发明目的的示例性优选FKBP抑制剂化合物描述于美 国专利US5330993,其中内容引入本文作为参考。化合物的实例包括 具有下式的化合物及其药用盐:

    其中A是O、NH或N-(C1-C4烷基);

    其中B氢原子、CHL-Ar、(C1-C6)直链或支链烷基、(C1-C6) 直链或支链烷基或链烯基、(C5-C7)环烷基、(C5-C7)环烯基或 者Ar取代的(C1-C6)直链或支链烷基或链烯基,或者

    其中L和Q独立地是氢原子、(C1-C6)直链或支链烷基或 (C1-C6)直链或支链链烯基;

    其中T是Ar或取代基在3位和4位的取代的环己基,取代基独 立地选自氢原子、羟基、O-(C1-C4)烷基或O-(C1-C4)链烯基及羰基;

    其中Ar选自1-萘基、2-萘基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噻吩基、 2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基和苯基,其上有1至3个取代基,这 些取代基独立地选自氢原子、卤原子、羟基、硝基、CF3、(C1-C6) 直链或支链烷基或(C1-C6)直链或支链链烯基、O-(C1-C4)烷基或 O-(C1-C4)链烯基、O-苄基、O-苯基、氨基和苯基;

    其中D是氢原子或U;E是氧原子或CH-U,条件是如果D是氢原 子,那么E是CH-U,或如果E是氧原子,则D是U;

    其中U是氢原子、O-(C1-C4)直链或支链烷基或O-(C1-C4)直链 或支链链烯基、(C1-C6)直链或支链烷基或(C1-C6)直链或支链 链烯基、(C5-C7)环烷基、取代有(C1-C4)直链或支链烷基或(C1 -C4)直链或支链链烯基的(C5-C7)环烯基、2-吲哚基、3-吲哚基、 [(C1-C4)烷基或(C1-C4)链烯基]-Ar或Ar(Ar如上所述);

    其中J是氢原子或C1或C2烷基或苄基;K是(C1-C4)直链或 支链烷基、苄基或环已基乙基;或者其中J和K可以一起形成5-7 元杂环,该杂环上可以含氧原子、硫原子、SO或SO2。

    在1位(式Ⅰ)的立体化学构型是(R)或(S),优选(S)。

    K1试验步骤

    通过文献(Harding,M.W.等,自然 341∶758-760(1989);Holt 等,美国化学联合会杂志115∶9923-9938)描述的已知方法评价本文 中使用的化合物对肽基-脯氨酰基异构酶(旋转异构酶)活性的抑 制。这些值以明显的K′s获得并在表Ⅰ中列出了多种化合物的值。结 合在模型底物N-琥珀酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基苯胺上的丙氨 酸-脯氨酸的顺反异构作用,在本领域技术人员熟知的糜蛋白酶偶合 试验中用分光光度检测方法监控,由反式底物上释放对硝基苯胺。加 入不同浓度的抑制剂测定对此反应的抑制,以一级速率常数中的变化 分析这些数据作为抑制剂浓度的功能,得到表观K值。

    在塑料透明小容器中,加入950ml冰冷的试验缓冲液(25mM HEPES,pH7.8,100mM NaCl)、10ml FKBP(2.5mM,在10ml Tris-ClpH7.5、100mM NaCl、1mM二硫苏糖醇中)、25ml糜蛋白酶(50mg/ml, 在1mM HCl中)和10ml存在于二甲基亚砜中的不同浓度的试验化合 物。加入5ml底物(N-琥珀酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基苯胺, 5mg/ml,在2.35mM LiCl的三氟乙醇溶液中)引发反应。

    用分光光度计监控90秒在390nm的吸收率与时间并用吸收率与 时间数据确定速率常数。

    这些试验的数据列于表Ⅰ和Ⅳ中。

    表Ⅰ 序号     B     D     n     K     1     苄基     苯基     2     1.5μM     2     3-苯基丙基     苯基     2     3  4-(4-甲氧苯基)丁基     苯基     2     4     4-苯基丁基     苯基     2     0.35μM     5     苯乙基     苯基     2     1.1μM     6     4-环己基丁基     苯基     2     0.4μM     7     苄基     甲氧基     2     80μM     8   4-环己基丁基     甲氧基     2     6μM     9     3-环己基丙基     甲氧基     2     20μM     10   3-环戊基丙基     甲氧基     2     35μM     11     苄基     2-呋喃基     2     3μM     12   4-环己基丁基 3,4,5-三甲氧基苯基     2     0.04μM     13   3-苯氧基苄基 3,4,5-三甲氧基苯基     2     0.018μM     14     4-苯基丁基 3,4,5-三甲氧基苯基     2     0.019μM     15  3-(3-吲哚基)丙基 3,4,5-三甲氧基苯基     2     0.017μM     16  4-(4-甲氧苯基)丁基 3,4,5-三甲氧基苯基     2     0.013μM

    表Ⅱ 序号   n   m     B     D     L   17   2   0   3-苯丙基     3-(3-吡啶基)丙基     苯基   18   2   0   3-苯丙基   3-(2-吡啶基)丙基     苯基   19   2   0   3-苯丙基   2-(4-甲氧苯基)乙基     苯基   20   2   0   3-苯丙基     3-苯丙基     苯基   21   2   0   3-苯丙基     3-苯丙基 3,4,5-三甲氧基苯基   22   2   0   3-苯丙基     3-(2-吡啶基) 3,4,5-三甲氧基苯基   23   2   0   3-苯丙基     3-(2-吡啶基) 3,4,5-三甲氧基苯基   24   2   0   3-苯丙基   3-(4-甲氧苯基)丙基 3,4,5-三甲氧基苯基   25   2   0   3-苯丙基   3-(3-吡啶基)丙基   3-异丙氧基苯基

    小鸡背根神经节培养物和轴突突起

    由妊娠10天的小鸡胚胎分离背根神经节。在37℃,5%二氧化 碳环境中,在薄层Matrigel包被的12孔板中培养整个神经节移植 物,培养基含Liebovitz加高葡糖基质,其中补充有2mM葡糖胺和 10%胎牛血清,并还含有10μM胞嘧啶β-D阿糖胞苷(Ara C)。24 小时后,用不同浓度的神经生长因子、亲免蛋白配体或NGF加药物的 结合形式处理DRGs。药物处理48小时后,用Zeiss Axiovert倒置 显微镜在相差或Hoffman Modulation相差下看到神经节。制作这些 移植物的显微照片,并定量测定轴突的突起。轴突比DRG直径长被记 为阳性,每个试验条件都定量测定轴突的总数。每孔培养3或4个 DRGs,且每种处理进行同样的两份。用6-10个不同浓度的数值作量 效曲线,由其计算ED50值。典型的反应曲线示于图1和图2,分别是 实施例15和22。

    这些试验的数据列于表Ⅲ和Ⅳ。对药物的营养作用的反应的 感觉神经元的典型显微照片见图3-5。图3显示了实施例21对神经 元培养物的剂量依赖性神经营养作用。图4显示了由300pM量的实施 例15引起的对轴突突起的刺激,而图5显示了由1nM实施例20引起 的对轴突突起的刺激。

    表Ⅲ

    小鸡DRG中轴突的突起     实施例     ED50,nM 在DRG培养物中轴突的突起     1     25-100     2     10-20     3     0.500     4     25-100     5     25-100     6     10-20     7     >10000     8     >10000     9     >10000     10     >10000     11     1000     12     0.031     13     0.180     14     1-5     15     0.050     16     0.030

    表Ⅳ

    生物结果 化合物 K,nM ED50,nM DRG培养物中轴突的突起 17 56 1-5 18 50 0.063 19 270 10-20 20 ... 0.0044 21 1.0 0.61 22 3.0 0.95 23 1.0 25 24 3.0 0.50 25 2.0 0.30

    本发明描述如上,同样的形式可以有多种变化形式是显而易见 的。这样的变化是不背离本发明的实质和范围,且所有这样的变化形 式将包括在下面的权利要求的范围内。

    关 键  词:
    旋转 异构酶 活性 抑制剂
      专利查询网所有文档均是用户自行上传分享,仅供网友学习交流,未经上传用户书面授权,请勿作他用。
    0条评论

    还可以输入200字符

    暂无评论,赶快抢占沙发吧。

    关于本文
    本文标题:旋转异构酶活性抑制剂.pdf
    链接地址:https://www.zhuanlichaxun.net/p-8329046.html
    关于我们 - 网站声明 - 网站地图 - 资源地图 - 友情链接 - 网站客服 - 联系我们

    copyright@ 2017-2018 zhuanlichaxun.net网站版权所有
    经营许可证编号:粤ICP备2021068784号-1