丹参酮ⅡA作为抗人星形胶质细胞瘤药的应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710350209.4 (22)申请日 2017.05.18 (71)申请人 遵义市第一人民医院 地址 563002 贵州省遵义市汇川区凤凰路 98号 (72)发明人 罗勇 冯飞 戴支凯 杨小艳 侯化化 李园园 施尚鹏 马庆庆 (74)专利代理机构 遵义浩嘉知识产权代理事务 所(普通合伙) 52112 代理人 张利秋 (51)Int.Cl. A61K 31/58(2006.01) A61K 36/258(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61K 3。

2、1/4375(2006.01) (54)发明名称 丹参酮A作为抗人星形胶质细胞瘤药的应 用 (57)摘要 丹参酮A作为抗人星形胶质细胞瘤药的应 用涉及医疗卫生领域， 所述药中的主要的成分为 丹参酮A。 通过抑制人星形胶质瘤细胞U251体 外实验和大鼠星形胶质瘤细胞C6生长的作用实 验， 显示丹参酮A作用于U-118MG细胞后， 随丹 参酮A浓度的增加和作用时间的延长， U-118MG 细胞的存活率逐渐降低。 丹参酮A作用48h后， U-118MG细胞内Caspase 3 mRNA和蛋白的表达高 于阴性对照组； 10、 30和100M丹参酮A组的细 胞凋亡率分别为(9.81.8)、 (16.52。

3、.1) 和(23.22.8)， 均高于阴性对照组的(2.8 1.1)(P0.05)。 实验表明， 丹参酮A作为抗人 星形胶质细胞瘤， 作用明确， 对人星形胶质细胞 瘤具有很好的抑制作用。 权利要求书1页 说明书6页 附图3页 CN 107088197 A 2017.08.25 CN 107088197 A 1.丹参酮A作为抗人星形胶质细胞瘤药的应用， 其特征在于： 抗人星形胶质细胞瘤药 中， 主要的成分为丹参酮A。 2.根据权利要求1所述的丹参酮A作为抗人星形胶质细胞瘤药的应用， 其特征在于： 所述抗人星形胶质细胞瘤药， 是中药有效提取物组方， 组方成分还包括丹参酮A、 苦参素、 红参总提取物。

4、。 3.根据权利要求2所述的丹参酮A作为抗人星形胶质细胞瘤药的应用， 其特征在于： 所述的抗人星形胶质细胞瘤药， 丹参酮A、 苦参素、 红参总提取物的质量比分别为1.00: (0.05-0.20)： (0.05-0.20)。 4.根据权利要求3所述的丹参酮A作为抗人星形胶质细胞瘤药的应用， 其特征在于： 所述的抗人星形胶质细胞瘤药， 丹参酮A、 苦参素、 红参总提取物的质量比分别为1.00: 0.12： 0.12。 5.根据权利要求1-4任一权利要求所述的丹参酮A作为抗人星形胶质细胞瘤药的应 用， 其特征在于： 丹参酮A、 苦参素是市售商品， 所述的红参总提取物的制备步骤如下： a、 将红参进。

5、行浸泡， 然后用乙醇水溶液进行回流提取， 将得到的提取液离心处理， 取上 清液， 得到红参总提取液； 工艺参数为： 红参的浸泡时间10-80min， 回流时间为40-130min， 回流次数为1-4次， 乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为60-90， 红参和乙醇水溶液的重 量份数比为1 (5-18)； b、 采用大孔吸附树脂柱对步骤a中的总提取液进行吸附， 先用水洗脱水溶性杂质， 再用 乙醇水溶液洗脱大孔吸附树脂柱， 收集得到红参洗脱液； 工艺参数为： 洗脱水溶性杂质时， 乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量小于10； 洗脱大孔吸附树脂柱时， 乙醇水溶液中乙醇 的体积百分含量为30-90； c、 将步。

6、骤b得到的洗脱液在45-55进行干燥， 得到红参总提取物。 6.根据权利要求1-4任一权利要求所述的丹参酮A作为抗人星形胶质细胞瘤药的应 用， 其特征在于： 所述的药加入药学上可接受的载体， 载体包括药学领域常规的稀释剂、 赋 形剂、 填充剂、 粘合剂、 湿润剂、 崩解剂、 吸收促进剂、 表面活性剂、 吸附载体或润滑剂等， 制 成最终的药物形态为片剂、 颗粒剂、 胶囊剂、 滴丸剂、 注射剂和输液剂等。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 107088197 A 2 丹参酮A作为抗人星形胶质细胞瘤药的应用 技术领域 0001 本发明涉及医疗卫生领域， 具体涉及丹参酮A作为可应用于人体的星形。

7、胶质细 胞瘤药物的应用。 背景技术 0002 近年来， 随着工作压力大、 环境、 食物等各类内外因素， 肿瘤的患者群体数量一直 呈高速增长的趋势。 现有治疗方法， 多采用手术切除、 放/化疗进行术后干预， 直到杀死肿瘤 细胞， 但手术对人体的损伤极大， 而放/化疗的过程不仅会杀死肿瘤细胞， 还同时会杀死人 体健康细胞， 从而使患者体质虚弱免疫力下降， 多数患者体内的肿瘤细胞又会死灰复燃， 所 以纯西医的方法治疗肿瘤存在极大的隐患， 而治疗过程也极为痛苦。 0003 随着对普通民众对中医药认识的逐步加深， 且中药的毒副作用小(合理配伍的情 况下， 甚至可以做到没有副作用)， 越来越多的研究者开始。

8、研究中医药治疗肿瘤， 但中医采 用辩证的方法根据人体的不同症状施药治疗， 不同的肿瘤， 药方不同， 药方中君药的也不 同， 所以就出现同一味药， 不同病症的药方中作用不同。 例如： 甘草， 如果是在咳嗽的患者药 方中， 甘草的作用是润肺止咳的效用， 但在多数含有药性较烈的药方中， 甘草起的作用是缓 和药性的功效。 中医辩证的过程对医生的要求较高， 如果辩证错误， 甚至可能导致对人体的 极大的损伤。 0004 为解决西药规范化但对人体有害， 中药需一人一方， 推广有困难的技术问题， 所以 才有了将中药有效成分提取物提取， 可以直达病灶， 可在不考虑患者本身体质的前提下， 利 用西医的规范化治疗方。

9、法， 既避免现有技术放/化疗手段的对身体的损伤， 同时还保证了治 疗的效果。 将中医和西医结合起来， 采用西医的快速精准诊断、 标准化给药方式、 中药提取 物的有效成分区分， 合力构成中药提取物精准、 有效治疗各病征的。 0005 从西医的角度来讲， 肿瘤属于局部组织细胞增生所形成的新生物(neogrowth)， 因 为这种新生物多呈占位性块状突起， 也称赘生物。 但同样是人， 为什么有人患肺肿瘤， 但有 人却是患肝肿瘤， 还有的人是患脑瘤， 在西医里是没有原因， 把坏细胞杀死(可能过程中， 把 好的细胞也一并杀死了)， 而中医则讲究究竟是人体的什么地方出了问题， 而针对该问题采 用什么样的药。

10、物， 具体到中西医结合时， 就是药物中哪些有效组分是起作用的， 选用有效成 分， 忽略对人身体起其它作用的成分， 并且应用西医的规范、 标准化治疗应用于绝大多数的 患者， 并且取得较好的治疗效果。 而具体采用哪些中药的哪些有效成分应用于哪种病症， 就 是创新点所在。 0006 星形胶质细胞瘤是中枢星形系统最常见、 预后较差的原发性恶性肿瘤， 发病原因 复杂， 西医临床治疗常采用以手术为主、 辅以放疗、 化疗、 生物免疫治疗等措施的综合治疗 方案， 但胶质瘤细胞具有生长迅速、 无边界浸润、 易复发等特点， 多数患者治疗后的生存期 仅约为1年。 目前， 星形胶质细胞瘤的临床治疗及预后尚不令人满意，。

11、 寻找有效的化疗药物、 并研究其作用机制， 对于其临床治疗具有重要的意义。 0007 从中医的角度讲， 脑肿瘤隶属于 “头痛” 、“头风” 等范畴。 脑瘤的发病原因概括为内 说 明 书 1/6 页 3 CN 107088197 A 3 外因两种。 即内为素质因素或易感因素， 外为诱发因素或为助长因素。 脑肿瘤形成的素质因 素主要为肾虚不充， 髓海失养， 肝肾同源， 肾虚肝亦虚， 肝风内动， 邪毒上扰清窍， 痰蒙浊闭， 阻塞脑络， 血气凝滞， 形成脑瘤： 中医认为，“头为诸阳之会” 总司人之神明， 最不容邪气相 犯。 若内伤七情(怒、 喜、 忧、 思、 悲、 恐、 惊)， 或感受六淫邪毒， 使脏。

12、腑功能失调， 加之外邪侵 入， 直中脑窍或邪气客于上焦， 气化不利， 经脉不通， 瘀血、 瘀浊内停， 也可积聚留结成块， 发 为脑瘤。 0008 丹参酮A(TanshinoneA， 丹参酮A)是从中药丹参中分离出的脂溶性二萜醌 类化合物， 为桔红色针状结晶(EtOAc)， 熔点为209-210。 易溶于乙醇， 丙酮， 乙醚， 苯等有 机溶剂， 微溶于水， 该物质别名： 丹参醌， 丹参醌A， 具有抗炎、 抗氧化、 心血管保护、 星形 系统保护、 护肝、 抑制病毒复制等活性。 发明内容 0009 为解决现有技术采用西医治疗的人星形胶质细胞瘤手术损伤、 放/化疗效果不佳， 治疗后普遍生存时间短的技术。

13、问题， 本发明提供丹参酮A作为抗星形胶质细胞瘤药物的 应用， 可以大大提高星形胶质细胞瘤的抑制作用， 提高患者的有治疗有效率、 治愈率， 延长 患者的生存时间， 减少治愈后的复发率。 0010 丹参酮A作为抗人星形胶质细胞瘤药的应用， 其特征在于： 抗人星形胶质细胞瘤 药中， 主要的成分为丹参酮A。 0011 本发明丹参酮A作为抗人星形胶质细胞瘤药的应用， 通过抑制人星形胶质瘤细 胞U251体外实验和大鼠星形胶质瘤细胞C6生长的作用实验， 显示丹参酮A作用于U-118MG 细胞后， 随丹参酮A浓度的增加和作用时间的延长， U-118MG细胞的存活率逐渐降低。 丹参 酮A作用48h后， U-11。

14、8MG细胞内Caspase 3mRNA和蛋白的表达高于阴性对照组； 10、 30和 100 M丹参酮A组的细胞凋亡率分别为(9.81.8)、 (16.52.1)和(23.22.8)， 均高于阴性对照组的(2.81.1)， (P0.05)。 这些结果表明， 丹参酮A可通过诱导细胞 凋亡， 从而起抗U-118MG的作用。 丹参酮A作为抗人星形胶质细胞瘤作用明确， 对人星形胶 质细胞瘤具有很好的抑制作用。 附图说明 0012 图1、 丹参酮对u-118mg细胞生长的影响 0013 图2、 丹参酮A对u-118mg细胞凋亡的影响 0014 图3、 丹参酮A对U-118MG细胞钙离子浓度(Ca2+i)的。

15、影响 0015 图4、 丹参酮A降低U-118MG细胞的线粒体膜电位 0016 图5、 丹参酮A对U-118MG细胞内CytC、 MT1E和Caspase 3 mRNA表达的影响 0017 图6、 丹参酮A对U-118MG细胞CytC、 MT1E和Caspase 3蛋白表达的影响 具体实施方式 0018 下面结合附图对本发明作进一步的说明： 0019 丹参酮A作为抗人星形胶质细胞瘤药的应用， 其特征在于： 抗人星形胶质细胞瘤 药中， 主要的成分为丹参酮A。 说 明 书 2/6 页 4 CN 107088197 A 4 0020 进一步的， 所述抗人星形胶质细胞瘤药， 属于中药有效提取物组方， 。

16、组方成分包括 丹参酮A、 苦参素、 红参总提取物。 0021 苦参素是从豆科槐属植物苦参中提取分离出的一种生物碱， 以氧化苦参碱为主， 并含有少量氧化槐果碱。 氧化苦参碱是苦参素升白作用的主要有效成分。 具有清热利湿、 利 尿解毒、 改善肝炎症状、 体征、 退黄、 降酶作用。 能抑制乙型肝炎病毒的复制、 诱生内源性干 扰素、 保护肝细胞、 改善肝功能、 抗肝纤维化、 升高白细胞及抗肿瘤。 适用于治疗慢性乙型病 毒性肝炎， 以及肿瘤放疗、 化疗引起的白细胞低下和其他原因引起的白细胞减少症。 本品为 我国研制和生产的抗病毒药， 在体内能诱生干扰素 ， 能使慢性乙肝病人血清HBeAg和(或) HBV。

17、 DNA阴转， 血精丙氨酸氨基转移酶下降， 临床疗效与干扰素类似。 红参特有的生理活性 物质G-Rh2， Panaxytriol， maltol等。 G-Rh2、 Panaxytriol有抑制癌细胞增长的作用， maltol 具有抗氧化作用。 干燥后的红参颜色红润， 气味浓香。 红参较白参相比组织致密、 坚固、 储藏 性良好。 红参俱有补气、 滋阴、 益血、 生津、 强心、 健胃和镇静等作用。 这些作用红参与白参没 有严格的区别， 但在补虚方面一般认为红参强于白参。 久服红参可以提高人体免疫力、 抗疲 劳、 抗辐射、 抑制肿瘤、 调整人体内分泌系统。 红参适合于老人、 久病体虚者， 红参具有火。

18、大、 劲足、 功效强之特点， 是阴盛阳虚者的首选补品， 医药上治疗虚脱或强补多用红参。 0022 鉴于星形胶质细胞瘤属于脑瘤的一种， 而其中医的原因是 “肾虚不充， 髓海失养， 肝肾同源， 肾虚肝亦虚” 的中医辩症理论， 除对星形胶质细胞瘤的直接作用的丹参酮A， 在 组方中加入护肝养肝的苦参素、 补气的红参， 可逐渐改善患者体质， 对星形胶质细胞瘤的治 疗起 “釜底抽薪” 的治疗效果， 0023 进一步的， 所述的抗人星形胶质细胞瘤药， 丹参酮A、 苦参素、 红参总提取物的质 量比分别为1.00:(0.05-0.20)： (0.05-0.20)。 0024 进一步的， 所述的抗人星形胶质细胞瘤。

19、药， 丹参酮A、 苦参素、 红参总提取物的质 量比分别为1.00:0.12： 0.12。 0025 进一步的， 丹参酮A、 苦参素是市售商品， 所述的红参总提取物的制备步骤如下： 0026 a、 将红参进行浸泡， 然后用乙醇水溶液进行回流提取， 将得到的提取液离心处理， 取上清液， 得到红参总提取液； 工艺参数为： 红参的浸泡时间10-80min， 回流时间为40- 130min， 回流次数为1-4次， 乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为60-90， 红参和乙醇水溶 液的重量份数比为1 (5-18)； 0027 b、 采用大孔吸附树脂柱对步骤a中的总提取液进行吸附， 先用水洗脱水溶性杂质， 再用。

20、乙醇水溶液洗脱大孔吸附树脂柱， 收集得到红参洗脱液； 工艺参数为： 洗脱水溶性杂质 时， 乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量小于10； 洗脱大孔吸附树脂柱时， 乙醇水溶液中乙 醇的体积百分含量为30-90； 0028 c、 将步骤b得到的洗脱液在45-55进行干燥， 得到红参总提取物。 0029 进一步的， 本发明治疗的药物， 在需要时， 可加入药学上可接受的载体， 载体包括 药学领域常规的稀释剂、 赋形剂、 填充剂、 粘合剂、 湿润剂、 崩解剂、 吸收促进剂、 表面活性 剂、 吸附载体或润滑剂等， 制成最终的药物形态为片剂、 颗粒剂、 胶囊剂、 滴丸剂、 注射剂、 输 液剂等。 0030 一、 。

21、体外抗肿瘤活性实验： 0031 实验目的： 确定选取丹参酮A作用于人星形胶质瘤细胞主要药物成分时的作用 说 明 书 3/6 页 5 CN 107088197 A 5 原理、 机制及效果。 0032 1材料和方法 0033 1.1实验材料 0034 人星形胶质瘤细胞U-118MG由中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心提 供。 RPMI-1640培养基为Gibco产品。 胎牛血清购自杭州四季青生物工程材料有限公司。 丹参 酮A由中国药品生物制品检定所提供。 5氟尿嘧啶(FU)： 上海旭东海普药业有限责任公司。 胰蛋白酶、 MTT、 Fura-2/AM、 罗丹明123(R123)为Sigma公司。

22、产品； Annex V-FITC/PI细胞凋亡 试剂盒购自广州BD生物科技有限公司。 Trizol、 RT-PCR试剂盒、 POWERGREEN PCR Master Mix为宝生物(大连)有限公司产品。 引物由生工生物工程(上海)有限公司合成。 抗 体购自Santa Cruz Biotechnology， INC。 主要仪器有450型酶联免疫检测仪(美国BIO-RAD 公司)、 Epics-XL II型流式细胞仪(美国Beckman Coulter公司)、 荧光分光光度计(Cary Eclipse， Australia)、 TU1810型紫外可见分光光度计(北京普析仪器有限责任公司)、 Ma。

23、stercycler Gradient Cycler(Eppendorf AG， Germany)、 iQ5Multicolor Real-Time PCR Detection System(BioRad Laboratories， Inc.， USA)。 0035 1.2方法 0036 1.2.1丹参酮A对U-118MG细胞生长的影响 0037 应用含10胎牛血清的RPMI-1640培养基培养U-118MG细胞。 实验分为阴性对照组 (Control， 加入RPMI-1640)、 阳性对照组(FU， 100 M， 应用RPMI1640配制)和丹参酮A组 (0.01 M-100 M， RPMI。

24、 1640配制)。 将U-118MG细胞接种于96孔板， 细胞悬液的浓度为每毫升 5104个细胞， 每孔180 L， 次日加药(每孔20 L)。 药物分别作用24、 48和72h后， 每孔加入20 L 5mg/mL的MTT溶液， 继续培养4h。 吸上清液， 每孔加入150 L的二甲基亚砜(DMSO)。 于酶标 仪570nm波长测定吸光度(A)值。 计算细胞的存活率， 细胞的存活率实验组平均A值/阴性 对照组平均A值100。 0038 1.2.2丹参酮A对U-118MG细胞凋亡的影响 0039 实验分为阴性对照组、 10 M、 30 M和100 M的丹参酮A组。 收集药物作用48h后的 细胞， 。

25、洗涤2次， 再用的PBS溶液重悬细胞。 加入Annexin V、 25、 避光孵育15min后， 再加入 碘化丙啶、 25避光孵育40min。 最后加入适量的PBS， 充分混匀后， 应用流式细胞仪检测。 0040 1.2.3细胞内钙的测定 0041 实验分组及药物作用时间同细胞凋亡实验。 收集药物作用后的细胞， 用含0.2牛 血清白蛋白的缓冲液重悬细胞， 加入终浓度为5 molL-1的fura2-AM， 避光孵育30min。 用 缓冲液洗3遍， 再用含0.2牛血清白蛋白的缓冲液重悬细胞， 并调整细胞浓度为每毫升5 105个细胞， 再37避光孵育20min。 荧光分光光度计测定F340/F380。

26、比率。 0042 1.2.4测定U-118MG细胞线粒体膜电位 0043 收集U-118MG细胞， 应用D-Hanks液重悬后， 加入终浓度为500nM的R123溶液， 避光 孵育30min。 之后用D-Hanks洗3遍， 再用D-Hanks液重悬细胞， 细胞浓度为每毫升为4105个 细胞。 设定荧光分光光度计激发波长为488nm， 发射波长为535nm， 待荧光强度稳定后， 加入 丹参酮A， 测定不同浓度丹参酮A组的荧光强度。 0044 1.2.5U-118MG细胞内细胞色素C(CytC)、 金属硫蛋白1E(MT1E)和Caspase3mRNA的 表达 说 明 书 4/6 页 6 CN 10。

27、7088197 A 6 0045 收集药物作用48h后的细胞， 加入Trizol收集总RNA， 经过氯仿萃取、 异丙醇沉淀和 75乙醇洗涤后， 加入DEPC水溶解RNA。 采用紫外分光光度计测定各组的A260/A280， 计算 RNA的含量， 并将各组的RNA样品配成50ng/ l的浓度。 按试剂盒说明进行RT(37， 15min； 85 ， 5s)和PCR(95 10min； 95 15s， 60 1min， 40个循环)。 以GAPDH为内参基因， 根据测 得的CT值计算目的基因的相对表达量。 0046 1.2.6U-118MG细胞内CytC、 MT1E和Caspase 3蛋白的检测 00。

28、47 收集药物作用48h后的U-118MG细胞， 经RIPA裂解、 高速离心后， 取上清液， 采用 Bradford法测量蛋白浓度。 取等量蛋白， 进行SDS聚丙烯酰胺电泳、 转膜和封闭后， 一抗孵育 过夜， 二抗室温下孵育， ECL法显色， 凝胶图像分析系统照相。 0048 1.2.7统计学分析 0049 采用spss18.0统计软件进行分析， 计量资料用xs表示， 组间比较采用单因素方 差分析， 以P0.05为差异有统计学意义。 0050 二、 体外抗肿瘤活性实验结果： 0051 2.1丹参酮A抑制U-118MG细胞生长 0052 丹参酮A对U-118MG细胞生长的影响如图1所示。 结果显。

29、示， 随丹参酮A浓度的 增加， U-118MG细胞的存活率逐渐下降， 其中10、 100 M的丹参酮A作用U-118MG细胞24h、 48h和72h后， 细胞存活率均低于阴性对照组(P0.01)。 0053 2.2丹参酮A诱导U-118MG细胞凋亡 0054 流式细胞仪检测显示(图2)， 阴性对照组U-118MG细胞的凋亡百分率为(2.8 1.1)； 10、 30和100 M的丹参酮A作用U-118MG细胞48h后的细胞凋亡率分别为(9.8 1.8)、 (16.52.1)和(23.22.8)， 均高于阴性对照组(P0.05)。 0055 2.3丹参酮A对U-118MG细胞钙离子浓度(Ca2+i。

30、)的影响 0056 荧光分光光度计检测显示(图3)。 阴性对照组U-118MG细胞的F340/F380比率为 2.570.06， U-118MG细胞经10、 30和100 M的丹参酮IIA作用后的F340/F380比率分别为 2.990.11、 3.220.08和3.260.09， 均高于阴性对照组(P0.01)。 0057 2.4丹参酮A降低U-118MG细胞的线粒体膜电位 0058 荧光分光光度计检测U-118MG细胞线粒体膜电位的结果(图4)显示， 阴性对照组的 荧光强度为98.610.57， 10、 30和100 M作用U-118MG细胞后的荧光强度分别为98.71 0.56、 95.。

31、330.53和92.730.59； 其中， 30和100 M作用U-118MG细胞后的荧光强度均低于 阴性对照组(P0.01)。 0059 2.5丹参酮A对U-118MG细胞内CytC、 MT1E和Caspase 3mRNA表达的影响 0060 RT-PCR检测显示(图5)， 丹参酮A作用U-118MG细胞后， 随丹参酮A浓度的增加， U-118MG细胞内CytC和Caspase 3mRNA的含量逐渐增加， 各浓度丹参酮IIA组的mRNA的含量 均高于阴性对照组(P0.05)； 30和100 M的丹参酮A组的细胞内MT1E的水平低于阴性对照 组(P0.05)。 0061 MT的结构在生物进化中。

32、高度保守， 有四种异构体， MT- 和MT-在大多数哺乳动物 的内脏器官中广泛存在， 尤以肝、 肾细胞为主， 而且参加其功能调节。 MT-分布主要限于中 枢星形系统， 主要分布于星性胶质细胞(集中于细胞体和突起中)， 其次为星形元细胞， 也有 报道称少量分布于生殖细胞、 小肠、 胃、 肾和嗅觉皮质细胞中。 MT-主要分布于皮肤、 舌、 消 说 明 书 5/6 页 7 CN 107088197 A 7 化道等器官的角质细胞和复层鳞状上皮细胞中。 0062 2.6丹参酮A对U-118MG细胞CytC、 MT1E和Caspase 3蛋白表达的影响 0063 Western blot检测显示(图6)，。

33、 丹参酮A作用U-118MG细胞48h后， 随药物浓度的 增加， U-118MG细胞内CytC和Caspase 3蛋白的表达逐渐增加， 而MT1E蛋白的表达量逐渐降 低。 0064 丹参酮A具有抑制人星形胶质瘤细胞U251和大鼠星形胶质瘤细胞C6生长的作 用， 丹参酮A作用于U-118MG细胞后， 随丹参酮A浓度的增加和作用时间的延长， U-118MG 细胞的存活率逐渐降低。 丹参酮A作用48h后， U-118MG细胞内Caspase 3mRNA和蛋白的表 达高于阴性对照组； 10、 30和100 M丹参酮A组的细胞凋亡率分别为(9.81.8)、 (16.5 2.1)和(23.22.8)， 均。

34、高于阴性对照组的(2.81.1)(P0.05)。 这些结果表明， 丹参酮A可通过诱导细胞凋亡， 从而起抗U-118MG的作用。 0065 通过实验， 可以得出， 将丹参酮A作为抗人星形胶质细胞瘤的主要成分可以有效 的抑制细胞再生， 并且可以诱导该类肿瘤细胞的凋亡。 而苦参素和红参有效提取物的加入， 通过患者应用， 可以有效的提高患者的自身免疫功能， 缩短肿瘤的治疗周期， 初中期患者， 经过治疗可以实现检测指标低于规定值， 延长患者的生存周期， 晚期患者的生存周期从1年 可延长到至少2年以上； 同时还可以明显改善患者体质， 减少星形胶质细胞瘤的复发。 0066 本发明的保护范围， 不仅限于具体实施方式所公开的技术方案， 凡将丹参酮A作 为抗人星形胶质细胞瘤药的主要成分， 进一步的还包括苦参素和红参有效提取物的技术方 案， 以及在上述技术方案内容上的微小改进、 等同替换， 均属于本发明的保护范围。 说 明 书 6/6 页 8 CN 107088197 A 8 图1 图2 说 明 书 附 图 1/3 页 9 CN 107088197 A 9 图3 图4 说 明 书 附 图 2/3 页 10 CN 107088197 A 10 图5 图6 说 明 书 附 图 3/3 页 11 CN 107088197 A 11 。