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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201611125437.3 (22)申请日 2016.12.09 (71)申请人 陕西易阳科技有限公司 地址 710000 陕西省西安市高新区高新路 枫叶高层35号602室 (72)发明人 张俊 (74)专利代理机构 西安亿诺专利代理有限公司 61220 代理人 康凯 (51)Int.Cl. A61K 9/50(2006.01) A61K 47/69(2017.01) A61K 47/54(2017.01) A61K 31/37(2006.01) A61K 31/337(200。
2、6.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种纳米脂质载体的制备方法 (57)摘要 本发明涉及一种纳米脂质载体的制备方法， 其特征在于包括以下步骤： 将FA5mg溶于二甲基 亚砜(DMSO)1mL中， 加入缩水剂EDC3mg和羧基活 化剂NHS2mg， 避光、 室温下搅拌反应4h后将DMSO 溶液缓慢加入到BSA水溶液(20mg/mL， 3mL)中， 在 避光环境中、 室温下搅拌反应10h； 本发明所述方 法制备的纳米脂质载体， 显著提高了肿瘤细胞对 纳米载体的特异性摄取， 并提高了在荷瘤裸鼠体 内的抗肿瘤效果。 可见， 叶酸修饰的主动靶向纳 米脂质载体， 增加了肿。
3、瘤细胞主动靶向能力， 提 高了体内抗肿瘤效果。 权利要求书1页 说明书2页 CN 106667960 A 2017.05.17 CN 106667960 A 1.一种纳米脂质载体的制备方法， 其特征在于包括以下步骤： （1） 将FA5mg溶于二甲基亚砜(DMSO)1mL中， 加入缩水剂EDC3mg和羧基活化剂NHS2mg， 避 光、 室温下搅拌反应4h后将DMSO溶液缓慢加入到BSA水溶液(20mg/mL， 3mL)中， 在避光环境 中、 室温下搅拌反应10h； （2） 将混合物过SephadexG-25凝胶柱， 除去未反应的FA； （3） 收集未反应的FA， （4） 精密称取AL5mg、 M。
4、CT25mg、 PC75mg和PTX4mg或香豆素42g溶于甲醇3mL中， 20-50减 压旋蒸成膜并真空过夜， 加入1.0-3.5mg/mLBSA溶液4mL， 35摄氏度环境下水合15-30min， 冰 浴探头超声， 经0.22纳米微孔滤膜过膜数次后即得包载PTX或香豆素的BSA.cNLCsHJ； （5） 将BSA水溶液替换为FABSA水溶液即得FA-BSAcNLCs。 2.如权利要求1所述一种纳米脂质载体的制备方法， 其特征在于： 所述步骤 （4） 中BSA溶 液为2.5mg/mL。 3.如权利要求1所述一种纳米脂质载体的制备方法， 其特征在于： 所述步骤 （4） 中水和 时间为20 mi。
5、n。 4.如权利要求1所述一种纳米脂质载体的制备方法， 其特征在于： 所述步骤 （4） 的反应 温度为35。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106667960 A 2 一种纳米脂质载体的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种纳米脂质载体的制备方法。 背景技术 0002 将药物分子或载药纳米制剂与靶向分子连接， 可以与细胞表面的受体结合， 将药 物选择性地递送至肿瘤细胞从而提高药效。 叶酸受体是一种糖基化磷脂肌醇连接的膜糖蛋 白， 叶酸具有无毒、 免疫原性弱、 性质稳定的特点， 与叶酸受体亲和力高。 研究表明相较于正 常细胞， 叶酸受体在多种人类肿瘤细胞(如卵巢癌、 肺癌、 乳。
6、腺癌、 结直肠癌、 肺癌等)膜表面 过度表达， 且叶酸与其他分子共价连接后， 仍保持对细胞膜表面叶酸受体的高亲和力， 这为 叶酸特异性受体介导的肿瘤细胞靶向提供了依据。 牛血清白蛋白(BSA)分子中赖氨酸的一 氨基及末端氨基众多， 是对其进行化学修饰的有效部位， 能够与叶酸活性酯共价连接。 白蛋 白在中性pH条件下荷负电， 可以通过静电引力吸附于阳离子纳米载体表面以延长血液滞留 时间， 并且白蛋白可被肿瘤和炎症部位优先摄取， 本身就具有一定的靶向作用。 发明内容 0003 本发明提出一种纳米脂质载体的制备方法。 0004 一种纳米脂质载体的制备方法， 其特征在于包括以下步骤： （1） 将FA5。
7、mg溶于二甲基亚砜(DMSO)1mL中， 加入缩水剂EDC3mg和羧基活化剂NHS2mg， 避 光、 室温下搅拌反应4h后将DMSO溶液缓慢加入到BSA水溶液(20mg/mL， 3mL)中， 在避光环境 中、 室温下搅拌反应10h； （2） 将混合物过SephadexG-25凝胶柱， 除去未反应的FA； （3） 收集未反应的FA， （4） 精密称取AL5mg、 MCT25mg、 PC75mg和PTX4mg或香豆素42g溶于甲醇3mL中， 20-50减 压旋蒸成膜并真空过夜， 加入1.0-3.5mg/mLBSA溶液4mL， 35摄氏度环境下水合15-30min， 冰 浴探头超声， 经0.22纳米。
8、微孔滤膜过膜数次后即得包载PTX或香豆素的BSA.cNLCsHJ； （5） 将BSA水溶液替换为FABSA水溶液即得FA-BSAcNLCs。 0005 所述步骤 （4） 中BSA溶液为2.5mg/mL。 0006 所述步骤 （4） 中水和时间为20 min。 0007 所述步骤 （4） 的反应温度为35。 0008 本发明所述方法制备的纳米脂质载体， 显著提高了肿瘤细胞对纳米载体的特异性 摄取， 并提高了在荷瘤裸鼠体内的抗肿瘤效果。 可见， 叶酸修饰的主动靶向纳米脂质载体， 增加了肿瘤细胞主动靶向能力， 提高了体内抗肿瘤效果。 具体实施方式 0009 实施例1。 0010 一种纳米脂质载体的制。
9、备方法， 包括以下步骤： 说 明 书 1/2 页 3 CN 106667960 A 3 （1） 将FA5mg溶于二甲基亚砜(DMSO)1mL中， 加入缩水剂EDC3mg和羧基活化剂NHS2mg， 避 光、 室温下搅拌反应4h后将DMSO溶液缓慢加入到BSA水溶液(20mg/mL， 3mL)中， 在避光环境 中、 室温下搅拌反应10h； （2） 将混合物过SephadexG-25凝胶柱， 除去未反应的FA； （3） 收集未反应的FA， （4） 精密称取AL5mg、 MCT25mg、 PC75mg和PTX4mg或香豆素42g溶于甲醇3mL中， 20-50减 压旋蒸成膜并真空过夜， 加入1.0-3.。
10、5mg/mLBSA溶液4mL， 35摄氏度环境下水合15-30min， 冰 浴探头超声， 经0.22纳米微孔滤膜过膜数次后即得包载PTX或香豆素的BSA.cNLCsHJ； （5） 将BSA水溶液替换为FABSA水溶液即得FA-BSAcNLCs。 0011 实施例2。 0012 一种纳米脂质载体的制备方法， 包括以下步骤： （1） 将FA5mg溶于二甲基亚砜(DMSO)1mL中， 加入缩水剂EDC3mg和羧基活化剂NHS2mg， 避 光、 室温下搅拌反应4h后将DMSO溶液缓慢加入到BSA水溶液(20mg/mL， 3mL)中， 在避光环境 中、 室温下搅拌反应10h； （2） 将混合物过Seph。
11、adexG-25凝胶柱， 除去未反应的FA； （3） 收集未反应的FA， （4） 精密称取AL5mg、 MCT25mg、 PC75mg和PTX4mg或香豆素42g溶于甲醇3mL中， 20-50减 压旋蒸成膜并真空过夜， 加入1.0-3.5mg/mLBSA溶液4mL， 35摄氏度环境下水合15-30min， 冰 浴探头超声， 经0.22纳米微孔滤膜过膜数次后即得包载PTX或香豆素的BSA.cNLCsHJ； （5） 将BSA水溶液替换为FABSA水溶液即得FA-BSAcNLCs。 0013 所述步骤 （4） 中BSA溶液为2.5mg/mL。 0014 实施例3。 0015 一种纳米脂质载体的制备方。
12、法， 包括以下步骤： （1） 将FA5mg溶于二甲基亚砜(DMSO)1mL中， 加入缩水剂EDC3mg和羧基活化剂NHS2mg， 避 光、 室温下搅拌反应4h后将DMSO溶液缓慢加入到BSA水溶液(20mg/mL， 3mL)中， 在避光环境 中、 室温下搅拌反应10h； （2） 将混合物过SephadexG-25凝胶柱， 除去未反应的FA； （3） 收集未反应的FA， （4） 精密称取AL5mg、 MCT25mg、 PC75mg和PTX4mg或香豆素42g溶于甲醇3mL中， 20-50减 压旋蒸成膜并真空过夜， 加入1.0-3.5mg/mLBSA溶液4mL， 35摄氏度环境下水合15-30min， 冰 浴探头超声， 经0.22纳米微孔滤膜过膜数次后即得包载PTX或香豆素的BSA.cNLCsHJ； （5） 将BSA水溶液替换为FABSA水溶液即得FA-BSAcNLCs。 0016 所述步骤 （4） 中水和时间为20 min。 0017 所述步骤 （4） 的反应温度为35。 说 明 书 2/2 页 4 CN 106667960 A 4 。