技术领域
本发明涉及一种肿瘤治疗领域,尤其涉及五谷虫制品用于制备治疗非小细胞肺癌的药品、保健品或食品中的应用。
背景技术
五谷虫为丽蝇科(Calliphoridae)昆虫大头金蝇(ChrysomyiamegacephalaFab.)或其他近缘昆虫的干燥幼虫体,在古代医书中就有记载,用于治疗小儿疳积、脓包疮。
目前记载五谷虫具有以下药理作用:1.平喘作用,五谷虫所含的总氨基酸是平喘的有效成分;2.对肠平滑的作用,五谷虫乙醇提取物和五谷虫总氨基酸粗提取物对组胺所致离体家兔和豚鼠的回肠平滑肌痉挛均有明显的争痉作用;3.毒性,五谷虫的毒性很小。
中国发明专利申请(申请号CN200510060277.4申请日2005.08.04)一种具有抗肿瘤生物活性蝇蛆的养殖方法。养殖的蝇蛆经过国家新药筛选中心几年来多次检测有对肝癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、肺癌、胃癌、等肿瘤细胞生长有很强的抑制率,其抗肿瘤生物活性都在75%~97%。
中国发明专利申请(申请号CN200710067951.0申请日2007.04.10)公开了一类抗肿瘤化合物,该组份从外源物质诱导的蝇蛆中提取、分离获得,具有抑制人原髓细胞白血病HL-60和人肺腺癌A549细胞增殖生长的作用。
中国发明专利申请(申请号CN201310223817.0申请日2013.06.06)公开了一种五谷虫抗肿瘤新用途,通过五谷虫抑制小鼠肿瘤重量的作用来表现,五谷虫能抑制肿瘤细胞的生长,对肿瘤细胞具有杀伤作用,能够在制备抗肿瘤药物或保健品中应用,具体公开了小鼠肉瘤S180的生长抑制。
肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,已成为我国城市人口恶性肿瘤死亡原因的第1位。非小细胞型肺癌包括鳞状细胞癌(鳞癌)、腺癌、大细胞癌,与小细胞癌相比其癌细胞生长分裂较慢,扩散转移相对较晚。非小细胞肺癌约占所有肺癌的80%,约75%的患者发现时已处于中晚期,5年生存率很低。
发明内容
本发明的第一个目的是提供五谷虫制品用于制备治疗非小细胞肺癌的药品中的应用。
本发明的第二个目的是提供五谷虫制品用于制备抑制非小细胞肺癌的保健品中的应用。
本发明的第二个目的是提供五谷虫制品用于制备抑制非小细胞肺癌的食品中的应用。
作为优选,上述的五谷虫制品为五谷虫干粉和\或五谷虫提取物以及五谷虫干粉和\或五谷虫提取物制备的制剂。
作为再优选,所述的制剂为胶囊剂、片剂、丸剂、散剂、复方颗粒剂、保健酒、蛋白粉、口服液或冻干粉。
作为优选,上述的五谷虫提取物包括五谷虫全虫或五谷虫干粉的水提取物和有机溶剂提取物中的一种或多种。
作为再优选,所述的有机溶剂提取物中的有机溶剂包括乙醇、石油醚或己烷中的一种或多种。
本发明的五谷虫制品为一种天然的产品,五谷虫制品有效成分是五谷虫全虫,现代医学研究证明:五谷虫中含蛋白质、脂肪、几丁聚糖、含抗菌肽以及18种氨基酸。本发明的五谷虫干粉中包括了五谷虫全虫的所有有效成分,五谷虫提取物主要是以脂肪酸和/或蛋白质、多肽、氨基酸等。经研究发现,五谷虫制品可以有效抑制非小细胞肺癌生长,且五谷虫制品不具有临床上常用的化疗药的耐药及其毒副作用。
具体实施方式
实施例1
1、种蝇选择
动物学鉴定:丽蝇科Calliphoridae昆虫大头金蝇Chrysomyia megacephala(Fab.)。成蝇体长8~11毫米,绿蓝色、头部宽,顶部黑色;复眼大,深红色,额中条褐红色,颜和颊部橙黄色,触角及小颚须褐色。胸、腹部绿蓝色,带有紫色光泽。第1腹节及第2,3腹节后缘黑色。雌蝇的额部及中条在中部处向外侧略为凸出。雄蝇复眼上部2/3有大形的小眼面,下方1/3则为小形的小眼面,二者界面清晰。前胸气门黑色,中胸气门浅褐色;有气门。腋瓣带棕色,上有小毛。幼虫成熟时黄白色,前端尖细,后端截平。体节14,头部1节,胸部3节,腹部10节,但通常只见8节。体表由小棘形成的环。后气门略高出表面,较扁于上方,气门环不完全;后气门间距不大于后气门的横径;第1气门裂垂直形;前气门具有10—13个指状突。
2、种蝇采集
(1)种蝇箱的制作:可以选用木质、玻璃、陶瓷制作,圆形或长方形均可,顶部留一个直径25厘米的口,并制作一个用透气的网状盖,以防种蝇逃逸。
(2)种蝇饲料配置:奶粉+红糖,1:1混合,加15%的水调和,放置于种蝇箱内。
(3)打开种蝇箱网状盖,置于28--38摄氏度,湿度小于65%的环境内。
让外界的大头金蝇进入箱内觅食,对不符合要求的蝇种进行分拣丢弃,并盖上网状盖,使其滞留于种蝇箱内觅食、产卵。
3、养殖硬件与养殖饲料
(1)蝇房建造:按养殖规模,可以选用砖石,玻璃、塑料、钢架结构材料,离地面2米左右的墙体上间隔1.5--2米设置通风窗,为防止其他苍蝇或昆虫进入,宜设有纱窗与外界隔离,在养殖箱上方一米制成可活动的通风管道,便于废气收集,防止异味散发污染环境,废气统一通过臭氧除臭装置处理后排出。为防止蝇种进入废气收集管道,宜在各进气口设置纱窗隔断。
(2)养殖箱制作:可以选用木质、陶瓷、水泥材料,制成长方形箱体,底部设置止水密封装置,箱体上方留一个直径30--40厘米的圆孔,即可。各养殖箱下方设有污水收集通道,统一进入污水池处理后排放。
(3)保温:为符合养殖产品的标准化要求,可以附设加温、降温设施。在炎热时季可在蝇房顶面设置防嗮遮阳设施。
(4)养殖饲料:猪内脏、淡水鱼、牛蛙、奶粉、蜂蜜。
4、养殖工艺步骤
(1)蝇种:采集的蝇种移植到提前一天放有淡水鱼的种蝇箱内,培养2天,待其在箱内产卵。
(2)收集蝇卵:待种蝇在蝇种箱内产卵,即可将蝇卵收集,转移到加有饲料的蝇房养殖箱内进行孵化、养殖,饲料和蝇卵的比例为每5克蝇卵,加入15公斤的饲料。
(3)孵化养殖:蝇卵孵化后,即可在养殖箱内获得所需的饲料,一般需要72小时,虫体长到长度1--1.2厘米,直径2.5--3毫米时。
(4)活性催化:在养殖箱内加入用200毫升预配的5%蔗糖(w/w)水溶液和1%的超氧化物歧化酶(LA-SOD)(酶系活力大于300万单位/克)500毫升,2小时后取出活体五谷虫,用清水反复冲洗干净,即刻放入—38摄氏度以下的冰柜内速冻。
(5)清洗干燥:低温速冻两天后,取出,在清水中融化,再仔细清洗,沥干水分,使用真空低温干燥设备干燥到水分含量低于10%。
试验例1
一、主要实验仪器与材料
1、材料
1.1.1非小细胞肺癌细胞株H125,购自北纳生物。细胞在含10%的灭活特级新生牛血清的F12K培养液中生长,取对数生长期细胞进行实验。培养箱中二氧化碳的浓度为5%,温度37℃,饱和湿度。
1.1.2药物与试剂五谷虫水提取液;AnnexinV-FITC/PI凋亡试剂盒,南京凯基公司产品;RNA酶A,胰蛋白酶(GIBCO)。
2、主要仪器
BD流式细胞仪BD FACSCaliburTM
二、实验方法和步骤
1.药物处理取对数生长期的细胞,加入五谷虫提取物,按终浓度为0.1mg/ml、、0.25mg/ml、0.5mg/ml与细胞共同孵育24、48、72小时后,用0.25%胰蛋白酶进行消化,使之成为单细胞,然后用1×PBS漂洗2次,离心后备用。
2.AnnexinV-FITC/PI-FCM检测预先配制好染液及缓冲液,置于冰上,取备用细胞进行计数,每105~106细胞加入500ul Binding Buffer悬浮细胞,再加入5ul Annexin V-FITC混匀后,加入5ul PI混匀;室温、避光、反应15分钟,上机检测。
3、数据与图像分析
在二维的FCM分析图上,细胞分为四个亚群:左下(LL)象限,Annexin V-FITC-/PI-为活细胞群(V);右下(LR)象限,Annexin V-FITC+/PI-为凋亡细胞(AP),此区细胞具有典型的凋亡细胞特征:包括细胞与核体积缩小,染色质浓缩致密,有新月体状核形成,细胞膜上的微绒毛消失;右上(UR)象限,AnnexinV-FITC+/PI+细胞已具有了坏死细胞的特征:细胞膜破裂,细胞器肿胀,胞质内空泡化,为继发性坏死细胞(N);左上(UL)象限,AnnexinV-FITC-/PI+为培养操作过程中出现的机械损伤细胞(O)。
四、实验结果
表:浓度和作用时间对诱导人非小细胞肺癌H125凋亡的影响
注:V:左下(LL)象限,活细胞群所占百分比;AP:右下(LR)象限,凋亡细胞所占百分比;N:右上(UR)象限,继发性坏死细胞所占百分比;O:左上(UL)象限,机械损伤细胞所占百分比。
五:实验结果
检测结果显示,样品在不同剂量梯度时均能诱导H125人非小细胞肺癌细胞凋亡,其凋亡程度与剂量有明显相关性,在0.25mg和0.5mg时其诱导凋亡的作用非常明显,在70%左右。
试验例2
苏**,男,80岁,浙江省长兴县,疾病名称:非小细胞肺癌。
药性五谷虫口服治疗记录
小结:
1.用药5个月左右糖链抗原CA125明显下降;①
2.谷丙转氨酶和谷草转氨酶转阴;白蛋白、白球比转为正常,β2-微球蛋白(β2-MG)有明显降低②。
试验例3
赵**,性别男,出生年月,1939,疾病名称非小细胞肺癌(脑转移),住址浙江省东阳市。
之前诊疗概况:
左上肺结节型中、低分化腺癌。2009-11-17行左上肺叶切除;
2009-12-15至2010-3-2之间四个疗程化疗:盖诺40mg d1、8+DDP d1-3;
2010-3-23至4-21全脑姑息放疗6MVX线DT30Gy/10f,局部病灶加量5f。
原生胶囊(五谷虫)口服治疗记录
小结
1.自服用药性五谷虫胶囊以来除去医院检查外未进行其它抗肿瘤治疗;
2.用药两个月后脑部转移瘤缩小;肿瘤标志物癌胚抗原(ECA)降至正常范围①、②,并一直保持正常,至今已超过12个月;
3.用药9个月后右中肺结节开始变小③;
4.2012年3月至6月间用药约三个月,颈部淋巴结肿大情况有改善,双侧锁骨上淋巴结肿大消失④。