一种虾青素和叶黄素组合物及其用途.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201610004838.7 (22)申请日 2016.01.05 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 105456239 A (43)申请公布日 2016.04.06 (73)专利权人 青岛森淼实业有限公司 地址 266061 山东省青岛市崂山区银川东 路18号 (72)发明人 袁三平 李璐 耿玉秋 董辉 王少丹 (74)专利代理机构 青岛清泰联信知识产权代理 有限公司 37256 代理人 高洋 (51)Int.Cl. A61K 31/122(2006.01) A6。

2、1P 27/02(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61K 31/047(2006.01) (56)对比文件 Ishida S.Lifestyle-related diseases and anti-aging ophthalmology: suppression of retinal and choroidal pathologies by inhibiting renin-angiotensin system and inflammation Nippon GankaGakkaiZasshi .2009,第113卷(第3期),403-422. Kanako Izum。

3、i-Nagai et alMacular Pigment Lutein IsAntiinflammatory in PreventingChoroidal Neovascularization Arterioscler Thromb Vasc Biol .2007, 2555-2562. Kanako Izumi-Nagai et alInhibition of Choroidal Neovascularization with anAnti-Inflammatory Carotenoid Astaxanthin IOVS .2008,第49卷(第4期), 1679-1685. 审查员 崔义文。

4、 (54)发明名称 一种虾青素和叶黄素组合物及其用途 (57)摘要 本发明的目的是提供一种虾青素和叶黄素 的组合物， 其有效成分为虾青素和叶黄素； 虾青 素和叶黄素的配比为： 1:4-8。 所述组合物的用 途， 其用作制备治疗眼科疾病的药物； 在抑制脉 络膜新生血管和抑制VEGF(血管内皮生长因子) 生成方面有很好的效果。 权利要求书1页 说明书8页 CN 105456239 B 2019.02.12 CN 105456239 B 1.一种虾青素和叶黄素组合物， 其特征在于： 有效成分为虾青素和叶黄素， 虾青素和叶 黄素的重量份配比为： 1:4.5-8。 2.根据权利要求1所述的虾青素和叶黄素。

5、组合物， 其特征在于： 虾青素和叶黄素的重量 份配比为： 1:5.1。 3.根据权利要求1所述的虾青素和叶黄素组合物， 其特征在于： 虾青素和叶黄素的重量 份配比为： 1:6.2。 4.一种权利要求1-3任一所述虾青素和叶黄素组合物的用途， 其特征在于： 用作制备治 疗眼科疾病的药物。 5.根据权利要求4所述虾青素和叶黄素组合物的用途， 其特征在于： 所述治疗眼科疾病 的药物是指抑制眼部炎症因子VEGF生成的药物。 6.根据权利要求4所述虾青素和叶黄素组合物的用途， 其特征在于： 所述治疗眼科疾病 的药物是指抑制脉络膜新生血管的药物。 7.根据权利要求4-6任一所述虾青素和叶黄素组合物的用途，。

6、 其特征在于： 所述治疗眼 科疾病的药物的剂型为口服冲剂。 8.根据权利要求4-6任一所述虾青素和叶黄素组合物的用途， 其特征在于： 所述组合物 在施药对象中的使用量为18-23mg/kg。 9.根据权利要求7所述虾青素和叶黄素组合物的用途， 其特征在于： 所述组合物在施药 对象中的使用量为18-23mg/kg。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 105456239 B 2 一种虾青素和叶黄素组合物及其用途 技术领域 0001 本发明涉及一种含虾青素和叶黄素的组合物， 还涉及其用途， 属于医药领域。 背景技术 0002 脉络膜新生血管是指来自脉络膜毛细血管的增殖血管， 通过Bruch膜。

7、的裂口而扩 展， 在Bruch膜与视网膜色素上皮之间、 或神经视网膜与视网膜色素上皮之间、 或位于视网 膜色素上皮与脉络膜之间增殖形成， 许多累及RPE-Bruch膜-脉络膜毛细血管复合体的疾病 均可导致CNV的形成， 又称视网膜下新生血管， 应早期发现并及时处理。 0003 血管内皮生长因子(英文： vascular endothelial growth factor， 简称： VEGF)是 血管内皮细胞特异性的肝素结合生长因子， 可在体内诱导血管新生， 尤其是诱导产生的脉 络膜新生血管， 对眼睛健康产生很大的威胁。 0004 现有技术中， 常常会提及虾青素和/或叶黄素及其他组分的结合会对眼。

8、睛产生保 健作用， 如对比文件1(公开号CN 104474018A)， 发明名称为 “一种缓解视疲劳的保健软胶 囊” 中指出采用富硒酵母410、 虾青素15、 越橘提取物36、 叶黄素25、 牡蛎 粉29、 VB10.050.1、 珍珠粉48、 亚麻籽油6070的组成， 可以有效缓解视疲 劳。 对比文件2(公开号CN 104839688 A)， 发明名称为 “一种眼保健制剂及其制备方法” 中指 出， 采用以下重量份的主料： 叶黄素酯0.00210份、 玉米黄素0.0022份、 虾青素0.0022 份， 可以保护眼睛， 有效预防和控制眼睛近弱视等作用。 对比文件3(公开号CN 104824510。

9、 A)， 发明名称为 “具有视力保护作用的保健食品” 中指出包括下述重量份原料： 10-30份葡萄 糖酸锌、 5-15份叶黄素、 0.2-0.8份虾青素、 10-30份橄榄油、 140-160份大豆油， 其组成科学、 天然、 配比恰当， 具有缓解视疲劳的作用。 尽管上述各种组合物根据发明内容判断来讲， 对 眼睛具有保健作用， 但是各组分中发挥重要贡献的是什么组分， 其发挥的作用具体落实到 对何种因子的抑制等问题， 均没有在相关的文献中有所体现。 发明内容 0005 本发明的目的是提供一种虾青素和叶黄素的组合物， 该组合物的合理配比可作为 治疗眼科疾病药物的原料， 尤其是对VEGF的产生和脉络膜。

10、新生血管的生成具有很好的抑制 作用， 可保护眼睛健康， 为护眼作出贡献。 0006 本发明的技术方案为： 0007 一种虾青素和叶黄素组合物， 其有效成分为虾青素和叶黄素； 虾青素和叶黄素的 重量份配比为： 1:4-8； 优选1： 4.5-8， 尤其优选1:5.1和1:6.2。 0008 一种虾青素和叶黄素组合物的用途， 其用作制备治疗眼科疾病的药物； 0009 具体地， 所述治疗眼科疾病的药物是指可以抑制眼部炎症因子VEGF(血管内皮生 长因子)生成的药物， 可以预防眼底血管新生、 达到早期干预视网膜脉络膜病变的作用。 0010 具体地， 所述治疗眼科疾病的药物是指抑制脉络膜新生血管的药物，。

11、 从而有效延 缓黄斑变性进展， 保护神经细胞和视网膜。 说 明 书 1/8 页 3 CN 105456239 B 3 0011 当虾青素和叶黄素组合物制备治疗眼科疾病的药物时， 所述药物的剂型为口服冲 剂。 0012 当虾青素和叶黄素组合物制备治疗眼科疾病的药物时， 所述组合物在施药对象中 的使用量为18-23mg/kg。 0013 与现有技术相比， 本发明的有益效果为： 0014 (1)本发明所述虾青素和叶黄素组合物可提高抗氧化能力、 清除自由基、 增强免疫 力、 保护眼睛健康、 预防眼部疾病， 是具有营养价值的膳食补充剂， 可应用于预防视网膜脉 络膜疾病、 眼部衰老、 角膜疾病、 高眼压深。

12、层的视网膜损伤保护作用。 0015 (2)虾青素和叶黄素协同起到抗氧化、 预防眼部疾病的作用效果大于单独成分所 起作用， 合适比例的配比在抗氧化、 预防眼部疾病起到大于加和作用的效果； 将其作为制备 药物的原料， 尤其在抑制脉络膜新生血管和抑制VEGF(血管内皮生长因子)生成方面有很好 的效果。 具体实施方式 0016 以下结合实施例和实验对本发明进行详细的阐述。 0017 实施例1： 0018 虾青素1份， 叶黄素4.5份， 二者混合得到虾青素和叶黄素组合物。 0019 实施例2： 0020 虾青素1份， 叶黄素5.1份， 二者混合得到虾青素和叶黄素组合物。 0021 实施例3： 0022 。

13、虾青素1份， 叶黄素6.2份， 二者混合得到虾青素和叶黄素组合物。 0023 实施例4： 0024 虾青素1份， 叶黄素7.2份， 二者混合得到虾青素和叶黄素组合物。 0025 实施例5： 0026 虾青素1份， 叶黄素8份， 二者混合得到虾青素和叶黄素组合物。 0027 实施例6： 抑制脉络膜新生血管实验(choroidal neovascularization CNV) 0028 (1)激光诱导CNV小鼠模型的制备： 0029 取成年雄性棕色挪威8周龄小鼠， 随机分为16组， 每组5只； 复方托品酰胺散瞳， 以 3.0ml/kg腹腔注射10水合氯醛， 并麻醉， 应用氪激光距视盘等距离围绕视。

14、盘视网膜光凝 10点， 光凝功率以击穿Bruch膜为宜。 0030 (2)实验方法： 0031 造模后， 各组选取造模成功的小鼠3只， 按照表1中的数据给药。 值得注意的是表1 中的数据为16组试验中各组合物中组分的重量份配比， 给药时， 药物中各组合物的总量相 等。 其中试验号1-5数据来自本发明实施例1-5所述虾青素和叶黄素组合物的不同配比； 试 验号6和7为随机选取的且组分比例不在本发明范围内的虾青素和叶黄素组合物； 试验号8 只含虾青素， 试验号9只含叶黄素； 试验号10和11数据来自对比文件1， 其中试验号10仅选取 对比文件1中虾青素和叶黄素两种组分的配比， 试验号11为虾青素、 。

15、叶黄素和其他物质的配 比； 试验号12和13数据来自对比文件2， 其中试验号12仅选取对比文件2中虾青素和叶黄素 两种组分的配比， 试验号13为虾青素、 叶黄素和其他物质的配比； 试验号14和15数据来自对 说 明 书 2/8 页 4 CN 105456239 B 4 比文件3， 其中试验号14仅选取对比文件3中虾青素和叶黄素两种组分的配比， 其中试验号 15为虾青素、 叶黄素和其他物质的配比； 试验号16为阴性对照。 0032 采用上述试验号组合物于视网膜光凝前第五天腹腔注射给药， 按试验设计将组合 物溶解于二甲亚砜溶液中， 二甲亚砜是良好的溶剂， 有助于组合物的溶解； 溶液中组合物浓 度为。

16、10mg/mL， 注射量为2mL/kg； 按照小鼠体重计算， 每千克体重注射的药剂中组合物含量 为20毫克， 然后根据小鼠体重换算成实际给药量， 每日一次， 连续注射14天； 对照组腹腔仅 按照2mL/kg的量注射二甲亚砜溶液。 0033 表1 试验设计表 0034 0035 0036 (3)不同处理下的脉络膜新生血管面积对比试验： 0037 将按照步骤(2)处理过的小鼠进行麻醉后， 左心室灌注50mg/ml的荧光素标记PBS， 处死小鼠， 分别摘取小鼠的左眼和右眼， 其中左眼用于实施例6分析使用， 右眼用于实施例7 分析使用。 0038 将摘除的左眼球固定在4PFA上1小时， 用PBS洗涤后。

17、， 切除眼前段， 去除视网膜， RPE-脉络膜-巩膜做从边缘到赤道的四径向切口， RPE层向上平铺于载玻片上， 分析软件记 录CNV面积。 0039 (4)统计方法 0040 应用spss11.0统计软件进行统计学分析处理， 采用单因素方法分析， 进行组间比 较。 P0.05时， 差异有统计学意义。 0041 表2 正态性检验 说 明 书 3/8 页 5 CN 105456239 B 5 0042 0043 表2为正态性检验， 由表2可知P0.05， 表明参数检验符合正态性分布假设， 可以 进行后续分析。 0044 表3 方差齐性检验 0045 CNV面积 0046 Levene统计量df1d。

18、f2显著性(p) .7511532.717 0047 表3为方差齐性检验， 由表3可知P0.05， 表明方差齐性， 符合原假设， 可进行后续 分析。 0048 表4 单因素方差分析 0049 CNV面积 说 明 书 4/8 页 6 CN 105456239 B 6 0050 0051 表4为单因素方差分析， 由表4可知组间F检验的P值0.05， 表明因素处理间的差 异性具有显著性， 具有统计意义， 可以进行统计分析。 0052 表5 多重比较的方差分析 0053 CNV面积 0054 0055 0056 将显示同类子集中的组均值。 0057 a.将使用调和均值样本大小3.000。 0058 b。

19、.类型1/类型2错误严重性比值100。 0059 由表5分析可得试验号1-5的处理因素效果与其他处理因素均有显著性差异， 其脉 络膜新生血管的面积均较小， 说明具有明显的抑制脉络膜新生血管的作用； 从表5中还可以 得知： 试验号3的处理因素效果最好。 试验号6、 7中， 其虾青素和叶黄素的比例范围分别位于 说 明 书 5/8 页 7 CN 105456239 B 7 本发明的下限以下和上限以上， 由表5可知， 二者处理因素无显著性差异， 且试验号6与试验 号12、 13也无显著性差异， 表明处理效果并不呈单一元素配比增高的依赖， 某一元素配比盲 目地增大并不一定会使处理效果有明显的优化， 试验。

20、号10和14也可以验证这一点。 试验号8 和9分别只添加了虾青素或叶黄素， 与试验号1-7相比， 有显著性差异， 表明单独施加某一种 元素， 其处理因素效果不如二者组合效果好， 适当的比例更能抑制脉络膜新生血管的生成， 说明虾青素和叶黄素二者具有协同作用。 试验号11和15由于添加了其他物质， 使得虾青素 和叶黄素占比减小， 剂量减少因而处理因素的效果不佳， 同时也说明了， 其他组分在抑制脉 络膜新生血管方面并没有突出的实验效果。 阴性对照试验号16与之前的处理因素都具有显 著性差异。 0060 实施例7： VEGF的表达量对比试验 0061 本实施例中使用的实验对象来源于实施例6步骤(3)中。

21、得到的小鼠右眼球， 对其进 行分析， 将眼球沿角巩膜缘剪开， 去除角膜， 晶状体和玻璃体， 玻璃视网膜， 制成RPE-脉络膜 眼杯， 提取蛋白， 用ELISA方法检测样本中VEGF的蛋白水平。 0062 表6 正态性检验 0063 0064 0065 表6为正态性检验， 由表6可知P0.05， 表明参数检验符合正态性分布假设， 可以 进行后续分析。 0066 表7 方差齐性检验 说 明 书 6/8 页 8 CN 105456239 B 8 0067 VEGF值 0068 Levene统计量df1df2显著性(p) .7511532.717 0069 表7为方差齐性检验， 由表7可知P0.05，。

22、 表明方差齐性， 符合原假设， 可进行后续 分析。 0070 表8 单因素方差分析 0071 VEGF值 0072 0073 表8为单因素方差分析， 由表8可知组间F检验的P值0.05， 表明因素处理间的差 异性具有显著性， 具有统计意义， 可以进行统计分析。 0074 表9多重比较结果 0075 VEGF值 0076 说 明 书 7/8 页 9 CN 105456239 B 9 0077 将显示同类子集中的组均值。 0078 a.将使用调和均值样本大小3.000。 0079 b.类型1/类型2错误严重性比值100。 0080 由表9分析可知： 试验号1-5的处理因素效果优于其他处理因素效果，。

23、 其在抑制 VEGF的生成方面与其他组相比具有显著性差异； 表中还可知试验号3的处理因素效果达到 最优， 表明本发明范围内的虾青素和叶黄素比例可以有效的抑制脉络膜新生血管生成因子 VEGF的生成， 从而预防脉络膜循环障碍和视网膜脉络膜炎的发生。 试验号6、 7在范围的上下 限以外， 二者之间不具有显著性差异， 且试验号6和12、 13之间也不具有显著性差异， 表明抑 制VEGF的生成并非呈单方面元素依赖， 相同重量中更高的单一元素占比并不能进一步提高 处理因素效果， 试验号10和14也可以说明这一点。 试验号8和9分别为只添加了虾青素或叶 黄素的处理因素， 其效果低于试验号1-7， 表明虾青素和叶黄素组合配比的处理因素效果要 好于单独添加效果， 说明虾青素和叶黄素二者具有协同作用。 试验号10和15由于添加其他 物质， 使得虾青素和叶黄素占比减小， 因而处理因素的效果不佳， 同时也说明了， 其他组分 在抑制脉络膜新生血管方面并没有突出的实验效果。 阴性对照试验号16与之前的处理因素 都具有显著性差异。 0081 综上所述， 虾青素和叶黄素的配比组合可以抑制CNV的重要生成因子VEGF的生成， 抑制CNV的生成， 对于治疗由于CNV生成引起的黄斑变性， 视网膜脉络膜炎症等具有良好的 疗效。 说 明 书 8/8 页 10 CN 105456239 B 10 。