发明领域
本发明涉及一种或多种共轭亚油酸(CLA)、高CLA的乳脂或一种或多种牛乳脂质组合物在治疗或预防轮状病毒感染中的用途
发明背景
乳是一种为新生儿提供重要营养来源的，富于营养的生物液体。此外，乳含有用于免疫系统发育、机能和维持的物质(agent)，该物质对于婴儿的发育是必需的。
轮状病毒是呼肠孤病毒科的第三型(dsRNA)病毒，并且每年造成约1.38亿起婴儿腹泻。95％的儿童在五岁前会遭受轮状病毒腹泻的发作。在全世界范围内，轮状病毒感染是腹泻住院治疗最普遍的原因(Parashar et al2003)。每天估计有1,205名儿童死于轮状病毒疾病。由于轮状病毒，5名儿童中会有一名将要就医，65名儿童中会有一名需要住院治疗，并且约293名儿童中会有一名儿童死亡。死亡大多发生在印度次大陆、撒哈拉以南的非洲和南美洲(Parashar et al 2003)。
轮状病毒粒子是由3层同心的蛋白形成的。病毒外层的两种蛋白，VP4和VP7与该病毒与宿主细胞的初始相互作用有关。VP4形成从病毒粒子表面延伸的突起(spikes)，并且已经被认定为是病毒附着多肽，而VP7是形成病毒粒子光滑表面的钙结合糖蛋白，并且被认为与后附着过程有关(Mendez et al 1999，Isa et al 2006)。进入细胞是一个复杂的过程，其包括病毒外层蛋白与细胞表面分子之间的相互作用。在体内，轮状病毒通过小肠绒毛上的成熟肠细胞进行感染，而在体外，轮状病毒结合到各种细胞系上，但只有一些细胞系被感染。Isa et al(2006)报导，病毒与细胞表面的初始结合是杂乱的，并且病毒与特异性后附着受体之间随后的相互作用是病毒进入细胞的原因。
轮状病毒基于它们感染细胞的能力被分为两种类型，该细胞已经用 神经氨酸酶处理来除去宿主细胞上的唾液酸(N-乙酰神经氨酸)残基。来自某些动物的轮状病毒需要细胞表面上的唾液酸残基来进行附着，而包括人轮状病毒株在内的许多其它轮状病毒没有上述需要。这些病毒株分别被称为神经氨酸酶敏感性(或依赖唾液酸的)病毒株和神经氨酸酶抗性的(或不依赖唾液酸的)病毒株(Isa et al，2006)。已经有报导称，唾液酸衍生物能够抑制对动物轮状病毒易感而不对人轮状病毒的易感的细胞的病毒结合(Guo et al，1999)。已经有报导称，宿主细胞表面的神经节苷脂GM1a在人轮状病毒感染中作为受体起作用(Guo et al，1999)。据报道，对神经氨酸酶处理具有抵抗力的神经氨酸酶抗性病毒株能够识别具有内部唾液酸的神经节苷脂(Delorme et al，2001)，这与结合神经节苷脂中的外部残基的神经氨酸酶敏感性病毒形成对比(Isa et al，2006)。
据报道，许多化合物(茶黄素、蛋白酶抑制剂、卵黄免疫球蛋白、合成的硫酸化唾液酸脂质(sialyl lipid)NMSO3、人乳粘着蛋白、MUC1粘蛋白和牛大分子乳清蛋白(MMWP)部分)能够抑制体外和的体内轮状病毒感染，但是没有化合物已经在临床中成功地使用(Bojsen et al，2007；Peterson et al，2001；Takahashi et al，2002；Isa et al，2006)。大部分这些工作是使用轮状病毒的动物病毒株而不是人病毒株完成的，例如MUC1粘蛋白和牛大分子乳清蛋白部分(Bojsen et al 2007)。利用由FonterraCooperative Group Limited生产的乳清蛋白浓缩物进行了研究，该研究表明在利用轮状病毒小鼠病毒株EDIM的小鼠模型中有轮状病毒脱落的减少(Wolber et al，2005)。Kvistgaard et al，2004报道，牛乳铁蛋白、牛乳粘着蛋白和牛MUC1粘蛋白不能够防止体外人Wa轮状病毒感染。
轮状病毒腹泻的通常治疗是再水化疗法，但是这种疗法只治疗症状，而不治疗感染的原因。通常也不推荐儿童使用抗腹泻药物(Yung et al，2005)。
因此，亟需治疗或预防轮状病毒感染的替代疗法。期望提供用于治疗或预防轮状病毒感染的替代方法或者至少为公众提供有用的选择。
发明概述
因此，本发明的第一方面涉及用于治疗或预防轮状病毒感染的一种 或多种试剂，该试剂选自：
(a)一种或多种共轭亚油酸(CLA)的异构体、11-十八碳烯酸或上述的组合，或
(b)高CLA的乳脂、一种或多种高CLA的乳脂部分、高CLA的乳脂的水解物、一种或多种高CLA的乳脂部分的水解物或上述的任意两种或更多种的组合，
(c)一种或多种牛乳脂组合物，该组合物选自
(i)乳脂，一种或多种乳脂部分或上述的组合，
(ii)无水乳脂(AMF)，一种或多种AMF部分或上述的任意两种或更多种的组合，
(iii)一种或多种富含磷脂的乳脂的部分，
(iv)一种或多种富含神经节苷脂的乳脂的部分，
(v)(i)至(iv)的任意一种或多种的一种或多种水解物，及
(vi)(i)至(v)的任意两种或更多种的组合，或
(d)(a)至(c)的任意两种或更多种的组合。
本发明的另一方面涉及用于治疗或预防轮状病毒感染的一种或多种试剂，该试剂选自：
(a)一种或多种共轭亚油酸(CLA)的异构体、11-十八碳烯酸或上述的组合，或
(b)高CLA的乳脂、一种或多种高CLA的乳脂部分、高CLA的乳脂的水解物、一种或多种高CLA的乳脂部分的水解物或上述的组合，
(c)(a)与(b)的组合。
本发明的另一方面涉及用于治疗或预防轮状病毒感染一种或多种试剂，该试剂选自：
(i)牛乳脂，一种或多种乳脂部分或上述的组合，
(ii)无水牛乳脂(AMF)，一种或多种AMF部分或上述的组合，
(iii)一种或多种富含磷脂的牛乳脂的部分，
(iv)一种或多种富含神经节苷脂的牛乳脂的部分，
(v)(i)至(iv)的任意一种或多种的一种或多种水解物，及
(vi)(i)至(v)的任意两种或更多种的组合。
本发明的另一方面涉及上文所述的一种或多种试剂在制备用于治疗或预防轮状病毒感染的组合物中的用途。
本发明的另一方面涉及治疗或预防轮状病毒感染的方法，该方法包括向需要一种或多种如上文所述的试剂的个体给药有效量的一种或多种如上文所述的试剂。
下文的实施方案可以涉及任何上述方面。
在一个实施方案中，轮状病毒为人轮状病毒，即感染人的轮状病毒株。在另一个实施方案中，轮状病毒为非人轮状病毒株，例如禽类(例如鸡、鸽子或火鸡轮状病毒株)、牛、犬、山羊、马、猫科、野兔、鼠、绵羊、猪或猿轮状病毒株。在一个实施方案中，轮状病毒是神经氨酸酶敏感性轮状病毒。在另一个实施方案中，轮状病毒是神经氨酸酶抗性轮状病毒。仍然在另一个实施方案中，轮状病毒是神经氨酸酶抗性的人轮状病毒。仍然在另一个实施方案中，神经氨酸酶抗性人轮状病毒是Wa人轮状病毒株。在一个实施方案中，个体是人。在一个实施方案中，个体为成人、儿童或婴儿、或免疫受损的成人、儿童或婴儿。在另一个实施方案中，个体为儿童、婴儿、免疫受损的儿童或免疫受损的婴儿。在另一个实施方案中，个体为成人、超过55岁的成人、免疫受损的成人、免疫受损的超过55岁的成人。
在一个实施方案中，所述试剂通过减少病毒对细胞的附着来治疗或预防轮状病毒感染。在另一个实施方案中，所述试剂通过减少病毒进入细胞来治疗或预防轮状病毒感染。在另一个实施方案中，所述试剂通过减少细胞中的病毒复制来治疗或预防轮状病毒感染。在另一个实施方案中，所述试剂通过减少细胞中的病毒包装来治疗或预防轮状病毒感染。在另一个实施方案中，所述试剂通过减少病毒的细胞裂解来治疗或预防轮状病毒感染。在一个实施方案中，所述试剂治疗或预防致泻的(diarrheagenic)轮状病毒感染。在另一个实施方案中，所述试剂治疗或预防轮状病毒感染引起的腹泻。
在一个实施方案中，富含神经节苷脂的部分包含GD3或GM3或其组合。
在一个实施方案中，富含磷脂的部分包含一种或多种磷脂酰乙醇胺、 一种或多种磷脂酰肌醇、一种或多种磷脂酰丝氨酸、一种或多种磷脂酰胆碱、一种或多种鞘脂(包括一种或多种鞘磷脂、一种或多种二氢鞘磷脂、一种或多种神经酰胺、一种或多种脑苷脂或一种或多种神经节苷脂或上述的任意两种或更多种的任意组合)、一种或多种溶血磷脂(失去一个脂肪酸的磷脂)或上述的任意两种或更多种的任意组合。
在一个实施方案中，所述试剂包含一种或多种甘油酯(包括一种或多种甘油单酸酯、一种或多种甘油二酸酯、或一种或多种甘油三酸酯或上述的任意两种或更多种的任意组合)、一种或多种磷脂(包括一种或多种磷脂酰乙醇胺、一种或多种磷脂酰肌醇、一种或多种磷脂酰丝氨酸、一种或多种磷脂酰胆碱、一种或多种鞘脂(如上文所述)或上述的任意两种或更多种的任意组合)、一种或多种溶血磷脂(失去一个脂肪酸的磷脂)、一种或多种神经酰胺、一种或多种醚甘油磷脂、一种或多种脑苷脂(包括一种或多种葡糖苷脂酰鞘氨醇、或一种或多种乳糖苷神经酰胺或上述的组合)、一种或多种硫苷脂、或一种或多种神经节苷脂(包括一种或多种单唾液酸神经节苷脂、一种或多种双唾液酸神经节苷酯、或一种或多种聚唾液酸神经节苷酯或上述的组合)或上述的任意两种或更多种的任意组合。
在一个实施方案中，将所述试剂作为脂质组合物的成分进行给药。优选的脂质组合物包括动物、植物和海产油和脂肪以及通过微生物发酵产生的脂质。优选的动物脂肪包括但不限于乳品脂肪，特别是牛乳脂，包括稀奶油。
在一个实施方案中，所述试剂选自稀奶油、奶油、酥油、无水乳脂(AMF)(通常通过稀奶油的相反转或奶油的脱水生产)、酪乳、奶油乳浆(serum)、β乳浆、从分离的一个或多个阶段得到的硬乳脂部分(包括H、SH和SSH部分)、从分离的一个或多个阶段得到的软乳脂部分(包括S、SS和SSS部分)、硬乳脂部分的组合、软乳脂部分的组合、硬乳脂部分与软乳脂部分的组合、鞘脂部分、富含乳脂球(或“球状”)膜脂质的部分(包括，例如鞘脂、神经酰胺和脑苷脂)、磷脂部分和复合脂质部分、富含CLA的乳脂、富含CLA的乳脂部分及上述的任意两种或更多种的任意组合，和上述的水解物，及所述水解物的部分，以及水解和/或未水解的部分的组合。这些部分可以从全乳或初乳及全乳或初乳的任何衍生物中获得， 该全乳或初乳的衍生物包括稀奶油、酸性稀奶油和乳清稀奶油(从乳清获得的乳脂质，包括酸乳清或乳酪乳清，优选乳酪乳清)。酸性稀奶油是从用产酸微生物，优选乳酸菌发酵的全乳或初乳得到的稀奶油。
在一个实施方案中，乳脂或其部分选自稀奶油、奶油、酥油、无水乳脂(AMF)(通常通过稀奶油的相反转或奶油的脱水生产)、酪乳、奶油乳浆、β乳浆、从分离的一个或多个阶段得到的硬乳脂部分(包括H、SH和SSH部分)、从分离的一个或多个阶段得到的软乳脂部分(包括S、SS和SSS部分)、硬乳脂部分的组合、软乳脂部分的组合、硬乳脂部分与软乳脂部分的组合及上述的任意两种或更多种的任意组合。
在一个实施方案中，AMF部分选自一种或多种硬乳脂部分(例如H、SH和SSH部分)、一种或多种软乳脂部分(例如S、SS和SSS部分)、硬乳脂部分的组合、软乳脂部分的组合、硬乳脂部分与软乳脂部分的组合及上述的任意两种或更多种的任意组合。
在一个实施方案中，富含磷脂的部分选自酪乳、一种或多种酪乳部分、奶油乳浆、一种或多种奶油乳浆部分、β乳浆、一种或多种β乳浆部分、一种或多种鞘脂部分、一种或多种乳脂球膜脂质部分、一种或多种磷脂部分、一种或多种复合脂质部分及上述的任意两种或更多种的任意组合。
在一个实施方案中，富含神经节苷脂的部分选自酪乳、一种或多种酪乳部分、奶油乳浆、一种或多种奶油乳浆部分、β乳浆、一种或多种β乳浆部分、一种或多种β乳浆的富含GD3的部分、一种或多种β乳浆的富含GM3的部分、一种或多种β乳浆的富含GD3和GM3的部分及上述的任意两种或更多种的任意组合。
在某些实施方案中，所述部分包含：
(a)约5％w/w至约100％w/w的脂质，或
(b)约40％w/w至约100％w/w的脂质，或
(c)约5％w/w至约95％w/w的脂质和约0％w/w至约75％w/w的蛋白质，或
(d)约15％w/w至约95％w/w的脂质和约0％w/w至约75％w/w的蛋白质，或
(e)约5％w/w至约95％w/w的脂质、约0％w/w至约75％w/w的蛋白质、约5％w/w至约85％w/w的磷脂和约0％w/w至约5％w/w的神经节苷酯，或
(f)约15％w/w至约95％w/w的脂质、约0％w/w至约65％w/w的蛋白质、约5％w/w至约70％w/w的磷脂和约0％w/w至约2.5％w/w的神经节苷酯。
在某些实施方案中，所述部分包含至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％或95％w/w的磷脂，并且可在任意这些值之间选择可用的范围(例如，约5％w/w至约95％w/w、约10％w/w至约95％w/w、约15％w/w至约95％w/w、约20％w/w至约95％w/w、约25％w/w至约95％w/w、约30％w/w至约95％w/w、约35％w/w至约95％w/w、约40％w/w至约95％w/w、约45％w/w至约95％w/w、约50％w/w至约95％w/w、约10％w/w至约70％w/w、约15％w/w至约70％w/w、约20％w/w至约70％w/w、约25％w/w至约70％w/w、约30％w/w至约70％w/w、约35％w/w至约70％w/w、约40％w/w至约70％w/w、约45％w/w至约70％w/w和约50％w/w至约70％w/w的磷脂)。
在某些实施方案中，所述部分包含至少约0.1％、0.5％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％w/w的独立地选自磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、磷脂酰丝氨酸和磷脂酰肌醇的一种或多种磷脂，并且可在任意这些值之间选择可用的范围(例如约0.1％w/w至约30％w/w、约0.5％w/w至约30％w/w、约1％w/w至约30％w/w、约2％w/w至约30％w/w、约3％w/w至约30％w/w、约4％w/w至约30％w/w、约5％w/w至约30％w/w、约10％w/w至约30％w/w、约15％w/w至约30％w/w、约20％w/w至约30％w/w、约0.1％w/w至约5％w/w、约0.5％w/w至约5％w/w、约1％w/w至约5％w/w、约2％w/w至约5％w/w、约3％w/w至约5％w/w、约0.1％w/w至约10％w/w、约0.5％w/w至约10％w/w、约1％w/w至约10％w/w、约2％w/w至约10％w/w、约3％w/w至约10％w/w、约4％w/w至约10％w/w、 约5％w/w至约10％w/w、约6％w/w至约10％w/w、约0.1％w/w至约20％w/w、约0.5％w/w至约20％w/w、约1％w/w至约20％w/w、约2％w/w至约20％w/w、约3％w/w至约20％w/w、约4％w/w至约20％w/w、约5％w/w至约20％w/w、约10％w/w至约20％w/w、约15％w/w至约20％w/w的独立地选自磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、鞘磷脂、磷脂酰丝氨酸和磷脂酰肌醇的一种或多种磷脂)。
在某些实施方案中，所述部分包含：
(a)约25％w/w至约35％w/w的蛋白质、约15％w/w至约25％w/w的脂质和约5％w/w至约12％w/w的磷脂，或
(b)约25％w/w至约35％w/w的蛋白质、约15％w/w至约25％w/w的脂质、约5％w/w至约12％w/w的磷脂、约5％w/w至约10％w/w的MFGM蛋白和约0.2％w/w至约0.9％w/w的神经节苷脂，或
(c)约25％w/w至约35％w/w的蛋白质、约15％w/w至约25％w/w的脂质、约5％w/w至约12％w/w的磷脂、约1％w/w至约5％w/w的磷脂酰胆碱、约1.5％w/w至约6％w/w的磷脂酰乙醇胺、约1％w/w至约5％w/w的鞘磷脂、约0.5％w/w至约2％w/w的磷脂酰丝氨酸、约0.1％w/w至2％w/w的磷脂酰肌醇、约5％w/w至约10％w/w的MFGM蛋白和约0.2％w/w至约0.9％w/w的神经节苷脂，或
(d)约40％w/w至约60％w/w的蛋白质、约25％w/w至约45％w/w的脂质和约10％w/w至约25％w/w的磷脂，或
(e)约40％w/w至约60％w/w的蛋白质、约25％w/w至约45％w/w的脂质、约10％w/w至约25％w/w的磷脂、约5％w/w至约20％w/w的MFGM蛋白和约0.5％w/w至约2.0％w/w的神经节苷脂，或
(f)约46％w/w至约52％w/w的蛋白质、约28％w/w至约40％w/w的脂质、约11％w/w至约16％w/w的磷脂、约2％w/w至约6％w/w的磷脂酰胆碱、约3％w/w至约8％w/w的磷脂酰乙醇胺、约2.5％w/w至约7％w/w的鞘磷脂、约0.5％w/w至约3％w/w的磷脂酰丝氨酸、约0.5％w/w至2％w/w的磷脂酰肌醇、约5％w/w至约15％w/w的MFGM蛋白和约0.5％w/w至约0.9％w/w的神经节苷脂，或
(g)约50％w/w至约70％w/w的蛋白质、约12％w/w至约32％w/w 的脂质和约5％w/w至约25％w/w的磷脂，或
(h)约50％w/w至约70％w/w的蛋白质、约12％w/w至约32％w/w的脂质，约5％w/w至约25％w/w的磷脂、约2％w/w至约8％w/w的磷脂酰胆碱、约2％w/w至约10％w/w的磷脂酰乙醇胺、约2％w/w至约8％w/w的鞘磷脂和约1％w/w至约3％w/w的磷脂酰丝氨酸、约10％w/w至约20％w/w的MFGM蛋白和约0.5％w/w至约2.5％w/w的神经节苷脂，或
(i)约56％w/w至约65％w/w的蛋白质、约18％至约28％w/w的脂质、约8％w/w至约20％w/w的磷脂、约2％w/w至约8％w/w的磷脂酰胆碱、约2％w/w至约10％w/w的磷脂酰乙醇胺、约2％w/w至约8％w/w的鞘磷脂和约1％w/w至约3％w/w的磷脂酰丝氨酸及约0.5％w/w至3％w/w的磷脂酰肌醇、约10％w/w至约20％w/w的MFGM蛋白和约0.5％w/w至约2.5％w/w神经节苷脂，或
(j)约0％w/w至约10％w/w的蛋白质、约85％w/w至约97％w/w的脂质和约25％w/w至约35％w/w的磷脂，或
(k)约0％w/w至约10％w/w的蛋白质、约85％w/w至约97％w/w的脂质、约25％w/w至约35％w/w的磷脂、约5％w/w至约10％w/w的磷脂酰胆碱、约7％w/w至约13％w/w的磷脂酰乙醇胺、约4％w/w至约9％w/w的鞘磷脂、约2％w/w至约5％w/w的磷脂酰丝氨酸、约1％w/w至约3％w/w的磷脂酰肌醇、约0％w/w至约5％w/w的MFGM蛋白和约1％w/w至约3％w/w的神经节苷脂，或
(l)约10％至约15％w/w的蛋白质、约80％w/w至约95％w/w的脂质和约60％w/w至约80％w/w的磷脂，或
(m)约10％w/w至约15％w/w的蛋白质、约80％w/w至约95％w/w的脂质、约60％w/w至约80％w/w的磷脂、约10％w/w至约20％w/w的磷脂酰胆碱、约18％w/w至约28％w/w的磷脂酰乙醇胺、约10％w/w至约20％w/w的鞘磷脂、约4％w/w至约12％w/w的磷脂酰丝氨酸、约2％w/w至约10％w/w的磷脂酰肌醇、约0％w/w至约5％w/w的MFGM蛋白和约1％w/w至约5％w/w的神经节苷脂，或
(n)约75％w/w至约99％w/w的脂质和约15％w/w至35％w/w的磷脂，或
(o)约80％w/w至约90％w/w的脂质、约5％w/w至约15％w/w的磷脂酰胆碱、约5％w/w至约15％w/w的磷脂酰乙醇胺、约4％w/w至约10％w/w的鞘磷脂和约0.1％w/w至约2％w/w磷脂酰丝氨酸，或
(p)约80％w/w至约90％w/w的脂质、约20％w/w至30％w/w的磷脂、约5％w/w至约15％w/w的磷脂酰胆碱、约5％w/w至约15％w/w的磷脂酰乙醇胺、约5％w/w至约10％w/w的鞘磷脂、约0.5％w/w至约1.5％w/w的磷脂酰丝氨酸和约0.1％w/w至约1.2％w/w的磷脂酰肌醇，或
(q)约75％w/w至约95％w/w的脂质和约50％w/w至约90％w/w的磷脂，或
(r)约80％w/w至约90％w/w的脂质、约10％至约30％w/w的磷脂酰胆碱、约12％w/w至约22％w/w的磷脂酰乙醇胺、约12％w/w至约22％w/w的鞘磷脂和约1％w/w至约3％w/w的磷脂酰丝氨酸，或
(s)约75％w/w至约95％w/w的脂质、约50％w/w至约90％w/w的磷脂、约10％w/w至约45％w/w的磷脂酰胆碱、约12％w/w至约25％w/w的磷脂酰乙醇胺、约12％至约25％w/w的鞘磷脂、约1％w/w至约6％w/w的磷脂酰丝氨酸和约0.5％w/w至4％w/w的磷脂酰肌醇，或
(t)约80％w/w至约90％w/w的脂质、约65％w/w至约75％w/w的磷脂、约10％w/w至约30％w/w的磷脂酰胆碱、约12％w/w至约22％w/w的磷脂酰乙醇胺、约12％w/w至约22％w/w的鞘磷脂、约1％w/w至约3％w/w的磷脂酰丝氨酸和约0.5％w/w至3％w/w的磷脂酰肌醇，或
(u)约25％w/w至约45％w/w的脂质和约0.2％w/w至约1％w/w的神经节苷脂GD3，或
(v)约25％w/w至约45％w/w的脂质、约10％w/w至约30％w/w的磷脂和约0.2％w/w至约1％w/w的神经节苷脂，或
(w)约25％w/w至约45％w/w的脂质、约10％w/w至约30％w/w的磷脂、约2％w/w至约5％w/w的磷脂酰胆碱、约3％w/w至约7％w/w的磷脂酰乙醇胺、约2％w/w至约5％w/w的鞘磷脂、约2％w/w至约12％w/w的磷脂酰丝氨酸、约1％w/w至约5％w/w的磷脂酰肌醇和约0.2％w/w至约1％w/w的神经节苷脂，或
(x)约20％w/w至约40％w/w的脂质和约0.8％w/w至约2％w/w神经 节苷脂GD3，或
(y)约20％w/w至约40％w/w的脂质、约5％w/w至约30％w/w的磷脂和约0.8％w/w至约3.5％w/w的神经节苷脂，或
(z)约20％w/w至约40％w/w的脂质、约5％w/w至约30％w/w的磷脂、约1％w/w至约5％w/w的磷脂酰胆碱、约2％w/w至约8％w/w的磷脂酰乙醇胺、约0.5％w/w至约5％w/w的鞘磷脂、约1％w/w至约10％w/w的磷脂酰丝氨酸、约1％w/w至约6％w/w的磷脂酰肌醇和约0.8％w/w至约3.5％w/w的神经节苷脂。
在一个实施方案中，所述部分包含至少约70％的总脂质、至少约12％的磷脂酰胆碱、至少约6％的磷脂酰乙醇胺、至少约6％的鞘磷脂和至少约1％的磷脂酰丝氨酸。在这个实施方案的优选部分中，所述部分包含约1.8％的丁酸(4:0)、约0.3％的癸酸(10:0)、约0.5％的月桂酸(12:0)、约7.4％的肉豆蔻酸(14:0)、约14.1％的肉豆蔻脑酸(14:1)、约1.0％的十五烷酸(15:0)、约26.0％的棕榈酸(16:0)、约1.7％的棕榈油酸(16:1)、约0.6％的十七烷酸(17:0)、约0.3％的十七碳烯酸(17:1)、约11.9％的硬脂酸(18:0)、约39.0％的油酸(18:1)、约5.0％的亚油酸(18:2)、约2.0％的亚麻酸(18:3)、约0.3％的花生酸(20:0)和约0.8％的胆固醇。在优选的实施方案中，这种部分的脂肪酸组成基本上如下文的实施例中所述的Phospholipid Concentrate(磷脂浓缩物)PC500TM磷脂部分。或者，所述部分是这个实施方案的部分的水解物。
在另一个实施方案中，所述部分包含至少约80％的总脂质、至少约30％的磷脂酰胆碱、至少约6％的磷脂酰乙醇胺、至少约15％的鞘磷脂和至少约2％的磷脂酰丝氨酸。在这个实施方案优选的部分中，所述部分包含约6.6％的肉豆蔻酸(14:0)、约27.0％的棕榈酸(16:0)、约1.3％的棕榈油酸(16:1)、约2.3％的十七烷酸(17:0)、约14％的硬脂酸(18:0)、约38.0％的油酸(18:1)、约6.5％的亚油酸(18:2)、约2.0％亚油酸(18:3)和约0.1％的胆固醇。在优选的实施方案中，这种部分的脂肪酸组成基本上如下文的实施例中所述的Phospholipid Concentrate PC600TM或PC700TM磷脂部分。或者，所述部分为这个实施方案的部分的水解物。
在一个实施方案中，所述部分包含至少约30％的总脂质、至少约0.5％ 的神经节苷脂GD3和至少约0.4％的神经节苷脂GM3。在优选的实施方案中，这种部分的脂肪酸组成基本上如下文的实例中所述的G500TM神经节苷脂部分。或者，所述部分为水解物。
在另一个实施方案中，所述部分包含至少约30％的总脂质、至少约1.2％的神经节苷脂GD3和至少约0.2％的神经节苷脂GM3。在优选的实施方案中，这种部分的脂肪酸组成基本上如下文的实例中所述的Ganglioside(神经节苷脂)G600TM的神经节苷脂部分。或者，所述部分为这个实施方案部分的水解物。
在一个实施方案中，本文中有用的组合物包含至少约0.1％、0.2％、0.5％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、99％、99.5％、99.8％或99.9％重量比的一种或多种上文所述的试剂，或者本发明中有用的组合物基本上由上述试剂组成，或由上述试剂组成，并且可在任意这些前述值之间选择可用的范围(例如，约0.1％至约50％、约0.2％至约50％、约0.5％至约50％、约1％至约50％、约5％至约50％、约10％至约50％、约15％至约50％、约20％至约50％、约25％至约50％、约30％至约50％、约35％至约50％、约40％至约50％、约45％至约50％、约0.1％至约60％、约0.2％至约60％、约0.5％至约60％、约1％至约60％、约5％至约60％、约10％至约60％、约15％至约60％、约20％至约60％、约25％至约60％、约30％至约60％、约35％至约60％、约40％至约60％、约45％至约60％、约0.1％至约70％、约0.2％至约70％、约0.5％至约70％、约1％至约70％、约5％至约70％、约10％至约70％、约15％至约70％、约20％至约70％、约25％至约70％、约30％至约70％、约35％至约70％、约40％至约70％、约45％至约70％、约0.1％至约80％、约0.2％至约80％、约0.5％至约80％、约1％至约80％、约5％至约80％、约10％至约80％、约15％至约80％、约20％至约80％、约25％至约80％、约30％至约80％、约35％至约80％、约40％至约80％、约45％至约80％、约0.1％至约90％、约0.2％至约90％、约0.5％至约90％、约1％至约90％、约5％至约90％、约10％至约90％、约15％至约90％、约20％至约90％、约25％至约90％、约30％至约90％、 约35％至约90％、约40％至约90％、约45％至约90％、约0.1％至约99％、约0.2％至约99％、约0.5％至约99％、约1％至约99％、约5％至约99％、约10％至约99％、约15％至约99％、约20％至约99％、约25％至约99％、约30％至约99％、约35％至约99％、约40％至约99％以及约45％至约99％)。
在一个实施方案中，本文中有用的组合物包含至少约0.001克、0.01克、0.05克、0.1克、0.15克、0.2克、0.3克、0.4克、0.5克、1克、2克、3克、4克、5克、6克、7克、8克、9克、10克、11克、12克、13克、14克、15克、16克、17克、18克或19克的一种或多种上文所述的试剂，或者本发明中有用的组合物基本上由上述试剂组成，或由上述试剂组成，并且可在任意这些前述值之间选择可用的范围(例如，约0.01克至约1克、约0.01克至约10克、约0.01克至约19克、约0.1克至约1克、约0.1克至约10克、约0.1克至约19克、约1克至约5克、约1克至约10克、约1克至约19克、约5克至约10克以及约5克至约19克)。
在一个实施方案中，本文中有用的组合物包含约0.1％、0.5％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、99％或99.9％重量比的新鲜全乳或乳衍生物，或者本文中有用的组合物基本上由上述试剂组成，或由上述试剂组成，并且可在任意这些前述值之间选择可用的范围(例如，约0.1％至约50％、约0.2％至约50％、约0.5％至约50％、约1％至约50％、约5％至约50％、约10％至约50％、约15％至约50％、约20％至约50％、约25％至约50％、约30％至约50％、约35％至约50％、约40％至约50％以及约45％至约50％)。所述乳衍生物优选自再生、粉末或新鲜的脱脂乳，再生或还原的全脂乳粉或脱脂乳粉，脱脂乳浓缩物，脱脂乳渗余物(retentate)，浓缩乳，超滤乳渗余物，乳蛋白浓缩物(MPC)，乳蛋白分离物(MPI)，脱钙乳蛋白浓缩物(MPC)，低脂乳，低脂乳蛋白浓缩物(MPC)，酪蛋白，酪蛋白酸盐，乳脂，稀奶油，奶油，酥油，无水乳脂(AMF)，酪乳，奶油乳浆，β乳浆，硬乳脂部分，软乳脂部分，鞘脂部分，乳脂球膜部分，乳脂球膜脂质部分，磷脂部分， 复合脂质部分，初乳，初乳部分，初乳蛋白浓缩物(CPC)，初乳乳清，来自初乳的免疫球蛋白部分，乳清(包括甜乳清、乳酸乳清、无机酸乳清或还原的乳清粉)，乳清蛋白分离物(WPI)，乳清蛋白浓缩物(WPC)，源自任意乳或初乳加工流(processing stream)的组合物，源自通过任意乳或初乳加工流的超滤或微量过滤获得的渗余物或渗透物(permeate)的组合物，源自通过任意乳或初乳加工流的色谱(包括但不限于离子和凝胶渗透色谱)分离获得的穿透或吸附部分的组合物，包括通过多级分离、差分结晶(differential crystallisation)、溶剂分离、超临界分离、近临界分离、蒸馏、离心分离或使用改性剂(如肥皂或乳化剂)的分离制备的提取物在内的任意这些乳衍生物的提取物，任意这些衍生物的水解物，水解物的部分以及包括水解和/或未水解部分的组合在内的任意两种或更多种这些衍生物的任意组合。应当理解，这些衍生物的来源可以是乳或初乳或其组合。
在一个实施方案中，本文中有用的组合物还包含药物可接受的载体。在另一个实施方案中，所述组合物为或被配制为食品、饮料、食品添加剂、饮料添加剂、营养补充剂、营养品、药膳食品、肠道喂养产品、胃肠外喂养产品、代餐、药用化妆品、保健品、药物(medicament)或药品(pharmaceutical)。在一个实施方案中，所述组合物的形式为片剂、囊片(caplet)、丸剂、硬或软的胶囊剂或锭剂。在一个实施方案中，所述组合物的形式为扁囊剂、粉末、可分配的粉末(dispensable powder)、颗粒剂、悬浮液、酏剂、液体或能够加入到食品或饮料中的任何其它形式，包括如水，乳或果汁。在一个实施方案中，所述组合物还包含一种或多种组分(例如抗氧化剂)，该组分能够在贮存期间或给药后的过程中避免或减少所述组合物的降解。这些组合物可以包括能够输送脂质的任何可食用消费品。合适的可食用消费品的实例包括水性制品，烘焙食品，包括巧克力、凝胶剂、冰淇淋在内的糖果制品，还原的水果制品，零食条(snack bar)，食物条(food bar)，牛奶什锦早餐条(muesli bar)，涂抹食品(spread)，调味汁，蘸液(dip)，包括酸乳酪和乳酪在内的乳制品，包括基于乳品和基于非乳品的饮料在内的饮料，乳，乳粉，包括基于乳品和基于非乳品的运动补充剂在内的运动补充剂，果汁，诸如蛋白撒布微粒(protein sprinkle)的食品添加剂，包括日补充片剂、断奶食品和酸乳酪在 内的营养补充制品以及粉末或液体形式的诸如婴儿代乳品(formula)、较大婴儿代乳品(follow-on formula)或成长代乳品的代乳品。可以类似的形式提供本文中有用的合适保健品组合物。
在一个实施方案中，所述组合物还可以包含抗病毒剂，或者试剂可与抗病毒剂组合，例如选自茶黄素、蛋白酶抑制剂、卵黄免疫球蛋白、合成的硫酸化唾液酸脂质NMSO3、人乳粘着蛋白(乳脂球膜的糖蛋白)、MUC1粘蛋白、牛大分子乳清蛋白部分或上述的组合的一种或多种抗病毒剂。在一个实施方案中，本文中有用的组合物包括乳组分，或者将该组合物与乳组分同时或顺序给药，该乳组分例如乳清蛋白、乳清蛋白部分(包括酸性或碱性乳清蛋白部分或其组合)、糖巨肽、乳铁蛋白、铁-乳铁蛋白、功能性乳铁蛋白或铁-乳铁蛋白变体、功能性乳铁蛋白或铁-乳铁蛋白片段、维生素D或钙或上述的任何两种或更多种的任意组合。优选地，该组合物还可以包含乳铁蛋白、铁-乳铁蛋白、功能性乳铁蛋白或铁-乳铁蛋白变体、功能性乳铁蛋白或铁-乳铁蛋白片段或上述的任意两种或更多种的组合，或者试剂可与以上组合。
对本文所公开的数字范围(例如，1至10)的引用还旨在包含对该范围内的全部有理数(例如，1、1.1、2、3、3.9、4、5、6、6.5、7、8、9和10)，以及该范围内有理数的任意范围(例如，2至8、1.5至5.5以及3.1至4.7)的引用，因此，在此处明确地公开了本文明确公开的全部范围的全部子范围。仅列举具有具体意图的实例，并认为在本申请中以类似的方式明确地指明所列举的最小值和最大值之间数值的全部可能的组合。
在本说明书中，当引用专利说明书、其它外部文件或其它信息来源时，这通常是为了为讨论本发明的特征提供上下文的目的。除非另外指明，否则对这些外部文件的引用不被理解为承认这些文件或者信息的这些来源在任何权限内是现有技术，或者形成本领域的公知常识部分。
附图简述
图1的两张图片表示，根据实施例2，用(A)高CLA乳脂或(B)从Fonterra Co-operative Group Limited购买的乳脂的G600TM神经节苷脂部 分处理的动物中未被感染的细胞的百分率。
发明详述
下文的实例证明，通过各种乳脂部分在体外防止轮状病毒的细胞附着，并且证明了乳脂部分在感染了Wa人轮状病毒株的动物模型中治疗或预防腹泻的能力。
1.定义
术语“无水乳脂”和“AMF”在本文中互换地使用，并且意指通过稀奶油的相反转或奶油的脱水来几乎完全地除去水和非脂肪材料而制备的乳脂部分。AMF(如果存在添加剂的话，也称作“无水乳脂肪(anhydrousbutteroil)”)通常从源于全乳的稀奶油或奶油中制备，但是也可以从初乳中制备。Bylund(Ed.，1995)公开了制备AMF的常用方法，该参考文献在此处被完整地并入。优选的AMF通常为约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、大于约95％、约96％、约97％、约98％、约99％、约99.5％或100％的脂质，并且具有约98％至约100％的脂质，特别是约99％的脂质、99.5％脂质或更高脂质的AMF是更优选的。对于AMF或无水乳脂肪，食品法规通常要求小于0.2％的水分，而对于乳脂肪，食品法规通常要求小于0.7％的水分。通常将AMF进一步分离成“硬”(H)和“软”(S)部分，还能够将“软”(S)部分进一步分离成“软硬(soft hard)”(SH)和“软软(soft soft)”(SS)部分，能够将软软(soft soft)”(SS)部分再进一步分离成“软软硬(soft soft hard)”(SSH)和“软软软(soft soft soft)”(SSS)部分。应当理解，每种部分的脂肪酸组成是不同的。AMF和衍生部分的非限制性示例脂肪酸组成示于下文的表1至表5中。
表1.示例性AMF组成
脂肪酸组分 平均值 (％w/w) 最小值 (％w/w) 最大值 (％w/w) c4:0(丁酸) 3.6 3.3 4.1 c6:0(己酸) 2.2 1.9 2.4 c8:0(辛酸) 1.2 1.1 1.4 c10:0(癸酸) 2.6 2.2 2.8
c10:1(2-癸烯酸) 0.3 0.3 0.3 c12:0(月桂酸) 2.9 2.5 3.2 c12:1(11-十二碳烯酸) 0.1 0.1 0.1 c13:0br(十三烷酸br) 0.1 0.1 0.1 c13:0(十三烷酸) 0.1 0.1 0.1 c14:0br(肉豆蔻酸br) 0.2 0.1 0.2 c14:0(肉豆蔻酸) 10.4 9.5 10.8 c14:1(肉豆蔻脑酸) 0.9 0.6 1.0 c15:0iso br 0.4 0.3 0.5 c15:0ante-iso br 0.6 0.5 0.7 c15:0(十五烷酸) 1.4 1.1 1.5 c16:0br 0.3 0.2 0.3 c16:0(棕榈酸) 28.7 25.4 30.4 c16:1(棕榈油酸) 1.9 1.6 2.0 c17:0iso br 0.7 0.6 0.7 c17:0ante-iso br 0.5 0.5 0.5 c17:0(十七烷酸) 0.7 0.6 0.8 c17:1 0.3 0.3 0.4 c18:0(硬脂酸) 11.5 10.8 13.6 c18:1(油酸) 23.4 21.8 26.4 c18:2(亚油酸) 1.4 1.3 1.7 c18:2conj 1.3 1.0 1.8 c18:3 0.8 0.7 0.9 c20:0(花生酸) 0.2 0.1 0.2 c20:1 0.3 0.2 0.3
表2.示例性硬部分(部分H)组成
脂肪酸组分 平均值 (％w/w) 最小值 (％w/w) 最大值 (％w/w) c4:0(丁酸) 2.0 1.8 2.1 c6:0(己酸) 1.3 1.2 1.4 c8:0(辛酸) 0.8 0.8 0.9 c10:0(癸酸) 2.2 1.9 2.4 c10:1(2-癸烯酸) 0.2 0.1 0.2 c12:0(月桂酸) 3.0 2.6 3.4 c12:1(11-十二碳烯酸) 0.0 0.0 0.1 c13:0br(十三烷酸br) 0.1 0.1 0.1 c13:0(十三烷酸) 0.1 0.1 0.1 c14:0br(肉豆蔻酸br) 0.1 0.1 0.2 c14:0(肉豆蔻酸) 11.8 10.7 12.6
c14:1(肉豆蔻脑酸) 0.6 0.3 0.7 c15:0iso br 0.4 0.3 0.5 c15:0ante-iso br 0.5 0.4 0.6 c15:0(十五烷酸) 1.6 1.2 1.7 c16:0br 0.3 0.3 0.3 c16:0(棕榈酸) 34.8 31.5 36.6 c16:1(棕榈油酸) 1.3 1.1 1.6 c17:0iso br 0.8 0.7 0.8 c17:0ante-iso br 0.5 0.5 0.6 c17:0(十七烷酸) 0.9 0.8 0.9 c17:1 0.2 0.2 0.3 c18:0(硬脂酸) 15.2 13.9 19.7 c18:1(油酸) 17.0 15.5 19.8 c18:2(亚油酸) 1.3 1.1 1.5 c18:2conj 0.8 0.6 1.1 c18:3 0.5 0.4 0.6 c20:0(花生酸) 0.2 0.2 0.3 c20:1 0.2 0.1 0.2
表3.示例性软硬部分(部分SH)组成
脂肪酸组分 平均值 (％w/w) 最小值 (％w/w) 最大值 (％w/w) c4:0(丁酸) 4.0 3.7 4.3 c6:0(己酸) 2.4 2.1 2.6 c8:0(辛酸) 1.2 1.1 1.4 c10:0(癸酸) 2.4 2.2 2.7 c10:1(2-癸烯酸) 0.3 0.2 0.3 c12:0(月桂酸) 2.5 2.3 2.7 c12:1(11-十二碳烯酸) 0.1 0.0 0.1 c13:0br(十三烷酸br) 0.1 0.1 0.1 c13:0(十三烷酸) 0.1 0.1 0.1 c14:0br(肉豆蔻酸br) 0.1 0.1 0.2 c14:0(肉豆蔻酸) 9.8 9.0 10.3 c14:1(肉豆蔻脑酸) 0.8 0.5 0.9 c15:0iso br 0.4 0.3 0.4 c15:0ante-iso br 0.5 0.4 0.6 c15:0(十五烷酸) 1.4 1.1 1.5 c16:0br 0.2 0.2 0.3 c16:0(棕榈酸) 32.8 29.8 34.0 c16:1(棕榈油酸) 1.5 1.3 1.8 c17:0isobr 0.6 0.6 0.7
c17:0ante-iso br 0.4 0.4 0.5 c17:0(十七烷酸) 0.8 0.8 0.9 c17:1 0.3 0.2 0.3 c18:0(硬脂酸) 13.2 12.5 16.1 c18:1(油酸) 19.5 17.4 22.2 c18:2(亚油酸) 1.3 1.2 1.5 c18:2conj 1.2 1.0 1.6 c18:3 0.7 0.6 0.7 c20:0(花生酸) 0.2 0.2 0.3 c20:1 0.2 0.2 0.3
表4.示例性软软硬部分(部分SSH)组成
脂肪酸组分 平均值 (％w/w) 最小值 (％w/w) 最大值 (％w/w) c4:0(丁酸) 4.0 3.9 4.3 c6:0(己酸) 2.4 2.2 2.6 c8:0(辛酸) 1.4 1.2 1.6 c10:0(癸酸) 2.8 2.4 3.4 c10:1(2-癸烯酸) 0.3 0.3 0.3 c12:0(月桂酸) 3.2 2.7 3.8 c12:1(11-十二碳烯酸) 0.1 0.1 0.1 c13:0br(十三烷酸br) 0.1 0.1 0.1 c13:0(十三烷酸) 0.1 0.1 0.1 c14:0br(肉豆蔻酸br) 0.2 0.1 0.2 c14:0(肉豆蔻酸) 11.5 10.6 12.2 c14:1(肉豆蔻脑酸) 0.9 0.7 1.0 c15:0iso br 0.4 0.4 0.5 c15:0ante-iso br 0.6 0.6 0.7 c15:0(十五烷酸) 1.4 1.2 1.5 c16:0br 0.3 0.2 0.3 c16:0(棕榈酸) 28.6 25.7 30.0 c16:1(棕榈油酸) 1.8 1.6 2.0 c17:0isobr 0.7 0.6 0.7 c17:0ante-iso br 0.5 0.5 0.5 c17:0(十七烷酸) 0.7 0.6 0.8 c17:1 0.3 0.3 0.4 c18:0(硬脂酸) 10.6 10.2 11.3 c18:1(油酸) 22.2 20.3 24.8 c18:2(亚油酸) 1.4 1.3 1.5 c18:2conj 1.3 1.1 1.7 c18:3 0.8 0.8 1.0
c20:0(花生酸) 0.2 0.1 0.2 c20:1 0.2 0.0 0.3
表5.示例性软软软部分(部分SSS)组成
脂肪酸组分 平均值 (％w/w) 最小值 (％w/w) 最大值 (％w/w) c4:0(丁酸) 4.4 4.0 4.7 c6:0(己酸) 2.7 2.4 2.8 c8:0(辛酸) 1.6 1.4 1.8 c10:0(癸酸) 3.4 2.8 3.7 c10:1(2-癸烯酸) 0.4 0.3 0.4 c12:0(月桂酸) 3.7 3.2 4.1 c12:1(11-十二碳烯酸) 0.1 0.1 0.1 c13:0br(十三烷酸br) 0.2 0.1 0.2 c13:0(十三烷酸) 0.1 0.1 0.1 c14:0br(肉豆蔻酸br) 0.2 0.2 0.2 c14:0(肉豆蔻酸) 10.2 9.5 11.0 c14:1(肉豆蔻脑酸) 1.2 0.8 1.3 c15:0iso br 0.5 0.4 0.5 c15:0ante-iso br 0.8 0.7 0.9 c15:0(十五烷酸) 1.1 0.9 1.2 c16:0br 0.3 0.2 0.3 c16:0(棕榈酸) 20.0 18.4 21.1 c16:1(棕榈油酸) 2.6 2.2 3.0 c17:0iso br 0.6 0.5 0.6 c17:0ante-iso br 0.5 0.5 0.5 c17:0(十七烷酸) 0.4 0.4 0.5 c17:1 0.5 0.5 0.6 c18:0(硬脂酸) 6.7 5.8 7.8 c18:1(油酸) 30.8 28.2 33.4 c18.2(亚油酸) 1.9 1.7 2.1 c18:2conj 1.7 1.3 2.3 c18:3 1.3 1.1 1.4 c20:0(花生酸) 0.1 0.1 0.1 c20:1 0.3 0.1 0.4
术语“β-乳浆”表示从含有多于60％的脂肪的乳品流分离的水性乳品成分，如下文所述，该分离是通过从水包油乳液至油包水乳液的相反转实现的。稀奶油是用于制备β-乳浆的优选原材料。例如，如WO2006/041316中图2所示，在从稀奶油制备乳脂肪(也称为无水乳脂或 AMF)的过程中制备β-乳浆。优选地，将β乳浆干燥；优选地，干燥的β-乳浆是粉末。
术语“高CLA的乳脂”与术语“富含CLA的乳脂”互换地使用，并且表示乳脂，该乳脂比普通乳脂包含更高水平的顺-9、反-11CLA或其盐、酯或前体，并且任选地包含更高水平的一种或多种其它CLA异构体。富含CLA的乳脂可以通过已知的技术来制备，该技术包括但不限于牧场饲养奶牛的游离脂肪酸的补充饲喂，例如，根据已知方法用鱼油和葵花油来饲喂奶牛。通常从全乳制备富含CLA的乳脂，但也可以从初乳制备。公开的国际PCT申请WO2005/107736中描述了富含CLA的乳脂的通常组合物，该申请在此处通过引用被并入。富含CLA的乳脂也可以通过如下文所述的用CLA补充乳脂来制备。在一个实施方案中，富含CLA的乳脂包含至少约2％、4％、6％、8％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％重量比的CLA，优选顺-9、反-11CLA，或其盐、酯或前体，并且可在任意这些前述值之间选择可用的范围(例如约4％至约7％)。富含CLA的乳脂优选地包含至少约2％重量比的顺-9、反-11CLA，优选约2％至10％重量比的顺-9、反-11CLA，更优选约4％至7％重量比的顺-9、反-11CLA，并且最优选约5％重量比的顺-9、反-11CLA。在一个实施方案中，富含CLA的乳脂包含CLA异构体，该异构体包含至少约50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％重量比的CLA，优选顺-9、反-11CLA或其盐、酯或前体，并且可在任意这些前述值之间选择可用的范围(例如约80％至约95％)。富含CLA的乳脂优选地包含CLA异构体，该异构体包含至少约50％重量比的顺-9、反-11CLA，优选约70％至80％重量比的顺-9、反-11CLA。
本说明书中所用术语“包含”表示“至少部分地由......组成”。当解释本发明书中包括该术语的叙述时，在每一叙述或权利要求中以该术语起始的特征都必须存在，但是其它特征也可以存在。诸如“包含(comprise)”和“包含(comprised)”的相关术语以相同方式来解释。
术语“共轭亚油酸”(CLA)表示一种或多种CLA异构体，该异构体选自游离或酯化形式的9，11-十八碳二烯酸和10，12-十八碳二烯酸，或其盐，或其混合物，该异构体包括顺-9、顺-11，顺-9、反-11，反-9、顺-11， 反-9、反-11，顺-10、顺-12，顺-10、反-12，反-10、顺-12和反-10、反12异构体，优选顺-9、顺-11，顺-9、反-11，反-10、顺-12和顺-10、顺-12异构体，如在公开的美国专利US5,585,400中所述，该专利在此处通过引用被并入。Chin et al(1992)描述了诸如顺-9、反-11CLA的CLA天然来源，该天然来源包括动物、细菌和植物来源。可以通过下述细菌的发酵将亚油酸转化成CLA：例如，产芽胞梭状芽孢杆菌(Clostridiumsporogenes)、双酶梭状芽孢杆菌(Clostridium bifermentans)、污泥梭状芽孢杆菌(Clostridium sordellii)和拟杆菌(Bacteroides sp)(Verhulst，et al.，1985)。其它用于细菌发酵的有机体包括溶纤维丁酸弧菌(Butyrivibriofibrisolvens)、迟缓真细菌(Eubacterium lentum)、费氏丙酸杆菌(Propionibacterium freudenreichi)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillusacidophilus)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)、埃氏巨球菌(Megasphaera elsdenii)和短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)。分别含有约65％和76％的亚油酸的葵花油和红花油可以用于CLA的制备。
“有效量”是赋予治疗效果所需要的量。Freireich等人(1966)描述了动物和人的剂量相互关系(基于毫克/平方米体表面)。从个体的身高和体重能够大约确定体表面积。参见，例如Scientific Tables(科学制表)，Geigy Pharmaceuticals，Ardley，New York，1970，537。如本领域技术人员所了解的，有效的剂量还随着给药途径、载体的使用等而变化。
术语“富含(enrich)”和“富含(enriched)”表示部分或组合物所具有的指定成分的浓度比在全乳、稀奶油、奶油、无水乳脂、酪乳、奶油乳浆或β乳浆或所述部分或组合物来源的母部分(parent fraction)中存在的指定成分的浓度高。例如富含神经节苷脂的部分是具有比全乳、稀奶油、奶油、无水乳脂、酪乳、奶油乳浆或β乳浆更高的神经节苷脂浓度的部分。同样地，富含磷脂的部分是具有比全乳、稀奶油、奶油、无水乳脂、酪乳、奶油乳浆或β乳浆更高的磷脂浓度的部分。
术语“部分”表示从源材料中分离出来的组合物，并且该组合物与分离出所述部分的源材料组成不同。例如，非人哺乳动物乳脂部分，例如绵羊、山羊、猪、鼠、水牛、骆驼、牦牛、马、驴、美洲驼或牛乳脂部分，优选牛乳脂部分，与全乳中的天然存在的乳脂的组成是不同的。 在可选择的实施方案中，所述部分中的浓度高于全乳，或全初乳，或来自乳的稀奶油，或来自初乳的稀奶油，或来自乳的AMF，或来自初乳的AMF中的浓度。本文中有用的优选源材料包括全乳、稀奶油、无水乳脂、酪乳、奶油乳浆、或β乳浆、或来自牛乳的乳清稀奶油。如本文所述，优选的部分为脂质部分。
因此，术语“富含磷脂的乳脂部分”表示非人哺乳动物乳脂的分离部分，其中该部分的磷脂浓度高于天然存在的非人哺乳动物乳脂的磷脂浓度。优选地，本文中有用的部分中至少一种磷脂，或至少一种磷脂和至少一种神经节苷脂的浓度比天然存在的非人哺乳动物乳脂的中的浓度高至少约0.5％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％，并且可在这些值之间选择可用的范围。在可选择的实施方案中，所述部分中的浓度高于全乳，或全初乳，或来自乳的稀奶油，或来自初乳的稀奶油，或来自乳的AMF，或来自初乳的AMF中的浓度。
同样地，术语“富含神经节苷脂的乳脂部分”表示非人哺乳动物乳脂的分离部分，其中该部分的神经节苷脂浓度高于天然存在的非人哺乳动物乳脂的磷脂浓度。优选地，本文中有用的部分中至少一种神经节苷脂，或至少一种神经节苷脂和至少一种磷脂的浓度比天然存在的非人哺乳动物乳脂中的浓度高至少约0.5％、1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95或100％，并且可在这些值之间选择有效的范围。在可选择的实施方案中，所述部分中的浓度高于全乳，或全初乳，或来自乳的稀奶油，或来自初乳的稀奶油，或来自乳的AMF，或来自初乳的AMF中的浓度。
术语“功能性乳铁蛋白片段”旨在表示乳铁蛋白多肽的天然存在或非天然存在的部分，根据下文的实施例测定时，该部分具有活性并包括金属离子功能性片段。有用的乳铁蛋白片段包括截短的乳铁蛋白多肽、乳铁蛋白的金属离子结合水解物、包含N-小叶(lobe)金属离子结合袋(binding pocket)的片段、包含C-小叶金属离子结合袋的片段以及(通过人工或天然过程)产生并通过下文讨论的已知技术鉴定的金属离子结合片 段。公开的国际专利申请WO 2006/054908和WO 2007/043900报道了乳铁蛋白片段的制备和用途，每个申请都在此处通过引用被并入。
术语“功能性乳铁蛋白变体”旨在表示根据下文的实例测定时具有活性的乳铁蛋白多肽的变体，并包括金属离子功能性变体。
术语“乳铁蛋白多肽”意指非糖基化或糖基化的野生型乳铁蛋白氨基酸序列或来自诸如下文描述的那些物种的同源乳铁蛋白序列。乳铁蛋白多肽具有两个金属离子结合袋，因此可以按照每个乳铁蛋白分子2个金属离子的化学计量比来结合金属离子。一个金属离子结合袋位于乳铁蛋白的N端小叶(N-小叶)，另一袋位于C端小叶(C-小叶)。牛和人乳运铁蛋白(乳铁蛋白前体)、乳铁蛋白及其中的肽的验证的序列可以参见Swiss-Prot(http://au.expasy.org/cgi-bin/sprot-search-ful)。标示的乳铁蛋白多肽包括牛乳运铁蛋白前体登录号P24627、牛乳铁蛋白、人乳运铁蛋白前体登录号P02788和人乳铁蛋白。公开的国际专利申请WO 2006/054908和WO 2007/043900报道了乳铁蛋白多肽、其片段、水解物和氨基酸序列的制备(包括从乳中的分离)和用途，每个申请都在此处通过引用被并入。乳铁蛋白多肽可以结合“天然”水平的金属离子，通常是铁离子。例如，牛乳铁蛋白是天然的约10％至20％(优选15％)铁饱和的。本文可以使用至少1％金属离子饱和的脱铁乳铁蛋白(apolactoferrin)和乳铁蛋白。
术语“金属离子乳铁蛋白”、“金属离子饱和的乳铁蛋白”、“金属离子乳铁蛋白片段”和“金属离子饱和的乳铁蛋白片段”旨在表示提供金属离子结合袋的群体的乳铁蛋白多肽或片段的群体，其中该群体中存在的至少约25％的金属离子结合袋具有结合的金属离子。应当理解，所述群体可以包含不同物种的多肽；例如，一些分子不结合离子，而其它分子每个结合1或2个离子。在使用不同金属离子的情况下，一些分子可以结合金属离子，该金属离子例如选自铝、铋、铜、铬、钴、金、铁、锰、锇、铂、钌、锌离子或在乳铁蛋白金属离子结合袋中特异性配合的其它离子，并且其它分子可以结合不同的离子。在某些情况下，所述群体可以包含与非特异性离子结合有关的多肽，其中一个或多个离子，优选金属离子，是非特异性结合的，即，不在金属离子结合袋中与多肽结合。可以与乳铁蛋白多肽非特异性结合的离子的非限制性实例是钙和硒。 可以实现饱和度的变化，并且可以通过已知的方法采用分光光度分析来确定该饱和度-例如参见公开的国际申请WO 2007/043900，该申请在此处通过引用被并入。在一个实施方案中，乳铁蛋白分子的群体中存在的至少约1％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％或100％的金属离子结合袋具有结合的金属离子，并且可在任意前述值之间选择可用的范围(例如，约5％至约100％、约10％至约100％、约15％至约100％、约20％至约100％、约25％至约100％、约30％至约100％、约35％至约100％、约40％至约100％、约45％至约100％、约50％至约100％、约55％至约100％、约60％至约100％、约65％至约100％、约70％至约100％、约75％至约100％、约80％至约100％、约85％至约100％、约90％至约100％、约95％至约100％和约99％至约100％)。
术语“乳脂”包括哺乳动物脂质和脂质部分、脂质水解物和脂质部分水解物。在某些实施方案中，乳脂可以是任意哺乳动物乳脂，包括但不限于牛、绵羊、山羊、猪、鼠、水牛、骆驼、牦牛、马、驴、美洲驼或人乳脂，其中牛乳脂是优选的来源。优选乳脂是乳品脂肪，特别是牛乳脂。优选乳脂含有一种或多种的棕榈酸、油酸、硬脂酸或肉豆蔻酸，它们作为存在的最丰富的脂肪酸，优选地，棕榈酸、油酸、硬脂酸和肉豆蔻酸是存在的最丰富的脂肪酸。在特别优选的实施方案中，诸如稀奶油或AMF的乳脂，例如具有a)与普通牛乳脂基本上相同重量百分比的棕榈酸(约23％(w/w)至约32％(w/w)，通常约28％(w/w)-参见表1.2，PF Foxand PLH McSweeney eds，Advanced Dairy Chemistry Volume 2-Lipids，3rdEd，Springer NY，NY(2006)ISBN-10：0-387-26364-0)；b)与普通牛乳脂基本上相同重量百分比的油酸(约15％(w/w)至约22％(w/w)，通常约17％(w/w)-参见Fox and McSweeny，同上文)；c)与普通牛乳脂基本上相同重量百分比的硬脂酸(约10％(w/w)至约15％(w/w)，通常约12％(w/w)-参见Foxand McSweeny同上文)；d)与普通牛乳脂基本上相同重量百分比的肉豆蔻酸(约9％(w/w)至约12％(w/w)，通常约11％(w/w)-参见Fox andMcSweeny同上文)；e)上述a)、b)、c)或d)中的任意两种；f)上述a)、b)、 c)或d)中的任意三种；g)上述a)、b)、c)和d)中的每一种。无水乳脂(AMF)是优选的，特别是具有与普通牛乳脂基本上相同重量百分比的棕榈酸、油酸和硬脂酸组成的AMF，更优选具有与普通牛乳脂基本上相同的脂肪酸组成的AMF(参见Fox and McSweeny，同上文)。优选的乳脂部分还包括稀奶油，奶油，无水乳脂(AMF)(通常通过稀奶油的相反转或奶油的脱水制备)，酪乳，奶油乳浆，β乳浆，来自分离的一个或多个阶段的硬乳脂部分(包括H、SH和SSH部分)，来自分离的一个或多个阶段的软乳脂部分(包括S、SS和SSS部分)，硬乳脂部分的组合，软乳脂部分的组合，硬乳脂部分和软乳脂部分的组合，鞘脂部分(包括鞘磷脂部分、神经酰胺部分、脑苷脂部分或神经节苷脂部分或上述的任意两种或更多种的任意组合)，乳脂球膜脂质部分，磷脂部分和复合脂质部分或上述的任意两种或更多种的任意组合和上述的任意一种或多种的水解物及水解物的部分、任意两种或更多种水解物的组合以及一种或多种水解部分和/或一种或多种非水解部分的组合。优选地，所述乳脂包含至少约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、85％、90％、95％、99％或100％的脂质，并且可在任意这些值之间选择可用的范围(例如，约60％至约100％、约70％至约100％、约80％至约100％、约85％至约100％、约90％至约100％、约95％至约100％、约96％至约100％、约97％至约100％、约98％至约100％和约99％至约100％，优选约40％或高于40％至约100％)。
术语“口服给药”包括口服、口颊、肠内和胃内给药。
术语“肠胃外给药”包括但不限于局部(包括对任意皮肤、表皮或粘膜表面给药)、皮下、静脉内、腹膜内、肌肉内给药。
术语“药物可接受的载体”旨在表示包括但不限于赋形剂、稀释剂、助剂或其组合的载体，当将足以递送本文中有用的有效量的化合物或组合物的剂量进行给药时，所述载体能够作为本文所述的组合物的组分对个体进行给药而不降低该组合物的活性且不具有毒性。制剂能够口服给药、鼻内给药或肠胃外给药(包括局部给药、肌肉内给药、腹膜内给药、皮下给药以及静脉内给药)。
“个体”为动物，优选哺乳动物，更优选哺乳动物伴生动物(companionanimal)或人。优选的伴生动物包括猫、狗和马。在一个实施方案中，人 为成人、儿童或婴儿、或免疫受损的成人、儿童或婴儿。
术语“治疗”或其派生词应被解释为其最广泛可能的涵义。该术语不应被理解为暗示对个体进行治疗直至完全康复。因此，“治疗”广义上包括对症状发作或具体状态的严重性的改善和/或预防。
2.乳脂和乳脂分离
Fox and McSweeney(2006)全面讨论了乳脂，该参考文献在此处通过引用被并入。除了脂质以外，乳脂还包括维生素、甾醇和较少的组分。参见Fox and McSweeney的第一章Composition and Structure of BovineMilk Lipids(牛乳脂质的组合物和结构)，来用于描述天然存在的牛乳脂。Dairy Processing Handbook(乳品加工手册)，1995以及Illingworth，2002，和Rombaut等人，2006(b)讨论了乳脂的分离，这些参考文献均在此处通过引用被并入。Fox and McSweeney(2006)讨论了乳脂的季节变化。
本发明中有用的乳脂部分的实例包括稀奶油(通常约20％至约40％重量比的脂肪，优选约40％重量比的脂肪)、奶油、酥油、无水乳脂(AMF)(通常通过稀奶油的相反转或奶油的脱水制备)、酪乳、奶油乳浆、β乳浆、硬乳脂部分、软乳脂部分、鞘脂部分、乳脂球膜部分、磷脂部分和复合脂质(每个分子产生3种或更多类型的水解物的脂质)部分及上述的组合和上述的水解物。
例如Bylund，1995，Rombaut et al，2005；Rombaut et al，2006(a)；Rombaut et al，2006(b)和公开的国际申请WO 2006/041316讨论了酪乳、奶油乳浆和β乳浆，所有这些参考文献在此处通过引用被并入。酪乳是用来描述采用奶油制备方法从常规奶油生产中获得的水性液体相的术语，该奶油制备方法可以是批次(搅乳(churn))方法或连续(Fritz)方法。酪乳也是用来描述由从稀奶油制备AMF的常规方法中的稀奶油浓缩步骤所产生的水性副产物的术语。这种常规方法涉及稀奶油的浓缩然后相反转来制备油，将该油进一步浓缩并研磨(polish)来制备AMF。最后，酪乳也是用来描述AMF生产的二乳浆(two-serum)方法的二次脱脂物(secondary skim)与β乳浆副产物的组合的术语，例如参见Bylund(Ed.，1995)和公开的国际申请WO 2006/041316(参见图2)，这些参考文献详细 地描述了这种方法。在该二乳浆方法中，将由稀奶油浓缩步骤得到的副产物进一步分离来生产二次脱脂物，并将从油浓缩步骤得到的副产物进一步分离来制备β-乳浆。在前两个例子中，在任何相反转发生前制备酪乳。在第三个例子中，酪乳为相反转前制备的二次脱脂物与相反转后制备的β乳浆的组合。在这些方法中，通常通过离心来实现浓缩和研磨。通常通过均化作用实现相反转。应当理解，这些乳品脂质部分的来源可以是乳或初乳或其组合。
分离中有用的原材料包括从乳或初乳或其组合得到的稀奶油、AMF、酪乳、奶油乳浆或β乳浆。
可以通过差分结晶来进行乳脂的多级分离(multistage fractionation)。将乳脂部分加热到设定的温度，并分离结晶的部分或固体(“硬脂”-硬部分)部分和液体(“油精”-软部分)部分。多级分离意指在先前分离步骤的产物的后续步骤中的再分离。可以通过将母软部分分离成软和硬的细部分(sub-fraction)来制备连续的软部分。
其它分离法包括相反转、酯交换、甘油醇解、溶剂分离(例如单独或顺序采用乙醇、水或丙酮)、超临界分离(例如参见Astaire，et al，2003)、近临界分离(例如参见WO 2004/066744)、蒸馏、离心分离、悬浮结晶、干燥结晶、使用改性剂(例如肥皂或乳化剂)的分离、超滤、微滤和本领域已知的任何用于脂质分离的方法以及这些方法的组合，所有这些方法均是本领域已知的。
在一个实施方案中，分离方法选自单独或顺序利用乙醇、水或丙酮对稀奶油、AMF、酪乳、奶油乳浆或β乳浆进行的溶剂分离。
本发明组合物中存在的脂质可以被完全或部分地改性，无论是天然、化学、酶促，或通过本领域已知的任意其它方法，这些脂质包括，例如，糖基化、唾液酸化、酯化、磷酸化或水解的脂质。脂质水解物可以利用已知的技术来制备，该已知的技术包括但不限于酸水解、碱水解、诸如Fox和McSweeney((2006)，Chapter 15by HC Deeth and CH Fitz-Gerald)所述的酶水解的利用脂肪酶的酶水解以及微生物发酵。一种碱水解的方法包括添加1％KOH(溶于乙醇)，并加热10分钟。水解的材料可以用醋酸或盐酸来中和。
乳脂球膜材料可以根据Kanno & Dong-Hyun，1990的酸化方法来分离，并且可以通过如Kanno et al，1975所述的添加甲醇的方法将乳脂球膜材料进一步分离为脂质和蛋白质部分。根据Purthi et al，1970的步骤，可以通过利用丙酮萃取脂质混合物来分离磷脂部分。通过戊烷对非极性脂质的选择性萃取，脂质残留物可以进一步富集在乳脂球膜脂质中。
公开的国际专利申请WO 2006/041316、WO 2007/123424和WO2007/123425也描述了用于制备本文中有用的乳脂部分的分离方法，每个申请在此处通过引用被整体地并入。
本文中有用的特别优选的乳脂部分包括在下文实施例中所述的那些乳脂部分和在下表中所总结的那些乳脂部分。这些部分可以是乳液或干燥的，也可以是粉末，该部分任选地与含有诸如乳糖的助流剂的组分一起添加来改善流动性。
表6-乳脂部分
＜0.01＝痕量
3.发明的有用的组合物
可以将本文中有用的组合物配制为食品、饮料、食品添加剂、饮料添加剂、营养补充剂、营养品、药膳食品、肠内或胃肠外喂养产品、代餐、药用化妆品或药品(pharmaceutical)。本领域技术人员根据技能和本说明书的教导可以制备合适的制剂。
在一个实施方案中，本文中有用的组合物包括能够载有脂质的任何可食用的消费品。合适的可食用消费品的实例包括粉末，液体，包括巧克力、凝胶剂、冰淇淋在内的糖果制品，还原的水果制品，零食条(snackbars)，食物条，牛奶什锦早餐条，涂抹食品，调味汁，蘸液，包括酸乳酪和乳酪在内的乳制品，包括基于乳品和基于非乳品的饮料在内的饮料(例如乳饮料和酸奶饮料)，乳粉，包括基于乳品和基于非乳品的运动补充剂在内的运动补充剂，诸如蛋白撒布微粒的食品添加剂，包括日补充片剂、断奶食品和酸奶在内的营养补充制品以及粉末或液体形式存在的诸如婴儿代乳品，较大婴儿代乳品或成长代乳品的代乳品。在这个实施方案中，本文中有用的优选组合物可以是粉末或液体形式的婴儿代乳品、较大婴儿代乳品或成长代乳品。可以以类似的形式来提供本发明中有用的合适保健品组合物。
粉末或液体形式的诸如婴儿代乳品，较大婴儿代乳品或成长代乳品的代乳品的实例包括下述实例。本文中有用的婴儿代乳品，较大婴儿代乳品或成长代乳品的一个实例包含(w/w)
(a)30％-60％的乳糖
(b)15％-35％的植物油
(c)0％-40％的脱脂乳粉
(d)0％-40％的乳清蛋白，例如WPC或WPI，优选80％的WPC(WPC80)
(e)1％-50％的本文中有用的试剂。
本文中有用的婴儿代乳品，较大婴儿代乳品或成长代乳品的另一实例包含(w/w)
(a)40％-60％的乳糖
(b)20％-30％的植物油
(c)10％-15％的脱脂乳粉
(d)6％-8％的乳清蛋白，优选WPC80
(e)1％-10％的本文中有用的试剂。
本文中有用的婴儿代乳品，较大婴儿代乳品或成长代乳品的另一实例包含(w/w)
(a)40％-60％的乳糖
(b)20％-30％的植物油
(c)10％-15％的脱脂乳粉
(d)6％-8％的乳清蛋白，优选WPC80
(e)1％-5％的本文中有用的试剂。
本文中有用的婴儿代乳品，较大婴儿代乳品或成长代乳品的另一实例包含(w/w)
(a)40％-60％的乳糖
(b)20％-30％的植物油
(c)10％-15％的脱脂乳粉
(d)6％-8％的乳清蛋白，优选WPC80
(e)2％-5％的本文中有用的试剂。
本发明中有用的婴儿代乳品，较大婴儿代乳品或成长代乳品的另一实例包含(w/w)
(a)30％-60％的乳糖
(b)15％-35％的植物油
(c)0％-40％的脱脂乳粉
(d)0％-40％的乳清蛋白，优选WPC80
(e)1％-50％的本文中有用的试剂，例如β乳浆粉末或其部分，或者β乳浆粉末和其部分，如从在极性脂质中富含或在中性脂质中缺乏的β乳浆获得的部分。
本文中有用的婴儿代乳品，较大婴儿代乳品或成长代乳品的另一实例包含(w/w)
(a)40％-60％的乳糖
(b)20％-30％的植物油
(c)10％-15％的脱脂乳粉
(d)6％-8％的乳清蛋白，优选WPC80
(e)1％-5％的本文中有用的试剂，例如β乳浆粉末或其部分，或者β乳浆粉末和其部分，如从在极性脂质中富含或在中性脂质中缺乏的β乳浆获得的部分。
任何的这些婴儿代乳品还可以包含0.1％w/w至4％w/w，优选2％w/w至4％w/w/的一种或多种维生素预混合物(premix)、矿物质预混合物、磷脂酰胆碱、一种或多种抗氧化剂、一种或多种稳定剂、或一种或多种核苷酸或上述的任意两种或更多种的组合。在某些实施方案中，可以配制这些婴儿代乳品来提供2700kJ/L至3000kJ/L的热量。
在可选择的实施方案中，可以配制本文中有用的组合物来允许通过任何选择的途径对个体给药，该途径包括但不限于口服或胃肠外给药(包括局部给药、皮下给药、肌肉内给药和静脉内给药)。
因此，可以用合适的药物可接受的载体(包括赋形剂、稀释剂、助剂及其组合)来配制本发明的有用的药物组合物，并且根据给药和标准药物实践的期望途径来选择该载体。例如，本发明的有用的组合物能够以粉末、液体、片剂或胶囊剂的形式进行口服给药，或者以软膏、乳膏或洗液的形式进行局部给药。合适的制剂可含有所需的添加剂(additionalagent)，包括乳化剂、抗氧化剂、调味剂或着色剂，并且可以使该合适的制剂适用于速释、缓释(delayed release)、修饰释放(modified release)、缓释(sustained release)、脉冲释放或控释。
胶囊能够含有诸如凝胶或纤维素的任何标准的药物可接受的材料。能够按照常规步骤，通过将活性成分与固体载体和润滑剂的混合物压制来配制片剂。固体载体的实例包括淀粉和糖膨润土。活性成分也能够以含有诸如乳糖或甘露醇的粘合剂、常规的填充剂和压片剂的硬壳片剂或胶囊剂的形式进行给药。药物组合物也能够通过肠胃外途径进行给药。肠胃外剂型的实例包括水溶液、等渗盐水或含有活性剂的5％葡萄糖溶液，或其它已知的药物可接受的赋形剂。环糊精或其它本领域技术人员已知的增溶剂能够用作药物赋形剂来用于递送治疗剂。
本发明的有用的组合物的效力能够在体外和体内进行评估。例如参见以下实例。简而言之，能够对所述组合物抑制体外轮状病毒感染的能 力进行测试。对于体内研究，能够向动物(例如小鼠)饲喂或注射所述组合物，然后评价该组合物对病毒感染的效果。基于研究结果，能够确定合适的剂量范围和给药途径。
本文中有用的组合物可单独地使用或与一种或多种其它的治疗剂组合地使用。该治疗剂可以是食品、饮料、食品添加剂、饮料添加剂、食品组分、饮料组分、营养补充剂、营养品、药膳食品、保健品、药物(medicament)或药品(pharmaceutical)。所述治疗剂优选有效地减弱一种或多种轮状病毒感染的症状。
当与其它治疗剂组合使用时，可以同时或顺序给药本文中有用的组合物和其它治疗剂。同时给药包括包含全部组分的单一剂型的给药或不同剂型基本上同时的给药。顺序给药包括根据不同方案的给药，优选地使得提供本文中有用的组合物和其它治疗剂的周期存在重叠。
能够与本文中有用的组合物共给药(co-administered)的合适试剂包括抗病毒剂、茶黄素、蛋白酶抑制剂、卵黄免疫球蛋白、合成的硫酸化唾液酸脂质NMSO3、人乳粘着蛋白(乳脂球膜的糖蛋白)、MUC1粘蛋白、牛大分子乳清蛋白部分及上述的组合，以及其它合适的本领域已知的试剂。
在一个实施方案中，本文中有用的组合物包括乳组分或与乳组分同时或顺序给药，该乳组分例如乳清蛋白、乳清蛋白部分(包括酸性或碱性乳清蛋白部分或其组合)、糖巨肽、乳铁蛋白、铁-乳铁蛋白、功能性乳铁蛋白变体、功能性乳铁蛋白片段、维生素D或钙或上述的组合。有用的含有乳组分的组合物包括例如，食品、饮料、食品添加剂、饮料添加剂、营养补充剂、营养品、药膳食品和保健品。也可以采用富含这些组分的乳部分。在国际专利申请WO 03/082921和WO 2007/043900中描述了有用的乳铁蛋白、片段和组合物，这两个申请在此处通过引用被整体并入本文。
应当理解，在本发明的方法中也可以采用上文中所列的另外的治疗剂(基于食品的试剂和药剂)，其中该治疗剂分别、同时或顺序与本文中有用的组合物一起给药。
应当理解，取决于下述可变情况，给药的组合物的剂量、给药周期 和常规给药方式在患者之间是不同的：如个体症状的严重性、要治疗病症的类型、选择给药的模式、个体的年龄、性别和/或总体健康状况。但是，作为一般实例，本发明人认为每天每kg体重给药约1mg至约1000mg的本文中有用的组合物，优选每天每kg约50mg至约500mg，或者150mg/kg/天至约410mg/kg/天，或约110mg/kg/天至约310mg/kg/天。在一个实施方案中，本发明人认为每kg体重给药约0.05mg至约250mg的本文中有用的药物组合物。
应当理解，给药可以包括单次每日剂量的给药，或合适的多次不连续分次剂量的给药。
通过参考以下实施例，将以非限制的方式说明本发明的各个方面。
实施例
样品分析
蛋白质水平通过总氮量乘以6.38来确定。磷脂水平通过31p NMR来确定。神经节苷脂水平通过如下方法确定。将三份约0.1g的粉末在16ml的kimax试管中称重并记录重量。添加6ml的甲醇并通过涡流混合1min。将溶液在50℃下孵育10min，然后添加6ml水并通过涡流混合。将溶液在4℃下静置2hr来沉降，将样品取出并通过0.45μm的滤器。通过HPLC来分析该样品。使用带有NH2保护(security guard)(PhenomenexTMKJO-4282柱套(holder)中的PhenomenexTM AJO-4302)的CosmosilTM5NH2-MS waters柱(Nacalai Tesque Inc，USA)。分析的每天都更换保护柱(guard cartrige)。将样品进样到柱中，并且采用溶剂A(90％的乙腈、5％的水和5％的5mM磷酸盐缓冲液pH5.6)和溶剂B(50％的乙腈、45％的水和5％的200mM磷酸盐缓冲液pH5.6)，以2ml/min的流速进行洗脱。采用如下的梯度：100％的A保持3.5min，然后26.5min内由100％的A至55％的A，然后1min内由55％的A至100％的A，然后100％的A保持5min(Wagener et al.(1996)，Journal of Lipid Research 37，1823-1829)。采用酪乳GD3(Matreya#1504)生成0μg至2μg GD3的外标曲线。在203nm下监测洗脱。
脂质的制备和其它乳品材料
乳脂部分(包括β乳浆)、乳铁蛋白、Sialyl OligolacTM乳提取物和乳脂球膜(MFGM)材料由Fonterra Co-operative Group Limited(新西兰)提供。Sialyl OligolacTM乳提取物为源自初乳的喷雾干燥粉末，该乳提取物含有高水平天然乳低聚糖、矿物质及游离的和与碳水化合物结合的唾液酸(蛋白质((原样(as is))8.7％、乳糖61.7％、水分3.9％、脂肪0.08％、灰分18.9％、游离的唾液酸2.5mg/g、结合的唾液酸9.3mg/g)。Sialyl OligolacTM含有3’唾液酸乳糖和二唾液酸乳糖，它们分别为源自神经节苷脂GM3和GD3的聚糖的游离形式。表9中的MFGM和MFGM蛋白部分根据已知方法由新西兰乳脂制备。
AMF和AMF部分
在上文中描述了由Fonterra Co-operative Group Limited提供的AMF、AMF硬部分(SH和SSH)及AMF软部分(SSS)。
高CLA的乳脂含有5.4％的CLA，并且根据已知的方法用鱼油和葵花油饲喂奶牛然后由产生的乳制备无水乳脂来制备。在公开的国际PCT申请WO 2005/107736中描述了富含CLA的乳脂的通常的组合物，该申请在此通过引用被并入。
磷脂部分
以上在表7中所描述的并在以下实施例中所使用的部分7至11根据公开的国际专利中请WO 2006/041316所述的方法来制备(参见实施例3至6)。部分12通过表7中的磷脂部分10的超临界二氧化碳萃取来制备。部分15通过β乳浆粉末的乙醇萃取来制备。
通过β乳浆粉末的乙醇萃取来制备Phospholipid Concentrate PC500TM磷脂部分(来自Fonterra Co-operative Group Limited，新西兰)。β乳浆是在AMF制备中产生的液体相。PC500TM磷脂部分为喷雾干燥的乳磷脂浓缩物，其通常的组成为77％至95％总脂质、约50％的中性脂质和约30％的极性脂质；并且通常的脂质组成为1.5％至5％的磷脂酰丝氨酸、12％至18％的磷脂酰胆碱、6％至9％的磷脂酰乙醇胺和6.7％至9％的鞘磷脂；并且通常的脂肪酸组成为丁酸(4:0)1.8％、癸酸(10:0)0.3％、月桂酸(12:0)0.5％、肉豆蔻酸(14:0)7.4％、肉豆蔻脑酸(14:1)14.1％、十五烷酸(15:0)1.0％、棕榈酸(16:0)26.0％、棕榈油酸(16:1)1.7％、十七烷酸(17:0)0.6％、十七碳烯酸(17:1)0.3％、硬脂酸(18:0)11.9％、油酸(18:1)39.0％、亚油酸(18:2)5.0％、亚麻酸(18:3)2.0％、花生酸(20:0)0.3％和胆固醇0.8％。
通过PC500TM磷脂部分的丙酮萃取来制备Phospholipid ConcentratePC600TM磷脂部分(来自Fonterra Co-operative Group Limited，新西兰)。PC600TM磷脂部分为冷冻干燥的乳磷脂浓缩物，其通常的组成为75％的极性脂质、8.0％的中性脂质、小于12％的灰分和小于4％的水分；通常的脂质组成为3％至4％的磷脂酰丝氨酸、大于36％的磷脂酰胆碱、大于9％的磷脂酰乙醇胺和大于18％的鞘磷脂；并且通常的脂肪酸组成为肉豆蔻酸(14:0)6.6％、棕榈酸(16:0)27.1％、棕榈油酸(16:1)1.3％、十七烷酸(17:0)2.3％、硬脂酸(18:0)14％、油酸(18:1)38.2％、亚油酸(18:2)6.5％、亚麻酸(18:3)2％、胆固醇0.1％及其它2％。
通过PC500TM磷脂部分的水性萃取(脱胶)来制备PhospholipidConcentrate PC700TM磷脂部分(来自Fonterra Co-operative Group Limited，新西兰)。PC700TM磷脂部分为冷冻干燥乳磷脂浓缩物，其通常的组成为85％的脂质、10％的灰分、2％的乳糖和2.5％的水分；通常的脂质组成为磷脂酰丝氨酸3％、磷脂酰胆碱31％、磷脂酰乙醇胺8.7％和鞘磷脂16.5％；并且通常的脂肪酸组成为肉豆蔻酸(14:0)5.4％、棕榈酸(16:0)20.9％、棕榈油酸(16:1)1.3％、十七烷酸(17:0)0.5％、硬脂酸(18:0)10.5％、油酸(18:1)30.5％、亚油酸(18:2)4.3％、亚麻酸(18:3)1.8％和花生四烯酸0.5％。
神经节苷脂部分
以上在表7中所描述的并在以下实施例中所使用的部分7至11根据公开的国际专利申请WO 2006/041316所述的方法来制备(参见实施例3至6)。部分12通过表7中磷脂部分10的超临界二氧化碳萃取来制备。部分15通过β乳浆粉末的乙醇萃取来制备。
通过β乳浆粉末的乙醇萃取来制备G500TM和G600TM神经节苷脂部分(来自Fonterra Co-operative Group Limited，新西兰)。β乳浆是在AMF 制备过程中产生的液体相。
G500TM神经节苷脂部分为喷雾干燥的乳神经节苷脂浓缩物，其中已经添加了乳糖和WPC(乳清蛋白浓缩物)以提高粉末流动性。G500TM神经节苷脂部分的通常的组成为脂质34.0％、水分3.2％、灰分5.0％和乳糖56.0％；通常的脂质组成为神经节苷脂GD30.6％和神经节苷脂GM30.5％；并且通常的脂肪酸组成为肉豆蔻酸(14:0)5.6％、棕榈酸(16:0)18.4％、棕榈油酸(16:1)1.2％、十七烷酸(17:0)0.5％、硬脂酸(18:0)14.9％、油酸(18:1)31.0％、亚油酸(18:2)3.8％、亚麻酸(18:3)1.5％和花生四烯酸(20:4)0.5％。
Ganglioside G600TM神经节苷脂部分为喷雾干燥的乳神经节苷脂浓缩物，其中已经添加了乳糖以提高粉末流动性。G600TM神经节苷脂部分的通常的组成为脂质30.0％、水分3.5％、灰分8.3％和乳糖58.0％；通常的脂质组成为神经节苷脂GD31.4％、神经节苷脂GM30.3％、磷脂酰丝氨酸4.5％、磷脂酰胆碱5.1％、磷脂酰乙醇胺2.0％和鞘磷脂1.7％；并且通常的脂肪酸组成为肉豆蔻酸(14:0)4.7％、棕榈酸(16:0)16.4％、棕榈油酸(16:1)1.2％、十七烷酸(17:0)0.5％、硬脂酸(18:0)17.0％、油酸(18:1)33.4％、亚油酸(18:2)4.2％、亚麻酸(18:3)1.4％和花生四烯酸(20:4)0.6％。
脂质水解物
通过向200mg脂质制备的样品中添加800μl的氢氧化钾(1.5％的乙醇溶液)来实现部分皂化。将所得的溶液混合10分钟，并用盐酸(10％)中和至pH值为7。然后将该溶液在氮气下冲干(flush dry)。
细胞培养、病毒繁殖及测定材料
所有的细胞培养材料均购自Invitrogen。轮状病毒株Wa(人)是奥克兰大学(Auckland University)的John Taylor赠送的。HT29细胞购自ATCC(HTB-38)。单唾液酸神经节苷脂GM3 cat#1503和二唾液酸神经节苷脂GD3 cat#1504购自Matreya(Pleasant Gap，PA，USA)。
轮状病毒繁殖
在含有1μg/ml胰蛋白酶的Dulbecco最小必需培养基(Dulbecco′sminimal essential medium)(DMEM)的存在下，将HT29细胞系用于繁殖人 轮状病毒株Wa(神经氨酸酶抗性)，该培养基补充了10％的胎牛血清和青霉素/链霉素(100μg/ml/100单位/ml)。通过两次冻融来收获轮状病毒，将该病毒在750g下离心以除去细胞碎片并保存于-80℃。对轮状病毒进行测定，发现其含有1×106噬斑形成单位(pfu)/ml。
轮状病毒感染测定
所用的感染测定是基于许多公开的测定(Scott et al 1979；Smith et al1979；Guarino et al 1996；Superti et al 2001)。将生长在DMEM(在96孔板中以3×105/ml接种)中的融合HT29细胞在无菌PBS中洗涤两次。于板中，在50μl体积的DMEM中进行每个要筛查的产物(初始浓度5mg/ml)的双倍稀释。除了只有细胞的对照，向所有的孔中添加病毒(104pfu/孔)，然后于37℃下，将板在在5％的CO2中孵育两个小时。其它对照包括病毒加细胞、仅有脂质、纯GM3和纯GD3。孵育两个小时后，向所有的孔添加胰蛋白酶，该孔含有2μg/ml浓度的病毒-这个步骤将VP4切割为多肽VP8和VP5，并且是病毒粒子侵入到细胞内所必需的。将板在37℃下和在5％的CO2中孵育七天，并每天检查只有病毒的对照孔中的致细胞病变效应。除去培养基，将板在无菌PBS中洗涤，风干并用甲醇固定一分钟。将板风干，然后用100μl/孔的1％结晶紫(351884W，BDH，英格兰)染色五分钟。将板用无菌水洗涤四次以除去多余的染色剂。添加每孔100μl的乙酸来溶解染色剂，并在Biorad ELISA微孔板检测仪(plate reader)中，于595nm的波长下读取吸光度。在最少三个独立的情况下测定每个样品，并计算未被感染的细胞的百分率。
统计学
利用非配对Student t检验(对于Macintosh，使用的是InStat)进行统计学分析，从而在产物的最低稀释下，将源自于牛乳的脂质产物的效果与只有病毒的对照进行比较。
实施例1-乳品脂质抑制体外轮状病毒感染
筛查16种脂质测试材料的预防细胞的轮状病毒感染的能力。脂质测试材料或对比材料对HT29细胞是无毒的。神经节苷脂GD3和GM3均在浓度范围内表现出活性(表8)。在16种脂质测试材料中，有14种在浓度范围内表现出预防细胞的病毒感染的活性(表9)。
表8：在各种浓度的GD3和GM3的存在下，未被轮状病毒感染的HT29细胞的百分率
＊与只有病毒的对照相比，p＜0.01时显著；＊＊p＜0.005时显著；＊＊＊p＜0.001时显著；没有p值的样品与只有病毒的对照没有明显的不同。ND＝未测定。
表9：在各种浓度的各种牛乳脂质部分的存在下，未被轮状病毒感染的HT29细胞的百分率
＊与只有病毒的对照相比，p＜0.01时显著；＊＊p＜0.005时显著；＊＊＊p＜0.001时显著；
没有p值的样品与只有病毒的对照没有明显的不同。
p小于0.001时，浓度为0.3125mg/ml的五种测试材料明显降低感染率(表9)。这些测试材料为富含CLA的乳脂、β乳浆、PC700TM磷脂部分和神经节苷脂部分。p小于0.005时，浓度为0.3125mg/ml的四种测试材料明显降低感染率。这些测试材料为AMF、软乳脂部分(SSS)，及PC500TM和PC600TM磷脂部分。P小于0.01时，浓度为0.3125mg/ml的三种测试材料明显降低感染率。这些测试材料为其它SH和SSH乳脂部分，以及水解的神经节苷脂部分。剩下的产物与病毒对照没有明显的不同。当浓度低至31.25μg/ml时，GM3和GD3的纯化样品保护细胞免受病毒感染(分别为43+/-10％和40+/-3％；p＜0.005)。在神经节苷脂-浓缩基础上，在最低的G600TM浓度下，G600TM部分比纯GD3有效10倍。
实施例2-乳品脂质能够治疗或预防由轮状病毒感染引起的腹泻
用于人轮状病毒感染的幼大鼠(baby rat)动物模型能够用于确定产品的体内效力(例如，参见Ciarlet et al 2006)。
以100μl的体积，通过递送入口腔的方式，将浓度为3g/kg体重的四种不同脂质测试材料喂给每组十只的五天大的大鼠崽。所有其它喂食均来自于分泌乳汁的母大鼠(mother rat)。在第一天和第二天，两次喂给大鼠崽100μl剂量的人轮状病毒株Wa(早晨和晚上)。对阴性对照大鼠注射(inoculate)100μl磷酸缓冲盐溶液(PBS)，但是不用病毒进行感染。对阳性对照大鼠注射100μl PBS，随后用病毒来进行感染。实验在注射轮状病毒之后进行10天。该实验重复进行。
为了测定感染率，将大鼠每天称重。将单独的粪便样品收集到预称重的器皿中，并每天进行一次腹泻的确定。根据粪便颜色、稠度和量，每天对腹泻进行如下的1至4的打分。
1.正常粪便-正常颜色(棕色)和稠度。
2.轻微腹泻-异常的颜色(绿色或黄绿色)但正常的稠度。
3.中度腹泻-正常颜色(棕色)但水一般的稠度。
4.严重腹泻-异常的颜色和水一般的稠度。
将排泄物样品处理成冷(4℃)PBS中的10％溶液，该溶液含有青霉素(200U/ml)、链霉素(200μl/ml)和庆大霉素(2mg/ml)，并如上文所述在细 胞培养中将10μl的等分重复测定以确定感染性轮状病毒的水平。在体外测定中，这些水平表示未被感染的细胞的百分率：未被感染的细胞％＝(测试样品的OD)*100/(阴性对照的OD)，其中OD为孔中溶液的光密度。
表10：喂食高CLA的乳脂的大鼠腹泻的严重性
表11：喂食G600TM乳脂的大鼠腹泻的严重性
表12：喂食β乳浆部分的大鼠腹泻的严重性
在体外轮状病毒测定中测定排泄物样品以确定未被感染的细胞的百分率。对于喂食高CLA的乳脂的大鼠(图1A)，处理与被感染的对照之间的差异在第一天(P＜0.001)、第三天(P＜0.025)、第七天(P＜0.05)和第八天(P＜0.025)是显著的。对于喂食G600TM部分的大鼠(图1B)，处理和被感染的对照之间的差异在第三天(P＜0.001)、第四天(P＜0.001)、第六天(P＝0.001)、第七天(P＜0.001)和第八天(P＜0.001)是显著的。
工业应用
本发明在治疗或预防轮状病毒感染中具有实用性。可以将所述的组合物用作食品、饮料、食品添加剂、饮料添加剂、营养补充剂、营养品、药膳食品、保健品、药物(medicament)或药品(pharmaceutical)。
本领域的技术人员可以理解的是，仅通过示例性说明提供上述描述，并且本发明并不被这些示例性说明所限制。
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