技术领域
本发明属于水产用中医药技术领域，具体涉及一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液及其制备方法。
背景技术
鱼类由于真菌感染而患的病，叫鱼类真菌病。真菌是具有细胞壁、真核的单细胞或多细胞体。真菌性病原大都可腐生或寄生于各种鱼类的鱼卵、体表、鳍部、鳃部、肌肉,危害鱼类的主要是藻菌纲的一些种类，如水霉、绵霉、鳃霉、鱼醉菌、链壶菌、离壶菌、海壶菌等，同时还有半知菌类的镰刀菌，以及丝囊霉菌等。相对于细菌和病毒病害而言,真菌病害一直没有引起足够的重视。近年来,随着水产养殖业的发展、生态环境的改变和一些抗真菌性药物的禁用,使得鱼类真菌性病害日益猖獗,形势严峻。所以，由于对真菌病尚无更理想的治疗方法，严重阻碍了水产养殖业的可持续发展。
在我国，中草药用于鱼病防治有着悠久的历史。中药具有抗菌、抗病毒及促进免疫功能，提高机体抗病能力等作用，中药副作用少，毒性低，不产生抗药性,所以无残留、无污染的中草药越来越受到重视，应用也日益广泛。各地养殖单位在实际应用中草药后，已表现出对水产动物的安神、镇静、健胃促消化、理气、活血、养精补益、驱虫、杀虫、保健、解毒排毒、抗肿瘤、治肝炎、收敛、抗创伤、抗菌、抑菌、杀灭病毒等多种药理作用。由此可见应用中草药防治鱼病的有效性已在生产实践所证实，应用中草药防治鱼病也是我们发展绿色水产业的需要，是人类自身健康的需要，因而有看美好的应用前景。 益生菌可改善水产动物机体内外的微生态平衡，提高其饲料转化量，抑制病原菌的种类和数量，控制水产养殖动物疾病的发生。随着水产养殖业的不断发展以及人们对环境保护意识的日渐提高，有益菌开始被引入水产养殖之中。发酵过的中草药一方面可以提高中草药药效，另一方面微生物也可以起到促生长、促消化的作用，提高养殖效益。从而发展无公害水产饲料添加剂，生产绿色水产品，增强我国水产品的国际市场竞争力。
发明内容
本发明的目的在于提供一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，该中草药发酵提取液属于天然药物，无毒副作用，主要用于治疗淡水鱼主要细菌性传染病，治疗成本低、治愈率高、安全、无毒副作用、使用方便。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
本发明提供了一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子2~4、土荆芥2~3、苦槿皮5~8、苦参1~2、石榴皮1~2和大黄2~5。
根据上述的防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子2~3.2、土荆芥2.8~3、苦槿皮5~7.2、苦参1~1.6、石榴皮1.3~2和大黄2~4。
根据上述的防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子3.2~4、土荆芥2~2.8、苦槿皮7.2~8、苦参1.6~2、石榴皮1~1.3和大黄4~5。
根据上述的防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子3、土荆芥2、苦槿皮5、苦参2、石榴皮1和大黄3。
所述的防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液的制备方法，具体步骤如下：
（1）将中药五倍子、土荆芥、苦槿皮、苦参、石榴皮和大黄烘干、粉碎为40～80目粉末备用；
（2）按照上述配方取步骤（1）中药粉末加入8～10倍量中药粉末量的水煎煮提取,煎煮1～2小时过滤得滤液；药渣加入8～10倍药渣量的水煎煮提取，煎煮1～2小时过滤得滤液，合并滤液备用；
（3）按重量比取芽孢杆菌菌液加入步骤（2）所得滤液中，芽孢杆菌菌液与中药液的重量比1:（40～60），密闭厌氧发酵，分装，即得防治淡水鱼病毒性疾病的中草药发酵提取液。
所述芽孢杆菌菌液的制备方法如下：取芽孢杆菌菌种进行斜面菌种培养，将斜面培养产生的悬浮液在对应的培养基内厌氧扩大培养，至对数生长期菌落数高于1.0×1010CFU/mL时止，得对应的菌液。
步骤（1）烘干温度为60～80℃。
步骤（3）中发酵温度为30℃～37℃，发酵时间为24～48h。
芽孢杆菌的培养基为营养琼脂培养基。
本发明中各原料功效简述如下：
五倍子：又名倍子、百药煎、百虫仓等。为漆科植物盐肤本的叶上的干燥虫瘿，由五倍子的蚜虫寄生而成。杀菌能力强，用于防治白头白嘴病、白皮病、赤皮病、疥疮病等。
土荆芥：为获科植物土荆芥的带有果穗的全草，俗称臭草，一年生草本，全草入药，有祛风杀虫、燥湿解毒之功。对霉菌、致病性皮肤真菌、疥螨、虱蚤、钩虫、线虫有抑制和杀灭作用。
苦槿皮:苦，寒；有毒。归肝、脾、胃经。具驱肠虫作用；用水或酒精浸泡本品后的浸泡液对常见致病性皮肤真菌有较明显的抑制作用。
苦参：为豆科落叶小灌木，广布房前屋后山坡湿地。根、叶入药，有燥湿、止痒、杀虫之功，能抗原虫，对致病性皮肤真菌有抑制作用。主治疥癣、皮肤病和体内外寄生虫病。临床上治黄鳝皮肤打印病（红斑病）和鲤鱼竖鳞病，可用苦参煎水泼洒，也可和土荆芥等同用；治疗甲鱼疥癣、毛霉病等可与百部煎汁共用。石榴皮：为石榴的干燥果皮，主要含鞣质、生物碱等，具有收敛止泻、杀虫和抑菌作用。对水产动物的原生虫、蠕虫病及水霉病有较好效果。可有效防治波豆虫病、车轮虫病、三代虫病、线虫病、绦虫病等。
大黄：又名锦纹、黄良，别名将军、生军、马蹄黄等，多年生草本植物。以根、根茎入药，抗菌作用强，抗菌谱广，可防治肠炎病、烂鳃病、白头白嘴病等。
芽孢杆菌：芽孢杆菌是一种好氧的革兰氏阳性菌，是对人畜无毒害的细菌，在自然界分布广泛，国内均允许将其用于饲料添加剂。其具有减少病害发生、促进养殖动物生长、改善养殖环境等特点。
与现有技术相比，本发明取得的有益效果：
1.本发明中草药发酵提取液属于天然药物，无毒副作用，药物中各个营养成分相互协同、互为补充，具有抗微生物、抗病毒、抗寄生虫、抗真菌和提高免疫力的作用，能有效促进鱼类的生长发育。
2.本发明通过芽孢杆菌的加入可以与养殖环境中的有害藻类及水产致病菌竞争，形成优势种群，抑制有害藻类及水产致病菌，有利于水产养殖，改善养殖环境，同时对水溶性有机物分解也有重要的作用。
3.本发明采用中药与益生菌的结合有显著的经济效益和社会效益。
用法用量：泼洒法，预防用药，本品每瓶1000ml泼洒范围为1000ml/10m2，连用2~3天。治疗量加倍，连用5~8天。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步的描述，但并不限制本发明的内容。
实施例1
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子2~4、土荆芥2~3、苦槿皮5~8、苦参1~2、石榴皮1~2和大黄2~5。
所述的防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液的制备方法，具体步骤如下：
（1）将中药五倍子、土荆芥、苦槿皮、苦参、石榴皮和大黄烘干、粉碎为40～80目粉末备用；
（2）按照上述配方取步骤（1）中药粉末加入8～10倍量中药粉末量的水煎煮提取,煎煮1～2小时过滤得滤液；药渣加入8～10倍药渣量的水煎煮提取，煎煮1～2小时过滤得滤液，合并滤液备用；
（3）按重量比取芽孢杆菌菌液加入步骤（2）所得滤液中，芽孢杆菌菌液与中药液的重量比1:（40～60），密闭厌氧发酵，分装，即得防治淡水鱼病毒性疾病的中草药发酵提取液。
所述芽孢杆菌菌液的制备方法如下：取芽孢杆菌菌种进行斜面菌种培养，将斜面培养产生的悬浮液在对应的培养基内厌氧扩大培养，至对数生长期菌落数高于1.0×1010CFU/mL时止，得对应的菌液。
实施例2
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子3、土荆芥2、苦槿皮5、苦参2、石榴皮1和大黄3。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例3
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子2、土荆芥3、苦槿皮7、苦参2、石榴皮2和大黄5。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例4
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子4、土荆芥3、苦槿皮6、苦参2、石榴皮1和大黄4。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例5
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子4、土荆芥3、苦槿皮8、苦参2、石榴皮1和大黄2。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例6
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子2、土荆芥2.5、苦槿皮6.5、苦参1.6、石榴皮1.8和大黄3.2。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例7
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子3.2、土荆芥2.8、苦槿皮7.2、苦参1.1、石榴皮1.8和大黄2.2。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例8
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子2.4、土荆芥2.4、苦槿皮5.6、苦参1.9、石榴皮1.4和大黄2.5。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例9
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子2.8、土荆芥2.2、苦槿皮5.2、苦参1.5、石榴皮1.2和大黄2.5。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例10
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子3.3、土荆芥2.7、苦槿皮7.1、苦参1.3、石榴皮1.2和大黄3.6。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例11
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子3.4、土荆芥2.8、苦槿皮5.8、苦参1.1、石榴皮1.4和大黄4.2。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例12
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子4、土荆芥3、苦槿皮8、苦参1、石榴皮1和大黄3。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例13
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子2、土荆芥3、苦槿皮7、苦参1、石榴皮1和大黄5。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例14
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子3.8、土荆芥2.3、苦槿皮6.9、苦参1.1、石榴皮1.6和大黄4.4。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例15
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子3.4、土荆芥2.4、苦槿皮7.9、苦参1.2、石榴皮1.3和大黄2.4。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例16
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子3.6、土荆芥2.2、苦槿皮6.8、苦参1.4、石榴皮1.3和大黄2.4。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例17
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子3.2、土荆芥2.3、苦槿皮6.8、苦参1.6、石榴皮1.2和大黄2.6。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例18
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子3.6、土荆芥2.2、苦槿皮6.2、苦参1.4、石榴皮1.3和大黄4.1。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例19
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子2.8、土荆芥2.2、苦槿皮5.8、苦参1.2、石榴皮1.2和大黄2.5。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例20
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子3.4、土荆芥2.3、苦槿皮5.4、苦参1.9、石榴皮1.6和大黄3.5。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例21
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子3、土荆芥3、苦槿皮6、苦参2、石榴皮1和大黄4。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例22
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子4、土荆芥2、苦槿皮5、苦参1、石榴皮1和大黄3。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例23
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子2、土荆芥2、苦槿皮6、苦参2、石榴皮1和大黄3。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
实施例24
一种防治淡水鱼真菌病的中草药发酵提取液，是由中药的提取液加入芽孢杆菌菌液密闭厌氧发酵而成，其中所述中药由以下重量份的组分组成：五倍子3.3、土荆芥2.4、苦槿皮5.3、苦参1.7、石榴皮1.6和大黄3.5。
本实施例的制备方法与实施例1相同。
下面以具体实验说明本发明的效果：
试验例
试验动物：随机选取400尾外观正常，体质健硕，大小均匀约50g的草鱼。分为置于室内4个池内养殖，每个池内100尾草鱼。
试验组别：预防试验1～3组，分别泼洒实施例2～4组中制备的中草药发酵提取液，治疗组在鱼群发病时给予治疗量给药，对照组不给予任何用药方案。喂饲相同的饵料。
试验方法：4个组，对照组不加任何药物，只喂饲基础日粮。其他三个组，每隔一周按1000ml/10m2的用药量泼洒一次中草药发酵提取液。试验周期为8周。期间早晚各投一次饵料。水温控制为15～20℃。空气压缩机根据情况定期加氧。每天观察并记录鱼的健康情况，试验期间不换水，定期清理残饵和粪便。
下表1。
疗效判断标准：
发病：试验中草鱼出现真菌性疾病的病症（体表有明显的病变）；
死亡：试验结束草鱼发病死亡；
治愈率：试验期间出现症状没死亡草鱼。
结论：统计分析，预防试验组1～3组中草鱼的发病率均显著低于对照组（P＜0.01），且治愈率均高于治疗组和对照组。预防试验组1的治愈率明显高于预防试验组2和3。治疗组经过治疗后治愈率达87%。说明本发明最佳实例为实施例2，本发明防治淡水鱼真菌病有较好的预防和治疗治作用。