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1、(10)申请公布号 CN 103070915 A (43)申请公布日 2013.05.01 CN 103070915 A *CN103070915A* (21)申请号 201210562127.3 (22)申请日 2012.12.07 A61K 36/53(2006.01) A61P 25/20(2006.01) A61P 37/04(2006.01) A61P 1/00(2006.01) A61P 1/14(2006.01) (71)申请人 塔里木大学 地址 843300 新疆维吾尔自治区阿拉尔市塔 里木大学 (72)发明人 沙爱龙 孟庆艳 郝海燕 (54) 发明名称 小新塔花水提物及其在制。
2、备镇静催眠、 提高 免疫力、 调理脾胃药物中的应用 (57) 摘要 本发明公开了一种用于镇静催眠、 提高免疫 力、 调理脾胃的小新塔花水提物及其制备方法。 其 制备实施方案是 ： 称取干燥小新塔花全草 ( 过 40 目筛 )， 加入 10 倍重量的蒸馏水， 回流提取 1h 或 常温浸泡 18-24h( 过夜 ) 或 37浸泡 15-20h， 提 取 2 次， 过滤， 洗涤滤渣， 合并滤液于同一瓶中， 将 滤液浓缩后， 以蒸馏水定容至 100mL， 即得浓度为 0.1g 生药 /mL 小新塔花水提物样品溶液。经动物 实验证明， 小新塔花水提物具有明显的镇静催眠、 提高免疫力、 健脾胃、 促进消化。
3、作用， 并呈现一定 的浓度依赖性。 动物急性毒性实验结果表明， 本发 明制备的小新塔花水提物安全、 无毒性， 临床应用 安全。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书6页 (10)申请公布号 CN 103070915 A CN 103070915 A *CN103070915A* 1/1 页 2 1. 一种小新塔花水提物， 其特征在于， 通过以下方法制备完成 ： 称取干燥小新塔花全草(过40目筛)， 加入10倍重量的蒸馏水， 回流提取1h或常温浸 泡 18-24h( 过夜 ) 或 37浸泡 。
4、15-20h， 提取 2 次， 过滤， 洗涤滤渣， 合并滤液于同一瓶中， 将 滤液浓缩后， 以蒸馏水定容至 100mL， 即得浓度为 0.1g 生药 /mL 小新塔花水提物样品溶液。 2. 根据权利要求 1 所述的小新塔花水提物在制备镇静催眠、 提高免疫力药物中的应 用。 3. 根据权利要求 1 所述的小新塔花水提物在制备调理脾胃药物中的应用。 权 利 要 求 书 CN 103070915 A 2 1/6 页 3 小新塔花水提物及其在制备镇静催眠、 提高免疫力、 调理脾 胃药物中的应用 技术领域 0001 本发明属于中医药学领域， 涉及一种中药小新塔花水提物及其在制备镇静催眠、 提高免疫力、 。
5、调理脾胃药物中的应用。 背景技术 0002 现代生活节奏越来越快， 许多人都有来自各个方面的巨大压力， 使得正常睡眠得 不到保证， 有部分人因为压力巨大而无法入睡。经常失眠导致注意力不集中、 理解能力下 降、 学习效率降低、 记忆力减退， 从而影响人的工作状态， 长时间失眠也会降低机体的免疫 力， 引起内分泌失调， 容易诱发并加重胃肠疾病、 感染性疾病、 心脑血管疾病等。 为缓解这些 压力， 失眠者往往依靠催眠药物入睡， 如地西泮等苯二氮卓类镇静催眠药， 但这些药物在帮 助入睡的同时也带来了很多副作用， 如成瘾性、 耐药性、 慢性毒性。 而且， 连续应用容易产生 头昏、 嗜睡、 乏力等不良反应。
6、。已有研究表明许多中草药具有良好的镇静催眠作用， 且不良 反应较少， 无成瘾性， 因此， 从天然植物中寻找新的镇静催眠药物显得尤其重要。 0003 小新塔花 (Ziziphora tenuior linn) 为唇形科新塔花属植物， 一年生草本， 主产 于新疆南北的山坡、 砾石、 草原及半沙漠地带， 前苏联、 伊朗经西亚至巴尔干半岛也有分布。 本品为维吾尔族民间常用的中药、 民族药， 其气味芳香， 主治慢性支气管炎、 虚劳咳嗽、 气短 多汗、 肋下疼痛、 感冒， 可缓解胸闷、 头晕。由于地域分布的局限性， 国内仅见小新塔花分布 调查、 抗炎镇痛的研究， 而国外对小新塔花研究较多， 如发现其精油有。
7、很高的抗菌活性， 在 伊朗常作为蔬菜用于烹饪或作为观赏植物。目前， 关于小新塔花镇静催眠、 免疫、 调理脾胃 作用的研究尚未见报道。 发明内容 0004 针对上述问题， 本发明的目的在于提供中药小新塔花水提物的制备方法及其在制 备镇静催眠、 提高免疫力、 调理脾胃药物中的应用。 0005 本发明通过下述方法制备小新塔花水提物 ： 0006 称取干燥小新塔花全草(过40目筛)， 加入10倍重量的蒸馏水， 回流提取1h或常 温浸泡 18-24h( 过夜 ) 或 37浸泡 15-20h， 提取 2 次， 过滤， 洗涤滤渣， 合并滤液于同一瓶 中， 将滤液浓缩后， 以蒸馏水定容至 100mL， 即得浓。
8、度为 0.1g 生药 /mL 小新塔花水提物样品 溶液。 0007 经动物实验研究证明， 小新塔花水提物具有镇静催眠、 提高免疫力、 调理脾胃作 用。包括 ： 抑制小鼠的自发活动， 提高阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡率， 缩短阈剂量戊巴 比妥钠致小鼠入睡时间并延长其睡眠时间， 增加小鼠免疫器官指数， 促进家兔离体胃平滑 肌条收缩频率、 幅度。动物急性毒性实验结果表明， 本发明制备的小新塔花水提物安全、 无 毒。 0008 本发明具有以下优点 ： 1. 小新塔花水提物提取工艺简单、 易操作， 不需要大型仪 说 明 书 CN 103070915 A 3 2/6 页 4 器， 能进行大规模生产利用。2。
9、. 具有镇静催眠、 提高免疫力、 健脾胃、 促消化的综合作用。 3. 无毒， 临床用药安全。 具体实施方式 0009 小新塔花水提物制备实施例 0010 实施例 1 0011 称取干燥小新塔花全草 ( 过 40 目筛 )， 加入 10 倍重量的蒸馏水， 回流提取 1h， 提 取 2 次， 过滤， 洗涤滤渣， 合并滤液于同一瓶中， 将滤液浓缩后， 以蒸馏水定容至 100mL， 即得 浓度为 0.1g 生药 /mL 小新塔花水提物样品溶液。 0012 实施例 2 0013 称取干燥小新塔花全草 ( 过 40 目筛 )， 加入 10 倍重量的蒸馏水， 常温浸泡 18-24h( 过夜 )， 提取 2 。
10、次， 过滤， 洗涤滤渣， 合并滤液于同一瓶中， 将滤液浓缩后， 以蒸馏水 定容至 100mL， 即得浓度为 0.1g 生药 /mL 小新塔花水提物样品溶液。 0014 实施例 3 0015 称取干燥小新塔花全草(过40目筛)， 加入10倍重量的蒸馏水， 37浸泡15-20h， 提取 2 次， 过滤， 洗涤滤渣， 合并滤液于同一瓶中， 将滤液浓缩后， 以蒸馏水定容至 100mL， 即 得浓度为 0.1g 生药 /mL 小新塔花水提物样品溶液。 0016 小新塔花水提物在制备镇静催眠、 提高免疫力、 调理脾胃药物中的应用实施例实 验一 ： 小新塔花水提物镇静催眠、 提高免疫力作用的实验研究 001。
11、7 1 材料 0018 1.1 实验动物 0019 48 只昆明种小鼠， 雌雄各半， 体重 18-22g， 由塔里木大学动物科学学院动物实验 站提供。 0020 1.2 药品与仪器 0021 小新塔花， 采于新疆托木尔峰国家级自然保护区并经鉴定 ( 下同 )。戊巴比妥钠 ( 美国 Sigma 公司 )。精密电子天平 ( 上海精科天平 )， 电子天平 ( 上海民桥精密科学仪器 有限公司 )。 0022 2 实验方法 0023 2.1小新塔花水提物(由小新塔花水提物制备实施例1制得， 下同)对小鼠自发活 动率的影响 0024 将小鼠随机分为正常对照组、 低剂量小新塔花水提物组 (0.5g/kg， 。
12、含生药 0.025g/mL)、 中剂量小新塔花水提物组 (1g/kg， 含生药 0.05g/mL)、 高剂量小新塔花水提物 组 (2g/kg， 含生药 0.1g/mL)， 共 4 组， 每组 12 只。给药前称量小鼠体重并观察小鼠在 5min 内的走动次数及举双前肢次数。各组小鼠连续灌胃 (0.20mL/10g)5d， 1 次 /d， 其中正常对 照组给等体积生理盐水。于末次给药前 8h 禁食不禁水。准确记录末次给药后 15， 30， 45， 60min 时 5min 内的小鼠走动次数和举双前肢次数。 0025 2.2 小新塔花水提物对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡的影响 0026 分组、 灌胃。
13、同 2.1。末次给药 30min 后， 小鼠腹腔注射戊巴比妥钠 30mg/kg( 按每 10g体重注射0.3戊巴比妥钠0.10mL。 戊巴比妥钠阈下催眠量， 即90100小鼠不入 说 明 书 CN 103070915 A 4 3/6 页 5 睡的戊巴比妥钠最大剂量， 由预试验确定 )， 观察并记录入睡动物数 ( 注射后 15min 内小鼠 翻正反射消失达 1min 以上者记为入睡 )， 计算各组入睡率。 0027 2.3 小新塔花水提物对戊巴比妥钠致小鼠入睡时间和睡眠时间的影响 0028 分组、 灌胃同 2.1。末次给药 30min 后， 小鼠腹腔注射戊巴比妥钠阈剂量 45mg/ kg( 按每。
14、 10g 体重注射 0.3戊巴比妥钠 0.15mL)， 记录睡眠出现 ( 翻正反射消失 ) 和消失 的时间， 计算睡眠潜伏期 ( 睡眠出现时间一记录开始时间 )， 睡眠持续时间 ( 睡眠消失时间 一睡眠出现时间 )。 0029 2.4 小新塔花水提物对小鼠免疫作用的影响 0030 各组末次给药后第 2 日称量小鼠体重 (g)， 后处死小鼠。取脾脏、 胸腺、 肝脏， 剔除 黏附组织并用滤纸吸干脏器血污后称量， 计算脾脏指数、 胸腺指数、 肝脏指数。 0031 脾脏指数 (mg/g) 脾脏重量 (mg)/ 体重 (g) 0032 胸腺指数 (mg/g) 胸腺重量 (mg)/ 体重 (g) 0033。
15、 肝脏指数 (mg/g) 肝脏重量 (mg)/ 体重 (g) 0034 2.5 数据统计分析 0035 所有实验结果的数据以均数 标准差表示， 所有数据分析在 SPSS 13.0 软 件上进行。组间比较采用 t 检验， 以 P 0.05 和 P 0.01 表示有统计学意义。 0036 3 结果与分析 0037 3.1 小新塔花水提物对小鼠自发活动率的影响 0038 由表12可知， 与对照组相比， 小新塔花水提物对小鼠的走动次数及举双前肢次 数的影响表现为 ： 中剂量组差异显著(P0.05) ； 高剂量组差异极显著(P0.01)， 自发活 动抑制率随剂量递增而增强。表明小新塔花水提物能显著抑制小。
16、鼠的自发活动， 对小鼠有 明显的镇静作用。 0039 表 1 小新塔花水提物对小鼠走动次数的影响( 次 ) 0040 0041 注 ： 与对照组比较， *P 0.01，*P 0.05。表 2-5 同。 0042 表 2 小新塔花水提物对小鼠举双前肢次数影响( 次 ) 0043 0044 3.2 小新塔花水提物对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡率的影响 0045 从表 3 可见， 与对照组相比， 小新塔花水提物中、 高剂量组对阈下剂量戊巴比妥钠 说 明 书 CN 103070915 A 5 4/6 页 6 致小鼠入睡率有明显升高作用 (P 0.05、 P 0.01)， 表明小新塔花水提物中、 高剂量。
17、组对 小鼠有明显的镇静催眠作用。 0046 表 3 小新塔花水提物对阈下剂量戊巴比妥钠致小鼠入睡的影响 0047 0048 3.3 小新塔花水提物对戊巴比妥钠致小鼠入睡时间和睡眠时间的影响 0049 结果见表 4， 与对照组相比， 3 个剂量组的睡眠潜伏期均缩短， 睡眠持续时间均延 长。 其中小新塔花水提物中、 高剂量组对小鼠入睡时间有极显著的缩短作用(P0.01)， 对 小鼠睡眠时间有明显延长作用 (P 0.05、 P 0.01)， 说明小新塔花水提物对小鼠有明显 的催眠作用。 0050 表 4 小新塔花水提物对戊巴比妥钠致小鼠入睡时间和睡眠时间的影响 (min) 0051 0052 3.4。
18、 小新塔花水提物对小鼠免疫作用的的影响 0053 结果见表 5， 与对照组相比， 3 个剂量组的胸腺指数、 脾脏指数、 肝脏指数均有所增 加。其中高剂量组小鼠脾脏指数极显著增加 (P 0.01)， 胸腺指数、 肝脏指数显著增加 (P 0.05) ； 中剂量组小鼠脾脏指数显著增加 (P 0.05)。表明小新塔花水提物能增加小鼠 免疫器官指数， 对提高小鼠免疫力有一定的促进作用。 0054 表5 小新塔花水提物对小鼠胸腺指数、 脾脏指数、 肝脏指数的影响(mg.g-1) 0055 0056 4 结论 0057 通过实验一说明小新塔花水提物具有明显的镇静催眠、 提高免疫力作用， 并呈现 一定的浓度依。
19、赖性。 0058 实验二 ： 小新塔花水提物调理脾胃作用的实验研究 0059 1 材料 0060 1.1 实验动物 0061 健康成年家兔 10 只， 体重 2.0-2.5kg， 雌雄不拘， 由塔里木大学动物科学学院动物 实验站提供。 0062 1.2 药品与仪器 说 明 书 CN 103070915 A 6 5/6 页 7 0063 乐氏液 ( 自制， NaCl 9g， KCl 0.42g， CaCl2 0.24g， NaHC03 0.2g， 葡萄糖 1.0g， 蒸 馏水 1000mL， 所用试剂均为国产分析纯 )。MedLab-U/4C501 型生物信号采集处理系统 ( 南 京美易科技有限。
20、公司 )， HW-400E 恒温平滑肌槽 ( 成都泰盟科技有限公司 )， JZ101 型张力换 能器 ( 北京新航兴业科贸有限公司 )。 0064 2 实验方法 0065 2.1 家兔离体胃平滑肌条标本的制备 0066 实验前家兔禁食不禁水 24h， 采用颈椎脱臼法处死， 迅速剖开腹腔， 找到胃底部， 沿 胃底纵行肌剪取胃底平滑肌条标本15mm5mm， 迅速取出胃底条。 分别用棉线结扎胃底条的 两端， 先将胃底条置于盛有 37恒温乐氏液的小烧杯中洗净， 然后将胃底条固定在恒温平 滑肌槽内 (37 )， 气泡每分钟约 100 个。 0067 2.2 收缩活动的记录方法 0068 将胃底条的上端连。
21、张力换能器， 下端系于恒温平滑肌槽试验片底部 L 型钩， 固定， 通过 MedLab 记录胃底条收缩曲线， 稳定 10min 后， 开始实验。实验采用分别加入的方法， 即 先加入低剂量组小新塔花水提物 (0.5g/kg， 含生药 0.025g/mL， 由小新塔花水提物制备实 施例1制得， 下同)并观察其效果后， 用37乐氏液反复灌洗至肠段的活动基本恢复并稳定 后， 再加入中剂量组小新塔花水提物 (1g/kg， 含生药 0.05g/mL)， 反复灌洗后加入高剂量组 小新塔花水提物 (2g/kg， 含生药 0.1g/mL)。 0069 2.3 数据统计分析 0070 用区间测量法测量加药前 5mi。
22、n 及加药后 5min 的收缩频率、 幅度， 并计算促进率 ( )， 促进率 ( ) ( 加药后平均值一加药前平均值 )/ 加药前平均值 100。实验结 果数据以均数 标准差表示， 数据分析在 SPSS13.0 软件上进行。加药前、 后比较采 用 t 检验， P 0.05 为统计学差异显著， P 0.01 为统计学差异极显著。 0071 3 结果与分析 0072 3.1 小新塔花水提物对家兔离体胃平滑肌条收缩频率的影响 0073 由表6可知， 与给药前相比， 小新塔花水提物3个剂量组对家兔离体胃平滑肌条收 缩频率均具有促进作用。 小新塔花水提物低、 中、 高剂量组均能使家兔离体胃平滑肌条收缩 。
23、频率增加， 低剂量组差异不显著 (P 0.05)， 中剂量组差异显著 (P 0.05)， 高剂量组差异 极显著 (P 0.01)， 促进率随剂量增加而逐渐增强， 呈现明显的剂量依赖效应。 0074 表 6 小新塔花水提物对家兔离体胃平滑肌条收缩频率的影响 0075 0076 注 ： 给药后与给药前比较， *P 0.01，*P 0.05。下同。 0077 3.2 小新塔花水提物对家兔离体胃平滑肌条收缩幅度的影响 0078 由表7可见， 与给药前相比， 小新塔花水提物3个剂量组对家兔离体胃平滑肌条收 缩幅度均具有促进作用。 小新塔花水提物低、 中、 高剂量组均能使家兔离体胃平滑肌条收缩 幅度升高，。
24、 其中低剂量组差异不显著 (P 0.05)， 中剂量组差异显著 (P 0.05)， 高剂量组 说 明 书 CN 103070915 A 7 6/6 页 8 差异极显著 (P 0.01)， 促进率随剂量增加而逐渐增强， 且呈现明显的剂量依赖效应。 0079 表 7 小新塔花水提物对家兔离体胃平滑肌条收缩幅度的影响 0080 0081 4 结论 0082 通过实验二说明小新塔花水提物能明显促进家兔离体胃平滑肌条的收缩， 并呈剂 量依赖效应。小新塔花水提物可显著健脾胃， 促进消化。 0083 实验三 ： 小新塔花水提物急性毒性的实验研究 0084 1 材料和方法 0085 将 36 只昆明种小鼠 (。
25、 雌雄各半， 体重 18-22g， 由塔里木大学动物科学学院动物实 验站提供 ) 随机分为 3 组， 每组 12 只， 禁食 24h， 分别灌胃给予 30g/kg、 15g/kg、 7.5g/kg 小 新塔花水提物 ( 由小新塔花水提物制备实施例 1 制得 )1 次， 观察给药后小鼠一般反应及死 亡情况， 连续观察 7d。实验结果的数据以均数 标准差表示。 0086 2 结果和结论 0087 连续观察 7d， 3 组小鼠每次灌胃给药后均出现蜷卧少动现象， 2h 后恢复正常， 这说 明小新塔花水提物对小鼠具有中枢抑制作用。小鼠进食、 大小便、 毛发均正常， 未见死亡和 毒性反应， 小新塔花水提物灌胃给药的 LD50未能测出。体重增长情况见表 8， 可知 7 天内小 鼠体重增长良好。称量体重后， 颈椎脱臼处死小鼠， 进行大体解剖， 观察主要脏器包括心、 肝、 脾、 肺、 肾、 胃、 睾丸、 子宫等， 肉眼未见明显病变。由此说明， 由水提物制备实施例 1 制得 的小新塔花水提物毒性小， 安全范围大， 临床用药是安全的。 0088 表 8 小新塔花水提物对小鼠体重的影响 0089 。 说 明 书 CN 103070915 A 8 。