鬼臼毒素醇质体及其制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102144972 A (43)申请公布日 2011.08.10 CN 102144972 A *CN102144972A* (21)申请号 201010108015.1 (22)申请日 2010.02.09 A61K 9/127(2006.01) A61K 31/365(2006.01) A61K 47/24(2006.01) A61P 31/20(2006.01) A61P 17/12(2006.01) (71)申请人 上海中医药大学 地址 201203 上海市浦东新区蔡伦路 1200 号 (72)发明人 冯年平 于燕燕 赵继会 翁海挺 施晓琴 (74)专利代理机。

2、构 上海浦一知识产权代理有限 公司 31211 代理人 潘诗孟 (54) 发明名称 鬼臼毒素醇质体及其制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种鬼臼毒素醇质体， 鬼臼毒 素包封于醇质体中， 载药脂质材料为磷脂酰胆碱、 磷脂酰乙醇胺或者二棕榈酰磷脂酰胆碱， 粒径为 50300nm。 本发明鬼臼毒素醇质体可制成贴片、 凝胶等外用剂型， 能减少用药量， 达到增加疗效减 少复发及毒副作用的目的。本发明还公开了上述 鬼臼毒素醇质体的两种制备方法。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 2 页 CN 102144973。

3、 A1/1 页 2 1. 一种鬼臼毒素醇质体， 其特征在于， 鬼臼毒素包封于醇质体中， 载药脂质材料为磷脂 酰胆碱、 磷脂酰乙醇胺或者二棕榈酰磷脂酰胆碱， 粒径为 50 300nm。 2. 按权利要求 1 所述的鬼臼毒素醇质体， 其特征在于， 含醇量为 20 50， 脂质含量 为 2 5， 载药量为 0.1 1.0， 包封率为 30 90。 3.权利要求1或2所述的鬼臼毒素醇质体的制备方法， 其特征是， 将鬼臼毒素与载药脂 质材料置于密闭容器中， 在磁力搅拌状态下加入乙醇使其溶解， 恒速缓慢滴入25倍量的 水继续恒速搅拌0.51h， 于冰水浴中探头超声后过孔径为0.220.5m的微孔滤膜， 即。

4、 得鬼臼毒素醇质体。 4.权利要求1或2所述的鬼臼毒素醇质体的制备方法， 其特征是， 将鬼臼毒素与载药脂 质材料溶于甲醇与氯仿体积比为 (3-5) 1 的混合溶液中， 溶解后加入茄型瓶中， 在 25 50下使用旋转蒸发仪减压蒸发除去有机溶剂， 使脂质在器壁上形成均匀薄膜， 加入处方 量的乙醇水溶液， 旋转水合， 于冰水浴中探头超声 0.5 1h 后过孔径为 0.22 0.5m 的 微孔滤膜， 即得鬼臼毒素醇质体。 权 利 要 求 书 CN 102144972 A CN 102144973 A1/4 页 3 鬼臼毒素醇质体及其制备方法 技术领域 0001 本发明属制药领域， 涉及一种鬼臼毒素醇质。

5、体 ； 本发明还涉及该醇质体的制备方 法。 背景技术 0002 鬼臼毒素 (Podophyllotoxin， PPT) 是从小檗科植物桃耳七、 八角莲或六角莲的根 及根茎中提取分离得到的木脂素类化合物， 它是世界卫生组织 (WHO) 推荐使用治疗尖锐湿 疣(CA)的一线药物， 它的主要作用机理是通过其细胞毒作用使受人类乳头瘤(HPV)感染的 细胞死亡， 常用的是 0.5的鬼臼毒素酊剂。 0003 CA 占我国性传播疾病的第二位， 其病因是 HPV 感染人体后寄居于基底细胞等角质 层形成细胞的细胞核内， 其DNA可整合到宿主细胞的DNA中并进行表达， 因而出现表皮的过 度增生甚至癌变。目前 CA。

6、 的治疗主要由冷冻、 激光、 微波、 免疫疗法及外用药物等， 临床主 要使用的就是鬼臼毒素酊剂。鬼臼毒素酊剂虽然能去除肉眼可见的病变， 但过量大面积的 使用会产生严重的毒副作用， 而脂质体虽然能够减少不良反应， 但是其作用也仅限于皮肤 表层， 所以难以消除皮肤深部的 HPV 潜伏感染而导致其复发。 0004 2000 年， 以色列 Touitou 等的研究小组对另一种新型脂质体醇质体 (Ethosomes)进行了报道， 其是在常规脂质体中添加高浓度的醇制备的含醇脂质体。 醇质体 不仅能够渗入皮肤深部， 还能够与细胞膜脂质融合， 渗入细胞内部， 因此将鬼臼毒素制成醇 质体可以达到减少用药量， 增。

7、加疗效减少复发及毒副作用的目的， 具有一定的临床意义。 发明内容 0005 针对现有临床常用的鬼臼毒素酊剂在治疗尖锐湿疣 (CA) 存在的、 会产生严重毒 副作用的不足， 本发明所要解决的技术问题是提供一种鬼臼毒素醇质体， 以提高鬼臼毒素 在皮肤内的滞留量， 减少全身毒副作用及局部刺激性 ； 本发明所要解决的技术问题还包括 提出鬼臼毒素醇质体的制备方法。 0006 为了解决上述技术问题， 本发明提供的载药醇质体的活性组分为鬼臼毒素， 鬼臼 毒素包封于醇质体中， 所用载药脂质材料为磷脂酰胆碱、 磷脂酰乙醇胺或者二棕榈酰磷脂 酰胆碱， 鬼臼毒素醇质体粒径范围为 50 300nm。 0007 优选地。

8、， 本发明上述鬼臼毒素醇质体的含醇量为 20 50， 脂质含量为 2 5， 载药量为 0.1 1.0， 包封率为 30 90。 0008 本发明上述鬼臼毒素醇质体可通过下述两种方法制备 ： 0009 一、 注入法 ： 将鬼臼毒素与载药脂质材料置于密闭容器中， 在磁力搅拌状态下加入 乙醇使其溶解， 恒速缓慢滴入25倍量的水继续恒速搅拌0.51h， 于冰水浴中探头超声 后过孔径为 0.22 0.5m 的微孔滤膜， 即得鬼臼毒素醇质体。 0010 二、 薄膜超声法 ： 将鬼臼毒素与磷脂类溶于甲醇与氯仿的体积比为 (3-5) ： 1 的混 合溶液中， 溶解后加入茄型瓶中， 在 25 50下使用旋转蒸发。

9、仪减压蒸发除去有机溶剂， 说 明 书 CN 102144972 A CN 102144973 A2/4 页 4 使脂质在器壁上形成均匀薄膜， 加入一定体积的乙醇水溶液， 旋转水合， 与冰水浴中探头超 声 0.5 1h 后过孔径为 0.22 0.5m 的微孔滤膜， 即得鬼臼毒素醇质体。 0011 本发明鬼臼毒素醇质体性质稳定， 可以按照常规方法将其制成贴剂、 凝胶剂等多 种外用剂型。 0012 目前临床常用的0.5鬼臼毒素酊剂含有6080的乙醇， 高浓度的乙醇对皮肤 有强烈的刺激作用， 且用药面积过大会带来全身毒性， 且临床实验证明该制剂由于不能作 用到皮肤深部而极其容易复发。 0013 随后的。

10、实施例将证明， 本发明含鬼臼毒素醇质体的局部刺激性较小， 与酊剂及脂 质体相比增加了皮肤内的滞留量而减少了透过量， 且醇质体与细胞膜具有良好的生物相容 性， 可以渗入细胞内部， 这对降低疾病的复发具有重要的意义。 附图说明 0014 图 1 是鬼臼毒素醇质体的脂质囊泡的电镜扫描图。 0015 图 2 是鬼臼毒素醇质体的粒径分布图。 0016 图 3 是鬼臼毒素醇质体与其他给药系统 24h 大鼠皮肤体外累积渗透量。 具体实施方式 0017 下面结合附图和具体实施例， 进一步阐述本发明。这些实施例应理解为仅用于说 明本发明而不用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之后， 本领域技术 人。

11、员可以对本发明作各种改动或修改， 这些等效变化和修饰同样落入本发明权利要求所限 定的范围。 0018 本发明以下实施例对制备得到的鬼臼毒素醇质体的粒径、 包封率和载药量等指标 采用以下措施进行如下评价和表征 ： 0019 1、 鬼臼毒素醇质体的透射电镜 (TEM) 照片 0020 样品加适量乙醇水溶液稀释， 滴加在覆盖碳膜的铜网上， 用 2.0磷钨酸负染， 于 透射电镜下观察， 放大 10 万倍拍摄透射电镜照片， 如图 1 所示。 0021 2、 测定鬼臼毒素醇质体的粒径 0022 将鬼臼毒素醇质体用激光粒度分析仪 (Nicomp 380/ZLS) 测定鬼臼毒素醇质体的 粒径， 如图 2 所示。

12、。 0023 3、 测定鬼臼毒素醇质体的包封率 0024 采用微柱离心法分离鬼臼毒素醇质体和游离药物， HPLC 法测定游离药物浓度， 根 据公式计算其包封率。 0025 4、 鬼臼毒素醇质体体外经皮渗透特性考察 0026 采用Tp-5智能透皮扩散仪， 离体SD大鼠腹部皮肤为渗透屏障， 以累计渗透量为指 标， 用 HPLC 测定鬼臼毒素 24h 的累积渗透速率及皮肤滞留量， 研究鬼臼毒素醇质体的体外 渗透特性。 0027 实施例 1 0028 称取 35mg 鬼臼毒素、 0.5g 大豆卵磷脂 ( 磷脂酰胆碱含量 95 ) 置于密闭容器 中， 加入3mL无水乙醇置于磁力搅拌器上， 在37， 70。

13、0rpm密闭条件下边变搅拌边缓慢注入 说 明 书 CN 102144972 A CN 102144973 A3/4 页 5 2 倍量的水， 注完后继续搅拌 5min， 然后在冰水浴条件下探头超声 0.5h， 最后过 0.45m 微 孔滤膜， 即得。 0029 经检测， 本实施例制得的鬼臼毒素醇质体的平均粒径为 83nm， 包封率为 51。 0030 实施例 2 0031 称取 35mg 鬼臼毒素、 0.5g 大豆卵磷脂 ( 磷脂酰胆碱含量 95 ) 溶解于 5mL 甲 醇氯仿 ( 体积比为 3 1) 混合溶剂中， 将该溶液置于 500mL 磨口茄型瓶中， 在 37水浴 温度下使用旋转蒸发仪减压。

14、蒸发除去溶剂， 并真空保持 30min， 使脂质在器壁上形成均匀薄 膜， 加入10mL的30乙醇水溶液， 旋转水合30min， 室温放置， 于冰水浴中探头超声5min， 过 0.22m 微孔滤膜， 即得。 0032 经检测， 本实施例制得的鬼臼毒素醇质体的平均粒径为 80nm， 包封率为 49.5。 0033 实施例 3 0034 称取 30mg 鬼臼毒素、 0.5g 大豆卵磷脂 ( 磷脂酰胆碱含量 95 ) 溶解于 3mL 甲 醇氯仿 ( 体积比为 4 1) 混合溶剂中， 将该溶液置于 500mL 磨口茄型瓶中， 在 37水浴 温度下使用旋转蒸发仪减压蒸发除去溶剂， 并真空保持 30min，。

15、 使脂质在器壁上形成均匀薄 膜， 加入 8mL 的 35乙醇水溶液， 旋转水合 30min， 室温放置， 于冰水浴中探头超声 2min， 过 0.50m 微孔滤膜， 即得。 0035 经检测， 本实施例制得的鬼臼毒素醇质体的平均粒径为 157nm， 包封率为 80.3。 0036 实施例 4 0037 称取 35mg 鬼臼毒素、 0.5g 大豆卵磷脂 ( 磷脂酰胆碱含量 95 ) 溶解于 10mL 甲 醇氯仿 ( 体积比为 5 1) 混合溶剂中， 将该溶液置于 500mL 磨口茄型瓶中， 在 37水浴 温度下使用旋转蒸发仪减压蒸发除去溶剂， 并真空保持 30min， 使脂质在器壁上形成均匀薄 。

16、膜， 加入 15mL 的 25乙醇水溶液， 旋转水合 30min， 室温放置， 于冰水浴中探头超声 10min， 过 0.30m 微孔滤膜， 即得。 0038 经检测， 本实施例制得的鬼臼毒素醇质体的平均粒径为 497nm， 包封率为 30.0。 0039 实施例 5 0040 称取 30mg 鬼臼毒素、 0.5g 大豆卵磷脂 ( 磷脂酰胆碱含量 95 ) 溶解于 5mL 甲 醇氯仿 ( 体积比为 3.5 1) 混合溶剂中， 将该溶液置于 500mL 磨口茄型瓶中， 在 37水 浴温度下使用旋转蒸发仪减压蒸发除去溶剂， 并真空保持 30min， 使脂质在器壁上形成均匀 薄膜， 加入10mL的3。

17、0乙醇水溶液， 旋转水合30min， 室温放置， 于冰水浴中探头超声5min， 过 0.40m 微孔滤膜， 即得。 0041 经检测， 本实施例制得的鬼臼毒素醇质体的平均粒径为 124nm， 包封率为 42.3。 0042 实施例 5 0043 称取 25mg 鬼臼毒素、 0.5g 大豆卵磷脂 ( 磷脂酰胆碱含量 95 ) 溶解于 3mL 甲 醇氯仿 ( 体积比为 4.5 1) 混合溶剂中， 将该溶液置于 500mL 磨口茄型瓶中， 在 37水 浴温度下使用旋转蒸发仪减压蒸发除去溶剂， 并真空保持 30min， 使脂质在器壁上形成均匀 薄膜， 加入 8mL 的 30乙醇水溶液， 旋转水合 30。

18、min， 室温放置， 于冰水浴中探头超声 2min， 过 0.35m 微孔滤膜， 即得。 0044 经检测， 本实施例制得的鬼臼毒素醇质体的平均粒径为 57nm， 包封率为 89.5。 0045 实施例 6 说 明 书 CN 102144972 A CN 102144973 A4/4 页 6 0046 以 SD 大鼠腹部皮肤为媒介， Franza 单室扩散池为体外模型， 用 HPLC 法测定透过 皮肤及皮肤内的鬼臼毒素含量， 求算稳态透皮速率， 皮肤滞留量， 考察不同给药形式 ( 鬼臼 毒素酊剂、 不同剂量的鬼臼毒素脂质体、 鬼臼毒素游离药物与空白醇质体的物理混合物及 鬼臼毒素乙醇水混悬液 ) 对鬼臼毒素经皮渗透的影响。研究结果如表 1 和图 3 显示， 相较 于其它给药系统鬼臼毒素醇质体具有较大的皮肤滞留量及较小的透皮速率。 0047 表 1. 鬼臼毒素醇质体与其他给药系统 24h 大鼠皮肤皮肤滞留量 0048 说 明 书 CN 102144972 A CN 102144973 A1/2 页 7 图 1 说 明 书 附 图 CN 102144972 A CN 102144973 A2/2 页 8 图 2 图 3 说 明 书 附 图 CN 102144972 A 。