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1、(10)申请公布号 CN 103263428 A (43)申请公布日 2013.08.28 CN 103263428 A *CN103263428A* (21)申请号 201310217308.7 (22)申请日 2013.06.03 A61K 31/7048(2006.01) A61P 31/06(2006.01) (71)申请人 南京正亮医药科技有限公司 地址 211300 江苏省南京市高淳区经济开发 区古檀大道 3 号科创大楼 607 室 (72)发明人 不公告发明人 (54) 发明名称 Polyflavanostilbene A 在制备抗结核菌药 物中的应用 (57) 摘要 本发明公开。
2、了 Polyflavanostilbene A 在制 备抗结核菌药物中的应用。本发明针对当前结 核病发病率高、 结核杆菌多重耐药菌株的出现， 使结核病发病率和死亡率呈上升趋势的现状， 发 现 Polyflavanostilbene A 具有显著抑制结核 菌的活性， 具有很好的应用前景。本发明涉及的 Polyflavanostilbene A 在制备治疗抗结核菌药 物中的用途属于首次公开， 由于骨架类型属于全 新的骨架类型， 而且其对于结核菌抑制活性强得 意想不到， 不存在由其他化合物给出任何启示的 可能， 具备突出的实质性特点， 同时用于结核菌感 染的防治显然具有显著的进步。 (51)Int.。
3、Cl. 权利要求书 1 页 说明书 4 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 (10)申请公布号 CN 103263428 A CN 103263428 A *CN103263428A* 1/1 页 2 1.Polyflavanostilbene A 在 制 备 抗 结 核 菌 药 物 中 的 应 用，所 述 化 合 物 Polyflavanostilbene A 结构如式 （） 所示 ： 式 （） 。 权 利 要 求 书 CN 103263428 A 2 1/4 页 3 Polyflavanostilbene A 在制备抗结核菌药物中的应。
4、用 技术领域 0001 本 发 明 涉 及 化 合 物 Polyflavanostilbene A 的 新 用 途，尤 其 涉 及 Polyflavanostilbene A 在制备抗结核菌药物中的应用。 背景技术 0002 近年来全球结核病的发病呈增高趋势， 据世界卫生组织 （WHO） 估计， 目前全球受结 核分枝杆菌 （Mycobacterium tuberculosis， MTB） 感染的人口占世界人口的三分之一， 其中 510%的感染者成为结核病患者。 我国每年出现活动性肺结核病人130万例， 其中传染性肺 结核约 60 万例， 其中传染性肺结核约 60 万例， 是全球结核病高负担国家。
5、之一。 0003 自抗结核药物相继问世， 使结核病的治疗起到划时代的变化。然而由于结核病患 者的治疗管理尚不十分规范， 不规则化疗， 滥用抗结核药物， 使结核病耐药情况日益严重， 且耐药性的变化更趋向于多种药物同时耐药， 这给结核病的防治工作造成极大困难。因此 寻找新的抗结核药物， 尤其是抗多药耐药性的抗结核药物对保护人民身体健康， 具有重要 意义。 0004 本发明涉及的化合物 Polyflavanostilbene A 是一个 2013 年发表 （Fushuang Li,et al.,2013.Polyflavanostilbene A,a New Flavanol-Fused Stilb。
6、ene Glycoside from Polygonum cuspidatum.Organic Letters 3(15),674677.） 的 新 化 合 物， 该化合物拥有全新的骨架类型， 还没发现其药理活性 （Fushuang Li,et al.,2013. Polyflavanostilbene A,a New Flavanol-Fused Stilbene Glycoside from Polygonum cuspidatum.Organic Letters 3(15),674677.） ，对 于 本 发 明 涉 及 的 Polyflavanostilbene A 在制备抗结核菌药物。
7、中的用途属于首次公开， 由于属于全新的结 构类型， 而且其对于抗结核菌活性强得意想不到， 不存在由其他化合物给出任何启示的可 能， 具备突出的实质性特点， 同时用于抗结核菌显然具有显著的进步。 发明内容 0005 本发明的目的在于根据现有Polyflavanostilbene A研究中未发现其具有抗结核 菌活性的报道的现状， 提供了 Polyflavanostilbene A 在制备抗结核菌药物中的应用。 0006 所述化合物 Polyflavanostilbene A, 结构如式 （） 所示 ： 0007 说 明 书 CN 103263428 A 3 2/4 页 4 0008 本发明目的通过。
8、以下技术方案予以实现 ： 0009 发明人先用卡介苗做应试菌株， 采用纸片扩散法对 Polyflavanostilbene A 的抗 结核菌活性进行初步试验， 根据初步试验的结果， 本发明再用固体培养基稀释法测定了该 化合物对卡介苗、 结核分枝杆菌标准株 H37Rv 株和耐多药结核分枝杆菌 （MDR MTB） 三种结 核菌的最小抑菌浓度， 实验结果证实 Polyflavanostilbene A 具有很强的抗结核菌和抗耐 药性结核菌活性， 可作为治疗结核菌感染疾病的先导化合物， 也可用于制备治疗结核病药 物。 0010 与现有技术相比， 本发明具有如下有益效果 ： 0011 1. 本发明提供了。
9、一种可用于抗结核病治疗的 Polyflavanostilbene A， 从而扩大 了抗结核菌药物的种类 ； 0012 2. 针对目前结核病发病率高、 结核杆菌多重耐药菌株及人体免疫缺陷病毒双重感 染的出现， 使结核病发病率和死亡率呈上升趋势的现状， 本发明发现 Polyflavanostilbene A 具有抗结核菌和耐药性结核菌活性的特点， 可用于抗结核药物的制备， 具有非常广阔的应 用前景 ； 0013 3. 本发明涉及的 Polyflavanostilbene A 在制备治疗抗结核菌药物中的用途属 于首次公开， 由于骨架类型属于全新的骨架类型， 而且其对于结核菌抑制活性强得意想不 到， 。
10、不存在由其他化合物给出任何启示的可能， 具备突出的实质性特点， 同时用于结核菌感 染的防治显然具有显著的进步。 具体实施方式 0014 本发明所涉及化合物 Polyflavanostilbene A 的制备方法参见文献 （Fushuang Li,et al.,2013.Polyflavanostilbene A,a New Flavanol-Fused Stilbene Glycoside from Polygonum cuspidatum.Organic Letters 3(15),674677.） 0015 以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明， 但本发明的保护范围不受具体实 施例的任。
11、何限制， 而是由权利要求加以限定。 0016 实施例 1 ： 本发明所涉及化合物 Polyflavanostilbene A 片剂的制备 ： 0017 取 20 克化合物 Polyflavanostilbene A, 加入制备片剂的常规辅料 180 克， 混匀， 常规压片机制成 1000 片。 0018 实施例 2 ： 本发明所涉及化合物 Polyflavanostilbene A 胶囊剂的制备 ： 0019 取 20 克化合物 Polyflavanostilbene A， 加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉 180 说 明 书 CN 103263428 A 4 3/4 页 5 克， 混匀， 装胶。
12、囊制成 1000 粒。 0020 下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。 0021 实验例 1 固体培养基稀释法测定 Polyflavanostilbene A 抗卡介苗 （BCG） 绝对浓 度 0022 从斜面上刮取卡介苗培养物， 加入到 3ml Middlebrook7H9 肉汤培养基中， 加入少量玻璃珠， 旋紧试管盖， 于漩涡振荡器上剧烈振动研磨， 与标准麦氏比浊管 （MacFarlandNo.1） 比浊， 即配成 1mg/ml 的卡介苗 （BCG） 菌悬液。将 Polyflavanostilbene A 用 DMSO 配成高浓度的原液， 用含 5% 的吐温 -80 无菌超纯水稀释原。
13、液至所需浓度， 将稀释好的 Polyflavanostilbene A 按所需剂量加入到 4ml Middlebrook7H11 琼脂 培养基 （该培养基已经 121高压蒸汽灭菌 15 分钟、 冷却至 50 55） ， 混匀， 制成含 Polyflavanostilbene A， 浓度分别为 6.0ug/ml， 4.0ug/ml， 3.0ug/ml， 2.0ug/ml， 1.5ug/ml， 1.0ug/ml， 0.75ug/ml， 0.5ug/ml 等浓度的斜面培养基。 0023 将浓度为 1mg/ml 的卡介苗 （BCG）菌悬液用接种环蘸取数环， 分别接种于含 Polyflavanostil。
14、bene A 系列浓度的培养基和空白对照培养基斜面上， 置于 37培养 4 8 周， 观察实验结果， 结果如表 1 所示。 0024 本实施例中所用 Middlebrook7H9 肉汤培养基和 Middlebrook7H11 琼脂培养基为 本领域技术人员进行结核菌培养时的常用培养基， 其配方采用常规配方即可。 0025 实验例2固体培养基稀释法测定Polyflavanostilbene A抗结核分枝杆菌标准株 H37Rv 株绝对浓度 0026 从斜面上刮取结核分枝杆菌标准株 H37Rv 株培养物， 加入到 3ml Middlebrook7H9 肉汤培养基中， 加入少量玻璃珠， 旋紧试管盖， 于。
15、漩涡振荡器上剧烈振动研磨， 与标准麦氏 比浊管 （MacFarland No.1） 比浊， 即配成 1mg/ml 的 H37Rv 株菌悬液。 0027 将 Polyflavanostilbene A 分别用 DMSO 配成高浓度的原液， 用含 5% 的吐温 -80 无菌超纯水稀释原液至所需浓度， 将稀释好的 Polyflavanostilbene A 按所需剂量加入到 4ml Middlebrook7H11琼脂培养基 （该培养基已经121高压蒸汽灭菌15分钟、 冷却至50 55） ， 混匀， 制成含 Polyflavanostilbene A， 浓度分别为 6.0ug/ml， 4.0ug/ml。
16、， 3.0ug/ml， 2.0ug/ml， 1.5ug/ml， 1.0ug/ml， 0.75ug/ml， 0.5ug/ml 等浓度的斜面培养基。 0028 将 浓 度 为 1mg/ml 的 H37Rv 株 菌 悬 液 用 接 种 环 蘸 取 数 环， 分 别 接 种 于 含 Polyflavanostilbene A 系列浓度的培养基和空白对照培养基斜面上， 置于 37培养 4 8 周， 观察实验结果， 结果如表 1 所示。 0029 实验例3固体培养基稀释法测定Polyflavanostilbene A抗结核分支杆菌临床分 离耐 ISRE MTB 株绝对浓度 0030 从斜面上刮取结核分枝杆。
17、菌临床分离耐 ISRE MTB 株 （耐异烟肼、 链霉素、 利福 平、 乙胺丁醇结核分枝杆菌临床分离柱）培养物， 加入到 3ml Middlebrook7H9 肉汤培养 基中， 加入少量玻璃珠， 旋紧试管盖， 于漩涡振荡器上剧烈振动研磨， 与标准麦氏比浊管 （MacFarland No.1） 比浊， 即配成 1mg/ml 的菌悬液。 0031 将 Polyflavanostilbene A 分别用 DMSO 配成高浓度的原液， 用含 5% 的吐温 -80 无菌超纯水稀释原液至所需浓度， 将稀释好的 Polyflavanostilbene A 按所需剂量加入到 4ml Middlebrook7H。
18、11琼脂培养基 （该培养基已经121高压蒸汽灭菌15分钟、 冷却至50 说 明 书 CN 103263428 A 5 4/4 页 6 55） ， 混匀， 制成含 Polyflavanostilbene A， 浓度分别为 6.0ug/ml， 4.0ug/ml， 3.0ug/ml， 2.0ug/ml， 1.5ug/ml， 1.0ug/ml， 0.75ug/ml， 0.5ug/ml 等浓度的斜面培养基。 0032 将浓度为1mg/ml的结核分枝杆菌临床分离耐ISRE MTB株菌悬液用接种环蘸取数 环， 分别接种于含Polyflavanostilbene A系列浓度的培养基和空白对照培养基斜面上， 置 于 37培养 4 8 周， 观察实验结果， 结果如表 1 所示。 0033 表 1 固体培养基稀释法测定 Polyflavanostilbene A 抗结核菌绝对浓度结果 0034 0035 结论 ： Polyflavanostilbene A具有很强的抗结核菌和抗耐药性结核菌活性， 可作 为治疗结核菌感染疾病的先导化合物， 也可用于制备治疗结核病药物。 说 明 书 CN 103263428 A 6 。