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一种一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂和其制备方法及其应用.pdf

上传人：罗明

文档编号：8245819

上传时间：2020-02-22

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1、(10)授权公告号 CN 103271904 B (45)授权公告日 2014.11.12 CN 103271904 B (21)申请号 201310182180.5 (22)申请日 2013.05.15 A61K 31/357(2006.01) C07D 407/04(2006.01) A61P 9/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 13/12(2006.01) A61P 11/06(2006.01) A61P 5/14(2006.01) (73)专利权人东南大学地址 210009 江苏省南京市四牌楼 2 号。

2、(72)发明人蔡进吉民 (74)专利代理机构南京苏高专利商标事务所 ( 普通合伙 ) 32204 代理人柏尚春 Natsuki Ishizuka 等 .Structure-Activity Relationships of a Novel Class of Endothelin-A Receptor Antagonists and Discovery of Potent and Selective Receptor Antagonist(S-1255). 1. Study on Structure-Activity Relationships and Basic Structure C。

3、rucial for ETA Antagonism. Journal of Medicinal Chemistry .2002,第45 卷 ( 第 10 期 ), 第 2041-2055 页 . Natsuki Ishizuka 等 .Structure-Activity Relationships of a Novel Class of Endothelin-A Receptor Antagonists and Discovery of Potent and Selective Receptor Antagonist(S-1255). 1. Study on Structure-Activi。

4、ty Relationships and Basic Structure Crucial for ETA Antagonism. Journal of Medicinal Chemistry .2002,第45 卷 ( 第 10 期 ), 第 2041-2055 页 . 李松等 . 一氧化氮供体最新研究进展及应用前景 . 中国生化药物杂志 .2006, 第 27 卷 ( 第 6 期 ), 第 374-378 页 . (54) 发明名称一种一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂和其制备方法及其应用 (57) 摘要本发明公开了一种具有通式（1）结构的一氧化氮。

5、供体型内皮素受体拮抗剂（1），其中， R1代表 -CH(CH3)2、或 R2代表 Cl 或R3代表 H 或 -(CH2)4ONO2。本发明化合物具有很强的内皮素受体拮抗活性，可用于制备治疗心脑血管、肿瘤、糖尿病、肾病、哮喘以及甲状腺亢进的药物。 (51)Int.Cl. (56)对比文件审查员刘军政权利要求书 1 页说明书 10 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利权利要求书1页说明书10页 (10)授权公告号 CN 103271904 B CN 103271904 B 1/1 页 2 1. 一种一氧化氮供体型内皮素受。

6、体拮抗剂，具有通式 (1) 的结构：其中，R1代表 CH(CH3)2、 R2代表 Cl 或R3代表(CH2)4ONO2。 2. 权利要求 1 所述一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂的制备方法，其特征在于：对苯二酚在浓硫酸催化下与乙酸酐反应生成对苯二酚二乙酸酯，在无水三氯化铝作用下发生 Fries 重排，生成 2， 5- 二羟基苯乙酮， 2， 5- 二羟基苯乙酮经选择性烷基化生成 5- 烷氧基-2-羟基苯乙酮， 5-烷氧基-2-羟基苯乙酮在碱性条件下与胡椒醛发生缩合反应，缩合反应后的产物在 POCl3和 DMF 环境中发生氯甲酰化反应，氯甲酰化反应的产物与 4- 取代苯酚。

7、在 NaH 的 DMF 悬浮液中进行反应，该反应后的产物先经过选择性氧化再与一氧化氮供体缩合即得到目标化合物。 3. 权利要求 1 所述一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂及其盐类化合物作为制备治疗心脑血管、肿瘤、糖尿病、肾病、哮喘以及甲状腺亢进药物的应用。权利要求书 CN 103271904 B 2 1/10 页 3 一种一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂和其制备方法及其应用技术领域 0001 本发明属于医药化工领域，具体涉及一种一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂，还涉及上述一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂的制备方法，最后涉及上述一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂的应用。。

8、背景技术 0002 心脑血管疾病的死亡率居各类疾病之首，其最终死因绝大多数是心肌肥大，心力衰竭（心衰）、脑卒中及致死性心律失常。尤其近年来严重心衰的病死率居高不下，已形成国际医药界的一个难题。这些疾病目前均缺乏有效的治疗药物。 0003 内皮素 (endothclin,ET) 是由血管内皮细胞、心肌、平滑肌等合成及分泌的一种含有 21 个氨基酸的活性多肽，具有强大的缩血管和促血管平滑肌细胞增殖作用，是一种内源性损伤因子，在许多心、脑、肺、肾和血管疾病的发病中都具有重要意义。 ET有3种形式的异型体，分别称为 ET 1， ET 2 和 E 3， ET 经。

9、内皮素转换酶（ECEs) 作用而激活，激活的 ET 与其受体结合而发挥作用，其中 ET1 既有强烈而持久的血管收缩作用，又具有促进细胞生长和有丝分裂特性，是引起多种疾病的炎性因子。由于内皮素拮抗剂蕴藏的潜在的治疗价值,世界各大制药公司都积极地投入到内皮素拮抗剂的研究与开发中,内皮素拮抗剂的研究现已成为热点。已发现的作用较强的肽类 ET 拮抗剂有 BQ123、 BQ160、 FR2139317 等 , 但由于肽类拮抗剂的口服生物利用率低而限制了其在须长期用药的心血管疾病中的应用。许多制药公司致力于有口服活性的非肽类 ET 拮抗剂的研究。已经上市的内皮素受体拮抗剂有波生坦、替。

10、唑生坦、恩拉生坦、西他生坦、阿曲生坦及安贝生坦，在治疗高血压、肺动脉高压、肿瘤、糖尿病并发症、心肌梗死及脑血管痉挛等方面取得很好效果。发明内容 0004 本发明所要解决的技术问题是提供一种一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂。 0005 本发明还要解决的技术问题是提供一种一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂的制备方法。 0006 本发明最后要解决的技术问题是提供上述内皮素受体拮抗剂及其盐类化合物作为制备治疗心脑血管、肿瘤、糖尿病、肾病、哮喘以及甲状腺亢进药物中的应用。 0007 为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下： 0008 一种内皮素受体拮抗剂，具有通式。

11、（1）的结构： 0009 说明书 CN 103271904 B 3 2/10 页 4 0010 其中， R1代表 CH(CH3)2、或 R2代表 Cl 或R3代表 H 或(CH2)4ONO2。 0011 上述一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂的制备方法，对苯二酚在浓硫酸催化下与乙酸酐反应生成对苯二酚二乙酸酯，在无水三氯化铝作用下发生 Fries 重排，生成 2， 5- 二羟基苯乙酮， 2， 5- 二羟基苯乙酮经选择性烷基化生成 5- 烷氧基 -2- 羟基苯乙酮， 5- 烷氧基-2-羟基苯乙酮在碱性条件下与胡椒醛发生缩合反应，缩合反应后的产物在POCl3和DMF 环境中发。

12、生氯甲酰化反应，氯甲酰化反应的产物与 4- 取代苯酚在 NaH 的 DMF 悬浮液中进行反应，该反应后的产物先经过选择性氧化再与一氧化氮供体缩合即得到目标化合物，目标化合物通过柱层析分离纯化或有机溶剂重结晶精制。一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂的合成路线： 0012 0013 上述一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂及其盐类化合物作为制备治疗心脑血管、肿瘤、糖尿病、肾病、哮喘以及甲状腺亢进药物中的应用。 0014 上述一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂或其药学上可接受的盐类化合物可以单说明书 CN 103271904 B 4 3/10 页 5 独或与至少一种药学上可接受的载体。

13、组合成制剂以供给药，如针剂、输液、滴丸、片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液等。 0015 有益效果：相比于现有技术，本发明的化合物具有很强的内皮素受体拮抗活性，可用于制备治疗心脑血管、肿瘤、糖尿病、肾病、哮喘以及甲状腺亢进的药物，且治疗效果显著。具体实施方式 0016 在本发明中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。 0017 其中，在下述实施例中，这些基团的名称为：4- 甲基苄氧基；苄氧基；4- 氯苄氧基；4- 甲氧基苄氧。

14、基； (4- 甲氧基 ) 苯氧基。 0018 熔点采用 b 形管熔点管测定；红外光谱仪为 Nicolet Impact410 型， KBr 压片；核磁共振仪采用 Bruker-AV300 型， TMS 为内标；元素分析用 Carlo Erba1106 型元素分析仪测定；质谱用 fi nnigan FTMS-2000 型及 HP1100LC/MSD 型质谱仪测定。 0019 2， 5- 二羟基苯乙酮的制备：在 1 升的烧杯中加入 110 克（1.0mol）的对苯二酚， 206 克（2.02mol）的乙酸酐和 2mL 浓硫酸，手工搅拌反应混合物，反应很快进。

15、行并放热，继续搅拌十分钟后，将反应混合物转移到 2 升的盛有 200 克碎冰的烧杯中，搅拌，待冰完全融化后，抽滤，水洗，烘干，得白色固体粉末 170 克，用无水乙醇重结晶得白色晶体对苯二酚二乙酸酯 140 克，收率 72%， Mp.120-122 ；向配有带氯化钙干燥管的回流冷凝管的 500mL 圆底烧瓶中，加入 50 克（0.257mol）的对苯二酚二乙酸酯和 116 克（0.87mol）粉状无水三氯化铝，混匀，在油浴上缓慢加热，使外温在 110维持一小时，产生大量烟雾，将外温升到 160-165，保温三小时，撤去油浴，反应物冷至室温，。

16、加入 350mL 的冰盐酸溶液，充分搅拌，使过量的三氯化铝水解，过滤，用冷水洗涤（2100mL），得粗品 35 克，收率 89%，用乙醇重结晶得绿色针状晶体 2， 5- 二羟基苯乙酮， Mp.198-200 ； 0020 5- 异丙氧基 -2- 羟基苯乙酮的制备：称取 15.2 克（0.1mol） 2， 5- 二羟基苯乙酮， 36.92 克（0.3mol） 2- 溴丙烷， 3.7 克碘化钾， 16.6 克（0.12mol）碳酸钾，加入到 150mL 的磨口锥形瓶中，再加入 60mL 的丙酮，搅拌下回流 24 小时，过滤，滤液旋干，残余物过柱（以。

17、石油醚：乙酸乙酯 =10 ： 1 的混合溶剂为洗脱液），得黄色油状物 13.6 克，收率 70% ； 5- 苄氧基 -2- 羟基苯乙酮的制备：称取 1.9 克（12.5mmol） 2,5- 二羟基苯乙酮， 3.45 克（25mmol）碳酸钾， 1.6 克（12.5mmol）的苄氯， 3.7 克碘化钾，加入到 150mL 的磨口锥形瓶中，再加入 60mL 的丙酮，慢慢的滴加含有 1.6 克（12.5mmol）的苄氯的丙酮溶液，加毕，搅拌下回流 24 小时，过滤，滤液旋干，残余物过柱（以石油醚：乙酸乙酯 =10 ： 1 的混合溶剂为洗脱液），。

18、得黄色油状物 13.6 克，收率 70% ； 5-(4- 甲基苄氧基 )-2- 羟基苯乙酮、 5-(4- 甲氧基苄氧基 )-2- 羟基苯乙酮、 5-(4-氯苄氧基)-2-羟基苯乙酮的制备方法均可参照5-苄氧基-2-羟基苯乙酮的制备方法， 5-取代-2-羟基苯乙酮化合物的合成可参照化合物5-异丙氧基-2-羟基苯乙酮或 5- 苄氧基 -2- 羟基苯乙酮的合成方法，结果见如下表 1 ：说明书 CN 103271904 B 5 4/10 页 6 0021 表 1 0022 0023 2-(3， 4- 亚甲二氧基苯基 )-6- 异丙氧基 -2， 3- 二氢 -4- 色酮的制备：称。

19、取 4.4g （23mmol）的 5- 异丙氧基 -2- 羟基苯乙酮， 3.4g（23mmol）的胡椒醛，加入到 50mL 的锥形瓶中，再加入10mL甲醇，搅拌下滴加2M的NaOH溶液45mmol(1.8gNaOH， 22mLH2O)，加毕，室温搅拌72h，丙酮稀释，过滤，乙醇重结晶，得黄色针状结晶2.5g，收率33%。 Mp.112-114； 2-(3， 4- 亚甲二氧基苯基 )-6- 苄氧基 -2， 3- 二氢 -4- 色酮的制备：称取 2.42g （10mmol）的 5- 苄氧基 -2- 羟基苯乙酮， 1.5g（10mmol）的胡椒醛，加入到 50。

20、mL 的锥形瓶中，再加入 10mL 甲醇，搅拌下滴加2M的NaOH溶液20mmol(将0.8gNaOH溶于10mLH2O中配成的溶液)，加毕，室温搅拌 72h，丙酮稀释，过滤，甲醇重结晶，得黄色粉末 2.0g，收率 53%， Mp.132-134；同理， 2-(3， 4- 亚甲二氧基苯基 )-6-(4- 甲基苄氧基 )-2， 3- 二氢 -4- 色酮、 2-(3， 4- 亚甲二氧基苯基 )-6-(4- 甲氧基苄氧基 )-2， 3- 二氢 -4- 色酮、 2-(3， 4- 亚甲二氧基苯基 )-6-(4- 氯苄氧基 )-2， 3- 二氢 -4- 色酮的制备方法均可参照。

21、2-(3， 4- 亚甲二氧基苯基 )-6- 苄氧基 -2， 3- 二氢 -4- 色酮的制备方法，结果见如下表 2 ： 0024 表 2 0025 0026 实施例 1 ： 2-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 异丙氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸的制备 0027 第一步，制备 2， 5- 二羟基苯乙酮： 0028 在 1 升的烧杯中加入 110 克（1.0mol）的对苯二酚， 206 克（2.02mol）的乙酸酐和 2mL 浓硫酸，手工搅拌反应混合物，反应很快进行并放热，继续搅拌十分钟后，将反应混合物转移到 2 升的盛有 200 克碎冰的烧杯中，搅。

22、拌，待冰完全融化后，抽滤，水洗，烘干，得说明书 CN 103271904 B 6 5/10 页 7 白色固体粉末 170 克，用无水乙醇重结晶得白色晶体对苯二酚二乙酸酯 140 克，收率 72%， Mp.120-122 ；向配有带氯化钙干燥管的回流冷凝管的 500mL 圆底烧瓶中，加入 50 克（0.257mol）的对苯二酚二乙酸酯和 116 克（0.87mol）粉状无水三氯化铝，混匀，在油浴上缓慢加热，使外温在 110维持一小时，产生大量烟雾，将外温升到 160-165，保温三小时，撤去油浴，反应物冷至室温，加入 350mL 的冰盐酸溶液，。

23、充分搅拌，使过量的三氯化铝水解，过滤，用冷水洗涤（2100mL），得粗品 35 克，收率 89%，用乙醇重结晶得绿色针状晶体 2， 5- 二羟基苯乙酮， Mp.198-200 ； 0029 第二步，制备 5- 异丙氧基 -2- 羟基苯乙酮： 0030 称取 15.2 克（0.1mol） 2， 5- 二羟基苯乙酮， 36.92 克（0.3mol） 2- 溴丙烷， 3.7 克碘化钾， 16.6 克（0.12mol）碳酸钾，加入到 150mL 的磨口锥形瓶中，再加入 60mL 的丙酮，搅拌下回流 24 小时，过滤，滤液旋干，残余物过柱（以石油醚：乙。

24、酸乙酯 =10 ： 1 的混合溶剂为洗脱液），得黄色油状物 13.6 克，收率 70% ； 0031 第三步，制备 2-(3， 4- 亚甲二氧基苯基 )-6- 异丙氧基 -2， 3- 二氢 -4- 色酮： 0032 称取 4.4g（23mmol）的 5- 异丙氧基 -2- 羟基苯乙酮， 3.4g（23mmol）的胡椒醛，加入到 50mL 的锥形瓶中，再加入 10mL 甲醇，搅拌下滴加 2M 的 NaOH 溶液 45mmol(1.8gNaOH， 22mLH2O)，加毕，室温搅拌 72h，丙酮稀释，过滤，乙醇重结晶，得黄色针状结晶 2.5g, 收率 33%。Mp。

25、.112-114 ； 0033 第四步，制备 2- （3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 异丙氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸： 0034 将21g(0.137mol)的POCl3于0下，滴加到41.60mL(0.54mol)的DMF中形成混合物，于0下搅拌30min，另将18g(0.05mol)的2-(3， 4-亚甲二氧基苯基)-6-异丙氧基-2， 3-二氢-4-色酮溶于70mLDMF中，在0下滴加到上述混合物中，加完后在室温下搅拌48h，充分反应后，将反应后的混合物倾入到 200mL 冰水中，搅拌 10min.，过滤，干燥，以丙酮 - 异丙醚重。

26、结晶，得黄色结晶性粉末 15g，收率 80%， Mp.114-115 ； 0035 称取 2.2g(0.023mol) 的氨基磺酸溶于 13mL 水中，向其中加入含有 3.5g(0.0094mol) 上述产物的甲苯溶液，形成混合溶液，冷却至 0，将 2.14g(0.0023mol) NaClO2溶于18mL冰水中，于0下滴加到上述混合溶液中，搅拌30min.，在搅拌的过程中再依次加入亚硫酸钠溶液（1.2gNaSO3溶于 10mL 水中），氢氧化钠溶液（1.6gNaOH 溶于 35mL 水中），添加完成后搅拌 10min.，过滤，水。

27、洗，干燥，乙醇重结晶，得黄色粉末 2-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 异丙氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸 3.4g，收率 89%， Mp.173-174， MS（TOF MS ES+）： 411.1M+Na+ 0036 1H-NMR(CDCl 3)(ppm):1.32-1.44(d,6H),4.43-4.51(m,1H),5.92(d,2H),6.09(s ,1H),6.69-6.75(t,2H),6.81-6.86(m,3H),7.18-7.30(t,1H).IR(cm-1):3425.44,2973.67, 1692.82,1668.94,1597.80。

28、,1567.61,1501.42,1482.87,1286.25,1252.05。 0037 实施例 2 ： 2-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4-(4- 甲氧基 ) 苯氧基 -6- 异丙氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸的制备 0038 第一步，制备 2， 5- 二羟基苯乙酮： 0039 参照实施例 1 中的第一步步骤操作； 0040 第二步，制备 5- 异丙氧基 -2- 羟基苯乙酮： 0041 参照实施例 1 中的第二步步骤操作；说明书 CN 103271904 B 7 6/10 页 8 0042 第三步，制备 2-(3， 4- 亚甲二氧基苯基 )-6- 异丙氧基。

29、 -2， 3- 二氢 -4- 色酮： 0043 参照实施例 1 中的第三步步骤操作； 0044 第四步，制备 2- （3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 异丙氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸： 0045 参照实施例 1 中的第四步步骤操作； 0046 第五步，制备目标产物： 0047 将 2-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 异丙氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸 4g （0.01mol）加入到 250mL 的锥形瓶中，加入 50mL 的无水 DMF 溶解，搅拌下加入 1.5g60% 的 NaH, 室温搅拌 30 分钟。

30、，再加入 1.3g（0.01mol）对甲氧基苯酚，于室温下搅拌 6 小时，将反应混合物倾入 300mL 冰水中，乙酸乙酯萃取三次（300mL3），无水硫酸镁干燥，过柱（石油醚：乙酸乙酯 =10 ： 1），制得黄色固体粉末，收率 50%， Mp.180-182 .MS（TOF MS ES+）： 499.1M+Na+1H-NMR(CDCl3)(ppm):0.99-1.01(d,3H),1.23-1.28(d,3H),3.75s,3H),4.0 9-4.17(m,1H),5.91(s,2H),6.34(s,1H),6.62-6.98(m,10H).IR(cm-1)。

31、:3437.79,2975.24,1 664.21,1630.30,1575.19,1503.79,1486.59,1442.61,1246.23,1234.38,1209.46。 0048 实施例3 ： 2- （3， 4-亚甲二氧基苯基） -4-(4-甲氧基)苯氧基-6-苄氧基-2H-色烯 -3- 羧酸的制备 0049 第一步，制备 2， 5- 二羟基苯乙酮： 0050 参照实施例 1 中的第一步步骤操作； 0051 第二步，制备 5- 苄氧基 -2- 羟基苯乙酮： 0052 称取 1.9 克（12.5mmol） 2,5- 二羟基苯乙酮， 3.45 克（25mmol）碳酸钾，。

32、 1.6 克（12.5mmol）的苄氯， 3.7 克碘化钾，加入到 150mL 的磨口锥形瓶中，再加入 60mL 的丙酮，慢慢的滴加含有 1.6 克（12.5mmol）的苄氯的丙酮溶液，加毕，搅拌下回流 24 小时。过滤，滤液旋干，残余物过柱（以石油醚：乙酸乙酯=10 ： 1的混合溶剂为洗脱液），得黄色油状物13.6 克，收率 70% ； 0053 第三步，制备 2-(3， 4- 亚甲二氧基苯基 )-6- 苄氧基 -2， 3- 二氢 -4- 色酮： 0054 称取 2.42g（10mmol）的 5- 苄氧基 -2- 羟基苯乙酮， 1.5g（10mmo。

33、l）的胡椒醛，加入到 50mL 的锥形瓶中，再加入 10mL 甲醇，搅拌下滴加 2M 的 NaOH 溶液 20mmol( 将 0.8gNaOH 溶于 10mLH2O 中配成的溶液 )，加毕，室温搅拌 72h，丙酮稀释，过滤，甲醇重结晶，得黄色粉末 2.0g，收率 53%， Mp.132-134 ； 0055 第四步，制备 2-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 苄氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸： 0056 参照实施例 1 中的第四步操作步骤； 0057 第五步，制备目标产物： 0058 参照实施例 2 中的第五步操作步骤，得到黄色固体粉。

34、末，收率 83%， Mp.174-176。 MS（ESI-）： 523.2M-H-1H-NMR(CDCl3)(ppm):3.74(s,3H),4.75(q,2H),5.89(s,2H),6.2 9(s,1H),6.67-6.92(m,5H),7.23-7.31(m,br,6H)。 IR(cm-1):3432.31,2947.96,2903.83,170 2.47,1691.18,1665.40,1631.12,1573.18,1502.06,1485.93,1442.81,1239.89,1201.92。 0059 实施例 4 ： 2- （3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6-(。

35、4- 甲基苄氧基 )-2H- 色烯 -3- 羧酸的制备 0060 参照实施例 12-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 异丙氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸的制备方法，得到黄色固体粉末，收率 45%，说明书 CN 103271904 B 8 7/10 页 9 Mp.167-169。MS（ESI-）： 499.0M-H-1H-NMR(CDCl3)(ppm):2.35(s,3H),4 .98(s,2H),5.89(s,2H),6.25(s,1H),6.68-6.89(m,5H),7.02-7.36(m,5H),IR(c m-1):3442。

36、.70,3433.06,3068.53,3020.32,2954.74,2918.10,2889.17,1693.38,1668.31,1 600.81,1566.09,1485.09,1442.66,1377.08,1317.29,1259.43,1240.14,1188.07,1039.5 8。 0061 实施例5 ： 2- （3， 4-亚甲二氧基苯基） -4-氯-6-(4-甲氧基苄氧基)-2H-色烯-3-羧酸的制备 0062 参照实施例 12-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 异丙氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸的制备方法，得到黄色固体。

37、粉末，收率 80%， Mp.156-158。MS ESI(-）： 465M-H-1H-NMR(CDCl3)(ppm):3.82(s,3H),4. 95(s,2H),5.91(s,2H),6.26(s,1H),6.69-6.93(m,6H),7.27-7.35(m,3H),IR(c m-1):3450.41,2999.10,2900.74,1695.31,1620.09,1571.88,1488.94,1452.30,1380.94,1 278.72,1249.79,1184.21,1031.85。 0063 实施例 6 ： 2-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 苄氧基 -。

38、2H- 色烯 -3- 羧酸的制备 0064 参照实施例 12- （3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 异丙氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸的制备方法，得黄色固体粉末，收率57%， Mp.145-148。 MS （ESI-）： 435.0M-H-1H-NMR(CDCl3) (ppm):5.00(s,2H),5.98(s,2H),6.2(s,1H),6.67-6.88(m,5H),7.24-7.42(m,6H)。 IR(cm -1):3082.70,3058.35,2928.61,2897.32,2876.65,1705.07,1685.02,1621.34,1570.7。

39、1,15 03.06,1483.20,1442.05,1423.01,1379.32。 0065 实施例 7 ： 2-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6-（4- 氯苄氧基） -2H- 色烯 -3- 羧酸的制备 0066 参照实施例 12- （3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 异丙氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸的制备方法制得黄色固体粉末，收率 67%， Mp.158-160。MS （ESI+）： 471.2(M+)1H-NMR(CDCl3) (ppm):2.79-2.86(dd,1H),2.98-3.08(m,1H),5.31-5.36(dd,1H),5。

40、.98(s,2H),6.81(s,1 H),6.84-7.41(m,10H)。 IR(cm-1):3450.41,3080.11,2898.81,1676.03,1618.17,1488.94,1 440.73,1407.94,1379.01,1342.36,1286.43,1232.43,1193.85,1126.35,1091.63,1062.7 0,1033.77,1010.63,929.63,871.76,815.83。 0067 实施例 8 ： 2-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 异丙氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸 -4 - 亚硝氧基丁酯的制备 0068 称。

41、取 1.5g(3.86mmol)2-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 异丙氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸（由上述实施例 1 制得）和 3.75(17.4mol) 的 1,4- 二溴丁烷，加入 100mL 的锥形瓶中，边搅拌边滴加含有 1mL 三乙胺的丙酮溶液（加入的丙酮溶液为 50mL），滴加完成，回流 10h，过滤，丙酮洗涤滤饼，将滤液旋干，过柱（以石油醚：乙酸乙酯 =20 ： 1 的混合溶剂为洗脱液），得黄色粘稠液体 3g，收率 60%。MS（TOF MS ES+）： 528.1M+Na+ 0069 1H-NMR(CDCl 。

42、3)(ppm) ： 1.25-1.38 （d,6H） ,1.65-1.76(m,br,4H),4.26-4.30(m,2H ),4.37-4.41(M,2H),4.6-4.72(M,1H),6.07(s,2H),6.88-6.91(d,1H),7.18-7.58(m,5H)。 IR (cm-1):2972.10,2933.53,2900.74,1685.67,1631.67,1623.95,1571.88,1490.87,1440.73 ,1392.51,1361.65,1332.72,1284.50,1215.07,1134.07,1031.85,993.27。说明书 CN 10327。

43、1904 B 9 8/10 页 10 0070 实施例 9 ： 2-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4-(4- 甲氧基 ) 苯氧基 -6- 异丙氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸 -4 - 亚硝氧基丁酯的制备 0071 参照实施例 92-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 异丙氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸 -4 - 亚硝氧基丁酯的制备方法，由 2-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4-(4- 甲氧基 ) 苯氧基-6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸（由上述实施例2制得）最终得到黄色粘稠物，收率80%。 0072 MS（TOF MS ES+）： 616.2M。

44、+Na+,632.2M+K+ 0073 1H-NMR(CDCl 3)(ppm):1.07-1.09(d,3H),1.18-1.20(d,3H),1.47-1.60(m,4H),1 .60-1.88(m,1H),3.74(s,3H),4.03-4.13(m,2H),4.20-4.25(m,3H),4.48-4.49(m,1H),5.9 1(s,1H),6.26(s,1H),6.70-6.94(m,10H)。 0074 IR(cm-1):2968.60,2936.51,2901.59,1691.05,1639.45,1631.34,1503.38,1486. 17,1443.64,1278.76,。

45、1207.20,864.45。 0075 实施例10 ： 2- （3， 4-亚甲二氧基苯基） -4-氯-6-苄氧基-2H-色烯-3-羧酸-4 -亚硝氧基丁酯的制备 0076 参照实施例 92-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 异丙氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸 -4 - 亚硝氧基丁酯的制备方法，由 2- （3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 苄氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸（由上述实施例 6 制得）最终得到黄色粘稠物，收率 41%。 0077 MS:ESI（+）： 577.1M+Na+, 0078 1H-NMR(CDCl 3)(ppm) 。

46、： 1.66-1.79(br,4H),4.16-4.28(m,2H),4.37-4.41(m,2H), 5.02(s,2H),5.91(s,2H),6.20(s,1H),6.68-6.87(m,4H),7.25-7.40(m,6H)。 0079 IR(cm-1):3450.41,2956.67,2896.88,1693.38,1627.81,1571.88,1490.87,144 0.73,1382.87,1315.36,1276.79,1245.93,1190.00,1134.07,1091.63,1033.77,1006.77 ,927.70,860.19。 0080 实施例11 ： 2-。

47、（3， 4-亚甲二氧基苯基） -4-氯-6-(4-甲基苄氧基)-2H-色烯-3-羧酸 -4 - 亚硝氧基丁酯的制备 0081 参照实施例 92-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 异丙氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸 -4 - 亚硝氧基丁酯的制备方法，由 2-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6-(4- 甲基苄氧基 )-2H- 色烯 -3- 羧酸（由上述实施例 4 制得）最终得到黄色固体，收率 83%。Mp.85-87 . 0082 MS（ESI+）： 590.0M+Na+,606.1M+K+ 0083 1H-NMR(CDCl 3)(ppm) ：。

48、 1.66-1.79(br,4H),4.16-4.28(m,2H),4.37-4.41(m,2H), 5.02(s,2H),5.91(s,2H),6.20(s,1H),6.68-6.87(m,4H),7.25-7.40(m,6H)。 0084 IR(cm-1):3074.32,2956.67,2920.03,2896.88,1693.38,1627.81,1571.88,1488. 94,1442.66,1382.87,1315.36,1276.79,1245.93,1191.93,1134.07,1120.56,1091.63,10 33.77,1006.77,985.56,927.70,8。

49、60.19。 0085 实施例 12 ： 2-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6-(4- 甲氧基苄氧基 )-2H- 色烯 -3- 羧酸 -4 - 亚硝氧基丁酯的制备 0086 参照实施例 92-（3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6- 异丙氧基 -2H- 色烯 -3- 羧酸 -4 - 亚硝氧基丁酯的制备方法，由 2- （3， 4- 亚甲二氧基苯基） -4- 氯 -6-(4- 甲氧基苄氧基 )-2H- 色烯 -3- 羧酸（由上述实施例 5 制得）最终得到黄色固体，收率 82%。Mp.77-79 . 0087 MS（ESI+）： 606M+Na+,622M+K+ 说明书 CN 1032719。

摘要
申请专利号：	CN201310182180.5	申请日：	20130515
公开号：	CN103271904B	公开日：	20141112
当前法律状态：		有效性：	有效
法律详情：
IPC分类号：	A61K31/357,C07D407/04,A61P9/00,A61P35/00,A61P3/10,A61P13/12,A61P11/06,A61P5/14	主分类号：	A61K31/357,C07D407/04,A61P9/00,A61P35/00,A61P3/10,A61P13/12,A61P11/06,A61P5/14
申请人：	东南大学
发明人：	蔡进,吉民
地址：	210009 江苏省南京市四牌楼2号
优先权：	CN201310182180A
专利代理机构：	南京苏高专利商标事务所(普通合伙)	代理人：	柏尚春
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内容摘要

本发明公开了一种具有通式（1）结构的一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂（1），其中，R1代表-CH(CH3)2、或R2代表Cl或R3代表H或-(CH2)4ONO2。本发明化合物具有很强的内皮素受体拮抗活性，可用于制备治疗心脑血管、肿瘤、糖尿病、肾病、哮喘以及甲状腺亢进的药物。

权利要求书

1.一种一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂，具有通式(1)的结构：其中，R代表–CH(CH)、R代表Cl或R代表—(CH)ONO。 2.权利要求1所述一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂的制备方法，其特征在于：对苯二酚在浓硫酸催化下与乙酸酐反应生成对苯二酚二乙酸酯，在无水三氯化铝作用下发生Fries重排，生成2，5-二羟基苯乙酮，2，5-二羟基苯乙酮经选择性烷基化生成5-烷氧基-2-羟基苯乙酮，5-烷氧基-2-羟基苯乙酮在碱性条件下与胡椒醛发生缩合反应，缩合反应后的产物在POCl和DMF环境中发生氯甲酰化反应，氯甲酰化反应的产物与4-取代苯酚在NaH的DMF悬浮液中进行反应，该反应后的产物先经过选择性氧化再与一氧化氮供体缩合即得到目标化合物。 3.权利要求1所述一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂及其盐类化合物作为制备治疗心脑血管、肿瘤、糖尿病、肾病、哮喘以及甲状腺亢进药物的应用。

说明书

技术领域

本发明属于医药化工领域，具体涉及一种一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂，还涉及上述一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂的制备方法，最后涉及上述一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂的应用。

背景技术

心脑血管疾病的死亡率居各类疾病之首，其最终死因绝大多数是心肌肥大，心力衰竭（心衰）、脑卒中及致死性心律失常。尤其近年来严重心衰的病死率居高不下，已形成国际医药界的一个难题。这些疾病目前均缺乏有效的治疗药物。

内皮素(endothclin,ET)是由血管内皮细胞、心肌、平滑肌等合成及分泌的一种含有21个氨基酸的活性多肽，具有强大的缩血管和促血管平滑肌细胞增殖作用，是一种内源性损伤因子，在许多心、脑、肺、肾和血管疾病的发病中都具有重要意义。ET有3种形式的异型体，分别称为ET－1，ET－2和E－3，ET经内皮素转换酶（ECEs)作用而激活，激活的ET与其受体结合而发挥作用，其中 ET1既有强烈而持久的血管收缩作用，又具有促进细胞生长和有丝分裂特性，是引起多种疾病的炎性因子。由于内皮素拮抗剂蕴藏的潜在的治疗价值,世界各大制药公司都积极地投入到内皮素拮抗剂的研究与开发中,内皮素拮抗剂的研究现已成为热点。已发现的作用较强的肽类ET拮抗剂有BQ123、BQ160、FR2139317 等,但由于肽类拮抗剂的口服生物利用率低而限制了其在须长期用药的心血管疾病中的应用。许多制药公司致力于有口服活性的非肽类ET拮抗剂的研究。已经上市的内皮素受体拮抗剂有波生坦、替唑生坦、恩拉生坦、西他生坦、阿曲生坦及安贝生坦，在治疗高血压、肺动脉高压、肿瘤、糖尿病并发症、心肌梗死及脑血管痉挛等方面取得很好效果。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂。

本发明还要解决的技术问题是提供一种一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂的制备方法。

本发明最后要解决的技术问题是提供上述内皮素受体拮抗剂及其盐类化合物作为制备治疗心脑血管、肿瘤、糖尿病、肾病、哮喘以及甲状腺亢进药物中的应用。

为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种内皮素受体拮抗剂，具有通式（1）的结构：

其中，R1代表—CH(CH3)2、或 R2代表Cl或R3代表H或—(CH2)4ONO2。

上述一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂的制备方法，对苯二酚在浓硫酸催化下与乙酸酐反应生成对苯二酚二乙酸酯，在无水三氯化铝作用下发生Fries重排，生成2，5-二羟基苯乙酮，2，5-二羟基苯乙酮经选择性烷基化生成5-烷氧基-2- 羟基苯乙酮，5-烷氧基-2-羟基苯乙酮在碱性条件下与胡椒醛发生缩合反应，缩合反应后的产物在POCl3和DMF环境中发生氯甲酰化反应，氯甲酰化反应的产物与4-取代苯酚在NaH的DMF悬浮液中进行反应，该反应后的产物先经过选择性氧化再与一氧化氮供体缩合即得到目标化合物，目标化合物通过柱层析分离纯化或有机溶剂重结晶精制。一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂的合成路线：

上述一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂及其盐类化合物作为制备治疗心脑血管、肿瘤、糖尿病、肾病、哮喘以及甲状腺亢进药物中的应用。

上述一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂或其药学上可接受的盐类化合物可以单独或与至少一种药学上可接受的载体组合成制剂以供给药，如针剂、输液、滴丸、片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液等。

有益效果：相比于现有技术，本发明的化合物具有很强的内皮素受体拮抗活性，可用于制备治疗心脑血管、肿瘤、糖尿病、肾病、哮喘以及甲状腺亢进的药物，且治疗效果显著。

具体实施方式

在本发明中所使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。

其中，在下述实施例中，这些基团的名称为：4-甲基苄氧基；苄氧基；4-氯苄氧基；4-甲氧基苄氧基； [(4-甲氧基)苯氧基]。

熔点采用b形管熔点管测定；红外光谱仪为Nicolet Impact410型，KBr压片；核磁共振仪采用Bruker-AV300型，TMS为内标；元素分析用Carlo Erba1106型元素分析仪测定；质谱用finnigan FTMS-2000型及HP1100LC/MSD型质谱仪测定。

2，5-二羟基苯乙酮的制备：在1升的烧杯中加入110克（1.0mol）的对苯二酚，206克（2.02mol）的乙酸酐和2mL浓硫酸，手工搅拌反应混合物，反应很快进行并放热，继续搅拌十分钟后，将反应混合物转移到2升的盛有200克碎冰的烧杯中，搅拌，待冰完全融化后，抽滤，水洗，烘干，得白色固体粉末170 克，用无水乙醇重结晶得白色晶体对苯二酚二乙酸酯140克，收率72%， Mp.120-122℃；向配有带氯化钙干燥管的回流冷凝管的500mL圆底烧瓶中，加入50克（0.257mol）的对苯二酚二乙酸酯和116克（0.87mol）粉状无水三氯化铝，混匀，在油浴上缓慢加热，使外温在110℃维持一小时，产生大量烟雾，将外温升到160-165℃，保温三小时，撤去油浴，反应物冷至室温，加入350mL的冰盐酸溶液，充分搅拌，使过量的三氯化铝水解，过滤，用冷水洗涤（2×100mL），得粗品35克，收率89%，用乙醇重结晶得绿色针状晶体2，5-二羟基苯乙酮， Mp.198-200℃；

5-异丙氧基-2-羟基苯乙酮的制备：称取15.2克（0.1mol）2，5-二羟基苯乙酮，36.92克（0.3mol）2-溴丙烷，3.7克碘化钾，16.6克（0.12mol）碳酸钾，加入到150mL的磨口锥形瓶中，再加入60mL的丙酮，搅拌下回流24小时，过滤，滤液旋干，残余物过柱（以石油醚：乙酸乙酯=10：1的混合溶剂为洗脱液），得黄色油状物13.6克，收率70%；5-苄氧基-2-羟基苯乙酮的制备：称取1.9克（12.5mmol）2,5-二羟基苯乙酮，3.45克（25mmol）碳酸钾，1.6克（12.5mmol）的苄氯，3.7克碘化钾，加入到150mL的磨口锥形瓶中，再加入60mL的丙酮，慢慢的滴加含有1.6克（12.5mmol）的苄氯的丙酮溶液，加毕，搅拌下回流24 小时，过滤，滤液旋干，残余物过柱（以石油醚：乙酸乙酯=10：1的混合溶剂为洗脱液），得黄色油状物13.6克，收率70%；5-(4-甲基苄氧基)-2-羟基苯乙酮、 5-(4-甲氧基苄氧基)-2-羟基苯乙酮、5-(4-氯苄氧基)-2-羟基苯乙酮的制备方法均可参照5-苄氧基-2-羟基苯乙酮的制备方法，5-取代-2-羟基苯乙酮化合物的合成可参照化合物5-异丙氧基-2-羟基苯乙酮或5-苄氧基-2-羟基苯乙酮的合成方法，结果见如下表1：

表1

2-(3，4-亚甲二氧基苯基)-6-异丙氧基-2，3-二氢-4-色酮的制备：称取4.4g （23mmol）的5-异丙氧基-2-羟基苯乙酮，3.4g（23mmol）的胡椒醛，加入到50mL 的锥形瓶中，再加入10mL甲醇，搅拌下滴加2M的NaOH溶液 45mmol(1.8gNaOH，22mLH2O)，加毕，室温搅拌72h，丙酮稀释，过滤，乙醇重结晶，得黄色针状结晶2.5g，收率33%。Mp.112-114℃；2-(3，4-亚甲二氧基苯基)-6-苄氧基-2，3-二氢-4-色酮的制备：称取2.42g（10mmol）的5-苄氧基-2- 羟基苯乙酮，1.5g（10mmol）的胡椒醛，加入到50mL的锥形瓶中，再加入10mL 甲醇，搅拌下滴加2M的NaOH溶液20mmol(将0.8gNaOH溶于10mLH2O中配成的溶液)，加毕，室温搅拌72h，丙酮稀释，过滤，甲醇重结晶，得黄色粉末 2.0g，收率53%，Mp.132-134℃；同理，2-(3，4-亚甲二氧基苯基)-6-(4-甲基苄氧基)-2，3-二氢-4-色酮、2-(3，4-亚甲二氧基苯基)-6-(4-甲氧基苄氧基)-2，3-二氢 -4-色酮、2-(3，4-亚甲二氧基苯基)-6-(4-氯苄氧基)-2，3-二氢-4-色酮的制备方法均可参照2-(3，4-亚甲二氧基苯基)-6-苄氧基-2，3-二氢-4-色酮的制备方法，结果见如下表2：

表2

实施例1：2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸的制备

第一步，制备2，5-二羟基苯乙酮：

在1升的烧杯中加入110克（1.0mol）的对苯二酚，206克（2.02mol）的乙酸酐和2mL浓硫酸，手工搅拌反应混合物，反应很快进行并放热，继续搅拌十分钟后，将反应混合物转移到2升的盛有200克碎冰的烧杯中，搅拌，待冰完全融化后，抽滤，水洗，烘干，得白色固体粉末170克，用无水乙醇重结晶得白色晶体对苯二酚二乙酸酯140克，收率72%，Mp.120-122℃；向配有带氯化钙干燥管的回流冷凝管的500mL圆底烧瓶中，加入50克（0.257mol）的对苯二酚二乙酸酯和116克（0.87mol）粉状无水三氯化铝，混匀，在油浴上缓慢加热，使外温在110℃维持一小时，产生大量烟雾，将外温升到160-165℃，保温三小时，撤去油浴，反应物冷至室温，加入350mL的冰盐酸溶液，充分搅拌，使过量的三氯化铝水解，过滤，用冷水洗涤（2×100mL），得粗品35克，收率89%，用乙醇重结晶得绿色针状晶体2，5-二羟基苯乙酮，Mp.198-200℃；

第二步，制备5-异丙氧基-2-羟基苯乙酮：

称取15.2克（0.1mol）2，5-二羟基苯乙酮，36.92克（0.3mol）2-溴丙烷， 3.7克碘化钾，16.6克（0.12mol）碳酸钾，加入到150mL的磨口锥形瓶中，再加入60mL的丙酮，搅拌下回流24小时，过滤，滤液旋干，残余物过柱（以石油醚：乙酸乙酯=10：1的混合溶剂为洗脱液），得黄色油状物13.6克，收率70%；

第三步，制备2-(3，4-亚甲二氧基苯基)-6-异丙氧基-2，3-二氢-4-色酮：

称取4.4g（23mmol）的5-异丙氧基-2-羟基苯乙酮，3.4g（23mmol）的胡椒醛，加入到50mL的锥形瓶中，再加入10mL甲醇，搅拌下滴加2M的NaOH溶液45mmol(1.8gNaOH，22mLH2O)，加毕，室温搅拌72h，丙酮稀释，过滤，乙醇重结晶，得黄色针状结晶2.5g,收率33%。Mp.112-114℃；

第四步，制备2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸：

将21g(0.137mol)的POCl3于0℃下，滴加到41.60mL(0.54mol)的DMF中形成混合物，于0℃下搅拌30min，另将18g(0.05mol)的2-(3，4-亚甲二氧基苯基)-6- 异丙氧基-2，3-二氢-4-色酮溶于70mLDMF中，在0℃下滴加到上述混合物中，加完后在室温下搅拌48h，充分反应后，将反应后的混合物倾入到200mL冰水中，搅拌10min.，过滤，干燥，以丙酮-异丙醚重结晶，得黄色结晶性粉末15g，收率80%，Mp.114-115℃；

称取2.2g(0.023mol)的氨基磺酸溶于13mL水中，向其中加入含有 3.5g(0.0094mol)上述产物的甲苯溶液，形成混合溶液，冷却至0℃，将 2.14g(0.0023mol)NaClO2溶于18mL冰水中，于0℃下滴加到上述混合溶液中，搅拌30min.，在搅拌的过程中再依次加入亚硫酸钠溶液（1.2gNaSO3溶于10mL 水中），氢氧化钠溶液（1.6gNaOH溶于35mL水中），添加完成后搅拌10min.，过滤，水洗，干燥，乙醇重结晶，得黄色粉末2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯 -6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸3.4g，收率89%，Mp.173-174℃，MS（TOF MS ES+）： 411.1[M+Na]+

1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.32-1.44(d,6H),4.43-4.51(m,1H),5.92(d,2H),6.09(s,1H), 6.69-6.75(t,2H),6.81-6.86(m,3H),7.18-7.30(t,1H).IR(cm-1):3425.44,2973.67, 1692.82,1668.94,1597.80,1567.61,1501.42,1482.87,1286.25,1252.05。

实施例2：2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-[(4-甲氧基)苯氧基]-6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸的制备

第一步，制备2，5-二羟基苯乙酮：

参照实施例1中的第一步步骤操作；

第二步，制备5-异丙氧基-2-羟基苯乙酮：

参照实施例1中的第二步步骤操作；

第三步，制备2-(3，4-亚甲二氧基苯基)-6-异丙氧基-2，3-二氢-4-色酮：

参照实施例1中的第三步步骤操作；

第四步，制备2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸：

参照实施例1中的第四步步骤操作；

第五步，制备目标产物：

将2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸4g（0.01mol）加入到250mL的锥形瓶中，加入50mL的无水DMF溶解，搅拌下加入1.5g60% 的NaH,室温搅拌30分钟，再加入1.3g（0.01mol）对甲氧基苯酚，于室温下搅拌6小时，将反应混合物倾入300mL冰水中，乙酸乙酯萃取三次（300mL×3），无水硫酸镁干燥，过柱（石油醚：乙酸乙酯=10：1），制得黄色固体粉末，收率 50%，Mp.180--182℃.MS（TOF MS ES+）：499.1[M+Na]+1H-NMR(CDCl3)δ(ppm): 0.99-1.01(d,3H),1.23-1.28(d,3H),3.75s,3H),4.09-4.17(m,1H),5.91(s, 2H),6.34(s,1H),6.62-6.98(m,10H).IR(cm-1):3437.79,2975.24,1664.21,1630.30, 1575.19,1503.79,1486.59,1442.61,1246.23,1234.38,1209.46。

实施例3：2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4--[(4-甲氧基)苯氧基]-6-苄氧基-2H-色烯 -3-羧酸的制备

第一步，制备2，5-二羟基苯乙酮：

参照实施例1中的第一步步骤操作；

第二步，制备5-苄氧基-2-羟基苯乙酮：

称取1.9克（12.5mmol）2,5-二羟基苯乙酮，3.45克（25mmol）碳酸钾，1.6 克（12.5mmol）的苄氯，3.7克碘化钾，加入到150mL的磨口锥形瓶中，再加入60mL的丙酮，慢慢的滴加含有1.6克（12.5mmol）的苄氯的丙酮溶液，加毕，搅拌下回流24小时。过滤，滤液旋干，残余物过柱（以石油醚：乙酸乙酯=10： 1的混合溶剂为洗脱液），得黄色油状物13.6克，收率70%；

第三步，制备2-(3，4-亚甲二氧基苯基)-6-苄氧基-2，3-二氢-4-色酮：

称取2.42g（10mmol）的5-苄氧基-2-羟基苯乙酮，1.5g（10mmol）的胡椒醛，加入到50mL的锥形瓶中，再加入10mL甲醇，搅拌下滴加2M的NaOH溶液20mmol(将0.8gNaOH溶于10mLH2O中配成的溶液)，加毕，室温搅拌72h，丙酮稀释，过滤，甲醇重结晶，得黄色粉末2.0g，收率53%，Mp.132-134℃；

第四步，制备2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-苄氧基-2H-色烯-3-羧酸：

参照实施例1中的第四步操作步骤；

第五步，制备目标产物：

参照实施例2中的第五步操作步骤，得到黄色固体粉末，收率83%，Mp. 174-176℃。MS（ESI-）：523.2[M-H]-1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):3.74(s,3H),4.75(q, 2H),5.89(s,2H),6.29(s,1H),6.67-6.92(m,5H),7.23-7.31(m,br,6H)。IR(cm-1): 3432.31,2947.96,2903.83,1702.47,1691.18,1665.40,1631.12,1573.18,1502.06, 1485.93,1442.81,1239.89,1201.92。

实施例4：2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-(4-甲基苄氧基)-2H-色烯-3-羧酸的制备

参照实施例12-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸的制备方法，得到黄色固体粉末，收率45%，Mp.167-169℃。MS（ESI-）： 499.0[M-H]-1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.35(s,3H),4.98(s,2H),5.89(s,2H),6.25(s, 1H),6.68-6.89(m,5H),7.02-7.36(m,5H),IR(cm-1):3442.70,3433.06,3068.53, 3020.32,2954.74,2918.10,2889.17,1693.38,1668.31,1600.81,1566.09,1485.09, 1442.66,1377.08,1317.29,1259.43,1240.14,1188.07,1039.58。

实施例5：2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-(4-甲氧基苄氧基)-2H-色烯-3-羧酸的制备

参照实施例12-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸的制备方法，得到黄色固体粉末，收率80%，Mp.156-158℃。MS ESI(-）： 465[M-H]-1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):3.82(s,3H),4.95(s,2H),5.91(s,2H),6.26(s, 1H),6.69-6.93(m,6H),7.27-7.35(m,3H),IR(cm-1):3450.41,2999.10,2900.74, 1695.31,1620.09,1571.88,1488.94,1452.30,1380.94,1278.72,1249.79,1184.21, 1031.85。

实施例6：2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-苄氧基-2H-色烯-3-羧酸的制备

参照实施例12-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸的制备方法，得黄色固体粉末，收率57%，Mp.145-148℃。MS（ESI-）：435.0 [M-H]-1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):5.00(s,2H),5.98(s,2H),6.2(s,1H),6.67-6.88(m, 5H),7.24-7.42(m,6H)。IR(cm-1):3082.70,3058.35,2928.61,2897.32,2876.65, 1705.07,1685.02,1621.34,1570.71,1503.06,1483.20,1442.05,1423.01,1379.32。

实施例7：2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-（4-氯苄氧基）-2H-色烯-3-羧酸的制备

参照实施例12-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸的制备方法制得黄色固体粉末，收率67%，Mp.158-160℃。MS（ESI+）：471.2 (M+)1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):2.79-2.86(dd,1H),2.98-3.08(m,1H),5.31-5.36(dd, 1H),5.98(s,2H),6.81(s,1H),6.84-7.41(m,10H)。IR(cm-1):3450.41,3080.11, 2898.81,1676.03,1618.17,1488.94,1440.73,1407.94,1379.01,1342.36,1286.43, 1232.43,1193.85,1126.35,1091.63,1062.70,1033.77,1010.63,929.63,871.76, 815.83。

实施例8：2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸-4’-亚硝氧基丁酯的制备

称取1.5g(3.86mmol)2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-异丙氧基-2H-色烯 -3-羧酸（由上述实施例1制得）和3.75(17.4mol)的1,4-二溴丁烷，加入100mL 的锥形瓶中，边搅拌边滴加含有1mL三乙胺的丙酮溶液（加入的丙酮溶液为 50mL），滴加完成，回流10h，过滤，丙酮洗涤滤饼，将滤液旋干，过柱（以石油醚：乙酸乙酯=20：1的混合溶剂为洗脱液），得黄色粘稠液体3g，收率60%。 MS（TOF MS ES+）：528.1M+Na]+

1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：1.25-1.38（d,6H）,1.65-1.76(m,br,4H),4.26-4.30(m,2H), 4.37-4.41(M,2H),4.6-4.72(M,1H),6.07(s,2H),6.88-6.91(d,1H),7.18-7.58(m,5H)。 IR(cm-1):2972.10,2933.53,2900.74,1685.67,1631.67,1623.95,1571.88,1490.87, 1440.73,1392.51,1361.65,1332.72,1284.50,1215.07,1134.07,1031.85,993.27。

实施例9：2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-[(4-甲氧基)苯氧基]-6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸-4’-亚硝氧基丁酯的制备

参照实施例92-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸 -4’-亚硝氧基丁酯的制备方法，由2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-[(4-甲氧基)苯氧基]-6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸（由上述实施例2制得）最终得到黄色粘稠物，收率80%。

MS（TOF MS ES+）：616.2[M+Na]+,632.2[M+K]+

1H-NMR(CDCl3)δ(ppm):1.07-1.09(d,3H),1.18-1.20(d,3H),1.47-1.60(m,4H), 1.60-1.88(m,1H),3.74(s,3H),4.03-4.13(m,2H),4.20-4.25(m,3H), 4.48-4.49(m,1H),5.91(s,1H),6.26(s,1H),6.70--6.94(m,10H)。

IR(cm-1):2968.60,2936.51,2901.59,1691.05,1639.45,1631.34,1503.38,1486.17, 1443.64,1278.76,1207.20,864.45。

实施例10：2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-苄氧基-2H-色烯-3-羧酸-4’-亚硝氧基丁酯的制备

参照实施例92-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸 -4’-亚硝氧基丁酯的制备方法，由2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-苄氧基-2H- 色烯-3-羧酸（由上述实施例6制得）最终得到黄色粘稠物，收率41%。

MS:ESI（+）：577.1[M+Na]+,

1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：1.66-1.79(br,4H),4.16-4.28(m,2H),4.37-4.41(m,2H), 5.02(s,2H),5.91(s,2H),6.20(s,1H),6.68-6.87(m,4H),7.25-7.40(m,6H)。

IR(cm-1):3450.41,2956.67,2896.88,1693.38,1627.81,1571.88,1490.87,1440.73, 1382.87,1315.36,1276.79,1245.93,1190.00,1134.07,1091.63,1033.77,1006.77, 927.70,860.19。

实施例11：2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-(4-甲基苄氧基)-2H-色烯-3-羧酸--4’- 亚硝氧基丁酯的制备

参照实施例92-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸 -4’-亚硝氧基丁酯的制备方法，由2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-(4-甲基苄氧基)-2H-色烯-3-羧酸（由上述实施例4制得）最终得到黄色固体，收率83%。 Mp.85-87℃.

MS（ESI+）：590.0[M+Na]+,606.1[M+K]+

1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：1.66-1.79(br,4H),4.16-4.28(m,2H),4.37-4.41(m,2H), 5.02(s,2H),5.91(s,2H),6.20(s,1H),6.68-6.87(m,4H),7.25-7.40(m,6H)。

IR(cm-1):3074.32,2956.67,2920.03,2896.88,1693.38,1627.81,1571.88,1488.94, 1442.66,1382.87,1315.36,1276.79,1245.93,1191.93,1134.07,1120.56,1091.63, 1033.77,1006.77,985.56,927.70,860.19。

实施例12：2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-(4-甲氧基苄氧基)-2H-色烯-3-羧酸-4’-亚硝氧基丁酯的制备

参照实施例92-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-异丙氧基-2H-色烯-3-羧酸 -4’-亚硝氧基丁酯的制备方法，由2-（3，4-亚甲二氧基苯基）-4-氯-6-(4-甲氧基苄氧基)-2H-色烯-3-羧酸（由上述实施例5制得）最终得到黄色固体，收率82%。 Mp.77-79℃.

MS（ESI+）：606[M+Na]+,622[M+K]+

1H-NMR(CDCl3)δ(ppm)：1.68-1.76(m,br,4H),3.81(s,3H),4.18-4.20(m,1H), 4.23-4.27(m,1H),4.38-4.41(s,2H),4.94(s,2H),5.91(s,2H),6.20(s,1H), 6.68-6.91(m,5H),7.25-7.34(m,5H)。

IR(cm-1):3450.41,2968.24,2898.81,1716.53,1629.74,1569.95,1512.09,1479.30, 1440.73,1382.87,1282.57,1245.93,1217.00,1182.28。

表3本发明一氧化氮供体型内皮素受体拮抗剂

实施例13：放射受体分析法筛选内皮素受体拮抗剂

采用放射受体分析法，利用125I-ET1与大鼠左心室膜受体的结合，对本发明所述化合物进行筛选，具体操作如下：

材料：125I-ET1：由北京北方生物技术研究所标记，放射比活度为 1750Ci/mmol。Tris-Hcl缓冲液（50mM，PH7.4），自行配制。BSA：购自建成生物技术公司。ET1：购自sigma公司。49#玻璃纤维滤膜：购自上海虹光公司。

动物：雄性SD大鼠，230～250g。

方法：大鼠脱颈椎处死，迅速取心脏，分离左心，加入Tris缓冲液制成10% 匀浆，经3次不同转速离心，提取膜受体蛋白。以测得的cpm值折算配体受体结合量。

筛选结果见表4。结果表明化合物Ⅰ01-Ⅰ12对内皮素受体具有不同程度的拮抗作用。

表4ET受体拮抗剂（10-7M）竞争结合（M±SD）

化合物 B%（n) I01 38.4±10.0(6) I02 31.1±9.5(6) I03 40.9±17.2(6) I04 95.0±25.1(2) I05 89.2±12.4(2) I06 63.8±22.6(2) I07 98.9±25.5(2) I08 60.5±20.2(5) I09 37.2±7.3(6) I10 77.5±17.6(6) I11 100.0±22.5(2) I12 88.45±27.4(2)

B%：表示放射性碘代内皮素与心肌受体的结合百分率；M为平均值，SD为标准偏差。

:实施例14：ET受体拮抗剂对ETAR和ETBR的竞争结合

采用实施例13的125I-ET1竞争受体配基结合试验。在进行对ETAR选择性作用时，加入ETBR激动剂S6C饱和对ETBR的结合。进行ETBR选择性时，加入ETA选择性阻断剂PD156707，与ETAR饱和结合，考察化合物Ⅰ03和Ⅰ09 对ETAR和ETBR的竞争结合情况，结果如表5所示。结果表明化合物Ⅰ03和Ⅰ09 对ETAR和ETBR有双重拮抗作用。

表5ET受体拮抗剂对ETAR和ETBR的竞争结合（M±sd，n=3）

综上，125I-ET1竞争受体配基结合试验结果表明，化合物Ⅰ01-Ⅰ12对内皮素受体具有不同程度的拮抗作用。其中化合物Ⅰ03和Ⅰ09对ETAR和ETBR有双重拮抗作用。