以白蛋白与磷脂为载体的多西他赛纳米制剂及其制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102078301 A (43)申请公布日 2011.06.01 CN 102078301 A *CN102078301A* (21)申请号 200910073294.X (22)申请日 2009.11.30 A61K 9/14(2006.01) A61K 47/42(2006.01) A61K 47/24(2006.01) A61K 31/337(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (71)申请人 孙璐 地址 150100 黑龙江省双城市青岭乡青岭村 9 委 (72)发明人 孙璐 (54) 发明名称 以白蛋白与磷脂为载体的多西他赛纳米制剂 及其。

2、制备方法 (57) 摘要 以白蛋白与磷脂为载体的多西他赛固体纳米 制剂及其制备方法， 它涉及抗肿瘤药物制剂及其 制备。 它解决了多西他赛药物水溶性差， 具有毒副 作用， 特别是高过敏性和溶血性， 用于静脉注射时 会引起严重的过敏反应症状的问题。本发明按重 量百分比由多西他赛为 1 15、 白蛋白为 10 43、 磷脂为 10 43、 维生素 E 为 1 10、 冻干赋形剂为120和酸性缓冲盐为115 组成， 添加溶剂， 采用高压匀质和冷冻干燥工艺制 成。本发明不采用对人体产生过敏反应的辅料或 溶剂， 消除了由吐温 -80 辅料和溶剂引起的过敏 反应， 大大提高了多西他赛固体纳米药物制剂的 安全。

3、性以及患者用药的顺应性。使药物制剂的稳 定性大大提高， 利于药物的贮存和运输。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 2 页 说明书 5 页 CN 102078304 A1/2 页 2 1. 以白蛋白与磷脂为载体的多西他赛纳米制剂， 按重量百分比由多西他赛、 白蛋白、 磷脂、 维生素 E、 冻干赋形剂和酸性缓冲盐组成， 其特征在于按重量百分比多西他赛为 1 15、 白蛋白为 10 43、 磷脂为 10 43、 维生素 E 为 1 10、 冻干赋形剂为 1 20和酸性缓冲盐为 1 15组成， 添加有机溶剂， 采用高压匀质和冷冻干燥的制备工。

4、艺 制备出 100 700 纳米的粉末制剂。 2. 根据权利要求 1 所述的以白蛋白与磷脂为载体的多西他赛纳米制剂， 其特征在于按 重量百分比多西他赛为8、 白蛋白30、 磷脂为30、 维生素E为5、 冻干赋形剂为15 和酸性缓冲盐 12组成， 添加 35ml 的乙醇， 采用高压匀质和冷冻干燥的制备工艺制备出 100 700 纳米的粉末制剂。 3. 根据权利要求 1 所述的以白蛋白与磷脂为载体的多西他赛纳米制剂， 其特征在于所 述的白蛋白采用人血清白蛋白、 牛血清白蛋白或通过生物技术所得到的白蛋白。 4. 根据权利要求 1 所述的以白蛋白与磷脂为载体的多西他赛纳米制剂， 其特征在于所 述的磷脂。

5、采用大豆磷脂、 蛋黄磷脂或合成磷脂。 5. 根据权利要求 1 所述的以白蛋白与磷脂为载体的多西他赛纳米制剂， 其特征在于所 述的冻干赋形剂采用蔗糖、 乳糖、 麦芽糖、 甘露醇或海藻糖。 6. 根据权利要求 1 所述的以白蛋白与磷脂为载体的多西他赛纳米制剂， 其特征在于所 述的酸性缓冲盐采用盐酸、 柠檬酸、 磷酸、 乳酸或醋酸。 7. 根据权利要求 1 所述的以白蛋白与磷脂为载体的多西他赛纳米制剂， 其特征在于所 述的有机溶剂采用乙醇或氯仿。 8. 权利要求 1 所述的以白蛋白与磷脂为载体的多西他赛纳米制剂的制备方法， 其特征 在于该方法的步骤如下 ： 步骤一、 按重量百分比取多西他赛为 1 1。

6、5、 磷脂为 10 43和维生素 E 为 1 10， 加入 10 43ml 的有机溶剂， 超声溶解， 作有机相 ； 步骤二、 按重量百分比取白蛋白为 10 43和酸性缓冲盐为 1 15， 加入 100 1000ml 的注射用水， 配制成水溶液， 溶液的 PH 值为 6.7， 采用 HCl 调节， 步骤三、 将步骤一的有机相加入到步骤二的水溶液中， 在高速剪切下制备成初乳 ； 步骤四、 将步骤三制备成的初乳在高压均质机上进行处理， 先在低压 30 40 兆帕下 处理一次， 然后在高压130150兆帕下处理两次， 将上述处理后的纳米乳与按重量百分比 1 20的水溶液冻干赋形剂混匀， 水溶液的 PH。

7、 值为 6.7 ； 步骤五、 采用旋转蒸发仪去除步骤四混匀液体内的有机溶剂， 将去除有机溶剂的液体 浓缩至 500ml， 用 0.22m 微孔滤膜无菌过滤， 取纳米乳液样品用激光粒度仪进行粒径测 定， 粒径呈正态分布， 粒径为 10nm 100nm， 纳米乳液分装到冻干瓶中 ； 步 骤 六、 将 步 骤 五 分 装 未 封 口 的 冻 干 瓶 放 入 冻 干 箱 内， 冻 干 箱 内 的 温 度 为 -38 -42， 维持 10 12 小时， 然后对冻干箱进行真空处理， 使箱内的真空度小 于 10010-3mbar， 再按 -38 -42保持 45 50 小时， -33 -37保持 20 24。

8、 小 时， -28 -32保持 10 14 小时， -25 -27保持 10 14 小时， -18 -22保 持 5 7 小时， -8 -12保持 5 7 小时， -3 -7保持 3 7 小时， 0保持 4 6 小时， 2 6保持 3 5 小时后封装， 即制得本发明的多西他赛纳米制剂。 9. 根据权利要求 8 所述的以白蛋白与磷脂为载体的多西他赛纳米制剂的制备方法， 其 权 利 要 求 书 CN 102078301 A CN 102078304 A2/2 页 3 特征在于步骤一中按重量百分比取 8的多西他赛、 30的大豆磷脂和 5的维生素 E， 加 入 35ml 的乙醇， 超声使溶解， 作有机。

9、相 ； 步骤二中取上述有机相加入到 800ml 的水溶液中， 该溶液含有包括有机相物质在内占总固体物质 12的酸性缓冲盐和 30的白蛋白， 溶液 的 PH 值为 6.7， 用 HCl 调节， 在高速剪切后制备成初乳 ； 将步骤三制备成的初乳在高压均质 机上进行处理， 先在低压35兆帕下处理一次， 然后在高压140兆帕下处理两次， 将上述处理 后的纳米乳与按重量百分比 15的水溶液冻干赋形剂混匀， 水溶液的 PH 值为 6.7 ； 步骤五 中冻干箱内的温度为 -40， 维持 12 小时， 然后对冻干箱进行真空处理， 使箱内的真空度小 于 10010-3mbar， 再按 -40保持 48 小时， 。

10、-35保持 24 小时， -30保持 12 小时， -25 保持 12 小时， -20保持 6 小时， -10保持 6 小时， -5保持 5 小时， 0保持 5 小时， 4 保持 4 小时后冻干结束封装， 即制得本发明的多西他赛纳米制剂。 权 利 要 求 书 CN 102078301 A CN 102078304 A1/5 页 4 以白蛋白与磷脂为载体的多西他赛纳米制剂及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及抗肿瘤药物及其制备。 具体涉及以白蛋白与磷脂为载体的多西他赛固 体纳米制剂及其制备方法。 背景技术 0002 多西他赛， 又名多烯紫杉醇， 英文名 docetaxel， 其化学名称为 。

11、2aR-(2a， 4， 4， 6， 9， (aR ， S )， 11， 12， 12a ， 12b)-(1， 1- 二甲基乙氧基 ) 羰 基 氨基 - 羰基苯丙酸 12b- 乙酰氧 -12- 苯甲酰氧 -2a， 3， 4， 4a， 5， 6， 9， 10， 11， 12， 12a， 12b- 十二氢 -4， 6， 11- 三羟基 -4a， 8， 13， 13- 四甲基 -5- 氧代 -7， 11- 亚甲基 -1H- 环癸 五烯并 -3， 4 苯并 1， 2-b 氧杂丁环 -9- 基 酯。分子式为 C43H53NO14， 分子量为 807.89。 多西他赛为紫杉醇类抗肿瘤药， 通过干扰细胞有丝分。

12、裂和分裂间期细胞功能所必需的微管 网络而起抗肿瘤作用。多西他赛可与游离的微管蛋白结合， 促进微管蛋白装配成稳定的微 管， 同时抑制其解聚， 导致丧失了正常功能的微管束的产生和微管的固定， 从而抑制细胞的 有丝分裂。多西他赛与微管的结合不改变原丝的数目。这一点与目前临床应用的大多数纺 锤体毒性药物不同。多西他赛是由法国原 Rhone-Poulenc Rorer、 即现 Sanofi-Aventis 公 司开发的一种半合成抗肿瘤药物， 1995 年 4 月在墨西哥首次上市， 目前则已在包括中国和 欧、 美、 日等在内的世界近百个国家或地区获准销售。2003 年 9 月 27 日安万特 ( 中国 )。

13、 投 资有限公司首先进行进口产品注册， 规格为 20mg/ 支。多西他赛注射剂 2004 年列入我国医 保目录乙类品种。 多西他赛目前已在全球各主要国家获得了用于治疗现今世界最为常见的 三种肿瘤即乳腺癌、 非小细胞肺癌和前列腺癌的多种适应症， 并已正在成为这些癌种治疗 的最常用或标准疗法之一。多西他赛还广泛用于治疗胃癌、 头颈部肿瘤、 食管癌、 卵巢癌等 的后期临床研究， 对这些适应症的治疗日后有望能获得欧美批准。目前在日本多西他赛用 于治疗胃癌、 头颈部肿瘤、 食管癌、 卵巢癌和子宫内膜癌已获得批准。恶性肿瘤一直是威胁 人类生命的重大疾病之一。 目前， 在我国每年平均约有150万人患上各种肿。

14、瘤， 每年约有80 万人死于恶性肿瘤。如此众多的肿瘤患者， 迫切需要安全、 有效、 低毒的抗肿瘤药物。因此， 研究开发高效、 低毒的抗肿瘤药物尤为重要。 0003 目前， 国外已有多西他赛注射液上市， 商品名为泰素帝 ； 其具体制剂规格有 20mg/0.5ml 和 80mg/2ml 两种， 常规推荐剂量方案是每 3 周 1 次 1 小时静脉输注 75mg/m2。 国内也有包括江苏恒瑞医药股份有限公司的多西他赛注射液制剂。但是多西他赛水溶性 差。由于多西他赛不溶于水， 略溶于乙醇， 加水稀释后即析出多西他赛沉淀。为制备多西他 赛注射剂， 市售的多西他赛注射液或注射用多西他赛均系以高浓度的吐温-8。

15、0与乙醇11 的比例为溶剂， 外加 ( 包装小盒内再附带 1 支 )13的乙醇制备而成的浓溶液， 按中国药典 的规定市售的注射用多西他赛实际上为溶液型注射剂。吐温 -80 是常用的表面活性剂， 而 吐温 -80 具有严重的毒副作用， 特别是高过敏性和溶血性， 用于静脉内注射， 会引起严重的 过敏反应， 包括休克、 呼吸困难、 低血压、 血管性水肿、 风疹等过敏样反应症状。这些不良反 应在人的临床试验中可以十分严重， 且有死亡的报道。 故临床用药常规实施预处理 ： 从多西 说 明 书 CN 102078301 A CN 102078304 A2/5 页 5 他赛治疗前 1 天开始口服地塞米松 8。

16、mg， 每天 2 次， 连服 3 5 天。即使这样， 一些病人仍 然会过敏， 6.5的病人会产生过敏水肿。5的病人会因为过敏而不得不停止使用。为了 提醒医生和病人认识到该药毒副反应的严重性， 美国的药物产品说明书中对该产品的过敏 休克副反应加有严重警告术语 ； 并且吐温 -80 黏性大， 给临床用药也带来不便。另外， 虽然 吐温 -80 能增加多西他赛的溶解度， 但在溶液状态的多西他赛稳定性差， 有效期短 ； 在包装 小盒内附带 1 支 13的乙醇， 这样既增加了生产成本， 又给患者的使用带来不便。因此， 迫 切需要改变多西他赛的剂型， 消除由吐温 -80 等溶媒引起的过敏反应和降低多西他赛自。

17、身 的毒副作用。国内外学者对此做了多种尝试， 其中包括对多西他赛的衍生物及制剂进行研 究。中国专利 C08F283/06 将聚乙二醇与多西他赛键接起来构成多西他赛的前药， 增加了多 西他赛的水溶性 ； 中国专利 A61K31/337 采用透明质酸、 葡萄糖或甘露醇、 乙醇、 丙二醇、 非 离子表面活性剂等制备了多西他赛的注射剂。 发明内容 0004 本发明为了解决现有多西他赛药物水溶性差的问题。 多西他赛注射液或注射用多 西他赛均系以高浓度的吐温 -80 与乙醇 1 1 的比例为溶剂， 而吐温 -80 具有严重的毒副 作用， 特别是高过敏性和溶血性， 用于静脉内注射， 会引起严重的过敏反应， 。

18、包括休克、 呼吸 困难、 低血压、 血管性水肿、 风疹等过敏样反应症状的问题。本发明提供了一种以白蛋白与 磷脂为载体的多西他赛纳米制剂及其制备方法。解决该问题的具体技术方案如下 ： 0005 本发明的以白蛋白与磷脂为载体的多西他赛纳米制剂， 按重量百分比由多西他 赛、 白蛋白、 磷脂、 维生素 E、 冻干赋形剂和酸性缓冲盐组成。按重量百分比多西他赛为 1 15、 白蛋白为 10 43、 磷脂为 10 43、 维生素 E 为 1 10、 冻干赋形剂为 1 20和酸性缓冲盐为 1 15组成， 添加有机溶剂， 采用高压匀质和冷冻干燥的制备工艺 制备出 100 700 纳米的粉末制剂。 0006 所述。

19、的白蛋白采用人血清白蛋白、 牛血清白蛋白或通过生物技术所得到的白蛋 白。但不限于上述所列。 0007 所述的磷脂采用大豆磷脂、 蛋黄脂或合成磷脂。但不限于上述所列。 0008 所述的冻干赋形剂采用蔗糖、 乳糖、 麦芽糖、 甘露醇或海藻糖。 但不限于上述所列。 0009 所述的酸性缓冲盐采用盐酸、 柠檬酸、 磷酸、 乳酸或醋酸。但不限于上述所列。 0010 所述的有机溶剂采用乙醇或氯仿。但不限于上述所列。 0011 以白蛋白与磷脂为载体的多西他赛纳米制剂的制备方法如下 ： 0012 步骤一、 按重量百分比取多西他赛为 1 15、 磷脂为 10 43和维生素 E 为 1 10， 加入 10 43m。

20、l 的有机溶剂， 超声溶解， 作有机相 ； 0013 步骤二、 按重量百分比取白蛋白为 10 43和酸性缓冲盐为 1 15， 加入 100 1000ml 的注射用水， 配制成水溶液， 溶液的 PH 值为 6.7( 用 HCl 调节 )， 0014 步骤三、 将步骤一的有机相加入到步骤二的水溶液中， 在高速剪切下制备成初 乳 ； 0015 步骤四、 将步骤三制备成的初乳在高压均质机上进行处理， 先在低压3040兆帕 下处理一次， 然后在高压130150兆帕下处理两次， 将上述处理的纳米乳与按重量百分比 1 20的水溶液冻干赋形剂混匀， 水溶液的 PH 值为 6.7 ； 说 明 书 CN 1020。

21、78301 A CN 102078304 A3/5 页 6 0016 步骤五、 采用旋转蒸发仪去除步骤四混匀液体内的有机溶剂， 将去除有机溶剂的 液体浓缩至 500ml， 用 0.22m 微孔滤膜无菌过滤， 取纳米乳液样品用激光粒度仪进行粒径 测定， 粒径呈正态分布， 粒径为 10nm 100nm， 纳米乳液分装到冻干瓶中 ； 0017 步骤六、 将步骤五分装未封口的冻干瓶放入冻干箱内， 冻干箱内的温度 为 -38 -42， 维持 10 12 小时， 然后对冻干箱进行真空处理， 使箱内的真空度小 于 10010-3mbar， 再按 -38 -42保持 45 50 小时， -33 -37保持 2。

22、0 24 小 时， -28 -32保持 10 14 小时， -25 -27保持 10 14 小时， -18 -22保 持 5 7 小时， -8 -12保持 5 7 小时， -3 -7保持 3 7 小时， 0保持 4 6 小时， 2 6保持 3 5 小时后封装， 即制得本发明的多西他赛纳米制剂。 0018 本发明将多西他赛制成纳米粒制剂， 纳米粒是一种新型的载药系统， 它的粒径通 常在几百纳米的范围内， 是一种理想的静脉注射的药物载体。药物可以溶解或包裹于纳米 粒中， 尤其适合于包载脂溶性药物， 能解决水溶性差的药物如多西他赛的溶解性问题。 由于 不使用吐温 -80 等易过敏的辅料和溶剂， 本发。

23、明的产品无辅料或溶剂带来的过敏反应， 故 无须在给药前后进行抗过敏预处理， 显著增加了患者用药的顺应性。这种新剂型已经受到 越来越多的关注。目前国外已上市的纳米制剂有治疗乳腺癌药物紫杉醇 (Abraxane)、 免疫 抑制剂西罗莫司(Rapamune)及止吐药阿瑞吡坦(Emend)。 另外， 布地奈德、 白消安、 胰岛素、 非诺贝特等药物的纳米制剂已进入 I 期临床试验阶段， Thymectacin 和一种细胞因子抑制 剂也已分别进入 II 期、 I/II 期临床试验阶段。 0019 此外， 对于抗癌药物多西他赛来说， 选择纳米粒的另一个重要原因是它的生物相 容性好， 对内皮网状系统、 肿瘤等。

24、部位有生物靶向性， 可被机体内的酯酶生物降解后缓释药 物并能降低药物的毒副作用， 材料降解后易被机体清除等。采用纳米技术制备的纳米粒， 能够高选择性地到达癌细胞并作用于癌细胞内外的小分子或基因物质， 充分显示了其优越 性。纳米颗粒进入血循环后往往被巨噬细胞吞噬， 富集于肝、 脾、 肺、 骨髓、 淋巴结等， 这些 器官和组织是载药纳米粒的天然靶器官。其中分布于肝 (60 90 )、 脾 (2 10 )、 肺 (3 10 )。因此， 人们常利用纳米药物的这个特点来治疗肿瘤。纳米粒缓释抗肿瘤 药物可延长药物在肿瘤内的存留时间， 减慢肿瘤生长 ； 与游离药物相比能延长实验动物的 存活时间。 动物实验研。

25、究表明， 静脉注射载柔红霉素聚氰基丙烯烷酯纳米粒后， 肝脏枯否细 胞吞噬大量的纳米粒， 成为一种有效的储药库， 降解的纳米粒不断地释放出游离的药物至 肝肿瘤组织内， 同时被激活的吞噬细胞也释放细胞毒性因子， 潜在地提高了药物的疗效。 阿 霉素葡聚糖复合物包封制成壳聚纳米粒子经静脉注人荷瘤小鼠后， 不仅延长药物血浆半衰 期， 而且可借助增强的渗透保留效应， 使药物富集到肿瘤组织， 并能缓慢释放药物而延长药 效。此外， 采用阿霉素聚氰基丙烯烷酯纳米粒研究显示， 可使癌细胞的耐药性大为降低， 药 效比游离阿霉素增加 10 倍。一种正在研究中的、 用于治疗艾滋病患者鸟型分枝杆菌感染的 抗微生物药物氯法。

26、齐明。该药由于溶解度低、 毒性和副作用较大， 应用受到了限制。将 其制成纳米制剂后给接种病菌的实验鼠静脉注射使用， 用药 1 周后的结果表明， 与等剂量 的氯法齐明脂质体组比较， 虽然两种制剂在对实验鼠肺部感染的疗效上没有显著差异， 但 纳米制剂组实验鼠肝脏和脾脏的感染程度明显低于氯法齐明脂质体组。同时发现， 给实验 鼠注射氯法齐明纳米制剂后两小时， 药物在肝脏中的浓度是其脂质体制剂的 1.62 倍。组织 分布数据还表明， 纳米粒子的药物更适合靶向于网状内皮质系统。 说 明 书 CN 102078301 A CN 102078304 A4/5 页 7 0020 本发明的以白蛋白与磷脂为载体的多。

27、西他赛纳米制剂及制备方法， 不采用对人体 产生危害的辅料和溶剂， 消除了由吐温 -80 等辅料引起的过敏反应， 大大提高了多西他赛 固体纳米药物制剂的安全性以及患者用药的顺应性 ； 注射用多西他赛纳米粒是以冻干后的 固体状态保存， 临用前加注射用水分散后使用， 因此， 多西他赛的稳定性大大提高， 同时也 有利于药物的贮存和运输 ； 注射用多西他赛纳米制剂的生物相容性好， 对内皮网状系统、 肿 瘤等部位有被动的生物靶向性， 能够高选择性地到达癌细胞并作用于癌细胞内外的小分子 或基因物质， 对于其抗肿瘤作用充分显示了潜在的优势的优点。本发明的方法采用高压匀 质和冷冻干燥技术， 可进行工业化生产。 。

28、具体实施方式 0021 具体实施方式一 ： 本实施方式按重量百分比由多西他赛、 白蛋白、 磷脂、 维生素 E、 冻干赋形剂和酸性缓冲盐组成， 按重量百分比多西他赛为 1 15、 白蛋白为 10 43、 磷脂为1043、 维生素E为110、 冻干赋形剂为120和酸性缓冲盐为115 组成， 添加有机溶剂， 采用高压匀质和冷冻干燥的制备工艺制备出100700纳米的固体粉 末制剂。 0022 具体实施方式二 ： 本实施方式与具体实施方式一的不同点在于按重量百分比多西 他赛为 8、 白蛋白 30、 磷脂为 30、 维生素 E 为 5、 冻干赋形剂为 15和酸性缓冲盐 12组成， 添加 35ml 的乙醇，。

29、 采用高压匀质和冷冻干燥的制备工艺制备出 100 700 纳米 的粉末制剂。 0023 具体实施方式三 ： 本实施方式所述的白蛋白采用人血清白蛋白、 牛血清白蛋白或 通过生物技术所得到的白蛋白。但不限于上述所列。 0024 具体实施方式四 ： 本实施式所述的磷脂采用大豆磷脂、 蛋黄磷脂或合成磷脂。 但不 限于上述所列。 0025 具体实施方式五 ： 本实施方式所述的冻干赋形剂采用蔗糖、 乳糖、 麦芽糖、 甘露醇 或海藻糖。但不限于上述所列。 0026 具体实施方式六 ： 本实施方式以白蛋白与磷脂为载体的多西他赛纳米制剂的制备 方法如下 ： 0027 步骤一、 按重量百分比取多西他赛为 1 15。

30、、 磷脂为 10 43和维生素 E 为 1 10， 加入 10 43ml 的有机溶剂， 超声溶解， 作有机相 ； 0028 步骤二、 按重量百分比取白蛋白为 10 43和酸性缓冲盐为 1 15， 加入 100 1000ml 的注射用水， 配制成水溶液， 溶液的 PH 值为 6.7( 用 HCl 调节 )， 0029 步骤三、 将步骤一的有机相加入到步骤二的水溶液中， 在高速剪切下制备成初 乳 ； 0030 步骤四、 将步骤三制备成的初乳在高压均质机上进行处理， 先在低压3040兆帕 下处理一次， 然后在高压130150兆帕下处理两次， 将上述处理的纳米乳与按重量百分比 1 20的水溶液冻干赋形。

31、剂混匀， 水溶液的 PH 值为 6.7 ； 0031 步骤五、 采用旋转蒸发仪去除步骤四混匀液体内的有机溶剂， 将去除有机溶剂的 液体浓缩至 500ml， 用 0.22m 微孔滤膜无菌过滤， 取纳米乳液样品用激光粒度仪进行粒径 测定， 粒径呈正态分布， 粒径为 10nm 100nm， 纳米乳液分装到冻干瓶中 ； 说 明 书 CN 102078301 A CN 102078304 A5/5 页 8 0032 步骤六、 将步骤五分装未封口的冻干瓶放入冻干箱内， 冻干箱内的温度 为 -38 -42， 维持 10 12 小时， 然后对冻干箱进行真空处理， 使箱内的真空度小 于 10010-3mbar，。

32、 再按 -38 -42保持 45 50 小时， -33 -37保持 20 24 小 时， -28 -32保持 10 14 小时， -25 -27保持 10 14 小时， -18 -22保 持 5 7 小时， -8 -12保持 5 7 小时， -3 -7保持 3 7 小时， 0保持 4 6 小时， 2 6保持 3 5 小时后进行封装， 即制得本发明的多西他赛纳米瓶装制剂。 0033 具体实施方式七 ： 本实施方式与具体实施方式六的不同点在于步骤一中按重量 百分比取 8的多西他赛、 30的大豆磷脂和 5的维生素 E， 加入 35ml 的氯仿， 超声使溶 解， 作有机相 ； 步骤二中取上述有机相加入。

33、到 800ml 的水溶液中， 该溶液含有包括有机相物 质在内的、 占总固体物质 12的酸性缓冲盐和 30的白蛋白， 溶液的 PH 值为 6.7， 用 HCl 调节， 在高速剪切后制备成初乳 ； 将步骤三制备成的初乳在高压均质机上进行处理， 先在 低压 35 兆帕下处理一次， 然后在高压 140 兆帕下处理两次， 将上述处理的纳米乳与按重量 百分比 15的水溶液冻干赋形剂混匀， 水溶液的 PH 值为 6.7 ； 步骤五中冻干箱内的温度 为 -40， 维持 12 小时， 然后对冻干箱进行真空处理， 使箱内的真空度小于 10010-3mbar， 再按 -40保持 48 小时， -35保持 24 小时， -30保持 12 小时， -25保持 12 小时， -20 保持 6 小时， -10保持 6 小时， -5保持 5 小时， 0保持 5 小时， 4保持 4 小时后冻干结 束封装， 即制得本发明的多西他赛纳米制剂。 0034 使用时用 0.9 NaCl 溶液进行复溶， 复溶后粒径呈正态分布， 大小为 100 700nm。 0035 具体实施方式八 ： 本实施方式所述的有机溶剂采用乙醇或氯仿。 说 明 书 CN 102078301 A 。