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1、(10)申请公布号 CN 102824380 A (43)申请公布日 2012.12.19 CN 102824380 A *CN102824380A* (21)申请号 201210345561.6 (22)申请日 2012.09.18 A61K 36/19(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (71)申请人 南京正亮医药科技有限公司 地址 211300 江苏省南京市高淳县经济开发 区古檀大道 3 号科创大楼 607 室 (72)发明人 不公告发明人 (54) 发明名称 莲芝消炎滴丸在制备抑制 HT1080 细胞增殖 药物中的应用 (57) 摘要 本发明公开了莲芝消炎滴丸在。
2、制备抑制 HT1080 细胞增殖药物中的应用， 莲芝消炎滴丸处 方为穿心莲干浸膏、 山芝麻浸膏， 规格为 30 丸 / 袋， 6 袋 / 盒， 口服， 一次 30 丸， 一日 3 次， 能清热 解毒， 凉血消肿， 用于肺胃有热、 火毒内盛引起的 咳嗽气喘、 痄腮、 乳蛾、 喉痹咽痛， 现发现其能抑制 HT1080 细胞增殖。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 3 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 3 页 1/1 页 2 1. 莲芝消炎滴丸在制备抑制 HT1080 细胞增殖药物中的应用。 权 利 要 求 书 CN 102。
3、824380 A 2 1/3 页 3 莲芝消炎滴丸在制备抑制 HT1080 细胞增殖药物中的应用 技术领域 0001 本发明涉及一种中成药的新用途， 尤其涉及莲芝消炎滴丸在制备抑制 HT1080 细 胞增殖药物中的应用。 背景技术 0002 纤维肉瘤表现为深在单发局限性硬固结节， 表面紧张， 光亮发红， 不易破溃， 通常 表面皮肤正常， 可以移动， 但侵犯邻近组织时则固定不能移动， 可浸润至皮下脂肪、 肌肉、 筋 膜等。如病变起源于真皮或后来侵犯到真皮时， 则表面皮肤可发生萎缩、 色素沉着及破溃， 偶尔表现为蕈样肿块， 在局部切除瘢痕附近可出现多发性损害。反复切除后， 仍常见复发。 多次复发后。
4、可出现系统症状。转移灶可见于肺， 偶见于肝， 局部淋巴结转移则很少见。更加 恶性者肿瘤较大， 而且较柔软， 进展更为迅速。肿瘤亦可见于婴儿， 甚至出生时即有。目前 的治疗手段效果都不太好。莲芝消炎滴丸是海南伊顺药业有限公司的独家产品， 目前还没 有其抑制纤维肉瘤 （HT1080） 细胞增殖的文献报道。 发明内容 0003 发明目的 ： 本发明的目的在于提供莲芝消炎滴丸在制备抑制 HT1080 细胞增殖药 物中的应用。 0004 技术方案 ： 莲芝消炎滴丸在制备抑制 HT1080 细胞增殖药物中的应用。 0005 莲芝消炎滴丸处方为穿心莲干浸膏 （以穿心莲总内酯汁） 、 山芝麻浸膏， 规格为 3。
5、0 丸/袋， 6袋/盒， 口服， 一次30丸， 一日3次， 能清热解毒， 凉血消肿， 用于肺胃有热、 火毒内 盛引起的咳嗽气喘、 痄腮、 乳蛾、 喉痹咽痛， 现发现其能抑制 HT1080 细胞增殖。 0006 有益效果 ： 莲芝消炎滴丸抑制 HT1080 细胞增殖， 效果良好。 具体实施方式 0007 莲芝消炎滴丸抑制 HT1080 细胞增殖的实验研究资料 0008 1 实验材料 0009 1.1 实验用细胞株 0010 纤维肉瘤 （HT1080） ， 来自本公司实验室细胞库， DMEM+10% FBS 常规培养。 0011 1.2 实验药物 0012 研究药物 ： 莲芝消炎滴丸， 海南伊顺药。
6、业有限公司， 批号 ： 20110219 0013 药液储液 ： 称取 100mg 莲芝消炎滴丸内容物， 溶于 5ml 无水乙醇中， 0.2m 滤器过 滤， 500l doff 管分装， -20存储， 同时 0.2m 滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。 0014 1.3 实验试剂 0015 DMEM （GIBCO公司Cat.No.12100-061 Lot.No.758137） ； 胎牛血清 （浙江天杭生物科 技有限公司 Lot.No.100419） ； NaHCO3（上海久亿化学试剂有限公司 Cat.No.11810-033Lot. No.1088387） ； Trypsin （AMRESCO。
7、 公司 批号 ： 2010/04） ； EDTA （AMRESCO 公司 批号 ： 2009/10） ； 说 明 书 CN 102824380 A 3 2/3 页 4 Penicillin G Sodium Salt（AMRESCO 公 司 批 号 ： 2010242） ； Streptomycin Sulfate （AMRESCO 公司 批号 ： 2010382） ； 无水乙醇 （南京化学试剂有限公司 批号 ： 080310182） ； MTT(Biosharp 批号 ： 0793);PBS（实验室自配） ； 0016 1.4 实验器材 0017 莱卡倒置显微镜 （德国 Leica 型号 ：。
8、 DM1L） ； 可见 - 紫外光微孔板检测仪 （美国 MD 公司 型号 ： SPECTRA MAX 190） ； CO2 培养箱 （FORMA 型号 ： 3111） ； 超净台 （苏净集团安泰公 司制造 型号 ： SW-CJ-ZFD） ； 纯水仪 （美国 Spring 公司 型号 ： S/N 020579） ； 精密移液器 （法 国吉尔森公司 型号 ： P2） ； 电子天平 （德国赛多利斯有限公司 型号 ： BT323S） ； 全自动高压灭 菌锅 （日本 SANYO 公司 型号 ： MLS-3020） ； 台式电热鼓风干燥箱 （上海精密实验设备公司 型 号 ： DHG9123A） ； 冰箱 。
9、（西门子公司 型号 ： KG18V21TI） ； 液氮罐 （CBS 型号 ： 2001） ； 低速离心机 （上海安亭科学仪器厂 型号 ： KA-1000） ； 0.2m 滤器 （MILLIPORE 型号 ： SLGP033RB） ； 10cm 培 养皿 (NEST 公司 )、 96 孔培养板 （NEST 公司） ； 细胞计数板 ； 离心管、 移液管、 Tips 若干。 0018 2 实验方法 0019 1） HT1080 细胞用 DMEM+10% FBS 于 37、 5% CO2 进行常规培养 （10cm 培养皿） ， 当细胞生长至对数期时， 收集细胞， 弃去培养液， PBS 轻洗 3 遍， 。
10、加入 3ml 0.25% 胰蛋白 酶-0.04%EDTA， 37消化2min后， 向其中加入5ml完全培养基中和反应， 吹打细胞后将其转 入离心管中， 1000rpm 离心 5min， 调整细胞悬液浓度 3104个 /ml。 0020 2） 将细胞种入 96 孔培养板中， 每孔加入细胞悬液 180l， 培养板放入细胞培养箱 中 （37， 5% CO2） 常规培养。 0021 3） 根据细胞生长情况， 一般长至50%-70%， 加入莲芝消炎滴丸溶液， 继续培养24h。 0022 4） 24h 后加入 20l MTT 溶液 （5mg/ml， 即 0.5%MTT） ， 继续培养 4h。 0023 5。
11、） 4h 后扣板法倒去上清， 用吸水纸轻轻拍干， 每孔加入 200l 二甲基亚砜， 置摇 床上低速振荡 10min， 使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪 490nm 处测量各孔的吸光 OD 值。 0024 6） 同时设置本底 （不加细胞， 只加培养液） ， 对照孔 （细胞、 相同浓度的药物溶解介 质、 培养液、 MTT、 二甲基亚砜） ， 每组设定 6 个复孔。 0025 7） 结果以药物对细胞增值的抑制率表示 ： 0026 细胞增值抑制率 （%） =（对照孔 OD 值 - 给药孔 OD 值） / 对照孔 OD 值 100%。实 验重复 3 次。 0027 3 统计处理 0028 采用 Mic。
12、rosoft Excel 2003 软件中的相关分析和 Student t 检验， 数据以 meanS.D. 表示。 0029 4 实验结果 0030 MTT 法实验后统计结果显示， 与对照组比较， 当剂量达到 5mg/ml 时， 对 HT1080 细 胞增殖抑制有差异 （P0.05） ， 剂量在 10mg/ml 时该差异具有显著性 （P0.01） ， 当剂量达到 15-20mg/ml 时有极显著性差异 （P0.001） 。 0031 表 1 莲芝消炎滴丸对 HT1080 细胞增殖抑制影响研究 0032 说 明 书 CN 102824380 A 4 3/3 页 5 0033 注 ： 与对照组比较， *P0.01 ； *P0.001 0034 5 实验结论 0035 莲芝消炎滴丸可以抑制HT1080细胞增殖， 减少HT1080细胞的细胞生长数目， 该作 用呈剂量依赖性。 说 明 书 CN 102824380 A 5 。