技术领域
本发明涉及一种罗布麻提取物及其纯化方法，尤其是一种罗布麻 黄酮含量很高的罗布麻提取物及其纯化方法。
背景技术
罗布麻是夹竹桃科植物。作为一种传统中药材，罗布麻提取物可 以用于治疗高血压、心脑缺血等疾病。罗布麻叶中含有黄酮，有机酸 及鞣质成分。由于黄酮和鞣质结构相近，通常的提取方法无法将二者 分离开。
现代化的分离纯化技术，如二氧化碳超临界萃取技术、高速逆流 色谱技术、工业制备色谱技术、大孔吸附树脂技术以及微波、超声等 辅助设备的开发，使得高纯度有效成分提取物的制备成为可能。
在目前开发的分离方法中，适于大规模工业化制备的生产工艺的 分离方法并不是很多。大孔树脂吸附分离法由于其低成本、无污染、 操作简便、易于工业化等优势在天然植物提取分离中占据重要地位。 但是，大孔吸附树脂具有广谱吸附作用，使它对某一吸附质或者对某 一类吸附质的吸附选择性并不好，这导致提取物的纯度不高。例如， CN1385188A公开了一种罗布麻有效部位的提取分离方法，包含罗布 麻上柱液的制备步骤、由分离柱进行分离的步骤、用洗脱剂对分离柱 进行洗脱的步骤以及对洗脱液进行浓缩的步骤，其中分离柱为大孔吸 附树脂柱，在洗脱步骤首先采用20-39％的乙醇水溶液洗脱，再用40- 70％的乙醇水溶液洗脱。该专利文献声称可以获得总黄酮含量达到 50wt％以上的浸膏。但是该方法并没有给出总黄酮含量的测试方法。 CN1634325A公开了一种罗布麻提取物及其提取方法，声称其提取物 中总黄酮含量35-90％。上述总黄酮含量是通过紫外光谱测定的，该方 法对于罗布麻总黄酮含量的测定专属性不强，误差非常大。本申请的 发明人发现，液相色谱(HPLC)适合于总黄酮含量的测定，测定的数 据较为准确。本申请的发明人也发现，上述两篇专利文献的提取物中 总黄酮含量在50wt％以下(液相色谱测定)。因此，目前尚未制备出来 总黄酮含量很高的罗布麻提取物。
目前，关于中药成分常用的除鞣质方法主要有热处理冷置法、明 胶沉淀法、酸性醇沉法、碱性醇沉法和铅盐沉淀法等，但是，大多方 法的选择性差(廖学品等，中草药提取物中单宁(鞣质)的选择性脱 除，天然产物研究与开发，第16卷第1期，第10-15页，2004年)。 除鞣质方法还包括聚酰胺法，但是这种方法存在不能用于酸性环境、 流速慢和混入低分子杂质等问题。因此，需要寻找一种简单且易于工 业化生产的方法，其可以将黄酮纯化、并将鞣质分离出来。
发明内容
为克服现有技术的缺陷，本申请的发明人进行了深入研究。本发 明的一个目的是提供一种罗布麻提取物，其总黄酮含量高、但鞣质含 量低。
本发明的另一个目的在于提供一种纯化方法，该方法可以显著提 高罗布麻提取物中的总黄酮含量，且可以将罗布麻粗提物中的一部分 鞣质分离出来。
本发明提供一种罗布麻提取物，所述的罗布麻提取物的总黄酮含 量在65wt％以上，鞣质含量低于16wt％；所述的总黄酮含量采用液 相色谱测定。
根据本发明所述的罗布麻提取物，优选地，所述的罗布麻提取物 的总黄酮含量在70～85wt％，鞣质含量为5～15wt％；所述的总黄酮 含量采用液相色谱测定。
本发明还提供一种罗布麻提取物的纯化方法包括如下具体步骤：
(1’)将罗布麻粗提物分散于第一乙醇水溶液中形成吸附液，所 述吸附液中的罗布麻粗提物浓度为5～10mg/ml；其中，所述罗布麻 粗提物的总黄酮含量低于20wt％，鞣质含量在7wt％以上，所述的总 黄酮含量采用液相色谱测定；
(2’)将罗布麻黄酮纯化树脂装入吸附柱；其中，所述的罗布麻 黄酮纯化树脂为酰胺化的聚丙烯酸酯树脂，粒径为0.3～1.0mm、比 表面积为70～150m2/g干树脂和平均孔径为10～30nm；
(3’)将1～2BV的所述吸附液加入步骤(2’)获得的吸附柱 中，以1～2BV/h的吸附速率将所述吸附液通过所述吸附柱，吸附完 毕后，用1～2BV的水洗涤所述吸附柱，再用第二乙醇水溶液对所述 吸附柱进行洗脱，收集解吸液，干燥后得到罗布麻提取物；其中，所 述的BV表示柱体积单位。
根据本发明所述的纯化方法，优选地，所述的第一乙醇水溶液含 有5～20vt％的乙醇；所述吸附柱的长径比为5～20:1；所述的第二乙 醇水溶液含有60～85vt％的乙醇。
根据本发明所述的纯化方法，优选地，所述的第一乙醇水溶液含 有12～15vt％的乙醇；所述吸附柱的长径比为10～20:1；所述的第二 乙醇水溶液含有65～70vt％的乙醇。
根据本发明所述的纯化方法，优选地，所述的罗布麻黄酮纯化树 脂的粒径0.4～0.8mm、比表面积为80～130m2/g干树脂和平均孔径 为15～25mm。
根据本发明所述的纯化方法，优选地，所述的罗布麻黄酮纯化树 脂以正庚烷为致孔剂进行制备得到。
根据本发明所述的纯化方法，优选地，所述的罗布麻黄酮纯化树 脂通过如下方法制备得到：
以丙烯酸酯为单体，二乙烯苯为交联剂，以偶氮二异丁腈 ABIN、偶氮二异庚腈ABVN或过氧化苯甲酰BPO为引发剂，以正 庚烷为致孔剂通过悬浮聚合步骤得到酯基树脂，然后经过胺解和酰胺 化步骤得到罗布麻黄酮纯化树脂；
其中，所述的致孔剂用量为丙烯酸酯和二乙烯苯总量的 101wt％～150wt％。
根据本发明所述的纯化方法，优选地，所述的悬浮聚合步骤为： 将丙烯酸酯、二乙烯苯、引发剂和致孔剂混合均匀形成油相，然后将 该油相加入到分散介质中，调节搅拌速度以使得分散介质中形成的油 珠尺寸控制在0.4～0.8mm之间；保持该搅拌速度，并以0.1～ 0.6℃/min的第一速度升温至65～80℃，保持3～6小时；继续以 0.1～0.6℃/min的第二速度升温至85～90℃，并保持3～6小时以形 成酯基树脂。
根据本发明所述的纯化方法，优选地，所述罗布麻粗提物通过如 下方法制备：
(1’)将粉碎的罗布麻叶用60～78vt％的乙醇水溶液在60～80℃ 下加热回流，得到粗提取液；
(2’)将所述的粗提取液旋蒸，在蒸出乙醇的同时补加水，旋蒸 至粗提取液中乙醇含量为5～20vt％，将所得溶液抽滤，即得吸附溶 液；
(3’)将所述吸附溶液在苯乙烯型树脂上进行吸附分离，吸附速 率为1～2BV/h，然后用75～85vt％的乙醇水溶液洗脱得到解吸液；
(4’)将所述的解吸液在50～70℃下真空干燥得到罗布麻粗提 物。
采用传统方法并不能有效地提高罗布麻提取物中的总黄酮含量。 本发明的纯化方法通过使用酰胺化的聚丙烯酸酯树脂、并控制吸附条 件，可以有效提高罗布麻提取物中的总黄酮含量、且有效去除鞣质。
附图说明
图1为制备例1的酯基树脂和酰胺基树脂的红外光谱图。
图2为槲皮素和山奈酚标准品的HPLC谱图。
图3为实施例1的罗布麻粗提物水解后的HPLC谱图。
图4为实施例1的罗布麻提取物水解的HPLC谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的保护 范围并不限于此。
本发明中，“％”表示重量百分比，除非特别声明或标注。
在本发明中，“吸附柱”、“树脂吸附柱”、“树脂柱”具有相同的含 义，均表示用于吸附分离的柱子。
在本发明中，所述的BV表示柱体积单位。
<罗布麻提取物>
本发明的罗布麻提取物的总黄酮含量在65wt％以上，优选为 70～85wt％，更优选为80～85wt％；鞣质含量低于16wt％，优选为 5～15wt％，更优选为10～15wt％。
本发明的总黄酮含量采用高效液相色谱(HPLC)测定。具体测 试条件如下：
a.对照品溶液的制备
精密称取槲皮素对照品5.4mg，山奈酚对照品3.7mg置于同一 50ml量瓶中，加80％甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得混合对照 品储备液(槲皮素浓度为108mg·L-1，山奈酚浓度为74mg·L-1)。
b.样品溶液制备
取适量罗布麻粗提取液，将体积比为20:3的罗布麻粗提取液与 浓盐酸加入锥形瓶中，于恒温水浴锅中90℃水浴中加热回流2h，取 出，冷却后，转移至容量瓶中，用70％乙醇定容至刻度，摇匀，过 0.45μm微孔滤膜，用HPLC法测得其总黄酮含量。
c.液相色谱(HPLC)条件
采用高效液相色谱仪(Aglient-1260美国安捷伦科技有限公司生 产)进行液相色谱操作。使用Aglient-1260紫外检测器和反相 AgligentC18(15μm，150mm×4.6mmI.D)色谱柱。流动相：甲醇- 0.4％磷酸溶液(体积比为50:50)，检测波长为360nm，柱温25℃，流 速为1.0ml·min-1，进样量10μl。
在上述条件下，槲皮素与山奈酚能与其他成分达到较好的分离， 且理论塔板数均不低于3000。
槲皮素与山奈酚标准品、罗布麻粗提物水解后的、罗布麻提取物 水解后的HPLC谱图参见图2-4。
d.罗布麻叶的总黄酮含量的计算
罗布麻叶中的黄酮苷水解后的绝大部分成为槲皮素和山奈酚。根 据HPLC法测得的槲皮素和山奈酚峰面积计算槲皮素和山奈酚的含 量。将6-O-乙酰基异槲皮苷的分子量(505.4)和6-O-乙酰基黄芪苷 的分子量(490.4)相加之和除以2，得到平均分子量为497.9的黄酮 醇乙酸酯苷作为总的罗布麻叶黄酮醇苷的代表。根据苷元槲皮素的分 子量(302.23)和山奈酚的分子量(286.23)计算出黄酮醇乙酸酯苷 对槲皮素和山奈酚的转换因子分别为1.65和1.74，再根据下式计算 罗布麻叶中总黄酮醇苷的含量。(光琴、周亚球，HPLC测定罗布麻 叶中总黄酮的含量，中国实验方剂学杂志，第17卷第6期，第103- 106页，2011年)
罗布麻叶总黄酮醇苷含量＝槲皮素含量×1.65+山奈酚含量×1.74
e.总黄酮化合物的纯度的计算
M烘干：溶液烘干后质量(mg)；
Me：溶液中总黄酮质量(mg)。
本发明的鞣质含量采用分光光度计测定(樊珍珍等，正交试验优 选罗布麻叶中总鞣质提取工艺，中国实验方剂学杂志，第19期第7 期，第13-16页，2013年)，具体测试条件如下：
a.磷钼钨酸试剂的配制
取钨酸钠100g，钼酸钠25g，加水700ml使其溶解，加盐酸 100ml，磷酸50ml，加热回流10h，放置冷却，再加硫酸锂150g、水 50ml和溴0.2ml，煮沸除去残留的溴(约15min)。冷却，加水稀释 至1000ml后滤过即得。本液不得显绿色；如放置后变为绿色，可加 溴0.2ml，煮沸除去多余的溴即可。
b.对照品溶液的制备
精密称取没食子酸对照品25mg，置于50ml棕色容量瓶中，加水 溶解，定容至刻度，精密量取5ml，置于25ml棕色容量瓶中加水至 刻度，摇匀，即得。
c.标准曲线的测定
精密量取对照品溶液0.25、0.5、1、1.5、2、2.5ml，分别置于 25ml棕色容量瓶中，分别加磷钼钨酸试液1ml，依次精密加20wt％ 碳酸钠溶液12ml，加水稀释至刻度，摇匀，放置30min:，以水为空 白，于760nm处测定吸光度(A)，以A为纵坐标，质量浓度为横坐 标，测得对照品的回归线方程，即为标准曲线。
d.总酚含量
精密量取供试品溶液0.2ml，置于25ml棕色容量瓶中，按方法 a～c测定吸光度，利用标准曲线计算其质量浓度。
e.不被吸附的多酚含量
精密量取供试品溶液25ml，加入至已有干酪素0.6g的100ml具 塞锥形瓶中，密塞，置于30℃水浴中保温1h，时时振摇，取出，放 冷，摇匀，过滤弃掉初滤液，取续滤液0.2ml置25ml棕色量瓶中， 按方法a～c测定吸光度，利用标准曲线计算其质量浓度。
f.鞣质的计算方法
通过测定对照品的吸光度，得出标准曲线。再分别测定干酪素吸 附前后样品的吸光度，将测定的吸光度A代入标准曲线中得出该溶 液中的酚类化合物的浓度C。
鞣质含量＝总酚量－不被吸附多酚含量
<纯化方法>
在本发明中，罗布麻粗提物与罗布麻提取物具有不同的含义，根 据总黄酮含量的不同而区别。在本发明中，罗布麻粗提物的总黄酮含 量低于20wt％，鞣质含量在7wt％以上；罗布麻提取物的总黄酮含量 在65wt％以上，鞣质含量低于16wt％。本发明的总黄酮含量采用液 相色谱测定，以保证测试数据的准确性。
在本发明中，将罗布麻提取物的纯化方法包括吸附液制备步骤 (1’)；装柱步骤(2’)；吸附分离步骤(3’)。在本发明中，步骤 (1’)、(2’)的顺序并没有特别限制，可以按照步骤(1’)和(2’) 的顺序进行，也可以按照步骤(2’)和(1’)的顺序进行。
本发明的步骤(1’)为：将罗布麻粗提物分散于第一乙醇水溶液 中形成吸附液，所述吸附液中的罗布麻粗提物浓度为5～10mg/ml。
在本发明的步骤(1’)中，所述的第一乙醇水溶液含有5～ 20vt％、优选为8～18vt％、更优选为10～15vt％的乙醇。第一乙醇水 溶液用于将罗布麻粗提物分散，并溶解其中的黄酮组分。作为优选， 本发明吸附液中的罗布麻粗提物浓度可以为6～8mg/ml。
本发明的步骤(2’)为：将上述罗布麻黄酮纯化树脂装入吸附 柱。所述吸附柱的长径比(柱长/柱直径)为5～20:1，优选为10～ 15:1。这样可以保证吸附分离效果，提高提取物中的黄酮含量。
本发明的步骤(2’)中，所述的罗布麻黄酮纯化树脂为酰胺化的 聚丙烯酸酯树脂。本发明的纯化树脂的形状可以为球形。粒径为 0.3～1.0mm，优选为0.4～0.8mm；比表面积为70～150m2/g干树 脂，优选为80～130m2/g干树脂；含水量为60～70％，优选为62～ 65％；平均孔径为10～30nm，优选为15～25mm。采用上述吸附分 离树脂，可以大幅度提高提取物中的总黄酮含量。
本发明的步骤(3’)为：将1～2BV、优选为1.5～2BV的所述 吸附液加入步骤(2’)获得的吸附柱中，以1～2BV/h、优选为1～ 1.5BV/h的吸附速率将所述吸附液通过所述吸附柱，吸附完毕后，用 1～2BV、优选为1～1.5BV/h的水洗涤所述吸附柱，再用第二乙醇水 溶液对所述吸附柱进行洗脱，收集解吸液，干燥后得到罗布麻提取 物。通过控制吸附速率，可以进一步提高罗布麻提取物中总黄酮含 量，同时避免其损失。将上述步骤获得的流出液进行检测，得到几乎 不含黄酮的鞣质样品，这进一步证明总黄酮的损失很少，且鞣质得到 有效去除。
在本发明的步骤(3’)中，所述的第二乙醇水溶液含有60～ 85vt％、优选为70～80vt％的乙醇。根据本发明的一个具体实施方 式，将1.5～2BV的所述吸附液加入步骤(2’)获得的吸附柱中，以 1～1.5BV/h的吸附速率将所述吸附液通过所述吸附柱，吸附完毕 后，用1～1.5BV的水洗涤所述吸附柱，再用第二乙醇水溶液对所述 吸附柱进行洗脱，收集解吸液，干燥后得到罗布麻提取物。
在本发明中，所述的罗布麻黄酮纯化树脂优选为以正庚烷为致孔 剂进行制备得到的树脂。根据本发明的一个具体实施方式，所述的罗 布麻黄酮纯化树脂通过如下方法制备得到：
以丙烯酸酯为单体，二乙烯苯为交联剂，以偶氮二异丁腈 ABIN、偶氮二异庚腈ABVN或过氧化苯甲酰BPO为引发剂，以正 庚烷为致孔剂通过悬浮聚合步骤得到酯基树脂，然后经过胺解和酰胺 化步骤得到罗布麻黄酮纯化树脂；其中，所述的致孔剂用量为丙烯酸 酯和二乙烯苯总量的101wt％～150wt％。本申请的发明人发现，将致 孔剂的用量控制在合适的范围，例如101wt％～150wt％，能保证获得 黄酮纯度更高的罗布麻提取物。
在本发明中，所述的悬浮聚合步骤可以为：将丙烯酸酯、二乙烯 苯、引发剂和致孔剂混合均匀形成油相，然后将该油相加入到分散介 质中，调节搅拌速度以使得分散介质中形成的油珠尺寸控制在0.4～ 0.8mm之间；保持该搅拌速度，并以0.1～0.6℃/min的第一速度升温 至65～80℃，保持3～6小时；继续以0.1～0.6℃/min的第二速度升 温至85～90℃，并保持3～6小时以形成酯基树脂。
在本发明的悬浮聚合步骤中，所述的丙烯酸酯可以选自丙烯酸甲 酯、丙烯酸乙酯、丙烯酸丙酯、丙烯酸丁酯的一种或多种；优选为丙 烯酸甲酯或丙烯酸乙酯；更优选为丙烯酸甲酯。本申请的发明人发 现，甲基丙烯酸甲酯等疏水性大的单体，由于胺解困难、且树脂疏水 性较强，并不适合于本发明。在本发明中，所述的二乙烯苯剂用量为 丙烯酸酯和二乙烯苯总量的15wt％～45wt％，优选为20wt％～ 40wt％，更优选为20wt％～30wt％。在本发明中，所述的引发剂可以 为偶氮二异丁腈ABIN、偶氮二异庚腈ABVN或过氧化苯甲酰 BPO；优选为偶氮二异丁腈ABIN。在本发明中，所述的引发剂用量 可以为丙烯酸酯和二乙烯苯总量的1.1wt％～2.0wt％，优选为 1.3wt％～1.5wt％。在本发明中，所述的分散介质可以选自浓度为1.0- 1.5wt％的聚乙烯醇水溶液或浓度为1.0-1.5wt％的明胶水溶液；优选为 浓度为1.0-1.5wt％的聚乙烯醇水溶液。
在本发明的悬浮聚合步骤中，所述的油珠尺寸可以控制在0.5～ 0.7mm之间，更优选为0.55～0.65mm之间；所述的第一速度可以为 0.2～0.5℃/min，更优选为0.4～0.5℃/min；所述的第二速度可以为 0.2～0.5℃/min，更优选为0.4～0.5℃/min。本申请的发明人发现，采 用上述工艺条件获得的纯化树脂，更有利于获得黄酮纯度更高的罗布 麻提取物。
在本发明中，胺解步骤为将酯基树脂烘干，然后采用溶胀试剂进 行溶胀5～24小时，然后与过量的胺解试剂在110～140℃下反应5～ 15小时，再用蒸馏水将溶胀后的酯基树脂洗涤至中性，得到胺基树 脂。在本发明中，酰胺化步骤为将胺基树脂与过量的醋酸酐在80～ 90℃下反应5～15小时，得到罗布麻黄酮纯化树脂。
在本发明中，所述罗布麻粗提物通过如下方法制备：
(1’)将粉碎的罗布麻叶用60～78vt％的乙醇水溶液在60～80℃ 下加热回流，得到粗提取液；
(2’)将所述的粗提取液旋蒸，在蒸出乙醇的同时补加水，旋蒸 至粗提取液中乙醇含量为5～20vt％，将所得溶液抽滤，即得吸附溶 液；
(3’)将所述吸附溶液在苯乙烯型树脂上进行吸附分离，吸附速 率为1～2BV/h，然后用75～85vt％的乙醇水溶液洗脱得到解吸液；
(4’)将所述的解吸液在50～70℃下真空干燥得到罗布麻粗提 物。
在本发明的步骤(1’)中，粉碎的罗布麻叶的粒径可以为小于等 于50目，更优选为小于等于40目。乙醇水溶液中的乙醇浓度优选为 65～75vt％，更优选为68～70vt％；加热回流的温度优选为65～75 ℃，更优选为68～70℃。步骤(2’)中，旋蒸至粗提取液中乙醇含量 优选为10～15vt％。步骤(3’)中，吸附速率优选为1～1.5BV/h；乙 醇水溶液中的乙醇浓度优选为65～75vt％，更优选为68～70vt％；苯 乙烯型树脂的实例包括但不限于HPD-100、HPD-300型大孔吸附树 脂。HPD-100型大孔吸附树脂是苯乙烯型非极性共聚体，适用于皂甙 类、黄酮类、萜类等天然产物及植物的提取分离。步骤(4’)中，真 空干燥的温度优选为60～65℃。
下面将详细描述本发明实施例中所使用的测试方法：
<测试方法说明>
1、树脂的含水率测定
准确称取一定量树脂干球置于称量瓶中，置于110℃烘箱中烘干 4h，取出后置于干燥器中冷却，冷却后称重。用以下公式计算树脂的 含水率:
x＝(w2-w3)/(w2-w1)×100％
式中：x为含水率，w1为称量瓶的重量，w2为称量瓶和试样重 量，w3为称量瓶和干燥后试样的重量。
2、树脂的红外光谱测定
将树脂样品在110℃下烘干、研碎，取2～3mg研碎的树脂样品 与200～300mg干燥的KBr粉末在玛瑙研钵中混匀，充分研细至颗粒 直径小于2μm，用不锈钢铲取70～90mg放入压片模具内，在压片机 上用5～10×107Pa压力压成透明薄片，然后在傅里叶变换红外光谱仪 (IRPrestige-21/FTIR-8400S，日本岛津公司生产)上测定。
3、树脂的比表面积及孔径测定
将树脂样品在80℃下烘干至恒重，置于干燥器中备用。准确称 取0.3g树脂样品用SSA-4200孔径及比表面积分析仪(北京彼奥德电 子技术有限公司)进行比表面积和孔径分析。
制备例1
将聚乙烯醇溶解于水中配成质量百分数为1％的聚乙烯醇水溶 液。将240g聚乙烯醇水溶液加入500ml三口瓶中，水浴加热至40 ℃；以32g丙烯酸甲酯为单体、8g二乙烯苯为交联剂，以42g正庚烷 作为致孔剂、以0.6g偶氮二异丁腈为引发剂，将上述物质混合均匀 后加入三口瓶中，开动搅拌，调节油珠尺寸在0.5～0.7mm之间，经 悬浮聚合，以0.5℃/min的升温速度缓慢升温至67℃反应4小时，再 继续以0.5℃/min的升温速度缓慢升温至85℃反应4小时，停止反应 反应产物。将反应产物冷却，再用60℃的热水洗涤，然后依次用蒸 馏水、无水乙醇、丙酮洗涤和抽滤，再用石油醚作为溶剂抽提8小 时，得到酯基树脂。
将50g上述酯基树脂加入500ml三口瓶中，以300ml的N,N-二 甲基甲酰胺充分溶胀，加入100g二乙烯三胺，搅拌均匀后，升温至 130℃反应10小时，反应完成后，经过洗涤处理后得到胺基树脂。
将50g上述胺基树脂加入500ml三口瓶中，再加入200ml醋酸 酐，在80℃反应10小时，经过洗涤处理后得到酰胺基树脂。
酰胺基树脂的外观特征和结构参数为：树脂为球形，粒径 0.4mm，比表面积为80m2/g干树脂，含水量为60％，平均孔径为 25nm。该制备例中，所得酯基树脂和酰胺基树脂的红外光谱图参见 图1。其中，1为酯基树脂的红外光谱图，2为酰胺基树脂的红外光 谱图。酯基树脂中的酯羰基C＝O的伸缩振动峰在1735.93cm-1附近， 经过酰胺化后的树脂在此处(1734.01cm-1)的吸收明显减弱，而且出 现了吸收更强的峰(1653.00cm-1)，为酰胺基上羰基C＝O的伸缩振动 吸收峰。
实施例1
1.罗布麻粗提物的制备
将罗布麻叶用粉碎机粉碎，过40目筛，称取30g粉碎的罗布 麻，用900ml的70vt％乙醇水溶液分三次回流提取，70℃加热回流， 每次2小时，三次所得滤液合并得到粗提取液。
将粗提取液用旋转蒸发仪进行旋蒸，在蒸出乙醇的同时补加水， 旋蒸至溶液中乙醇含量为5-20vt％。将得到的溶液进行抽滤，即得吸 附溶液。
将商品化树脂HPD-100型大孔吸附树脂装柱(长径比为6:1)后 加入上柱液，将上柱液以1BV/h的吸附速率通过树脂柱，吸附完毕 用1BV水洗，再加入2BV的80vt％的乙醇水溶液，将吸附在树脂上 的物质洗脱下来，收集解吸液。65℃真空干燥得到罗布麻粗提物(固 体粉末)，经测定其中黄酮含量为14.5wt％，鞣质含量为9.7wt％。水 解后的HPLC谱图参见图3(水解条件参见前文)。
2.罗布麻提取物的制备
将上述罗布麻粗提物溶解在15vt％乙醇水溶液中，制得上柱 液，上柱液浓度为10mg/ml。
将酰胺基树脂装入吸附柱中，吸附柱的长径比为20:1。
在室温下，将2BV的上柱液加入吸附柱，以1.0BV/h的流速通 过吸附柱，其中的黄酮化合物被吸附在吸附柱上，而同时含有部分鞣 质的流出液从吸附柱上流出。经检测，流出液中得到几乎不含黄酮的 鞣质样品。
以70vt％乙醇溶液洗脱吸附柱，树脂得以再生，同时将洗脱液 (解吸液)回收，真空干燥后得到罗布麻提取物。水解后的HPLC谱 图参见图4(水解条件参见前文)。总黄酮含量与鞣质含量参见表1。
对比例1～2
分别作为对比应用例1和2，CN1385188A的实施例2和 CN1634325A的实施例2的方法获得罗布麻提取物，采用本发明的测 试方法测定总黄酮含量。
表1
本发明并不限于上述实施方式，在不背离本发明的实质内容的情 况下，本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发 明的范围。