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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201811069714.2 (22)申请日 2018.09.13 (71)申请人 淮安亿泰生物科技有限公司 地址 223001 江苏省淮安市清江浦区韩侯 大道198号201室 (72)发明人 焦立英 吕石翠 王兆丽 (51)Int.Cl. A61K 31/439(2006.01) A61K 33/24(2019.01) A61P 11/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 一种生物碱用于逆转肺癌顺铂耐药性的用 途 (57)摘要 本发明。
2、公开了一种生物碱用于逆转肺癌顺 铂耐药性的用途。 顺铂(DDP)是肺癌术后的一线 化疗药物， 天然性与获得性耐药限制了以顺铂为 基础的联合化疗疗效。 因此， 有必要开发逆转肺 癌顺铂耐药性的药物。 本发明发现， 化合物TA-1、 TA-2、 TB-1、 TB-2、 TB-3、 TC-1、 TD-1、 TE-1、 TE-2可 以有效逆转肺癌细胞对顺铂的耐药性， 其中TC- 1、 TD-1不仅仅能逆转耐药性， 还能够增强肺癌细 胞对顺铂的敏感性。 化合物TB-4不具备这种作 用。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 109172571 A 2019.01.11 CN 109172571 A。
3、 1.如下结构的生物碱在制备逆转肺癌患者顺铂耐药性的药物中的应用： 其中， R为 2.一种逆转肺癌患者顺铂耐药性的药物制剂， 其特征在于： 以权利要求1所述的生物碱 为活性成分， 还含有药学上可以接受的辅料。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 109172571 A 2 一种生物碱用于逆转肺癌顺铂耐药性的用途 技术领域 0001 本发明属于医药领域， 涉及一种生物碱用于逆转肺癌顺铂耐药性的用途。 背景技术 0002 肺癌是呼吸系统最常见的恶性肿瘤， 其发病率及死亡率均居恶性肿瘤之首， 且具 有逐年上升趋势。 从临床角度出发， 结合肿瘤细胞的组织学及生物学特征， 一般将肺癌分为 两类： 。
4、小细胞肺癌(small cell lung cancer， SCLC)及非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer， NSCLC)， 其中约85的肺癌为NSCLC。 NSCLC易出现区域淋巴结转移及血源性 散播， 患者预后较差， 5年生存率不足15。 0003 顺铂(DDP)是肺癌术后的一线化疗药物， 天然性与获得性耐药限制了以顺铂为基 础的联合化疗疗效。 因此， 有必要开发逆转肺癌顺铂耐药性的药物。 发明内容 0004 本发明旨在克服现有技术不足， 提供一种生物碱用于逆转肺癌顺铂耐药性的用 途。 0005 本发明上述目的通过如下技术方案实现： 0006 如下结构的生物。
5、碱在制备逆转肺癌患者顺铂耐药性的药物中的应用： 0007其中， R为-CH3或-CH2CH2CH3。 0008 一种逆转肺癌患者顺铂耐药性的药物制剂， 以上述生物碱为活性成分， 还含有药 学上可以接受的辅料。 0009 如下结构的生物碱在制备逆转肺癌患者顺铂耐药性的药物中的应用： 0010其中， R为 0011 一种逆转肺癌患者顺铂耐药性的药物制剂， 以上述生物碱为活性成分， 还含有药 学上可以接受的辅料。 0012 如下结构的生物碱在制备逆转肺癌患者顺铂耐药性的药物中的应用： 0013其中， R为 0014 一种逆转肺癌患者顺铂耐药性的药物制剂， 以上述生物碱为活性成分， 还含有药 学上可以。
6、接受的辅料。 说 明 书 1/4 页 3 CN 109172571 A 3 0015 如下结构的生物碱在制备逆转肺癌患者顺铂耐药性的药物中的应用： 0016其中， R为 0017 一种逆转肺癌患者顺铂耐药性的药物制剂， 以上述生物碱为活性成分， 还含有药 学上可以接受的辅料。 0018 如下结构的生物碱在制备逆转肺癌患者顺铂耐药性的药物中的应用： 0019其中， R为 0020 一种逆转肺癌患者顺铂耐药性的药物制剂， 以上述生物碱为活性成分， 还含有药 学上可以接受的辅料。 0021 有益效果： 0022 本发明发现， 化合物TA-1、 TA-2、 TB-1、 TB-2、 TB-3、 TC-1。
7、、 TD-1、 TE-1、 TE-2可以有效 逆转肺癌细胞对顺铂的耐药性， 其中TC-1、 TD-1不仅仅能逆转耐药性， 还能够增强肺癌细胞 对顺铂的敏感性。 化合物TB-4不具备这种作用。 附图说明 0023 图1为顺铂对各组细胞半数抑制浓度IC50值。 具体实施方式 0024 下面结合附图和实施例具体介绍本发明实质性内容， 但不能以此限定本发明的保 护范围。 0025 一、 实验材料 0026 研究测试的生物碱按常规方法和文献方法制备， 根据化学结构分为五大类， 具体 化学结构和编号如下表所示。 说 明 书 2/4 页 4 CN 109172571 A 4 0027 0028 肺癌细胞株H。
8、460购自ATCC， DMEM培养基、 胎牛血清购自GIBCO公司。 0029 二、 实验方法 0030 1、 细胞培养 0031 人肺癌细胞株H460常规复苏后， 用含10FBS、 50U/ml链霉素、 50U/ml青霉素及 4mmol/L L-谷氨酰胺的DMEM培养基， 在37、 5CO2条件下培养， 每23d换液。 0032 2、 构建顺铂耐药株H460/DDP 0033 用顺铂持续接触浓度递增诱导法建立的人肺癌顺铂耐药细胞株H460/DDP。 0034 具体方法如下： 用顺铂浓度为0.1 g/ml的DMEM培养对数生长期的H460细胞， 4周后 将细胞消化传代并用正常全培培养， 待细胞。
9、贴壁后， 将顺铂浓度提高至0.2 g/ml， 继续培养 说 明 书 3/4 页 5 CN 109172571 A 5 4周并消化传代； 再依次将顺铂浓度提高至0.5、 1.0、 2.0 g/ml， 连续培养5个月， 获得肺癌顺 铂耐药株H460/DDP。 0035 3、 分组及给药 0036 给药组： 取对数生长期的H460/DDP细胞， 以1000个/孔接种于96孔板中， 37、 5 CO2培养箱中培养。 待细胞贴壁后， 分别加入含有5 M TA-1、 TA-2、 TB-1、 TB-2、 TB-3、 TB-4、 TC-1、 TD-1、 TE-1或TE-2(DMSO为溶媒)的完全培养基培养； 。
10、0037 H460/DDP组： H460/DDP细胞， 仅加入等量溶媒DMSO， 不加药， 其他同给药组； 0038 H460组： H460细胞， 仅加入等量溶媒DMSO， 不加药， 其他同给药组。 0039 4、 各组细胞对顺铂敏感性的测定 0040 各组细胞培养48h后， 弃去旧培养基， 加入梯度浓度的顺铂， 每个浓度设置3个复 孔， 37、 5CO2培养箱中培养48h后， 弃旧培养基， 加入含10CCK-8的新鲜培养基， 37孵 育3h， 测450nm处光密度值， 计算半数抑制浓度IC50。 0041 5、 数据处理 0042 采用SPSS 17.0进行统计学分析， 数据采用均值标准差表。
11、示， 采用Student s t 检验进行两组间比较， P0.05为差异有统计学意义。 0043 三、 实验结果 0044 顺铂对各组细胞半数抑制浓度IC50值如表1和图1所示。 与H460组相比， H460/DDP 组肺癌细胞的IC50值显著升高(P0.05)， 说明H460/DDP肺癌细胞对顺铂产生了明显的耐 药性； 与H460/DDP组相比， TA-1、 TA-2、 TB-1、 TB-2、 TB-3、 TC-1、 TD-1、 TE-1、 TE-2组肺癌细胞 的IC50值显著降低(P0.05)， 说明TA-1、 TA-2、 TB-1、 TB-2、 TB-3、 TC-1、 TD-1、 TE-。
12、1、 TE-2孵 育增强了H460/DDP肺癌细胞对顺铂的敏感性(P0.05)。 0045 化合物TB-4作用不明显(P0.05)。 0046 表1顺铂对各组细胞半数抑制浓度IC50值 0047 组别IC50值( g/ml)组别IC50值( g/ml) H460组14.211.25TB-3给药组20.061.19 H460/DDP组52.851.63TB-4给药组48.721.55 TA-1给药组21.071.47TC-1给药组7.610.93 TA-2给药组23.421.38TD-1给药组7.330.88 TB-1给药组18.951.10TE-1给药组15.621.27 TB-2给药组17.181.08TE-2给药组9.240.96 0048 上述实验结果表明， 化合物TA-1、 TA-2、 TB-1、 TB-2、 TB-3、 TC-1、 TD-1、 TE-1、 TE-2可 以有效逆转肺癌细胞对顺铂的耐药性， 其中TC-1、 TD-1不仅仅能逆转耐药性， 还能够增强肺 癌细胞对顺铂的敏感性。 化合物TB-4不具备这种作用。 0049 上述实施例的作用在于具体介绍本发明的实质性内容， 但不可以将本发明的保护 范围局限于上述的具体实施例。 说 明 书 4/4 页 6 CN 109172571 A 6 图1 说 明 书 附 图 1/1 页 7 CN 109172571 A 7 。