玉屏风颗粒的新用途.pdf

本发明公开了一种玉屏风颗粒的新用途；旨在提供一种有效治疗鼻咽癌，并且副作用小的药物，并且扩大玉屏风颗粒的应用范围；其技术要点是：玉屏风颗粒作为治疗鼻咽癌药物的应用；属于医药技术领域。

1.玉屏风颗粒在制备治疗鼻咽癌药物的用途,所述玉屏风颗粒的药物活性组分的原料及质量比为：黄芪20～70％、白术15～60％、防风10～35％。 2.根据权利要求1所述的玉屏风颗粒在制备治疗鼻咽癌药物的用途，所述的玉屏风颗粒的药物活性组分的原料及质量比为：黄芪60％、白术20％、防风20％。

技术领域

本发明公开一种药物的新用途，具体地说，是玉屏风颗粒治疗鼻咽癌 的新用途；属于医药技术领域。

背景技术

鼻咽癌是发生于鼻咽腔顶部和侧壁的恶性肿瘤，高发于中国南方，具 有明显的种族和地区分布特征。由于其好发部位隐蔽，早期不易被发 现，临床上病人来就诊主要是因为鼻咽癌的转移症状和体征，如颈部 淋巴结肿大、头痛、耳鸣和复视等，此时病情已经到了中晚期，失去 了最佳治疗时期。研究表明，鼻咽癌的发病与环境污染、遗传因素及 爱波斯坦-巴尔病毒（EBV）感染密切相关。临床上治疗主要为放疗原 发灶，并辅以铂类药物为主的化疗，早期的治疗效果较好，五年生存 率在50%-70%之间，但中晚期效果不理想，五年生存率仅为10%-40%， 病人死亡的原因主要是癌细胞全身多处转移，包括淋巴转移、骨转移 等。

传统中医没有鼻咽癌的病名，但是在“失荣”、“上石疽”、“真头 痛”、“鼻渊”、“控脑砂”、“恶核”、“鼻衄”、“脱荣”、“ 瘰疬”等病证中体现相关内容。对于鼻咽癌的发生，中医理论认为是 “正气虚则成岩”，《外科正宗》认为是“损伤中气”，《疡科心得 集》提出“营亏络枯”，《张氏医通》则言“营气内夺”，《马培之 外科医案》认为是“肝脾荣损”，可见“营气”的虚损在鼻咽癌的发 生中具有重要的作用。《外科真诠》所言：“由忧思、恚怒、气郁、 血逆与火凝结而成。”可见鼻咽癌的病机为“正虚邪盛”，正虚肝脾 受损，营气内虚，邪盛痰瘀火结。其病机关键为“虚”、“瘀、“痰 ”。目前鼻咽癌的中医临床治疗，主要为放化疗后的中医辨证施治， 处于辅助治疗地位，主要目的是提高放化疗疗效，减轻放化疗毒副反 应，改善生活质量，多为含清热解毒、活血化瘀、补虚、拔毒化腐、 消肿敛疮类中药的大验方。实验研究中，报道了中药肿节风及其提取 物、中药有效成分姜黄素、土贝母苷甲、氯化两面针碱、橙皮苷、大 黄素等有一定的抑制鼻咽癌细胞活性或放疗增敏性，相关抗鼻咽癌活 性还有待进一步确认。

玉屏风颗粒出自元代《丹溪心法》中玉屏风散，是治表虚自汗的经世 名方，广泛应用于增强机体免疫功能的治疗，具有扶正固本、益气补 中的效果。玉屏风颗粒是《中国药典》2010年版一部收载品种，并收 载在2012版国家基本药物目录，归属内科用药-解表剂-扶正解表类别 。

玉屏风颗粒由黄芪、炒白术、防风三味药组成，具有益气、固表、止 汗的功效，用于表虚不固，自汗恶风，面色晄白，或体虚易感风邪者 。

现代研究认为肿瘤的发生发展与宿主的免疫系统功能密切相关，肿瘤 患者往往存在免疫 抑制、抵抗力低下、反复感染等问题，提高肿瘤患者机体的免疫功能 ，是肿瘤防治中的一项重要措施。玉屏风由于对免疫系统具有明显的 提升作用，因此在肿瘤领域主要作为补益类药物在使用，用于提高免 疫、扶正固本、化疗后升白等。目前公开的玉屏风在肿瘤领域的应用 包括：张红军等报道玉屏风散能增强S180肉瘤小鼠的免疫功，抑制荷 瘤小鼠S180肉瘤的生长；蔡光先等报道超微玉屏风丸能上调恶性肿瘤 化疗患者的白细胞水平，明显改善因化疗所致白细胞减少症的气虚证 相关症状。林爱武等报道玉屏风散用于肿瘤术后低热自汗的治疗，效 果满意。汤滢等公开了玉屏风散对荷Hepal-6肝癌小鼠肿瘤具有一定抑 制作用，与化疗药顺铂联用时，能起到减毒增效作用。

总之，现有公开主要是将玉屏风作为补益类药物用于肿瘤放化疗后免 疫提升，对荷

S180肉瘤小鼠、荷Hepal-6肝癌小鼠肿瘤的抑制作用均采用的是动物肿 瘤移植模型，由于动物肿瘤移植模型与临床疗效之间的相关性不强， 一般仅用于候选药物的初步筛选。通常情况下，以人癌异体移植模型 试验结果来评价药物的抗肿瘤有效性更为可靠。因此现有公开对于玉 屏风在肿瘤治疗中的作用无特指性和具体实施。

本发明解决的技术问题是明确玉屏风颗粒在鼻咽癌治疗中的最佳药物 配比及其对鼻咽癌治疗的有效性，包括通过体外细胞实验证实其对鼻 咽癌细胞的直接杀灭作用，通过人癌异体移植模型实验证实其对生存 期的延长作用，对生存质量的改善作用。相关作用未见其他文献或专 利报道。

目前，本产品还被广泛用于预防、治疗呼吸系统疾病和免疫功能紊乱 为主的多种疾病。周海银，罗海燕，杨梅雨等在“玉屏风散颗粒治疗 60例小儿反复呼吸道感染临床观察[J]”中公开了玉屏风颗粒治疗反复 呼吸道感染的用途；闫玉红在“小议玉屏风散治疗慢性荨麻疹[J]”中 公开了玉屏风散治疗慢性荨麻疹的用途；王涛，施和建，吴志芬在“ 玉屏风散联合双嘧达莫治疗过敏性紫癜疗效观察[J]”中公开了玉屏 风颗粒辅助治疗过敏性紫癜的用途；黄跃，兰小玲，甘金梅等在“ 玉屏风颗粒治疗急慢性鼻炎、过敏性鼻炎300例疗效观察[J]”中公 开了玉屏风颗粒治疗急慢性鼻炎、过敏性鼻炎的用途；朱灵芝在“玉 屏风颗粒治疗慢性支气管炎的疗效观察及护理体会[J]”中公开了玉 屏风颗粒治疗慢性支气管炎的用途；曹嘉美，袁韬，洗剑，余腾等在 “玉屏风胶囊治疗角膜溃疡病的临床观察[J]”中公开了玉屏风胶囊 治疗角膜溃疡病用途；刘英志，林静俐，付玉等在“玉屏风颗粒治疗 与食物过敏相关性复发性口腔溃疡疗效观察[J]”中公开了玉屏风颗 粒治疗复发性口腔溃疡的用途；宗桂芬，王玲，王芳等在“玉屏风散 合生脉饮治疗病毒性心肌炎48例[J]”中公开了玉屏风散辅助治疗病 毒性心肌炎的用途；陆定国，钱蕴玉在“玉屏风口服液防治婴幼儿喘 息性气管炎18例观察[J]”中公开 了玉屏风治疗婴幼儿喘息性气管炎的用途；向明在“玉屏风颗粒对小 儿肾病综合征病程干预分析[J]”中公开了玉屏风颗粒辅助治疗小 儿肾病综合征的用途。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供一种有效治疗鼻咽癌，副作用 小的药物玉屏风颗粒，并且扩大玉屏风颗粒的应用范围。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案是这样的：该玉屏风颗 粒作为治疗鼻咽癌药物的应用。

上述的玉屏风颗粒的新用途，玉屏风颗粒的药物活性组分的原料及质 量比为：黄芪20~70%、白术15~60%、防风10~35%。

进一步的，上述的玉屏风颗粒的新用途，其特征在于，玉屏风颗粒的 药物活性组分的原料及质量比为：优选为黄芪60%、白术20%、防风20 %。

与现有技术相比，本发明提供的技术方案，具有如下优点：

1、本发明提供的技术方案采用中药材为原料，在中医药理论指导下， 通过各药材的合理配比、协同作用，在抗鼻咽癌、辅助鼻咽癌放化疗 有很好的治疗效果。本发明所述的玉屏风颗粒，针对鼻咽癌患者正虚 肝脾受损，营气内虚，邪盛痰瘀火结等病机特点而设，全方黄芪甘、 微温，归脾、肺经，功效健脾补中、升阳举陷、益卫固表、利尿、托 毒生肌；白术甘、苦、温，归脾、胃经，功效健脾益气、燥湿利尿、 止汗、安胎；防风辛、甘、微温，归膀胱、肝、脾经，功效祛风解表 ，胜湿止痛，止痉。三药材精当配伍制备而成玉屏风颗粒，解决了鼻 咽癌病机特点的“虚”状态，起到治疗鼻咽癌的作用，同时也可协同 化疗和放疗。因此也扩大了玉屏风颗粒用途的应用范围。

2、本发明所提供的玉屏风颗粒，能显著延长鼻咽癌患者生存期。

3、本发明所提供的玉屏风颗粒，能提高鼻咽癌患者生存质量。

4、本发明所提供的玉屏风颗粒，对鼻咽癌细胞具有直接抑制作用， 能抑制肿瘤的生长。

附图说明

图1玉屏风颗粒对鼻咽癌CNE2细胞存活率的影响；

图2玉屏风颗粒对荷鼻咽癌裸鼠体重的影响；

图3玉屏风颗粒对荷鼻咽癌裸鼠肿瘤体积的影响；

图4荷鼻咽癌裸鼠生存曲线。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求作进一步的详细说明， 但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求范围内所做的 有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。

实施例1

本发明提供玉屏风颗粒作为治疗鼻咽癌药物的应用。

其中：所述的玉屏风颗粒的药物活性组分的原料及质量比参见下表：

实验例1玉屏风颗粒对鼻咽癌CNE-2细胞的毒性试验

1仪器与试剂

1.1药物

称取玉屏风颗粒10g（按实施例1玉屏风颗粒7的原料及质量比制备而成 ），溶于50mL蒸馏水中，超声提取30min，取上清液高压灭菌，按1∶ 4的比例进行进行倍比稀释，配成梯度浓度。

1.2细胞

鼻咽癌CNE-2细胞，由南方医科大学肿瘤研究所传代培养并保存。

1.3试剂

RPMI-1640培养基，胎牛血清，胰酶（0.25%）及噻唑蓝（MTT）均为G IBCO公司产品，MTT粉末避光用PBS溶解，配成5mg/ml浓度，0.22微米 滤膜除菌分装，-20℃保存备用。二甲基亚砜（北京鼎国昌盛生物技术 有限公司，Sigma分装）。

1.4仪器

Boxun超净工作台（上海）、FormaseriesIIwaterjacketC O2incubator（Thermo）、酶标仪（BIO-RAD）、活细胞工作站（Ca rlZeiss），NikonEclipseTi倒置显微镜、NikonEclipse8 0i荧光显微镜、冷冻高速离心机（Sigma）、超低温冰箱（FormaSc ientific）、高压蒸汽灭菌器（HIRAYAMA）、纯水仪（Millipore）。

2试验方法

2.1鼻咽癌细胞培养

鼻咽癌CNE-2细胞常规传代培养，取对数生长期细胞用胰酶消化，用含 10%胎牛血清的RPMI-1640培养液制成细胞悬液，以3×104个/mL的细胞 密度加入96孔板中，每孔200μL，37℃，5%CO2孵箱中培养24h，待细 胞长成单层，吸出培养液，加入梯度浓度的玉屏风药液，每个浓度5个 复孔。对照组加入等体积含2%胎牛血清的RPMI-1640培养液，并设调零 孔。37℃，5%CO2孵箱中培养，72h后，将药液吸出，每孔加入5mg/ml MTT200μL，37℃，5%CO2孵箱中孵育4h，弃上清，每孔加入DMSO200μ L，室温下震荡混匀10min，酶联免疫检测仪测定吸光度，检测波长49 0nm。并按公式5-1计算细胞存活率。

细胞存活率=（药物组平均吸光度值）/（对照组平均吸光度值）×10 0%

3统计方法

采用SPSS18.0统计软件，One-wayANOVA分析各药物浓度组及对照组 间细胞存活率的差异，p<0.05为具有显著性差异。并采用Regression -probit回归分析药物浓度与细胞存活率间的关系，计算细胞半数存活 浓度TC50。

4实验结果

4.1玉屏风颗粒对鼻咽癌CNE2细胞形态的影响

鼻咽癌CNE2细胞加入不同浓度的玉屏风颗粒药液后，部分浓度组出现 细胞病变，表现为细胞粘连、壁厚、变圆、破碎、脱落，吸光度值下 降。

4.2玉屏风颗粒对鼻咽癌CNE2细胞存活率的影响

与对照组相比，参阅图1和表1，玉屏风组0.7812mg/ml（p=0.022）、 3.125mg/ml（p=0.017）、12.5mg/ml（p=0.001）、50mg/ml（p=0.00 0）及200mg/ml（p=0.000）对鼻咽癌CNE2细胞有明显的抑制作用，并 随玉屏风浓度的增加，抑制作用增强，其余各种与对照组无显著性差 异（p>0.05）；经回归分析，得回归曲线Probit(p)=1.131-0.022x， 据此计算得半数细胞存活浓度TC50=28.68mg/ml。

表1玉屏风颗粒对鼻咽癌CNE2细胞存活率的影响

实验例2玉屏风颗粒对荷鼻咽癌裸鼠的药效研究

1仪器与试剂

1.1试药

玉屏风流浸膏（按实施例1玉屏风颗粒7的原料及质量比制备而成）， 顺铂（齐鲁制药有限公司，批号908027CF）

1.3细胞及动物

鼻咽癌CNE-2细胞株由南方医科大学肿瘤研究所传代保存。SPF级BALB /C裸鼠，3-4周龄，雌性，购自广东省医学实验动物中心。

1.2试剂及仪器

RPMI-1640培养基，胎牛血清，胰酶（0.25%）均为GIBCO公司产品， Boxun超净工作台（上海）、FormaseriesIIwaterjacketC O2incubator（Thermo）、NikonEclipseTi倒置显微镜、Nikon Eclipse80i荧光显微镜、冷冻高速离心机（Sigma）、超低温冰箱 （FormaScientific）、高压蒸汽灭菌器（HIRAYAMA）、纯水仪（M illipore）。

2实验方法

2.1鼻咽癌CNE-2荷瘤裸鼠模型的制备

鼻咽癌CNE-2细胞常规传代培养，取对数生长期细胞用胰酶消化，用含 matrigel的RPMI-1640培养液（不含血清）制成细胞悬液，以1×107个 /mL的细胞密度植入裸鼠背部皮下，每只接种0.2mL。然后每天扪及接 种部位观察肿瘤生长情况，以V=1/2×a×b2（V表示肿瘤体积，a和b分 别表示肿瘤的长和宽。）当肿瘤体积>100mm3时，将荷瘤裸鼠进行随机 分组。

2.2分组及给药

将32只肿瘤体积>100mm3的荷瘤裸鼠进行随机分组，分为模型对照组， 顺铂组、顺铂+玉屏风组，玉屏风组，每组8只动物。分组当天开始给 药。模型对照组每天灌胃给予蒸馏水，顺铂组腹腔注射顺铂注射液， 剂量6mg/kg，每周给药1次，共4周。顺铂+玉屏风组除每周腹腔注射等 剂量顺铂外，每天灌胃给予玉屏风药液，剂量40g生药/kg。玉屏风组 每天灌胃给予玉屏风药液，剂量40g生药/kg。连续给药28天。

2.3评价指标及检测方法

每间隔一天称量各组裸鼠体重，并测量肿瘤大小，以V=1/2×a×b2（ V表示肿瘤体积，a和b分别表示肿瘤的长和宽。）计算肿瘤体积，并计 算相对肿瘤增殖率T/C（%），T/C（%）=TRTV/CRTV×100%（TRTV指治疗组RT V，CRTV指阴性对照组RTV），RTV（relativetumorvolume）代表相 对肿瘤体积，计算公式为：RTV=Vt/V0，其中V0为分笼给药时测量所得 肿瘤体积，Vt为每一次测量时的肿瘤体积。观察结束后剥离肿瘤组织 ，HE染色做病理切片。

3统计方法

采用SPSS18.0统计软件，One-WayANOVA（方差分析）分析各组间体 重及肿瘤体积的差异。P<0.05表示有显著性差异。采用Kaplan-Meier 法分析各组生存期。

4实验结果及讨论

4.1玉屏风颗粒对鼻咽癌裸鼠体重的影响

开始给药治疗后，每间隔一天称量各组裸鼠体重，绘制体重-时间变化 曲线，如图2所示。对照组在治疗第一周，体重稍有增加，达到初始体 重的102%左右，随后体重开始降低，在治疗第三周时，降到最低，为 初始体重的96%左右，随后体重又开始回升，在治疗第四周时，达到初 始体重的101%左右。玉屏风组则一直保持体重的增加状态，整个治疗 周期体重保持在初始体重的104%左右，最高达到初始体重的105.79%， 与对照组有显著性差异（p=0.036<0.05），说明玉屏风颗粒能促进荷 鼻咽癌裸鼠体重的增加。顺铂组在开始治疗后，与对照组相比，裸鼠 体重开始显著下降，在治疗第二周末时，体重下降为初始体重的75%左 右，与对照组有显著性差异，并出现裸鼠死亡；玉屏风+顺铂组体重的 变化趋势与顺铂组无显著性差异，但在治疗第二周未时未出现裸鼠死 亡情况。结果表明，与对照组相比，玉屏风颗粒能显著增加荷鼻咽癌 裸鼠的体重，顺铂则显著降低裸鼠的体重，表现出一定的毒副作用； 玉屏风颗粒与顺铂联合给药与顺铂单独给药相比，对裸鼠体重的影响 差异不明显，可能是因为顺铂的毒性较大，使裸鼠的体重严重降低， 掩盖了玉屏风颗粒对裸鼠体重的增加作用。

4.2玉屏风颗粒对荷鼻咽癌裸鼠肿瘤体积的影响

开始给药治疗后，每间隔一天以游标卡尺测量肿瘤的大小，以V=1/2× a×b2（V表示肿瘤体积，a和b分别表示肿瘤的长和宽。）计算肿瘤体 积，绘制肿瘤体积-时间变化曲线，共测量28天，如图3所示。

在实验观察期内，根据肿瘤体积-时间曲线，可见随着时间的延长，各 组肿瘤体积都呈逐步增大趋势，与对照组相比，玉屏风组（p=0.023） 、顺铂组（p=0.005）及玉屏风+顺铂组（p=0.001）肿瘤体积都明显减 小，差异具有显著性（p值均<0.05）。说明给药组均能显著抑制肿瘤 的生长。但顺铂组与玉屏风+顺铂组间差异不显著（p>0.05），我们认 为可能是顺铂对肿瘤体积的抑制作用大大高于玉屏风对肿瘤体积的抑 制作用，从而掩盖了玉屏风的作用，使两组间肿瘤体积差异不显著。 各组相对肿瘤增殖率见表2。

表2各组相对肿瘤增殖率

分组 相对肿瘤增殖率T/C（%） 玉屏风组 67.20% 顺铂组 35.83% 玉屏风+顺铂组 33.78%

4.3玉屏风颗粒对荷鼻咽癌裸鼠生存期的影响

各组从接种鼻咽癌CNE2细胞之日起算，观察生存周期，共观察51天。 参阅图4，表3、表4和表5，在观察期末，顺铂组裸鼠全部死亡，对照 组裸鼠生存率为37.5%，玉屏风组裸鼠生存率为71.4%，玉屏风+顺铂组 裸鼠生存率为50%。各组间生存率有显著性差异（p=0.001<0.05），对 照组平均生存期为48.25天，中位生存期为50天；顺铂组平均生存期为 37天，中位生存期为36天。玉屏风+顺铂组平均生存期为46天，中位生 存期为52天。玉屏风组平均生存期为50.714天，中位生存期>52天。

结果表明玉屏风颗粒单独使用时，对荷鼻咽癌裸鼠的生存期有显著延 长作用，与顺铂联用时，与顺铂组相比，亦能显著延长裸鼠的生存期 。

表3裸鼠生存率统计表

分组 裸鼠数量（只） 末期死亡裸鼠数量（只） 存活裸鼠数量（只） 存活率（%） 顺铂组 8 8 0 0.0% 对照组 8 5 3 37.5% 玉屏风组 7 2 5 71.4% 玉屏风+顺铂组 8 4 4 50.0% 总计 31 19 12 38.7%

表4平均及中位生存期统计表

表5水平间的总体比较

综上所述，玉屏风针对癌症发病的病机特点“虚”状态，起到治疗鼻 咽癌的作用，同时也可协同化疗和放疗治疗鼻咽癌。