光黄素在制备肿瘤放化疗增敏剂中的应用及抗肿瘤药物组合物.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810085625.0 (22)申请日 2018.01.29 (71)申请人 丽水学院 地址 323000 浙江省丽水市莲都区三岩寺 (72)发明人 杨如会 宋兆侠 (74)专利代理机构 北京超凡志成知识产权代理 事务所(普通合伙) 11371 代理人 吕露 (51)Int.Cl. A61K 31/525(2006.01) A61K 33/24(2006.01) A61K 45/06(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 光黄素在制备肿。

2、瘤放化疗增敏剂中的应用 及抗肿瘤药物组合物 (57)摘要 本发明提供了光黄素在制备肿瘤放化疗增 敏剂中的应用及抗肿瘤药物组合物。 光黄素能够 协同化疗药物并提高化疗效果， 并增加化疗药物 的杀伤能力2-4倍； 同时， 光黄素还能够作为光敏 剂并协同放疗使用， 其能够增加放疗作用3-5倍， 同时还能够明显减少肿瘤的复发。 权利要求书2页 说明书6页 附图4页 CN 108210499 A 2018.06.29 CN 108210499 A 1.光黄素在制备抗肿瘤化疗药物增敏剂中的应用； 和/或， 光黄素在制备肿瘤放疗增敏 剂中的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述肿瘤为恶性。

3、肿瘤。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于， 所述肿瘤为癌或肉瘤。 4.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 光黄素竞争性抑制核黄素， 减少肿瘤细胞 对核黄素的摄取， 减少肿瘤细胞对放化疗的抗损伤能力， 增加肿瘤细胞对放化疗的敏感性 和减少复发。 5.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述光黄素为口服给药和/或注射给药； 其中， 所述注射给药包括肌肉注射给药和静脉注射给药。 6.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述光黄素的给药量为5mg-2g/d。 7.根据权利要求1所述的应用,其特征在于， 所述化疗药物包括： 阿霉素、 环磷酰胺、 如 紫杉醇、 健择、 氮芥、 。

4、环磷酰胺、 异环磷酰胺、 氟尿嘧啶、 卡莫氟、 吉西他滨， 阿霉素、 丝裂霉 素、 柔红霉素， 开普拓、 足叶乙甙、 泰索帝， 三苯氧胺、 依西美坦、 奈法林， 顺铂、 卡铂、 草酸铂、 萘达铂， 氮芥、 苯丙氨酸氮芥、 磷雌氮芥、 乙烯亚胺类、 塞替哌、 亚胺醌、 丁氧哌烷、 甲基磺酸 酯类、 马利兰、 苏消安、 甲磺亚胺丙醇， 亚硝脲类、 卡莫司汀、 洛莫司汀、 司莫司汀、 环氧化物 类、 二溴甘露醇、 二溴卫矛醇、 二氮醌、 氨甲蝶呤、 氯甲氨蝶呤、 氟尿嘧啶、 喃氟啶、 卡莫氟、 6巯基嘌呤、 6硫鸟嘌呤、 氟达拉滨、 羟基脲、 羟基胍、 吉西他滨、 阿糖胞苷、 依诺他滨、 氟 环胞苷。

5、、 阿霉素、 吡喃阿霉素、 表阿霉素、 阿克拉霉素、 丝裂霉素、 柔红霉素、 平阳霉素、 博来 霉素、 派来霉素、 放线菌素D、 放线菌素C、 光辉霉素、 橄榄霉素、 链脲霉素、 链褐霉素、 更新霉 素、 喜树碱、 开普拓、 拓扑特肯、 足叶乙甙、 鬼臼噻吩甙、 胺苯丫啶、 长春花碱、 长春新碱、 秋水 仙碱、 紫杉醇， 或泰索帝中的一种或几种。 8.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于， 所述放疗包括： 放射性同位素产生的 、 、 射线； 和/或， x线治疗仪和加速器发出的X射线； 和/或， 各种电子束、 质子束、 中子束、 负 介子束以及其他重离子束。 9.一种抗肿瘤药物组合物， 其特征。

6、在于， 所述抗肿瘤药物组合物包括化疗药物和增敏 剂； 其中， 所述增敏剂为光黄素； 优选的， 所述化疗药物包括阿霉素、 环磷酰胺、 如紫杉醇、 健择、 氮芥、 环磷酰胺、 异环磷 酰胺、 氟尿嘧啶、 卡莫氟、 吉西他滨， 阿霉素、 丝裂霉素、 柔红霉素， 开普拓、 足叶乙甙、 泰索 帝， 三苯氧胺、 依西美坦、 奈法林， 顺铂、 卡铂、 草酸铂、 萘达铂， 氮芥、 苯丙氨酸氮芥、 磷雌氮 芥、 乙烯亚胺类、 塞替哌、 亚胺醌、 丁氧哌烷、 甲基磺酸酯类、 马利兰、 苏消安、 甲磺亚胺丙醇， 亚硝脲类、 卡莫司汀、 洛莫司汀、 司莫司汀、 环氧化物类、 二溴甘露醇、 二溴卫矛醇、 二氮醌、 氨甲。

7、蝶呤、 氯甲氨蝶呤、 氟尿嘧啶、 喃氟啶、 卡莫氟、 6巯基嘌呤、 6硫鸟嘌呤、 氟达拉滨、 羟基脲、 羟基胍、 吉西他滨、 阿糖胞苷、 依诺他滨、 氟环胞苷、 阿霉素、 吡喃阿霉素、 表阿霉素、 阿克拉霉素、 丝裂霉素、 柔红霉素、 平阳霉素、 博来霉素、 派来霉素、 放线菌素D、 放线菌素C、 光辉霉素、 橄榄霉素、 链脲霉素、 链褐霉素、 更新霉素、 喜树碱、 开普拓、 拓扑特肯、 足叶乙甙、 鬼臼噻吩甙、 胺苯丫啶、 长春花碱、 长春新碱、 秋水仙碱、 紫杉醇， 或泰索帝中的一种或几种。 10.根据权利要求9所述的抗肿瘤药物组合物， 其特征在于， 所述肿瘤为恶性肿瘤； 权 利 要 求 。

8、书 1/2 页 2 CN 108210499 A 2 和/或， 所述肿瘤为癌或肉瘤。 权 利 要 求 书 2/2 页 3 CN 108210499 A 3 光黄素在制备肿瘤放化疗增敏剂中的应用及抗肿瘤药物组 合物 技术领域 0001 本发明涉及医药领域， 具体而言， 涉及光黄素在制备肿瘤放化疗增敏剂中的应用 及抗肿瘤药物组合物。 背景技术 0002 肿瘤的治疗， 目前国内外普遍开展以手术后综合化疗和放疗的治疗方案， 但由于 早期诊断的困难、 病理分类繁多、 组织结构复杂等因素， 对于肿瘤的治疗效果一直并不理 想。 0003 肿瘤患者对化疗的原发性和/或获得性多药耐药(Multiple drug。

9、 resistance， MDR)以及患者对放疗耐受性等因素在， 是放化疗治疗的重要弊端， 术后或放化疗复发则是 肿瘤治疗失败的重要原因。 肿瘤干细胞(Cancer stem cells， CSCs)是存在于肿瘤组织中具 有干细胞能力(即自我更新、 多向分化以及导致肿瘤发生和转移能力)的肿瘤细胞亚群， 被 认为是肿瘤耐药性的产生和复发的重要原因。 典型的卵巢癌初次化疗后的复发可能归因于 初次化疗后残留的CSCs或起始细胞。 0004 DNA是很多抗癌药物和放疗的靶点， 如烷化剂和铂类化合物。 当肿瘤细DNA受损时， 会直接影响其复制和转录功能， 严重时会引发细胞的死亡。 但肿瘤细胞内存在抗DN。

10、A损伤修 复机制， 这一机制主要由核酸内切酶、 DNA聚合酶、 DNA连接酶等参与完成。 当肿瘤细胞中这 些酶蛋白合成增加时， DNA修复机制加强， 因而， CSCs高效率的DNA修复是化疗和放疗抵抗的 重要机制， CSCs的DNA修复能力的增高则是其重要的特征， DNA损伤修复能力的增强是CSCs 对化疗药物和放疗射线产生抗性的一个重要原因。 由于CSCs通常定位于低氧微环境中， 因 此定位于低氧环境中的CSCs需要对由于低氧造成的氧化应激的损伤具备一定的修复能力， 促使肿瘤发生及发展。 因而， 找到有效阻滞CSCs DNA损伤修复能力的方法对增加肿瘤化疗 效果意义重大。 0005 CSCs。

11、具有富集核黄素的特性， 其胞内浓度明显高于普通细胞肿瘤细胞。 核黄素作 为线粒体能量代谢的参与者， 可以改善线粒体能量代谢， 清除自由基对线粒体功能的损害， 从而对线粒体起到保护作用， 会缓和化疗药物的损伤作用。 CSCs富集核黄素的能力是其抵 抗化疗药物DNA损伤的重要因素。 光黄素是核黄素的无活性代谢产物， 可以竞争性抑制CSCs 对核黄素的转运， 通过改作用削弱CSCs放化疗损伤的修复能力， 增强放化疗效果。 0006 经研究发现， 对高比例CSCs肿瘤细胞， 光黄素干扰核黄素代谢途径可以增强放化 疗效果， 单独使用没有明显作用， 而且目前也没有将核黄素或其前体、 代谢产物作为抗肿瘤 辅。

12、助药物的相关研究或报道。 0007 有鉴于此， 特提出本发明。 发明内容 0008 本发明的第一目的在于提供一种光黄素在制备抗肿瘤化疗药物增敏剂中的应用， 说 明 书 1/6 页 4 CN 108210499 A 4 光黄素可以作为化疗药物的增敏剂， 与化疗药物配合使用， 提高其对于肿瘤的杀伤能力， 改 善化疗治疗效果。 0009 本发明的第二目的在于提供一种抗肿瘤药物组合物。 0010 为了实现本发明的上述目的， 特采用以下技术方案： 0011 光黄素在制备抗肿瘤化疗药物增敏剂中的应用； 和/或， 光黄素在制备肿瘤放疗增 敏剂中的应用。 0012 优选的， 本发明所述应用中， 所述肿瘤为恶性。

13、肿瘤。 0013 优选的， 本发明所述应用中， 所述肿瘤为癌或肉瘤。 0014 优选的， 本发明所述应用中， 光黄素竞争性抑制核黄素， 减少肿瘤细胞对核黄素的 摄取， 减少肿瘤细胞对放化疗的抗损伤能力， 增加肿瘤细胞对放化疗的敏感性和减少复发。 0015 优选的， 本发明所述应用中， 所述光黄素为口服给药和/或注射给药； 其中， 所述注 射给药包括肌肉注射给药和静脉注射给药。 0016 优选的， 本发明所述应用中， 所述光黄素的给药量为5mg-2g/d。 0017 优选的， 本发明所述应用中， 所述化疗药物包括阿霉素、 环磷酰胺、 如紫杉醇、 健 择、 氮芥、 环磷酰胺、 异环磷酰胺、 氟尿嘧。

14、啶、 卡莫氟、 吉西他滨， 阿霉素、 丝裂霉素、 柔红霉 素， 开普拓、 足叶乙甙、 泰索帝， 三苯氧胺、 依西美坦、 奈法林， 顺铂、 卡铂、 草酸铂、 萘达铂， 氮 芥、 苯丙氨酸氮芥、 磷雌氮芥、 乙烯亚胺类、 塞替哌、 亚胺醌、 丁氧哌烷、 甲基磺酸酯类、 马利 兰、 苏消安、 甲磺亚胺丙醇， 亚硝脲类、 卡莫司汀、 洛莫司汀、 司莫司汀、 环氧化物类、 二溴甘 露醇、 二溴卫矛醇、 二氮醌、 氨甲蝶呤、 氯甲氨蝶呤、 氟尿嘧啶、 喃氟啶、 卡莫氟、 6巯基嘌 呤、 6硫鸟嘌呤、 氟达拉滨、 羟基脲、 羟基胍、 吉西他滨、 阿糖胞苷、 依诺他滨、 氟环胞苷、 阿 霉素、 吡喃阿霉素、 。

15、表阿霉素、 阿克拉霉素、 丝裂霉素、 柔红霉素、 平阳霉素、 博来霉素、 派来 霉素、 放线菌素D、 放线菌素C、 光辉霉素、 橄榄霉素、 链脲霉素、 链褐霉素、 更新霉素、 喜树碱、 开普拓、 拓扑特肯、 足叶乙甙、 鬼臼噻吩甙、 胺苯丫啶、 长春花碱、 长春新碱、 秋水仙碱、 紫杉 醇， 或者泰索帝中的一种或几种。 0018 优选的， 本发明所述应用中， 所述放疗包括： 放射性同位素产生的 、 、 射线； 0019 和/或， x线治疗仪和加速器发出的X射线； 0020 和/或， 各种电子束、 质子束、 中子束、 负 介子束以及其他重离子束。 0021 同时， 本发明也提供了一种抗肿瘤药物组。

16、合物， 所述抗肿瘤药物组合物包括化疗 药物和增敏剂； 0022 其中， 所述增敏剂为光黄素； 0023 优选的， 所述化疗药物包括： 阿霉素、 环磷酰胺、 如紫杉醇、 健择、 氮芥、 环磷酰胺、 异环磷酰胺、 氟尿嘧啶、 卡莫氟、 吉西他滨， 阿霉素、 丝裂霉素、 柔红霉素， 开普拓、 足叶乙甙、 泰索帝， 三苯氧胺、 依西美坦、 奈法林， 顺铂、 卡铂、 草酸铂、 萘达铂， 氮芥、 苯丙氨酸氮芥、 磷 雌氮芥、 乙烯亚胺类、 塞替哌、 亚胺醌、 丁氧哌烷、 甲基磺酸酯类、 马利兰、 苏消安、 甲磺亚胺 丙醇， 亚硝脲类、 卡莫司汀、 洛莫司汀、 司莫司汀、 环氧化物类、 二溴甘露醇、 二溴卫。

17、矛醇、 二 氮醌、 氨甲蝶呤、 氯甲氨蝶呤、 氟尿嘧啶、 喃氟啶、 卡莫氟、 6巯基嘌呤、 6硫鸟嘌呤、 氟达 拉滨、 羟基脲、 羟基胍、 吉西他滨、 阿糖胞苷、 依诺他滨、 氟环胞苷、 阿霉素、 吡喃阿霉素、 表阿 霉素、 阿克拉霉素、 丝裂霉素、 柔红霉素、 平阳霉素、 博来霉素、 派来霉素、 放线菌素D、 放线菌 素C、 光辉霉素、 橄榄霉素、 链脲霉素、 链褐霉素、 更新霉素、 喜树碱、 开普拓、 拓扑特肯、 足叶 说 明 书 2/6 页 5 CN 108210499 A 5 乙甙、 鬼臼噻吩甙、 胺苯丫啶、 长春花碱、 长春新碱、 秋水仙碱、 紫杉醇， 或者泰索帝中的一种 或几种。 。

18、0024 优选的， 本发明所述的抗肿瘤药物组合物中， 所述肿瘤为恶性肿瘤； 和/或， 所述肿 瘤为癌或肉瘤。 0025 与现有技术相比， 本发明的有益效果为： 0026 光黄素单独给药对肿瘤细胞没有影响， 然而， 其能够协同化疗药物并提高化疗效 果， 并增加化疗药物的杀伤能力2-4倍； 0027 同时， 光黄素还能够作为光敏剂并协同放疗使用， 其能够增加放疗作用3-5倍， 同 时还能够明显减少化疗/放疗停止后肿瘤的复发。 附图说明 0028 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案， 以下将对实施例或现 有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。 0029 图1为光黄素分子结构图； 。

19、0030 图2为核黄素分子结构图； 0031 图3为不同化疗试剂对卵巢癌细胞活力影响对照实验检测结果图； 0032 图4为不同化疗试剂对卵巢癌细胞凋亡率影响对照实验检测结果图； 0033 图5为不同化疗试剂对卵巢癌细胞团数量影响对照试验检测结果图； 0034 图6为光黄素对放疗抑制卵巢癌细胞活力影响对照检测结果图； 0035 图7为光黄素协调化疗药物对荷瘤裸鼠卵巢癌肿瘤体积影响及对照检测结果图。 具体实施方式 0036 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述， 但是本领域技术人员将会 理解， 下列实施例仅用于说明本发明， 而不应视为限制本发明的范围。 实施例中未注明具体 条件者， 按照。

20、常规条件或制造商建议的条件进行。 所用试剂或仪器未注明生产厂商者， 均为 可以通过市售购买获得的常规产品。 0037 光黄素(lumiflavin， 结构如图1所示)是黄素类似物， 是核黄素(结构如图2所示) 的无活性产物。 光黄素能够阻止核黄素在黄素激酶作用下转变为黄素腺嘌呤二核苷酸 (FAD)和黄素单核苷酸(FMN),因而可对核黄素的生理作用干扰。 同时， 光黄素也是体外核黄 素失活产物， 在碱性条件下光照核黄素即可产生光黄素， 体外研究发现光黄素和核黄素在 卵巢癌细胞中的富集一致。 0038 虽然在理论上， 光黄素的使用能够影响核黄素的代谢， 进而起到肿瘤细胞增殖抑 制的作用。 然而， 。

21、在实际研究中发现， 干扰核黄素代谢途径对正常卵巢癌细胞的增殖并不会 产生影响。 但是， 光黄素却能够与放化疗产生协同作用， 并提高放化疗对于癌细胞的杀伤效 果， 同时还能够减少治疗后肿瘤的复发。 0039 有鉴于这一研究发现， 本发明特提供了一种将光黄素作为抗肿瘤化疗药物增敏剂 以及肿瘤放疗增敏剂的肿瘤治疗新方案， 从而增加肿瘤细胞对于化疗药物的敏感性， 提高 对于肿瘤细胞的杀伤效果， 同时光黄素也能够提高肿瘤放疗的治疗效果， 并降低化疗/放疗 的肿瘤复发。 说 明 书 3/6 页 6 CN 108210499 A 6 0040 进一步的， 本发明中， 是将光黄素作为放化疗的辅助试剂而使用， 。

22、而通过口服或注 射的光黄素能够以癌细胞中的干细胞为靶点， 并富集于靶点区域， 竞争性的抑制核黄素， 减 少肿瘤细胞对核黄素的摄取， 并减少肿瘤细胞对放化疗的抗损伤能力， 从而增加肿瘤细胞 对放化疗的敏感性和减少复发。 0041 具体的， 当作为化疗增敏剂时， 光黄素则需要配合化疗药物使用， 进而以肿瘤治疗 药物组合物的形式应用， 并将其用于肿瘤， 特别是恶性肿瘤(例如癌或者肉瘤)的治疗中。 0042 作为配合使用的抗肿瘤药物， 可以应用的化疗药物可以为： 阿霉素、 环磷酰胺、 如 紫杉醇、 健择(盐酸吉西他滨)、 氮芥、 环磷酰胺、 异环磷酰胺， 氟尿嘧啶、 卡莫氟、 吉西他滨， 阿霉素、 丝。

23、裂霉素、 柔红霉素， 开普拓、 足叶乙甙、 泰索帝； 三苯氧胺、 依西美坦、 奈法林； 顺 铂、 卡铂、 草酸铂、 萘达铂； 氮芥、 苯丙氨酸氮芥、 磷雌氮芥、 乙烯亚胺类、 塞替哌、 亚胺醌、 丁 氧哌烷、 甲基磺酸酯类、 马利兰、 苏消安、 甲磺亚胺丙醇； 亚硝脲类、 卡莫司汀、 洛莫司汀、 司 莫司汀、 环氧化物类、 二溴甘露醇、 二溴卫矛醇、 二氮醌、 氨甲蝶呤、 氯甲氨蝶呤、 氟尿嘧啶、 喃氟啶、 卡莫氟、 6-巯基嘌呤、 6-硫鸟嘌呤、 氟达拉滨、 羟基脲、 羟基胍、 吉西他滨、 阿糖胞苷、 依诺他滨、 氟环胞苷、 阿霉素、 吡喃阿霉素、 表阿霉素、 阿克拉霉素、 丝裂霉素、 柔红。

24、霉素、 平 阳霉素、 博来霉素、 派来霉素、 放线菌素D、 放线菌素C、 光辉霉素、 橄榄霉素、 链脲霉素、 链褐 霉素、 更新霉素、 喜树碱、 开普拓、 拓扑特肯、 足叶乙甙、 鬼臼噻吩甙、 胺苯丫啶、 长春花碱长 春新碱、 秋水仙碱、 紫杉醇， 或者泰索帝中的一种， 或者几种的复合物。 0043 同时， 在肿瘤化疗治疗中， 光敏剂和化疗药物均可以采用口服/注射的方式进行给 药， 例如采用口服的方式服用光敏剂， 同时采用注射的方式给予化疗药物； 或者采用注射的 方式给予光敏剂， 同时采用口服的方式服用化疗药物； 又或者， 光敏剂和化疗药物均采用口 服的方式给药； 还或者， 光敏剂和化疗药物均。

25、采用注射的方式进行给药； 0044 其中， 光敏剂的给药量控制在5mg-2g/d。 0045 而在放疗治疗中， 作为放疗光敏剂的光黄素则配合放射线使用， 从而达到对于肿 瘤进行治疗的目的。 0046 例如， 将光黄素配合放射性同位素产生的 、 、 射线； 和/或， x线治疗仪和加速器 发出的X射线； 和/或， 各种电子束、 质子束、 中子束、 负 介子束以及其他重离子束等放射线 进行肿瘤治疗。 0047 同样的， 在放疗治疗中， 可以采用口服/注射的方式进行光黄素给药， 其用量同样 也要控制在5mg-2g/d。 0048 实验例1 0049 实验材料： 0050 细胞株： 人卵巢癌细胞(HO8。

26、910)， 购自中科院上海细胞库； 0051 光黄素： 购于上海江莱生物科技有限公司； 0052 Transwell 24孔板(Corning公司)； 0053 DAPI(sigma公司)； 0054 CCK8检测试剂盒： 日本同仁化学社。 0055 Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒： Gibco(Invitrogen)公司 0056 实验方案: 0057 实验1: 说 明 书 4/6 页 7 CN 108210499 A 7 0058 细胞培养及分组： 0059 细胞培养： HO8910细胞以含10胎牛血清的DMEM高糖培养基(含100IU/mL青霉素 和100IU/mL。

27、链霉素)在37、 5CO2条件下培养， 根据细胞生长情况， 每隔2-3d换液1次。 0060 实验分组： 空白对照组， 光黄素(20 mol/L)组， 顺铂(DDP)组(20 mol/L)， DDP组+光 黄素(20 mol/L+20 mol/L)对照组， 各组干预48h后收集细胞， 并进行不同指标检测。 0061 (1)CCK-8方法检测细胞： 0062 各组细胞吸除培养液， 细胞培养96孔板每孔加入含10CCK8检测液的RPMI 1640 培养基100 l， 37避光孵育1h， 450nm处读取各孔OD值。 每组样本6个复孔， 按下式计算各实 验组细胞活力： 0063 0064 实验结果如。

28、图3所示。 0065 由图3的实验结果可知， 单独使用光黄素对于HO8910的细胞活力并不会产生任何 影响； 0066 同时， 相较于单独使用DDP而言， 将光黄素与DDP联合使用后， 明显对于HO8910的细 胞活力的影响更大。 0067 而由如上的实验检测结果也可以得知的是， 光黄素可以协同顺铂(DDP)降低对卵 巢癌细胞活力(*， 与对照组比较， P0.01； #， 与DDP组比较， P0.01)。 0068 (2)流式细胞仪检测细胞凋亡： 0069 药物作用48h时后， 加入0 .25胰酶(不含EDTA)消化， 然后离心收集细胞 (1500rpm， 离心时间5min收集细胞)； 007。

29、0 将收集的细胞以PBS(4提前预冷)洗涤细胞两次， 缓冲液悬浮细胞后加入5 l Annexin V-FITC和10 l PI， 轻轻混匀后于4避光孵育5min， 上机检测， 实验结果如图4所 示。 0071 由图4的实验结果可知， 单独使用光黄素并不会明显导致HO8910细胞凋亡； 0072 同时， 相较于单独使用DDP而言， 将光黄素与DDP联合使用后， HO8910细胞的凋亡率 明显提高。 0073 而由如上的实验检测结果也可以得知的是， 光黄素能够增加顺铂对细胞的凋亡作 用， 提高顺铂对于肿瘤细胞的杀伤能力。 (*， 与对照组比较， P0.01； #， 与DDP组比较， P 0.01)。

30、。 0074 (3)平板克隆实验检测细胞集落形成能力： 0075 取生长状态良好的处于对数生长期的HO8910细胞， 分别胰酶消化， 离心， 细胞悬液 反复吹打， 单个细胞百分率在95以上。 血球计数板下计数， 完全培养基调节细胞浓度， 接 种6孔板， 每孔200个细胞， 以十字方向轻轻晃动培养皿， 使细胞分散均匀。 37、 5CO2、 饱 和湿度培养箱中培养48h后， 计算细胞数在50个细胞以上的细胞团(1个集落)， 实验结果如 图5所示。 0076 由图5的实验检测结果可知， 单独使用光黄素并不会明显影响肿瘤细胞团的数量； 0077 同时， 相较于单独使用DDP而言， 将光黄素与DDP联合。

31、使用后， 肿瘤细胞团的数量明 显降低。 说 明 书 5/6 页 8 CN 108210499 A 8 0078 而由如上的实验检测结果也可以得知的是， 光黄素可以协同顺铂减少卵巢癌细胞 克隆的形成。 0079 实验2 0080 细胞培养及分组： 0081 取正常培养的处于对数期细胞， 接种6孔板， 细胞铺满80后， 分为空白对照组、 放 疗对照组、 10 mol、 20 mol、 40 mol/L光黄素干预组， 孵育24h后， 六孔板用封口膜密封好， 除 了空白对照组外， 进行细胞放疗， 放疗后及时去除封口膜并用酒精消毒， 放入细胞培养箱中 分别培养48h。 0082 放疗方案： 0083 5。

32、GY， 3.64cGY/min， 源皮距(SSD)100cm； 表面射野(FSZ)： 1010cm， G180 ， 培 养板放在固体水上， 固体水厚度1.5cm； 6MV， MU514/F DOSE RATE350。 0084 CCK8检测： 0085 放疗48h后， 弃去原培养基， 将正常培养组和放疗组同时加入110 l/孔CCK8稀释 液。 孵育2h， 450nm和650nm测定OD值。 检测结果如图6所示。 0086 由图6所示的实验检测结果可知， 光黄素可以协同放疗降低卵巢癌细胞活力， 明显 增强放疗对细胞的杀伤作用。 (*， 与单纯放疗组比较， P0.01) 0087 实验3 008。

33、8 实验方案及分组： 0089 人卵巢癌细胞(HO8910)细胞106/只接种于裸鼠皮下， 20d后肿瘤长至50mm3开始按 肿瘤大小分组。 具体分为： 对照组， DDP组(5mg/kg)， 光黄素组(20mg/kg) ,光黄素+DDP组 (20mg/kg+5mg/kg)。 0090 腹腔注射给药， 每日一次， 连续30d， 计算肿瘤体积； 停药30d后再计算肿瘤体积变 化， 结果如图7所示。 0091 由图7所示的实验结果可知， 单独使用光黄素对于肿瘤细胞的生长基本没有任何 影响； 0092 同时， 相较于单独使用DDP进行肿瘤治疗而言， 将光黄素与DDP共同使用(图7中最 下方曲线)后， 。

34、对于肿瘤生长的抑制效果更为明显， 而且在停药后， 也能够明显减少肿瘤的 生长。 0093 由如上的动物实验结果可以得知的是， 光黄素联合DDP可以协同DDP的化疗效果， 而且可以减少停药后肿瘤的生长。 0094 而由如上实验1-3的对照试验结果可知， 光黄素能够作为光敏剂而配合化疗和放 疗使用， 并能够提高化疗和放疗对于肿瘤的治疗效果， 同时还能够有效抑制肿瘤细胞的生 长。 0095 尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明， 然而应意识到， 在不背离本发明的 精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。 因此， 这意味着在所附权利要求中 包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。 说 明 书 6/6 页 9 CN 108210499 A 9 图1 图2 说 明 书 附 图 1/4 页 10 CN 108210499 A 10 图3 图4 说 明 书 附 图 2/4 页 11 CN 108210499 A 11 图5 图6 说 明 书 附 图 3/4 页 12 CN 108210499 A 12 图7 说 明 书 附 图 4/4 页 13 CN 108210499 A 13 。