技术领域
本发明属于医用诊断试剂领域，尤其是涉及一种用于标记的纳米炭制剂。
背景技术
恶性淋巴癌又称“淋巴瘤”，是原发于淋巴结或其他淋巴组织的恶性肿瘤，是我国常见的十大恶性肿瘤之一。本病多见于中、青年，男性患者多于女性。本病按其细胞成分的不同可分为何杰金氏病和非何杰金氏淋巴瘤两大类。其恶性程度不一，由淋巴一组织细胞系统恶性增生所引起，多发生在淋巴结内。淋巴癌(肿瘤)的症状，主要是在身体上摸到肿大的淋巴结，早期皆不痛不痒，因此常被人所忽略。
恶性淋巴癌患者，可行根治性颈淋巴结切除术。在手术操作过程中，需要采用纳米炭制剂对淋巴结染色示踪，以帮助医生彻底清除淋巴结，提高恶性肿瘤治疗效果。纳米炭制剂注射到恶性肿瘤周缘组织中，被巨噬细胞吞噬，迅速进入淋巴管，聚集滞留到淋巴结，使淋巴结染成黑色，实现肿瘤区域引流淋巴结的活体染色。纳米炭制剂用于手术中胃癌区域引流淋巴结的示踪，利于手术中肉眼辨认和清除区域引流淋巴结，从而减少组织损伤、缩短手术时间、增加淋巴结的清除数量，达到彻底清扫淋巴的目的，减少恶性肿瘤复发的机率。
申请号：02113731.5公开了一种纳米炭混悬组合物，其由纳米炭颗粒、聚乙烯吡咯烷酮、生理盐水和枸橼酸钠所组成；本发明还公开了纳米炭混悬组合物的制备方法，其采用振动磨或者球磨对组合物进行分散，其分散效率大大提高，可在短时间内达到较高的分散效果。
发明内容
本发明的目的是提供一种分散性好、稳定性高的用于标记的纳米炭制剂，不仅适用于肿瘤细胞在淋巴系统的失踪，还适用于消化道病变部位或活检点进行标记。
一种用于标记的纳米炭制剂，包括纳米炭、胶束载体、增溶剂、渗透压调节剂，所述胶束载体为高分子多糖类化合物、聚丙烯酸类化合物或聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物；
所述高分子多糖类化合物为羟乙基纤维素、羟乙基淀粉、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、黄原胶、瓜尔豆胶、果胶、阿拉伯胶或海藻酸钠中的一种或几种；
所述聚丙烯酸类化合物为卡波姆、聚卡波非或聚丙烯酸钠中的一种或几种；
所述聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物为泊洛沙姆188或者泊洛沙姆407。
本发明采用高分子化合物为胶束载体，能够将纳米炭包裹在胶体中心，避免纳米炭颗粒之间的碰撞而产生的沉淀。
所述纳米炭的粒径为40-800nm。
所述纳米炭的粒径为120-500nm。
根据纳米炭颗粒直径的不同，能够选择性的进入淋巴系统，或者留在病变部位，因此本发明的用于标记的纳米炭制剂不仅适用于肿瘤细胞在淋巴系统的失踪，还适用于消化道病变部位或活检点进行标记。
所述胶束载体包括卡波姆0.1-5重量份、羟乙基纤维素0-5重量份、泊洛沙姆0-3重量份、羧甲基纤维素钠0-3重量份、黄原胶0-3重量份和海藻酸钠0-3重量份。
所述胶束载体包括卡波姆0.3-2重量份、羟乙基纤维素0-2重量份、泊洛沙姆0-0.5重量份、羧甲基纤维素钠0-0.5重量份、黄原胶0-0.5重量份和海藻酸钠0-0.5重量份。
所述纳米炭制剂包括纳米炭0.2-5重量份、胶束载体0.3-6重量份、增溶剂0.15-3重量份，渗透压调节剂0.5-5.0重量份和水70-100重量份。
所述增溶剂为脂肪醇聚氧乙烯醚、聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯、山梨醇酐单油酸酯中的一种或几种；优选所述增溶剂为聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯0.15-2.0重量份；脂肪醇聚氧乙烯醚0-0.5重量份和山梨醇酐单油酸酯0-0.5重量份。
所述渗透压调节剂为氯化钠、甘油、果糖中的一种或几种。
所述用于标记的纳米炭制剂的胶体粒径为150-3000nm；纳米炭制剂的粘度为300-10000mPa.s。
本发明研究人员发现纳米炭制剂炭的沉降率与胶体粒径和粘度有关，胶体粒径为150-3000nm；纳米炭制剂的粘度为300-10000mPa.s时，纳米炭制剂的炭沉降率最低。
优选的，所述用于标记的纳米炭制剂的胶体粒径为500-2000nm；纳米炭制剂的粘度为1000-8000mPa.s。
更优选的，所述用于标记的纳米炭制剂的胶体粒径为1000-1500nm；纳米炭制剂的粘度为2000-7000mPa.s。
一种所述的用于标记的纳米炭制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将胶束载体分散到水中溶胀10-24h后，均质10-30min；
(2)将增溶剂加入到50-80℃的温水中溶解，搅拌5-15min后调节pH值至6.0-9.0；
(3)将纳米炭加到步骤二的溶液中，在3000-8000转/min的条件下高速乳化分散20-50min；
(4)将制备好的纳米炭制剂在115℃的温度下灭菌30min，即得。本发明采用高分子化合物为胶束载体，能够将纳米炭包裹在胶体中心，避免纳米炭颗粒之间的碰撞而产生的沉淀。
采用的胶束载体组分为高分子多糖类化合物、聚丙烯酸类化合物或聚氧乙烯聚氧丙烯醚嵌段共聚物，不具有生物活性，不会对人体产生刺激或其他不良反应，本发明所用的增溶剂为生物惰性材料，不会参与到人体的代谢反应，本发明所用的渗透压调节剂为临床常用的药品级材料，其生物安全性已经被长期的临床应用所验证，因此本发明提供用于标记的纳米炭制剂良好的生物安全性，不会对人体的健康产生损伤。
该制备方法简单方便，在进行纳米炭分散时采用的是乳化剂，便能够达到良好的分散效果，无需使用复杂球磨机或振动分散机，使用乳化剂进行分散时还具有消耗能量少，降低生产成本的优点。
具体实施方式
实施例1
(1)将卡波姆0.3重量份分散到水中溶胀10小时后，均质10分钟；
(2)将聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯0.15重量份加入到50℃的温水中溶解，搅拌5分钟后调节pH值至6.0；
(3)将120nm纳米炭1.0重量份加到步骤二的溶液中，在8000转速/分钟的条件下高速乳化分散20分钟；
(4)将制备好的纳米炭制剂在115度的温度下灭菌30min，即得。
实施例2
(1)将卡波姆0.5重量份、黄原胶0.5重量份体分散到水中溶胀24小时后，均质30分钟；
(2)将聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯0.50重量份、氯化钠0.5重量份加入到80℃的温水中溶解，搅拌15分钟后调节pH值至6.5；
(3)将500nm纳米炭0.2重量份加到步骤二的溶液中，在8000转速/分钟的条件下高速乳化分散30分钟；
(4)将制备好的纳米炭制剂在115度的温度下灭菌30min，即得。
实施例3
(1)将卡波姆1.0重量份、羧甲基纤维素钠0.5重量份体分散到水中溶胀14小时后，均质15分钟；
(2)将聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯2.0重量份、脂肪醇聚氧乙烯醚0.5重量份、氯化钠0.9重量份加入到50℃的温水中溶解，搅拌5分钟后调节pH值至6.0；
(3)将400nm纳米炭5.0重量份加到步骤二的溶液中，在6000转速/分钟的条件下高速乳化分散25分钟；
(4)将制备好的纳米炭制剂在115度的温度下灭菌30min，即得。
实施例4
(1)将卡波姆1.5重量份、海藻酸钠0.5重量份体分散到水中溶胀10小时后，均质10分钟；
(2)将聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯1.5重量份、山梨醇酐单油酸酯0.5重量份、果糖2.0重量份加入到58℃的温水中溶解，搅拌8分钟后调节pH值至8.5；
(3)将200nm纳米炭1.0重量份加到步骤二的溶液中，在4500转速/分钟的条件下高速乳化分散50分钟；
(4)将制备好的纳米炭制剂在115度的温度下灭菌30min，即得。
实施例5
(1)将卡波姆2.0重量份、海藻酸钠0.1重量份、羟乙基纤维素0.2重量份体分散到水中溶胀15小时后，均质30分钟；
(2)将聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯0.5重量份、山梨醇酐单油酸酯0.3重量份、脂肪醇聚氧乙烯醚0.1重量份、果糖2.0重量份、甘油0.2重量份加入到50℃的温水中溶解，搅拌10分钟后调节pH值至8.0；
(3)将150nm纳米炭1.0、500nm纳米炭0.4重量份加到步骤二的溶液中，在3000转速/分钟的条件下高速乳化分散40分钟；
(4)将制备好的纳米炭制剂在115度的温度下灭菌30min，即得。
实施例6
(1)将卡波姆1.0重量份、黄原胶0.2重量、羧甲基纤维素钠0.2重量份体分散到水中溶胀24小时后，均质10分钟；
(2)将山梨醇酐单油酸酯0.1重量份、脂肪醇聚氧乙烯醚0.1重量份、聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯0.5重量份、果糖2.0重量份、氯化钠0.4重量份加入到65℃的温水中溶解，搅拌15分钟后调节pH值至7.0；
(3)将120nm纳米炭0.5、350nm纳米炭0.5重量份加到步骤二的溶液中，在5000转速/分钟的条件下高速乳化分散30分钟；
(4)将制备好的纳米炭制剂在115度的温度下灭菌30min，即得。
实施例7
(1)将卡波姆0.2重量份、羟乙基纤维素0.2重量份、泊洛沙姆0.5重量份分散到水中溶胀14小时后，均质30分钟；
(2)将山梨醇酐单油酸酯0.2重量份、脂肪醇聚氧乙烯醚0.5重量份、聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯1.2重量份、甘油1.0重量份、氯化钠0.4重量份加入到80℃的温水中溶解，搅拌15分钟后调节pH值至9.0；
(3)将180nm纳米炭1.0、450nm纳米炭1.0重量份加到步骤二的溶液中，在6000转速/分钟的条件下高速乳化分散50分钟；
(4)将制备好的纳米炭制剂在115度的温度下灭菌30min，即得。
实施例8
(1)将卡波姆1.0重量份、泊洛沙姆0.2重量份、黄原胶0.1重量份分散到水中溶胀15小时后，均质15分钟；
(2)将山梨醇酐单油酸酯0.5重量份、脂肪醇聚氧乙烯醚0.1重量份、聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯2.0重量份、氯化钠0.9重量份加入到60℃的温水中溶解，搅拌5分钟后调节pH值至6.0；
(3)将200nm纳米炭1.0、350nm纳米炭3.0重量份加到步骤二的溶液中，在3000转速/分钟的条件下高速乳化分散20分钟；
(4)将制备好的纳米炭制剂在115度的温度下灭菌30min，即得。
实验例1稳定性试验
试验组：实施例1制备用于标记的纳米炭制剂
对照组：市售纳米炭制剂
温度37℃
时间：1个月、3个月、6个月、12个月
表1不同时间实验组和对照组炭的沉降率
1个月 3个月 6个月 12个月 试验组 0.5％ 1.2％ 1.8％ 2.9％ 对照组 3.2％ 6.7％ 11.8％ 18.7％
实验结果表明：实验组在1个月、3个月、6个月、12个月的时间内炭的沉降率为0.5％、1.2％、1.8％、2.9％；对照组在1个月、3个月、6个月、12个月的时间内炭的沉降率为3.2％、6.7％、11.8％、18.7％。在温度37℃的条件下放置12个月，本发明提供的用于标记的纳米炭制剂炭的沉降率仅为2.9％，而市售纳米炭制剂炭的沉降率多达18.7％。因此本发明提用于标记的纳米炭制剂非常稳定，比目前市面产品有很大优势。
实验例2用于肿瘤的标记情况
试验组：实施例1制备用于标记的纳米炭制剂
对照组：市售纳米炭制剂
试验对象：胃部肿瘤
时间：10天、30天、60天、90天
表2不同时间实验组和对照组对肿瘤标记情况
10天 30天 60天 90天 试验组 非常明显 非常明显 非常明显 明显 对照组 明显 明显 不明显 不明显
实验结果表明：实验组在10天、30天、60天、90天的时间对肿瘤的标记情况分别为非常明显、非常明显、非常明显、明显；对照组在10天、30天、60天、90天的时间对肿瘤的标记情况分别为明显、明显、不明显、不明显。在90天的时间内，本发明提供的用于标记的纳米炭制剂对肿瘤的标记情况非常明显，而市售纳米炭制剂对肿瘤的标记情况则不明显，因此本发明提用于标记的纳米炭制剂对肿瘤的标记非常明显，比目前市面产品有很大优势
以上对本发明的实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。