一种具有抗炎活性的药物组合物及其应用.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201510395480.0 (22)申请日 2015.07.07 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 105030754 A (43)申请公布日 2015.11.11 (73)专利权人 中国药科大学 地址 210009 江苏省南京市童家巷24号 (72)发明人 李萍 刘鄂湖 刘乐乐 王珍 (74)专利代理机构 江苏圣典律师事务所 32237 代理人 王玉国 (51)Int.Cl. A61K 31/352(2006.01) A61P 29/00(2006.01) A6。

2、1K 31/12(2006.01) (56)对比文件 CN 1840162 A,2006.10.04, Wilson Maldonado-Rojas,et alPotential interaction of natural dietary bioactive compounds with COX-2. Journal of Molecular Graphics and Modelling .2011,第30卷第157-166页. Wilson Maldonado-Rojas,et alFood- Related Compounds That Modulate Expression of In。

3、ducible Nitric Oxide Synthase May Act as Its Inhibitors. Molecules .2012,第17卷第8118-8135页. Sruthi.H.V,et alInsilico evaluation of Anti-inflammatory activity of Natural compounds against Modeled COX2. Journal of Pharmacy Research .2012,第5卷(第2期), 第1091-1097页. 审查员 贺伊博 (54)发明名称 一种具有抗炎活性的药物组合物及其应用 (57)摘要 。

4、本发明提供了一种具有抗炎活性的药物组 合物。 该具有抗炎活性的药物组合物的组分包括 异黄酮和姜酚， 所述异黄酮和姜酚的摩尔比为8 1-1 4。 本发明还提供了上述的具有抗炎活性的 药物组合物在作为治疗和/或预防炎症的药物中 的应用。 本发明的具有抗炎活性的药物组合物的 组分之间具有良好的协同抗炎作用， 能产生比单 体药物更好的生物学效应， 从而可以降低给药剂 量， 具有良好的临床用药开发前景。 权利要求书1页 说明书8页 附图5页 CN 105030754 B 2017.08.22 CN 105030754 B 1.一种具有抗炎活性的药物组合物， 其组分包括异黄酮和姜酚， 所述异黄酮为染料木 。

5、素或鹰嘴豆芽素A， 所述姜酚为6-姜酚； 该药物组合物的组分为染料木素和6-姜酚时， 所述染料木素和6-姜酚的摩尔比为8 1- 1 2； 该药物组合物的组分为鹰嘴豆芽素A和6-姜酚， 所述鹰嘴豆芽素A和6-姜酚的摩尔比为 4 1-1 4。 2.根据权利要求1所述的具有抗炎活性的药物组合物， 其特征在于： 所述染料木素和6- 姜酚的摩尔比为8 1、 4 1、 2 1、 1 1或1 2。 3.根据权利要求1所述的具有抗炎活性的药物组合物， 其特征在于： 所述鹰嘴豆芽素A 和6-姜酚的摩尔比为4 1、 2 1、 1 1、 1 2或1 4。 4.根据权利要求1所述的具有抗炎活性的药物组合物， 其特征在。

6、于： 该药物组合物的组 分中还包含一种或多种药学上可接受的辅料或赋形剂； 其中， 异黄酮的浓度为0.01-25 M， 姜酚的浓度为0.01-50 M。 5.权利要求1-4任一项所述的具有抗炎活性的药物组合物在制备作为治疗和/或预防 炎症的药物中的应用。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 105030754 B 2 一种具有抗炎活性的药物组合物及其应用 技术领域 0001 本发明涉及一种具有抗炎活性的药物组合物及其应用， 属于天然药物技术领域。 背景技术 0002 炎症是机体对感染的一种防御反应， 正常生理条件下， 炎症对机体是有益的。 在病 理条件下， 炎症也会引起一系列病理变化， 会。

7、对机体造成损伤， 如关节炎、 败血症和动脉粥 样硬化等。 当机体受到损伤时， 巨噬细胞作为第一道免疫防线， 会释放出一系列细胞炎症因 子， 包括肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNF)、 白细胞介素(Interleukin,IL)、 前 列腺素2(Prostaglandin E2,PGE2)以及一氧化氮(Nitric oxide,NO)等， 这些炎症因子对 机体的修复过程具有重要影响。 0003 NO作为机体内重要的生物信号分子， 在炎症过程中具有双重作用： 炎症反应初期， 机体内源性NO由一氧化氮合酶(Nitric oxide synthase,NOS)催化L-精氨。

8、酸(L-arginine, L-Arg)合成， 对炎症有一定的抑制作用； 而在炎症反应后期， 诱导型一氧化氮合酶(Induced nitric oxide synthase,iNOS)诱导生成大量NO参与炎症反应， 此时NO具有细胞毒作用， 可 造成组织损伤。 发明内容 0004 鉴于现有技术的情况， 本发明的目的是提供一种具有抗炎活性的药物组合物及其 应用， 组合物内组分能够起到协同抗炎的作用。 0005 本发明的目的通过以下技术方案得以实现： 0006 一种具有抗炎活性的药物组合物， 其组分包括异黄酮和姜酚， 所述异黄酮和姜酚 的摩尔比为8 1-1 4。 0007 本发明的具有抗炎活性的药。

9、物组合物， 通过抑制炎症因子NO的释放， 起到协同抗 炎的作用。 0008 上述的具有抗炎活性的药物组合物中， 优选的， 所述异黄酮包括染料木素或鹰嘴 豆芽素A， 但不限于此。 0009 上述的具有抗炎活性的药物组合物中， 优选的， 所述姜酚包括6-姜酚， 但不限于 此。 0010 上述的具有抗炎活性的药物组合物中， 优选的， 该药物组合物的组分包括染料木 素和6-姜酚， 所述染料木素和6-姜酚的摩尔比为8 1-1 2。 0011 上述的具有抗炎活性的药物组合物中， 优选的， 所述染料木素和6-姜酚的摩尔比 为8 1、 4 1、 2 1、 1 1或1 2。 0012 上述的具有抗炎活性的药物组。

10、合物中， 优选的， 该药物组合物的组分包括鹰嘴豆 芽素A和6-姜酚， 所述鹰嘴豆芽素A和6-姜酚的摩尔比为4 1-1 4。 0013 上述的具有抗炎活性的药物组合物中， 优选的， 所述鹰嘴豆芽素A和6-姜酚的摩尔 比为4 1、 2 1、 1 1、 1 2或1 4。 说 明 书 1/8 页 3 CN 105030754 B 3 0014 上述的具有抗炎活性的药物组合物中， 优选的， 该药物组合物的组分中还包含一 种或多种药学上可接受的辅料或赋形剂； 其中， 异黄酮的浓度为0.01-25 M， 姜酚的浓度为 0.01-50 M。 0015 上述的具有抗炎活性的药物组合物是通过常规方案将组分混合制备。

11、得到的。 0016 本发明还提供上述的具有抗炎活性的药物组合物在作为治疗和/或预防炎症的药 物中的应用。 0017 上述的应用中， 具有抗炎活性的药物组合物可以进一步制成各种剂型的药品或保 健品。 0018 本发明中， 染料木素(分子式C15H10O5， 分子量为270.24)和鹰嘴豆芽素A(C16H12O5， 分子量为284.26)主要存在于豆科， 6-姜酚(C17H26O4， 分子量为294.39)主要存在于姜科， 这 三种天然化合物均具有抗炎、 抗肿瘤等药理活性， 通过对它们分别进行组合配伍， 能够得到 具有协同抗炎作用的药物组合物， 这为治疗炎症组织损伤提供了新的思路和选择。 0019。

12、其中， 染料木素的结构式为： 0020鹰嘴豆芽素A的结构式为： 00216-姜酚的结构式为： 0022 本发明的突出效果为： 0023 本发明的药物组合物的组分之间具有良好的协同抗炎作用， 能产生比单体药物更 好的生物学效应， 从而可以降低给药剂量， 具有良好的临床用药开发前景。 附图说明 0024 图1为本发明实施例的染料木素和6-姜酚摩尔比为8:1配伍组合时的抑制效应-联 合用药指数曲线图； 0025 图2为本发明实施例的染料木素和6-姜酚摩尔比为4:1配伍组合时的抑制效应-联 合用药指数曲线图； 0026 图3为本发明实施例的染料木素和6-姜酚摩尔比为2:1配伍组合时的抑制效应-联 合用。

13、药指数曲线图； 0027 图4为本发明实施例的染料木素和6-姜酚摩尔比为1:1配伍组合时的抑制效应-联 合用药指数曲线图； 0028 图5为本发明实施例的染料木素和6-姜酚摩尔比为1:2配伍组合时的抑制效应-联 合用药指数曲线图； 0029 图6为本发明实施例的鹰嘴豆芽素A和6-姜酚摩尔比为4:1配伍组合时的抑制效 说 明 书 2/8 页 4 CN 105030754 B 4 应-联合用药指数曲线图； 0030 图7为本发明实施例的鹰嘴豆芽素A和6-姜酚摩尔比为2:1配伍组合时的抑制效 应-联合用药指数曲线图； 0031 图8为本发明实施例的鹰嘴豆芽素A和6-姜酚摩尔比为1:1配伍组合时的抑制。

14、效 应-联合用药指数曲线图； 0032 图9为本发明实施例的鹰嘴豆芽素A和6-姜酚摩尔比为1:2配伍组合时的抑制效 应-联合用药指数曲线图； 0033 图10为本发明实施例的鹰嘴豆芽素A和6-姜酚摩尔比为1:4配伍组合时的抑制效 应-联合用药指数曲线图。 具体实施方式 0034 为了对本发明的技术特征、 目的和有益效果有更加清楚的理解， 现对本发明的技 术方案进行以下详细说明， 但不能理解为对本发明的可实施范围的限定。 下述实施例中所 述实验方法， 如无特殊说明， 均为常规方法； 所述试剂和材料， 如无特殊说明， 均可从商业途 径获得。 0035 实施例 0036 本实施例提供一种药物组合物，。

15、 其组分包括异黄酮和姜酚， 所述异黄酮为染料木 素或鹰嘴豆芽素A， 所述姜酚为6-姜酚。 0037 当该药物组合物组分为包括染料木素和6-姜酚时， 染料木素和6-姜酚的摩尔比分 别为8 1、 4 1、 2 1、 1 1和1 2； 0038 当该药物组合物组分为包括鹰嘴豆芽素A和6-姜酚时， 鹰嘴豆芽素A和6-姜酚的摩 尔比分别为4 1、 2 1、 1 1、 1 2和1 4。 0039 本实施例的药物组合物是通过将染料木素和6-姜酚或者将鹰嘴豆芽素A和6-姜酚 简单混合制备得到的。 0040 1、 对本实施例的药物组合物进行体外抗炎活性实验： 0041 (1)仪器与试剂： 0042 染料木素(成。

16、都曼斯特生物技术有限公司生产) 0043 鹰嘴豆芽素A(成都曼斯特生物技术有限公司生产) 0044 6-姜酚(成都曼斯特生物技术有限公司生产) 0045 脂多糖(LPS， 美国Sigma-Aldrich公司生产) 0046 N-(1-萘基)乙二胺二盐酸盐(国药集团化学试剂有限公司生产) 0047 磺胺(国药集团化学试剂有限公司生产) 0048 磷酸(南京化学试剂有限公司生产) 0049 酶标仪(基因有限公司生产) 0050 BT25S十万分之一电子天平(德国sartorius公司生产)； 0051 (2)NO含量抑制率的测定： 0052 测定方法： Griess法， 该方法是经典的检测NO的方。

17、法； 其原理为： NO在体内极易氧 化成NO2-， 在酸性条件下， NO2-与重氮盐磺胺发生重氮化反应， 生成重氮化合物， 后者进一步 与N-(1-萘基)乙二胺发生耦合反应， 该反应产物浓度和NO2-浓度呈线性关系， 在540nm处有 说 明 书 3/8 页 5 CN 105030754 B 5 最大吸收峰。 0053 操作步骤： 取培养细胞上清液100 L， 加入等体积Griess试剂充分混合， 避光静置 反应10min后， 在酶标仪上测定540nm处吸光度， 用亚硝酸钠标准曲线计算培养上清液中NO 含量。 0054 NO含量抑制率按下式计算： 0055 NO含量抑制率()1-(给药组-对照。

18、组)/(造模组-对照组)100 0056 本实施例的药物组合物的实验结果如下表1-9所示。 0057 表1(染料木素单独给药时的抑制率及IC50)、 表2(鹰嘴豆芽素A单独给药时的抑制 率及IC50)和表3(6-姜酚单独给药时的抑制率及IC50)分别是染料木素、 鹰嘴豆芽素A和6- 姜酚单独给药时对NO含量的抑制效果， 结果显示抑制率随给药浓度的增加呈现浓度依赖 性， 其中染料木素的IC50约为10.83 M， 鹰嘴豆芽素A的IC50约为9.865 M， 6-姜酚的IC50约 为197.9 M(超出6-姜酚的安全给药范围)。 0058 表1 0059 0060 表2 0061 0062 表3 。

19、0063 说 明 书 4/8 页 6 CN 105030754 B 6 0064 0065 表4(染料木素和6-姜酚按8:1和4:1配伍组合时的抑制率)、 表5(染料木素和6-姜 酚按2:1和1:1配伍组合时的抑制率)和表6(染料木素和6-姜酚按1:2配伍组合时的抑制率) 分别是染料木素和6-姜酚按8:1， 4:1， 2:1， 1:1及1:2配伍组合时对NO含量的抑制情况， 结果 发现抑制率随着配伍浓度的增加呈现浓度依赖性。 0066 表4 0067 0068 表5 0069 0070 表6 0071 说 明 书 5/8 页 7 CN 105030754 B 7 0072 0073 表7(鹰嘴。

20、豆芽素A和6-姜酚按4:1和2:1配伍组合时的抑制率)、 表8(鹰嘴豆芽素A 和6-姜酚按1:1和1:2配伍组合时的抑制率)和表9(鹰嘴豆芽素A和6-姜酚按1:4配伍组合时 的抑制率)分别是鹰嘴豆芽素A和6-姜酚按4:1， 2:1， 1:1， 1:2及1:4配伍组合时对NO含量的 抑制情况， 结果发现抑制率随着配伍浓度的增加呈现浓度依赖性。 0074 表7 0075 0076 表8 0077 0078 表9 0079 0080 0081 2、 对本实施例的药物组合物中包含的药物组分配伍组合进行联合给药效应分析： 说 明 书 6/8 页 8 CN 105030754 B 8 0082 (1)分析。

21、方法： 采用Chou-Talalay联合指数法进行两种药物配伍组合时的联合效 应分析， 根据联合作用指数(Combination index， CI)公式进行计算， 该公式如下： 0083 0084 其中， D为2个药物组合给药产生效应X(FaX)时， 组合中单个药物的剂量； 0085 Dx为单个药物给药产生效应X(FaX)时的剂量。 0086 应用CombiDrug统计软件绘制效应-联合指数曲线(Fa-CI曲线)， 从两药联合作用 指数的关系图表可以评价两药合用时的作用关系： CI1， 产生拮抗作用； CI1， 产生加和作 用； CI1， 产生协同作用。 Chou-Talalay联合指数法对。

22、CI值进行了效应分级， 如表10所示。 0087 表10 0088 0089 (2)对本实施例的药物组合物中的染料木素和6-姜酚配伍组合进行联合给药效应 分析， 结果如表11(染料木素和6-姜酚配伍组合时的CI指数)和图1-图5所示。 0090 对本实施例的药物组合物中的鹰嘴豆芽素A和6-姜酚配伍组合进行联合给药效应 分析， 结果如表12(鹰嘴豆芽素A和6-姜酚配伍组合时的CI指数)和图6-图10所示。 0091 表11 0092 0093 0094 表12 说 明 书 7/8 页 9 CN 105030754 B 9 0095 0096 经过分析， 本述的两组药物组合物配伍均具有协同抗炎作用。

23、， 由表11可见， 染料木 素和6-姜酚在摩尔浓度比为8:1-1:2范围内均具有协同效应， 尤其在两者浓度比为1:1时协 同效应最强； 由表12显示， 鹰嘴豆芽素A和6-姜酚在摩尔浓度比为4:1-1:4范围内均具有一 定协同效应， 尤其在两者浓度比为1:1时协同效应最强。 0097 由上可见， 本实施例的药物组合物中的组分具有良好的协同抗炎作用， 尤其在低 剂量配伍时， 能产生比单体药物更好的生物学效应， 从而可以降低给药剂量， 具有良好的临 床用药开发前景。 说 明 书 8/8 页 10 CN 105030754 B 10 图1 图2 说 明 书 附 图 1/5 页 11 CN 105030754 B 11 图3 图4 说 明 书 附 图 2/5 页 12 CN 105030754 B 12 图5 图6 说 明 书 附 图 3/5 页 13 CN 105030754 B 13 图7 图8 说 明 书 附 图 4/5 页 14 CN 105030754 B 14 图9 图10 说 明 书 附 图 5/5 页 15 CN 105030754 B 15 。