技术领域
本发明涉及适合肠胃外给予的药物组合物，其含有2-芳基丙酸的烷基 铵盐并且注射后无痛。具体地说，本发明的组合物含有酮洛芬、布洛芬或 萘普生的碱性水溶液。
发明背景
给予肠胃外产品的一个常见缺陷是注射部位疼痛，这可能是活性药 物、配方成分或者整个配方所引起的。研制肠胃外产品过程中注意力主 要集中在配方的化学、物理和微生物稳定性以及整体安全性方面，而从 给药途径来看，注射部位疼痛是可注射药物配方的一个不好特性，受到 的关注很少。这主要是因为缺少一定数量和类型的模型进行疼痛生理学 和机理的研究，使用动物模型评估疼痛涉及一定的困难、变化和费用， 而且评估动物或人的疼痛程度需要用到主观与客观测量(通常涉及大量的 实验设备)。
一给定配方可能会引起组织损伤，导致注射部位疼痛；此时，毒性筛 选方法如红血球细胞溶解，或者L6成肌细胞系方法，或者啮齿动物体内 肌肉模型能够提供一个合理方法，就所希望的理化性质和组织耐受性研 究和选择最佳配方(Brazeau G.A.等人，“Current perspectives on pain upon injection of drug”，Journal of Parm.Sciences，87，6，June 1998)。
相反，如果注射部位没有任何类型的组织损伤，在人体测试任何可注 射配方之前，采用一些方法在研制早期阶段筛选配方评估它们是否可能 引起疼痛是有益的。
其中一种方法是大鼠爪子拍打(paw-lick)模型，用此模型来快速体内筛 选肠胃外产品，但得到的所有结果未必总是能够在以后用临床数据加以确 认。
发明内容
在我们对动物进行的实验中，我们发现，与单独滴入注射用水相比， 将含有酮洛芬的不同pH值和成分的溶液滴入大鼠眼睛内，动物不停眨眼 作出反应。假设眨眼与注射产生的疼痛有一定程度的相关性，那么大鼠 眨眼试验可用作另一个动物模型，评估可注射药物组合引起的疼痛程度。
评估人在给予可注射溶液后疼痛量的一种公知临床方法是利用VAS (视觉类比评分法)分值作为指标(Scott and Huskinsson，Pain，2：175-184， 1976)。VAS分值是一种对刚注射后或注射后一段时间人的注射部位疼痛 强度的评估，结果以100mm视觉类比评分表示。
所以，用两种适宜pH值的可注射酮洛芬组合物进行临床研究，在大 鼠眨眼试验中均发现疼痛减轻。将酮洛芬磷酸盐缓冲液(pH6.5)的典型配 方与市售制剂“Artrosilene fiale”进行比较，评估注射疼痛，所述 “Artrosilene fiale”是注射安瓿(Dompéfarmaceutici S.p.A.)，含有酮洛芬赖 氨酸盐水溶液(用柠檬酸和氢氧化钠调pH为7至7.5之间)，但不含有通 常用在可注射配方中以减轻注射疼痛的共溶剂如苯甲醇(WO 97/24114)。
已经知道，“Artrosilene fiale”相对于酮洛芬典型配方能减轻注射疼 痛。
我们已经发现，含有2-芳基丙酸(如酮洛芬、布洛芬、萘普生或噻洛 芬酸)烷基铵盐的碱性水溶液的肠胃外给药型组合物不会引起注射疼痛。
因此，本发明提供一种适合肠胃外给予的抗炎和止痛药物组合物，其 特征在于，它含有以外消旋或对映体形式存在的2-芳基丙酸的烷基铵盐 水溶液，所述2-芳基丙酸选自酮洛芬、布洛芬、萘普生或噻洛芬酸，所 述水溶液的pH为8-9范围内且不含防腐剂、共溶剂和辅助物质。
优选的组合物含有酮洛芬L-赖氨酸盐。
更优选的组合物含有酮洛芬L-赖氨酸盐、碳酸氢钠和氢氧化钠，pH 值为8.5。
附图说明
图1为第一个实验的pH-反应曲线。
图2为第二个实验的pH-反应曲线。
图3为注射KSL溶液后大鼠眨眼次数与VAS之间的关系。
具体实施方式
已经制成了具有不同pH值的各种酮洛芬L-赖氨酸盐水溶液配方，在 上述的大鼠眨眼试验中进行了测试。从此试验中筛选出合适的配方，与 pH6.5的酮洛芬典型配方以及与市售酮洛芬制剂“Artrosilene fiale”进行 比较。pH值在8至9范围内的溶液不会引起任何注射疼痛，在此点上比 Artrosilene更好。
已经发现，大鼠眨眼试验和基于VAS评分的临床试验有一定关系。
表1列出实验所用的材料：
表1
所有测试配方都是8％酮洛芬L-赖氨酸盐水溶液。用1N NaOH溶液 或35％盐酸溶液调节pH值，制成了具有不同pH值的溶液。一些制剂中 还加入了4mg/mL碳酸氢钠。
从原有的安瓿和瓶子中取出Artrosilene和0.9％NaCl溶液，包装装 入带有聚合物盖和铝环的黑色玻璃小瓶中。表2和表3列出两个不同实 验中所测试配方的具体成分、pH值和渗透压摩尔浓度。
表2-第一个实验 批号 成分 pH 渗透压摩尔浓度 (mOsmol/kg) PG054/34/SU01 KSL+HCl 7.0 308 PG054/35/SU01 KSL 7.2 267 PG054/36/SU01 KSL+NaOH 8.0 289 PG054/37/SU01 KSL+NaOH 9.0 333 PG054/38/SU01 KSL+NaOH 9.5 403 PG054/53/SU01 KSL+NaOH 8.5 382 PG054/45/SU01 KSL+NaHCO3 7.0 359 PG054/46/SU01 KSL+NaHCO3+NaOH 7.5 351 PG054/47/SU01 KSL+NaHCO3+NaOH 8.0 358 PG054/48/SU01 KSL+NaHCO3+NaOH 8.5 382 PG054/49/SU01 KSL+NaHCO3+NaOH 9.0 395 PG054/50/SU01 KSL+NaHCO3+NaOH 9.5 455
表3-第二个实验 批号 成分 pH 渗透压摩尔浓度 (mOsmol/kg) PG054/62/SU01 KSL+NaHCO3+HCl 7.0 356 PG054/63/SU01 KSL+HCl 7.0 276 PG054/64/SU01 KSL+NaHCO3+NaOH 8.0 362 PG054/65/SU01 KSL+NaOH 8.0 282 PG054/66/SU01 KSL+NaHCO3+NaOH 9.0 399 PG054/67/SU01 KSL+NaOH 9.0 336 PG054/70/SU01 KSL+NaOH 7.5 268 PG054/71/SU01 KSL+NaOH 8.5 301 PG054/72/SU01 KSL+NaOH 9.5 405 PG054/75/SU01 KSL+NaHCO3+NaOH 7.5 354 PG054/76/SU01 KSL+NaHCO3+NaOH 8.5 384 PG054/77/SU01 KSL+NaHCO3+NaOH 9.5 463
动物
实验所用的动物描述如下：
物种：大鼠
品系：Sprague-Dawley
供给者：Charles-River(Calco，LC，意大利)
性别：雄性
周龄：5-7周
到达时体重：176-200克
到达时每个笼有5只动物(Makrolon 3G type，Tecniplast Gazzada S.r.l.，Buguggiate，VA，意大利)，让它们在动物房间适应新环境至少6 天。
白杨和冷杉碎片经加热处理去除树脂和去尘后用来作动物草垫。
树木中不带有可能影响到本研究目的的污染物。
动物房间温度维持在20℃±2，相对湿度维持在55％±10。
房间照明：12小时人造光源(上午7.00到下午7.00)，12小时黑暗(下 午7.00到上午7.00)。
动物以来自意大利米兰的Laboratorio Dottori Piccioni，Gessate的小丸 喂饲。根据供应商的分析说明书，污染物含量处于EPA-TSCA提出的极 限范围内(44Fed.Reg.44053-44093July 26，1979)。
无论是喂给动物的食物或水中都不带有可能会影响本研究目的的污 染物。
在适应期内食物和水随意供给。
将不同酮洛芬配方滴入每只动物的眼睛，每次均测定固定时间内眨眼 次数。全部实验都用Gilson吸液管将每一配方25μL滴入大鼠眼睛内。
配方
酮洛芬L-赖氨酸盐 160mg
碳酸氢钠 8mg
氢氧化钠 3mg
适量注射用水 2ml
制备方法
在1.6ml注射用水中加入160mg酮洛芬L-1赖氨酸盐和3mg氢氧化 钠。然后在该溶液中加入碳酸氢钠(8mg)，再加入注射用水至2ml。
实施例1
大鼠眨眼试验
每个实验第一阶段，分别将每一配方25μL滴入大鼠左眼内。在第二 阶段，分别将每一配方25μL滴入该大鼠右眼内。
计算各阶段大鼠在滴入配方15秒内眨眼次数(以记时器计算时间)。
两个实验相隔8天。
表4和表5列出第一个实验的结果。图1所示为第一个实验观察到的 pH-反应曲线。
表6和表7列出第二个实验的结果。图2所示为第二个实验观察到的 pH-反应曲线。
表4-第一个实验第一阶段 批号 成分 pH 渗透压摩尔浓度 (mOsmol/kg) 滴入15秒后平 均眨眼次数 标准 误差 PG054/34 KSL+HCl 7.0 308 7.75 1.4 PG054/35 KSL 7.2 267 7.25 1.6 PG054/36 KSL+NaOH 8.0 289 1.71 0.4 PG054/37 KSL+NaOH 9.0 333 1.14 0.3 PG054/38 KSL+NaOH 9.5 403 4.13 1.1 PG054/53 KSL+NaOH 8.5 301 0.2 0.2 PG054/40 Artrosilene fiale 7.3 308 9.25 1.9 PG054/41 NaCl - - 0.83 0.4
表5-第一个实验第二阶段 批号 成分 pH 渗透压摩尔浓度 (mOsmol/kg) 滴入15秒后平 均眨眼次数 标准 误差 PG054/45 KSL+NaHCO3 7.0 359 5.1 1.0 PG054/46 KSL+NaHCO3+ NaOH 7.5 351 3.0 0.8 PG054/47 KSL+NaHCO3+ NaOH 8.0 358 1.5 0.3 PG054/48 KSL+NaHCO3+ NaOH 8.5 382 2.1 0.8 PG054/49 KSL+NaHCO3+ NaOH 9.0 395 3.1 0.7 PG054/50 KSL+NaHCO3+ NaOH 9.5 455 6.1 1.4 PG054/51 Artrosilene fiale 7.4 307 9.6 2.5 PG054/52 NaCl - - 1.2 0.6
表6-第二个实验第一阶段 批号 成分 pH 渗透压摩尔浓度 (mOsmol/kg) 滴入15秒后 平均眨眼次数 标准 误差 PG054/62 KSL+NaHCO3+HCl 7.0 356 5.9 0.8 PG054/63 KSL+HCl 7.0 276 6.8 1.0 PG054/64 KSL+NaHCO3+NaOH 8.0 362 2.0 0.4 PG054/65 KSL+NaOH 8.0 282 4.1 1.3 PG054/66 KSL+NaHCO3+NaOH 9.0 399 3.0 0.5 PG054/67 KSL+NaOH 9.0 336 1.9 0.6 PG054/68 Artrosilene fiale 7.3 - 10.3 1.7 PG054/69 NaCl - - 0.4 0.2
表7-第二个实验第二阶段 批号 成分 pH 渗透压摩尔浓度 (mOsmol/kg) 滴入15秒后 平均眨眼次数 标准 误差 PG054/70 KSL+NaOH 7.5 268 7.8 1.3 PG054/71 KSL+NaOH 8.5 301 1.9 0.5 PG054/72 KSL+NaOH 9.5 405 3.5 0.8 PG054/73 Artrosilene fiale 7.3 282 8.8 1.7 PG054/74 NaCl - 308 0.6 0.2 PG054/75 KSL+NaHCO3+NaOH 7.5 354 2.5 0.6 PG054/76 KSL+NaHCO3+NaOH 8.5 384 3.0 0.4 PG054/77 KSL+NaHCO3+NaOH 9.5 463 9.6 2.2
实施例2
VAS评估
除了临床试验KLS 0497由Aster临床研究中心(法国巴黎)，临床试验 KLS 0101由I.P.A.S.S.A.(瑞士，Ligornetto)进行之外，其余全部临床试验 都由LCG(英国剑桥，Bourn Hall Clinic)进行。
每次治疗包括在臀大肌外上侧四分之一处深度肌内注射一安瓿测试 配方。每次注射在制成注射器10分钟内进行，注射持续3-5秒。由受试 者评估注射部位疼痛强度并以100mm视觉类比评分法记录在病例报告 表格中。
通过Windows 95的STAT1001.26版进行统计学研究。
用复制/粘贴功能将数据输入微软Excel的统计软件内，打印，开始 统计前人工检查。
所有变量用N、平均值、标准方差、平均值标准误差描述。
用“t-检验”比较参考化合物(Artrosilene)与盐水，验证测试功效。
进行ANOVA(单向重复测量)比较酮洛芬的pH-反应曲线。应用 Dunnett′s检验。
表8列出得到的结果，其中比较了VAS分值与大鼠眨眼次数。
事实上，我们的实验证实了大鼠眨眼次数与VAS(视觉类比评分法) 分值是有关系的。
表8简要列出不同配方(相关成分见表9)所获得的结果。注射后立即 计算VAS分值，将配方滴入大鼠眼睛15秒后计算大鼠眨眼次数。
表8 配方* 临床编号 病人 数目 平均VAS 分值±S.D. VAS≥50的 病人数目 VAS≥75的 病人数目 平均眨 眼次数 KSL+Phosphate buffer pH6.5 KSL0199 48 47.3±26.3 22(45.83％) 7(14.58％) 24.6 Artrosilene fiale pH7.0 KSL0196 18 46.9±25.6 9(50％) 4(22.22％) 9.49 Artrosilene fiale pH7.0 KSL0396 17 45.3±23.5 7(41.18％) 3(17.65％) Artrosilene fiale pH7.0 KSL0497 31 42.9±21.2 12(38.71％) 3(9.68％) Artrosilene fiale pH7.0 KSL0199 44 40.0±27.0 15(34.09％) 6(13.64％) KSL+NaHCO3 pH8.0 KSL0100 12 35.0±25.3 4(33.33％) 1(8.33％) 2.45 KSL+NaHCO3 PH8.5 KSL0101 32 20.4±16.2 2(6.25％) 0 1.9
表9-配方成分 KSL+磷酸盐缓冲液 pH6.5 Artrosilene fiale pH7.0 KSL+NaHCO3 pH8.0 KSL+NaHCO3 pH8.5 KSL 160mg KSL 160mg KSL 160mg KSL 160mg NaH2PO4·H2O 35.88mg 无水柠檬酸5mg NaHCO3 4mg NaHCO3 8mg 适量NaOH，至pH6.5 适量NaOH，至 pH7.0 适量NaOH，至 pH8.0 适量NaOH，至 pH8.5 适量注射用水，至2mL 适量注射用水，至 2mL 适量注射用水，至 2mL 适量注射用水，至 2mL
图3所示为给予相同配方后VAS与大鼠眨眼次数间的关系。
实验测试了酮洛芬赖氨酸盐(KSL)水溶液配方(80mg/mL)和含有碳酸 氢钠(NaHCO3，4mg/mL)且pH值在7.0至9.5范围内的KSL配方(80 mg/mL)。参考标准使用Artrosilene ftiale和0.9％氯化钠水溶液。大鼠眨 眼试验结果表明，pH值处于研究范围极限值的配方，大鼠眨眼次数较高。
这些实验获得了凹形曲线，表示pH值处于中间范围的配方耐受性更 好(即眨眼次数更接近等渗盐水溶液的次数)。
KSL水溶液在pH值为8.5时VAS分值最低，pH值在8.0至9.5范围 内眨眼次数较少。
KSL+碳酸氢钠的水溶液在pH值为8.0时眨眼次数最少，pH值在7.5 至9.0范围内VAS分值较低。
重复实验，测试成分相同但批号不同的配方，两个实验都获得同样结 果。
对实验数据进行分析，我们观察到由pH值在8.0至9.0范围内的配 方(KSL溶液和KSL+碳酸氢钠溶液)所引起的眨眼次数同样地少。此pH 值范围对降低眨眼次数的作用是明显的。另一方面，渗透压摩尔浓度似 乎对眨眼次数无任何影响。
在研究第二阶段中，KSL配方的眨眼次数与用同一配方在人体测试 得到的VAS有关。已经发现相关系数R＝0.778，并注意到pH值越高的配 方，人的耐受性越好，VAS值越低。实际上，当配方的pH为8.5时，发 现它的平均VAS值(20.4)比Artrosilene fiale配方(平均值：43.8)低得多， 见表8。此外，用pH8.5配方治疗的病人中有6.25％的VAS值≥50，没有 病人的VAS值≥75，而注射了Artrosilene fiale的病人中有41％的VAS 值≥50，有15.8％的VAS值≥75。
如表8所示，从不同临床试验和不同临床中心得到的Artrosilene的 VAS值都是差不多。
这一结果还得到眨眼试验的确认。实际上，发现Artrosilene fiale的 眨眼次数为9.49，明显高于pH为8.5的配方获得的数值1.9。
综合考虑大鼠眨眼试验得到的结果以及VAS与眨眼次数之间的关 系，我们得出如下结论：pH值在8.0至9.0范围内的配方注射疼痛较轻。 注射后无痛的最佳配方是pH约8.5的配方水溶液。