技术领域
本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法，属中药领域。
背景技术
阴道炎是阴道粘膜及粘膜下结缔组织的炎症，是妇科门诊常见的疾病。阴道炎临床上以 白带的性状发生改变以及外阴疡痒灼痛为主要临床特点，常见的阴道炎有细菌性阴道炎、滴 虫性阴道炎、霉菌性阴道炎、老年性阴道炎。由于阴道与外界相通，常因经期或性生活卫生 不良，或因分娩及宫腔操作等因素引起阴道感染，甚至可使炎症侵袭内生殖器官。此外患有 糖尿病、B族维生素缺乏、卵巢功能衰退，某些过敏或感染性疾病者更易感染，致病病原体 常为霉菌、细菌、支原体、衣原体等，除老年性阴道炎外，滴虫性阴道炎、霉菌性阴道炎近 年来发病率有上升趋势。因此，探索一种治疗该类疾病的药物非常必要。
发明内容
本发明的目的是提供一种制备治疗湿热下注型霉菌性阴道炎或滴虫性阴道炎药中应用的 中药组合物及其制备方法；本发明的目的还在于提供一种中药组合物的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的：
首先是处方组成，包括如下重量份的原料药：
黄柏 350～450份 大黄 350～450份 丹参 350～450份 乳香 80～100份
没药 80～100份 紫草 350～450份 蛤壳 150～250份 冰片 15～25份
进一步研究后，确定其最佳组成为：
黄柏 400份 大黄 400份 丹参 400份 乳香(制) 90份
没药(制) 90份 紫草 400份 蛤壳 200份 冰片 20份
就该处方，发明认为可以制成临床所需的各种剂型，优选为栓剂。针对于此，发明人又 进行了工艺研究。为了制成栓剂，必须先将原处方进行提取精制，其过程如下：
取蛤壳粉碎成细粉，备用；黄柏、大黄用70％乙醇回流提取三次，第一次3小时，第二 次2小时，第三次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.12～1.15(50℃)，备用 。紫草、丹参用乙醇温浸(40～45℃)三次，第一次3天，第二、三次各2天，滤过，合并滤 液，减压浓缩至相对密度为1.12～1.15(40℃)，备用。乳香、没药蒸馏提取挥发油，水溶液 滤过，药渣再加水煎煮1.5小时，滤过，两次滤液与上述浓缩液合并后，减压浓缩至相对密 度为1.30～1.35(50℃)的稠膏，加入上述细粉，混匀，低温烘干，粉碎，得干膏粉，加入β -环糊精包结的挥发油与冰片，混匀，得到药物中间体。
进一步研究，发现以下述的工艺条件亦可实现：
取蛤壳粉碎成细粉，备用；黄柏、大黄、紫草、丹参用70％乙醇回流提取二次，每次2 小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.12～1.15(50℃)，备用。乳香、没药蒸馏 提取挥发油，水溶液滤过，药渣再加水煎煮1.5小时，滤过，两次滤液与上述浓缩液合并后 ，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(50℃)的稠膏，加入上述细粉，混匀，低温烘干，粉碎 ，得干膏粉，加入β-环糊精包结的挥发油与冰片，混匀，得到药物中间体。
用以上任何一种中间体，配以适宜的辅料，就可以压成栓剂。
为了有效控制本发明产品的质量，发明人还制定了质量控制方法，包括定性鉴别和含量 测定两部分，下面分别论述。
定性鉴别部分包含了如下的几种：
a.取本发明组合物制剂5～10g，加二氯甲烷20ml使溶解，加乙醇10ml，搅匀，加甲醇 300ml，振摇20分钟，冷冻1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加20ml热水使溶解，以乙醚提取三 次，每次20ml，合并乙醚液，用1％氢氧化钠提取三次，每次20ml，合并碱液，备用；余乙 醚液挥干，加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品，加醋酸乙酯制成每 1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点 于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在与对照 品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
b.取上述a项下的碱液，加盐酸调pH4～5，以乙醚提取三次，每次20ml，合并乙醚液， 挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取左旋紫草素对照品，加乙醇制成每1ml 含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2μl、对照品溶液5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60℃～90℃)-醋酸乙酯-甲酸(15∶3∶1) 的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同颜色的斑点。
c.另取大黄素与大黄酚对照品，加氯仿制成每1ml各含0.5mg的溶液，作为对照品溶液 。照薄层色谱法试验，吸取上述鉴别b项下的供试品溶液、大黄素与大黄酚对照品溶液各2μ l，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60℃～90℃)-醋酸乙酯-甲酸(15∶3∶1)的 上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置可见光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱 相应的位置上，显相同颜色的斑点。
d.取本发明组合物制剂5～10g，进行微量升华，升华物加无水乙醇0.5ml使溶解，作为 供试品溶液；另取冰片对照药材20mg，加乙醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱 法试验，吸取供试品溶液2～5μl、对照药材溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石 油醚(60℃～90℃)-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛的10 ％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上 ，显相同颜色的斑点。
含量测定方法如下：
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05mol/L磷 酸二氢钾的0.1％的磷酸溶液(25∶75)为流动相；检测波长265nm。理论板数按盐酸小檗碱 峰计应不低于2000。
对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含30μg 的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本发明组合物制剂1～2g，精密称定，置索氏提取器中，以石油 醚200ml提取3小时，石油醚液弃去；取出滤纸包，冷风吹干，置锥形瓶中，精密加1％盐酸 甲醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，以1％盐酸甲醇补足损失重量，滤过，取续滤液 25ml，蒸干，加水15ml使溶解，以乙醚提取三次，每次20ml，乙醚液弃去，余水液蒸干，加 甲醇2～5ml使溶解，加于中性氧化铝柱，以甲醇洗脱，收集洗脱液50ml混匀，精密吸取 25ml，蒸干，残渣加流动相使溶解，定量转移至l0ml容量瓶中，以0.45μm微孔滤膜滤过， 即得。
测定法 分别精密吸取对照品与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本组合物制剂每单位量含黄柏以盐酸小檗碱(C20H17NO4·HCl)计，不得少于2.0mg。
上述单位量是指含相当2g原药材的成品药剂量。
具体实施方式：
本发明药物制剂具有清热燥湿、杀虫止痒的功能，可用于湿热下注型霉菌性阴道炎、滴 虫性阴道炎的治疗。发明人根据其功能主治，从抗炎、抗阴道滴虫等方面对其药效学进行了 验证。
受试药物：按照本发明最优配比的二种不同工艺制得的制剂1、2号，含2g生药/枚的栓 剂。
妇炎消泡腾片：广州中一药业有限公司生产，批号：20030418。
仪器：PB303-N电子天平，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司。
动物：昆明种小鼠18～22g，雌雄兼用，由山东大学实验动物中心提供。
试验1：对二甲苯所致小鼠耳壳肿胀的影响
取小鼠40只，雌雄各半，随机分为四组，皮下注射本品制剂和阳性药，于第4天给药1h后左 耳壳滴二甲苯0.02ml/只，30min脱臼处死，用剪刀沿小鼠的耳廓基线剪下两耳，在同一部位用 0.6cm的穿孔器冲下耳片，两耳片称重求差，结果见表1。
表1对二甲苯所致小鼠耳壳肿胀的影响( X±S) 组别 剂量ml 动物数/只 两耳片重量差/μg 空白对照组 10 2.00±0.66 本品制剂1 10 1.20±0.41* 本品制剂2 10 1.30±0.17* 阳性药组 10 1.36±0.20*
注：与对照组相比*P＜0.05，**P＜0.01
表1结果表明，本品制剂对小鼠耳壳炎症有显著抑制作用。
试验2：体外杀阴道滴虫作用
从患者阴道分泌物中分离，接种于含有青、链霉素的肝-胨-糖培养基中，每4d转种1次，反 复接种4次，计数，使培养液中滴虫数达1万个/ml时，供试验用。培养基分4组，药物进行对倍稀 释，然后在每管肝-胨-糖培养基中加入0.1ml阴道毛滴虫培养液，于37℃下连续培养3d(每天在 光学显微镜下观察1次滴虫活动情况)，第3d，每管取0.1ml培养液，观察阴道滴虫数量及死亡情 况，结果见表2。
表2体外杀滴虫作用 组别 药液稀释倍数 1∶32 1∶16 1∶8 1∶4 1∶2 1∶1 空白对照组 + + + + + + 本品制剂1 + + + - - - 本品制剂2 + + + - - - 阳性药组 + + + + - -
注：+阴道滴虫运动、活泼，细胞有光泽，滴虫数量增加；-阴道滴虫已死，不能运动，细胞无 光泽，部分虫体裂解。
表2结果表明本品制剂对阴道滴虫有杀灭作用，药液稀释倍数为1∶4时可见滴虫死亡，部 分虫体裂解。
试验3：体外抑菌试验
本品制剂隔水于80℃水浴灭菌2h，将上述菌种接种于肉汤血清培养基中，于37℃下连续培 养18h，菌液中菌数达9亿个/ml，取肉汤培养基稀释至90万个/ml，供实验用。白色念珠菌增菌 培养达500万个/ml时，取出稀释至5万个/ml，备用。分别用巧克力血培养基、肉汤琼脂培养基 、血琼脂培养基、沙氏培养基制成培皿，在各菌株培皿之碟管中加制剂，进行培养，37℃下 18h后测抑菌圈，结果对链球菌抑制作用最强，次为白色念珠菌，见表3。
表3对白色念珠菌等抑制效果 菌株名称 抑菌圈(mm) 本品制剂1 本品制剂2 金葡菌 16.3±0.5 16.1±0.7 大肠杆菌 9.7±0.5 9.5±0.5 变形杆菌 10.0±0.8 9.8±0.4 链球菌 21.0±0.8 21.6±0.9 淋球菌 11.7±0.5 11.4±0.5 白念菌 20.0±0.8 20.5±0.6
试验结果表明：本品制剂体外对白色念珠菌有一定的抑制作用。
下面通过实施例来进一步说明本发明的技术方案：
实施例一
【处方】黄柏 350g 大黄 350g 丹参 350g 乳香 80g
没药 80g 紫草 350g 蛤壳 150g 冰片 15g
【制法】以上八味，取蛤壳粉碎成细粉，备用；黄柏、大黄用8倍量70％乙醇回流提取 三次，第一次3小时，第二次2小时，第三次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度 为1.20～1.25(50℃)，备用。紫草、丹参用10倍量乙醇温浸(40～45℃)三次，第一次3天 ，第二、三次各2天，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.20～1.25(50℃)，备用。 乳香、没药加8倍量水，蒸馏提取6小时，收集挥发油，水溶液滤过，药渣再加8倍量水煎煮 1.5小时，滤过，滤液合并，减压浓缩至相对密度为1.20～1.25(50℃)，备用。将上述三份 浓缩后清膏，合并，再减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(50℃)的稠膏，加入上述细粉， 混匀，减压干燥，粉碎，得干膏粉。将挥发油与冰片加少量乙醇溶解，与上述干膏粉一并加 入到熔融的36型混合脂肪酸酯中，混匀，制成2750g，浇模，冷却后取出，制成1000枚栓， 即得。
实施例二
【处方】黄柏 450g 大黄 450g 丹参 450g 乳香(制) 100g
没药(制) 100g 紫草 450g 蛤壳 250g 冰片 25g
【制法】以上八味，取蛤壳粉碎成细粉，备用；黄柏、大黄、紫草、丹参用70％乙醇回 流提取二次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.12～1.15(50℃)，备 用。乳香、没药蒸馏提取挥发油，水溶液滤过，药渣再加水煎煮1.5小时，滤过，两次滤液 与上述浓缩液合并后，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(50℃)的稠膏，加入上述细粉，混 匀，低温烘干，粉碎，得干膏粉，将挥发油与冰片加少量乙醇溶解，与上述干膏粉一并加入 到熔融的36型混合脂肪酸酯中，混匀，制成2750g，浇模，冷却后取出，制成1000枚栓，即 得。
实施例三
【处方】黄柏 400g 大黄 400g 丹参 400g 乳香 90g
没药 90g 紫草 400g 蛤壳 200g 冰片 20g
【制法】以上八味，取蛤壳粉碎成细粉，备用；黄柏、大黄、紫草、丹参用70％乙醇回 流提取二次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度为1.12～1.15(50℃)，备 用。乳香、没药蒸馏提取挥发油，水溶液滤过，药渣再加水煎煮1.5小时，滤过，两次滤液 与上述浓缩液合并后，减压浓缩至相对密度为1.30～1.35(50℃)的稠膏，加入上述细粉，混 匀，低温烘干，粉碎，得干膏粉，将挥发油与冰片加少量乙醇溶解，与上述干膏粉一并加入 到熔融的36型混合脂肪酸酯中，混匀，制成2750g，浇模，冷却后取出，制成1000枚栓，即 得。
【鉴别】
a.取本品5枚，切碎，准确称取8g，加二氯甲烷20ml使溶解，加乙醇10ml，搅匀，加甲 醇300ml，振摇20分钟，冷冻1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加20ml热水使溶解，以乙醚提取 三次，每次20ml，合并乙醚液，用1％氢氧化钠提取三次，每次20ml，合并碱液，备用；余 乙醚液挥干，加甲醇5ml使溶解，作为供试品溶液；另取丹参酮IIA对照品，加醋酸乙酯制成 每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别 点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯(19∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，在与对 照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
b.取[鉴别](a)项下的碱液，加盐酸调pH4～5，以乙醚提取三次，每次20ml，合并乙 醚液，挥干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取左旋紫草素对照品，加乙醇制 成每1ml含0.1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液2μl、对照 品溶液5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60℃～90℃)-醋酸乙酯-甲酸(15 ∶3∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的 位置上，显相同颜色的斑点。
c.另取大黄素与大黄酚对照品，加氯仿制成每1ml各含0.5mg的溶液，作为对照品溶液 。照薄层色谱法试验，吸取上述[鉴别](2)项下的供试品溶液、大黄素与大黄酚对照品溶 液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60℃～90℃)-醋酸乙酯-甲酸(15∶ 3∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置可见光下检视，供试品色谱中，在与对 照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
d.取本品5枚，切碎，准确称取8g，进行微量升华，升华物加无水乙醇0.5ml使溶解， 作为供试品溶液；另取冰片对照药材20mg，加乙醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层 色谱法试验，吸取供试品溶液2～5μl、对照药材溶液1μl，分别点于同一硅胶G薄层板上， 以石油醚(60℃～90℃)-醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛 的10％硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位 置上，显相同颜色的斑点。
含量测定：
a.色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.05mol/L 磷酸二氢钾的0.1％的磷酸溶液(25∶75)为流动相；检测波长265nm。理论板数按盐酸小檗 碱峰计应不低于2000。
b.对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含30 μg的溶液，即得。
c.供试品溶液的制备 取本品5枚，切碎，混匀，称取1g，精密称定，置索氏提取器中 ，以石油醚(60℃～90℃)200ml提取3小时，石油醚液弃去；取出滤纸包，冷风吹干，置锥 形瓶中，精密加1％盐酸甲醇50ml，称定重量，超声(250W，20kHz)处理30分钟，以1％盐 酸甲醇补足损失重量，滤过，取续滤液25ml，蒸干，加水15ml使溶解，以乙醚提取三次，每 次20ml，乙醚液弃去，余水液蒸干，加甲醇2～5ml使溶解，加于中性氧化铝柱(5g，120～ 160目，湿法上柱，d＝1.5cm)，以甲醇洗脱，收集洗脱液50ml混匀，精密吸取25ml，蒸干 ，残渣加流动相使溶解，定量转移至10ml容量瓶中，以0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
d.测定法 分别精密吸取对照品与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得 。
本品每枚含黄柏以盐酸小檗碱(C20H17NO4·HCl)计，不得少于2.0mg。
每枚栓为2.75g，相当于原药材2g。