技术领域
本发明涉及提高人体免疫功能的含有左旋咪唑或其衍生物的注射剂。
背景技术
左旋咪唑及其衍生物，是公知的化合物。左旋咪唑的分子式为C11H12N2S，盐酸 左旋咪唑是左旋咪唑的一种衍生物。左旋咪唑及其衍生物被用作药物已有较长的历 史。早期主要用左旋咪唑作驱虫药。经过进一步研究后发现，它还具有激发机体免 疫功能的作用，因而人们将其作为增加免疫功能的增效剂，如用作针对抗感染(病毒 或细菌或疫苗)免疫增效剂。早期的提高免疫功能的增效剂的剂型为口服片剂。口服 的左旋咪唑增效剂有毒副作用，如使用者恶心、呕吐、发生皮疹、发热、粒细胞减 少及脑类综合症等症状。新疆大学生命科学与技术学院申请的第02123695.X号名 为“增强核酸疫苗免疫组合物及其生产方法和使用方法”的发明专利申请记载了一 种含有核酸疫苗和左旋咪唑的组合物。其中的左旋咪唑起着疫苗增效剂的作用。该 组合物可以通过注射、喷射、口服、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的 途径进入机体。由于给药途径的多样性，因而，可针对个体的差异做广泛的选择。 但是将疫苗和左旋咪唑构成组合物有一定的困难和不足：1.由于该组合物是由二种 或多种组分构成，因而难以控制和保证该组合物的稳定性；2.制备这种由疫苗和增 效剂组合而成的组合物的工艺比较复杂，因而制备周期长，生产成本高，产品质量 也不易控制；3.用增效剂激活机体对疫苗的应答是一个特殊的过程，只有在一定的 期间内，通过多次向机体施以增效剂，逐步激发机体的免疫机能，使机体处于最佳 的免疫状态下接受疫苗时才能产生最好的免疫效果。因此，将疫苗和左旋咪唑增效 剂组合成一种组合物，则不能通过多次施以增效剂使机体在接受疫苗前处于较好的 状态。由于现有技术上述的不足，所以本技术领域一直期待着一种新的针对免疫功 能的增效剂的出现。
发明内容
本发明的目的在于提供一种含有左旋咪唑溶液的、用于增强人体免疫功能的注 射剂。
本发明的目的通过以下的技术方案实现：
1.一种用于增强人体免疫功能的的注射剂，它由重量百分比为0.05-5％的左 旋咪唑和余量的水组成。
2.上述的用于增强人体免疫功能的注射剂，它还含重量百分比为0.2％-0.02％ 的稳定剂。
3.上述第二项的用于增强人体免疫功能的注射剂，其中所述稳定剂为亚硫酸氢 钠和EDTA-2Na。
4.上述的第1-3中任一项所述的用于增强人体免疫功能的注射剂，其中所述 的盐酸左旋咪唑的重量百分比为0.05-2.5％。
5.上述第4项所述的用于增强人体免疫功能的注射剂，其中所述的盐酸左旋咪 唑的重量百分比为0.5％。
下面对本发明作进一步的说明：
为将左旋咪唑或者其衍生物，如盐酸左旋咪唑制备成安全有效的注射剂， 首先要确定该注射剂的安全有效的施用剂量。经本发明人在做动物实验时发现， 当施用剂量大于50mg/kg体重·日时，会使实验动物产生不良反应，甚至死亡；而 当施用剂量小于0.5mg/kg体重·日时，该注射剂对于增强免疫功能的效果不明显。 此外，本发明人还发现在施用剂量为50-5mg/kg体重·日的范围内时增强免疫功能 的效果与施用剂量之间为负相关关系，即施用剂量减少时，增强免疫的效果反而更 明显，根据实验结果，本发明人将用作针对免疫功能的增效剂的左旋咪唑或盐酸左 旋咪唑的施用剂量确定为50-0.5mg/kg体重·日。然而，为保证左旋咪唑注射剂配 置的准确便捷和消毒杀菌的可靠，本发明人不提倡在施用现场临时配置左旋咪唑注 射剂。在药厂实现按着严格的计量、灭菌、封装等工艺预先制成规定装量的注射 剂是更为可取的。当施用剂量按上述实验定为0.5mg-50mg/Kg体重*日，日注射量 定为0.1毫升时，经折算该用作免疫功能增效剂的左旋咪唑注射剂的安全有效重量 百分比浓度应为0.5-0.005％。考虑到前述的左旋咪唑剂量与其增强免疫功能的效果 之间的负相关关系，左旋咪唑的安全有效浓度较佳范围应为0.25％-0.005％，而最佳 为0.05％。当上述实验结果用于制备装量为1毫升的适于人体免疫增效注射剂时， 左旋咪唑的安全有效重量百分比浓度应为0.05-5％，较佳为0.05-2.5％，最佳为0.5％。 当用于人体免疫时，左旋咪唑的剂量应为实验小鼠所用剂量的1/30-1/50，而人 的体重为小鼠体重的5000倍。
本发明的用于增强机体免疫功能的左旋咪唑注射剂是按如下步骤制备的：
1.将新生产的注射用水冷却至室温，然后向其通药用氮气至饱和；
2.根据配方精确称量左旋咪唑或盐酸左旋咪唑及辅料；
3.将称出的所述辅料，如亚硫酸氢钠和EDTA-2Na溶于注射用水中，然后再 向该溶液中加入称出的左旋咪唑和盐酸左旋咪唑，并搅拌使之全溶；
4.用滤膜过滤上述溶液得到澄明的溶液，然后不断地将药用氮气通入该溶 液，再将其PH值调至4.2-4.5；
5.将所得溶液按0.1-1ml/支的装量灌装成注射液；
6.在以100℃的温度将所得的注射液灭菌30分钟，然后冷却、包装。
所述的辅料包括常规的抗氧剂，络合剂和稳定剂，如亚硫酸氢钠、EDTA-2Na。 就增强免疫功能的作用而言，左旋咪唑和盐酸左旋咪唑的功效相似，由于后者易溶 于水，故优选后者。在本发明中将左旋咪唑和盐酸左旋咪唑是作为等价效的物质使 用的。
以较小的剂量达到明显的免疫效果，而且避免了口服剂所带来的使机体产生恶 心、呕吐等不良反应是本发明的优点。本发明的左旋咪唑注射液中的主要成份是左 旋咪唑而不含疫苗本身，因而可以通过向机体多次注射该注射剂的方式，逐步提高 机体的免疫水平，然后在其处于较佳状态时接受疫苗，从而产生较好的免疫效果。
下面结合实施例详细说明本发明：
具体实施方式
实施例1.
盐酸左旋咪唑注射液的制备：
将新生产的注射用水100毫升冷至室温，然后向其通药用氮气至饱和；称出1 g盐酸左旋咪唑，2g亚硫酸氢钠和0.2g EDTA-2Na；先将称出的亚硫酸氢钠和 EDTA-2Na溶于上述氮饱和注射用水中，然后再将称出的盐酸左旋咪唑加入该注射用 水中，搅拌使之全溶，后加注射用水至1000毫升；用滤膜过滤上述溶液至澄明， 再将药用氮气持续地将通入所得溶液，然后将其PH值调至4.4；得到重量百分比浓 度为0.1％的左旋咪唑溶液；将所得溶液用灌装机灌装成装量为0.5ml/支的注射剂； 以100℃的温度将所得的注射液灭菌30分钟，待冷却后包装。
实施例2.
以与实施例1相同的步骤制备左旋咪唑注射剂，但盐酸左旋咪唑的加入量为 0.5g，所得的注射剂中的左旋咪唑的重量百分比浓度为0.05％。
实施例3.
以与实施例1相同的步骤制备左旋咪唑注射剂，但盐酸左旋咪唑的加入量为 0.05g，所得的注射剂中的左旋咪唑的重量百分比浓度为0.005％。
实施例4.
盐酸左旋咪唑对体液免疫功能及细胞免疫功能的影响
实验动物：二级ICR小鼠，体重18-22g，雌雄各半，由北京维通利华实验动 物技术有限公司提供。
实验药物：
1.盐酸左旋咪唑，由亚洲(北京)国际肝病研究院提供。
2.Alsever‘s液：用葡萄糖2.000g、柠檬酸钠0.800g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.420g、 溶于100ml蒸馏水中制成。
3.都氏试剂：用氰化钾0.025g、高铁氰化钾0.100g、碳酸氢钠0.500g溶于1000ml 蒸馏水中制成。
4.北京人参蜂王浆，北京三九药业有限公司出产，口服给药。
一.盐酸左旋咪唑对于小鼠的细胞免疫功能的影响。
1.盐酸左旋咪唑溶液的制备：
用灭菌生理盐水将上述盐酸左旋咪唑分别配成重量百分比浓度为4.00％、 2.00％、1.00％、0.50％、0.25％、0.10％、0.05％、0.005％的水溶液。
2.抗原的制备：
取健康家养成年绵羊外颈静脉血，去除纤维蛋白后，加入为羊血体积2倍的 Alsever‘s液，摇匀，置于4℃冰箱内待用。
3.实验：
1)预试：将浓度为4.00％的盐酸左旋咪唑0.1ml肌肉注射实验小鼠1次，结 果实验小鼠全部死亡；1.00％浓度的该溶液0.1ml每日肌肉注射实验小鼠1次，连续 2日，结果实验小鼠全部死亡。
2)正式实验
将小鼠随机分成7组，每组10只，一组为空白对照组，注射生理盐水；一组 为阳性药对照组，口服人参蜂王浆，目的是使用疗效肯定的免疫增强剂，如增强了 小鼠的免疫功能，则证明本组其它实验是可靠的；其余5组为实验组，分别连续7 日，每日一次注射0.1ml浓度为0.50％、0.25％、0.10％、0.05％和0.005％的按上述 方法配置的盐酸左旋咪唑溶液。
在注射盐酸左旋咪唑溶液的第二天，向实验小鼠尾静脉注射羊红细胞约5×106个/只羊红细胞致敏。注射实验溶液的第7天将20％羊红细胞0.02ml作为抗体分别 注入小鼠后肢左右脚掌皮内，24小时后，用游标卡尺测量足跖肿胀度(FPR)，以 左、右后肢的厚度差值作为免疫(DTH)指标。结果表示于表I
表I.盐酸左旋咪唑对小鼠的细胞免疫反应引起的足跖肿胀的影响 x±S 组别 剂量 (mg/kg) 浓度 (％) 动物数 (只) 肿胀度 (mm) 空白对照 人参蜂王浆 盐酸左旋咪唑 盐酸左旋咪唑 盐酸左旋咪唑 盐酸左旋咪唑 盐酸左旋咪唑 - 8.5 50 25 10 5 0.5 - - 0.50 0.25 0.10 0.05 0.005 10 10 10 10 10 10 10 0.021±0.021 0.042±0.019* 0.024±0.011 0.025±0.026 0.032±0.018 0.038±0.013* 0.28±0.016
注：与空白对照组比较，*P＜0.01，**P＜0.05
数据统计学处理：计算各组FPR值 x±S，对各组间进行Student’t检验，采用孙 瑞元、陈志扬、郑青山教授等主编的DAS软件对上述结果进行统计学处理，判定 显著性差异。
二.左旋咪唑溶液对小鼠体液免疫功能的影响
绵羊红细胞悬液及盐酸左旋咪唑溶液的制备同上。
随机取小鼠70只，平均分成7组，每组10只，第一组为空白对照组；一组为 阳性药对照组，口服人参蜂王浆；其余5组为实验组。
实验：
空白对照组每天肌肉注射生理盐水。
制备豚鼠血清：自豚鼠心脏取血，放置1小时后，离心收集血清，于-20℃保 证，临用时用生理盐水按1∶10稀释。
实验组每天分别肌肉注射上述不同浓度的盐酸左旋咪唑溶液0.1ml/10g体重， 连续7日。注射第1天，每鼠静脉注射3∶5(v∶v)绵羊红细胞生理盐水稀释液0.2ml， 该稀释液的红血球浓度为20亿个/ml。给药第7日20分钟后，自小鼠后眼眶取血进 行溶血素测定。
溶血素测定：将上述取自小鼠眼眶的血于离心管内放置1小时后，使血清充 分分离出，再以2000转/分的速度离心分离10分钟，提取血清，用生理盐水稀释 200倍按下表进行试验。再按下表方式进行试验。
溶血素测定 样品管 空白对照管 200倍稀释血清 生理盐水 10％绵羊红细胞稀释液 1∶10豚鼠血清稀释液 1ml 0.5ml 1.0ml 1.0ml 0.5ml 1.0ml
将上述样品于37℃水浴中保温10分钟。用冰浴终止反应后，以2000转/分离 心分离10分钟，取上清液1.0ml及都氏液3.0ml于试管内。用空白对照管于540nm 波长处调零待测个管吸收度值。
绵羊红细胞半数溶血值测定管：取10％绵羊红细胞稀释液0.25ml，都氏试剂 4.0ml于另一试管内用于测定绵羊红细胞半数溶血值。
按下列公式计算每只小鼠样品的半数溶血值HC50.
样品HC50＝(样品吸收度值÷羊红细胞半数溶血时吸收度值)×稀释倍数
数据统计学处理：计算各组HC50值 x±S，对各组间进行Student’t检验，采用孙 瑞元、陈志扬、郑青山教授等主编的DAS软件对上述结果进行统计学处理，判定 显著性差异。
实验结果见下表II
表II 盐酸左旋咪唑对小鼠血清凝聚素的影响( X±S) 组别 剂量 (mg/kg) 浓度 (％) 动物数 (只) HC50 空白对照 人参蜂王浆 盐酸左旋咪唑I 盐酸左旋咪唑II - 8.5 50 25 - - 0.50 0.25 10 10 10 10 259.3±57.9 329.0±49.1* 277.9±86.1 314.6±61.4
盐酸左旋咪唑III 盐酸左旋咪唑IV 盐酸左旋咪唑V 10 5 0.5 0.10 0.05 0.005 10 10 10 334.7±47.1* 392.6±22.8** 288.6±58.2
注：与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
结论：上述实验结果表明，盐酸左旋咪唑对细胞免疫功能和体液免疫功能有 显著的影响。但在盐酸左旋咪唑制成注射剂时，其重量百分比浓度不能超过0.5％， 否则会使接受盐酸左旋咪唑的机体产生不良反应乃至死亡。从上述实验发现，在低 浓度范围时，盐酸左旋咪唑的浓度与其对机体免疫功能的影响呈负相关关系，因而 盐酸左旋咪唑注射剂的适宜浓度为0.05％左右，由于本发明含有盐酸左旋咪唑溶液 的免疫增效注射剂对增强机体的细胞免疫功能和体液免疫功能有积极的作用，因 此，本领域的技术人员不难预见和理解该注射剂对具体的抗原(病毒或细菌或疫苗) 有良好的增强特异性免疫功能的作用，从而达到抗感染的目的。