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1、(10)申请公布号 CN 102552870 A (43)申请公布日 2012.07.11 CN 102552870 A *CN102552870A* (21)申请号 201210061647.6 (22)申请日 2012.03.09 A61K 38/01(2006.01) A61K 47/34(2006.01) A61K 47/12(2006.01) A61K 9/20(2006.01) A61P 3/02(2006.01) A61P 25/28(2006.01) A61P 25/00(2006.01) (71)申请人 张睿 地址 100052 北京市西城区东河沿胡同 73 号宣武门大厦 1。
2、1 层 (72)发明人 张睿 (54) 发明名称 一种脑蛋白水解物滴丸及其制备方法 (57) 摘要 本发明属于医药技术领域， 本发明公开了一 种脑蛋白水解物滴丸及其制备方法， 其中滴丸包 括脑蛋白水解物和基质。本发明滴丸制剂处方是 通过科学的筛选试验确定的。 药理试验表明， 本发 明滴丸比市售脑蛋白水解物为原料的制剂具有更 好的药理作用。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 7 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 7 页 1/1 页 2 1. 一种脑蛋白水解物滴丸， 其特征在于滴丸中脑蛋白水解物与基质的重量比为 1 1-1。
3、0。 2. 根据权利要求 1 所述的一种脑蛋白水解物的滴丸， 其中基质为聚乙二醇 1000、 聚乙 二醇1500、 聚乙二醇4000、 聚乙二醇6000、 硬脂酸聚烃氧(40)酯、 硬脂酸钠和泊洛沙姆一种 或几种。 3. 根据权利要求 1 所述的一种脑蛋白水解物滴丸， 其中脑蛋白水解物的制备方法为 ： 将猪脑组织加入纯水， 捣碎， 在 65-90保温 15-45 分钟， 冷却至 30-50， 加入草酸溶 液调 pH 值为 2.0-4.0， 搅拌加入猪脑重量 1.5 -3.0的胃蛋白酶， 搅拌， 30-50保温 2-6 小时， 收集上清液， 沉淀离心， 合并上清液， 上清液减压浓缩到猪脑重量的 。
4、1/2-1/5， 用碱溶 液调 pH 值 5.0-8.0， 100 -120灭活 3-6 小时， 加水至猪脑重量， 用氢氧化钙溶液调 pH 值 6.5-7.5， 过滤， 活性炭吸附， 脱碳， 得清液 ； 加入猪脑重量 1-3的胰蛋白酶， 35-45保温 1-4 小时， 煮沸 15-30 分钟， 冷却， 静置， 过滤， 得水解液 ； 水解液上离子交换柱， 用纯水洗脱， 洗脱液弃去， 用浓度为5-15的氨水洗脱， 收集洗脱液， 浓缩， 用碱溶液调pH值6.9-7.5， 减压浓缩， 去除氨至尽， 浓缩液静置， 过滤， 去除沉淀， 得原液， -20以下冻结保存 ； 解冻， 过滤， 去除沉淀， 稀释至每。
5、毫升含氮 5.4-6.8mg， 含游离氨基酸 25-50mg， 加入稀释液重量的 0.03 -0.1亚硫酸氢钠， 得到调配液 ； 调配液用 6000-10000 分子量超滤膜超滤， 收集过 滤液， 0.2m 膜除菌过滤， 冷冻干燥， 得到脑蛋白水解物。 4. 根据权利要求 3 所述的一种脑蛋白水解物滴丸， 其中制备方法中酸溶液为盐酸、 磷 酸、 甲酸、 乙酸、 乙二酸溶液中的一种。 5. 根据权利要求 3 所述的一种原料为脑蛋白水解物的滴丸， 其中制备方法中碱溶液为 氢氧化钠、 氢氧化钾、 碳酸氢钠、 碳酸氢钾、 氢氧化钙溶液中的一种。 6. 根据权利要求 1 所述的一种脑蛋白水解物滴丸， 其。
6、中制备方法中离子交换柱为强酸 型阳离子交换柱。 7. 根据权利要求 1 所述的一种脑蛋白水解物滴丸， 其中滴丸的制备方法为 ： 调整滴丸机的温度控制系统， 使滴丸机的滴头温度加热并保持在 50 -90， 冷凝剂 的温度冷却并保持在 0至 10 ； 待滴丸机滴头和冷凝柱内冷凝剂的温度分别达到所述温 度状态时， 将含有脑蛋白水解物和基质的熔融液置于滴丸机的滴头罐内， 通过滴头滴入冷 凝剂中收缩成形即得。 8. 根据权利要求 7 所述的一种脑蛋白水解物滴丸， 其中制备方法中冷凝剂是甲基硅 油、 液体石蜡、 植物油中的一种或几种。 权 利 要 求 书 CN 102552870 A 2 1/7 页 3 。
7、一种脑蛋白水解物滴丸及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及医药技术领域， 具体涉及一种脑蛋白水解物滴丸及其制备方法。 背景技术 0002 脑蛋白水解物是用健康猪的新鲜大脑经酶解、 纯化等方法得到的含有氨基酸和小 分子肽等的混合物制备的药物 . 它能通过血脑屏障， 提高耗氧量， 增加脑活性， 参与体内氧 化作用 ； 可改善肾上腺皮质机能， 促进全身代谢 ； 参与 - 酮酸的氧化脱羧和葡萄糖代谢， 提高脑氧及葡萄糖利用度， 供给脑细胞修复再生所需的作为神经递质本身或神经递质和生 物胺类的前体的各种氨基酸， 调节脑神经活动， 促进中枢递质氨基丁酸、 多巴胺和 5- 羟色 胺等生物合成 ； 与游。
8、离氨结合成无毒的谷氨酰胺， 降低血氨 ； 同时改善肾上腺皮质机能， 促 进全身代谢， 是一种脑功能不全的治疗药物。 0003 脑蛋白水解物是以猪脑为原料经过酶解等步骤得到有效部位， 因此， 在研究新的 制剂过程中， 对其物质基础也应该重新研究， 中国专利 94104516.1 公开了脑蛋白水解物制 备方法， 采用制匀浆、 脱脂、 风干、 酶解、 超滤、 离子交换等步骤， 该方法中风干步骤会造成多 肽等步骤的流失 ； 中国专利申请号为 01130523.1、 200510064567.6、 200710055421.4 等专 利公开了脑蛋白水解物的新的制备方法， 上述方法中都存在使得氨基酸大量流。
9、失的步骤， 因此， 上述方法值得商榷 ； 中国专利申请号为 200610065169.0 在制备过程脑蛋白水解物 中， 加入外源氨基酸补充制备过程中损失的氨基酸， 而且国内现有脑蛋白水解物制剂大多 采用类似加入外源氨基酸方法， 说明制备方法存在问题， 需要进一步改进。 0004 以脑蛋白水解物为原料的制剂在临床应用多年， 疗效显著， 目前临床使用的制剂 为注射制剂和普通片剂 ； 但上述制剂在临床应用中存在着很多缺陷 ： 注射制剂不良反应 多， 使得医生和患者不敢放心使用， 普通片剂虽然克服了不良反应多的缺陷， 但其生物利用 度不高， 从而影响其药效， 因此， 为了满足临床的需要， 对脑蛋白水解。
10、物为原料的制剂， 进行 深入的开发势在必行。 发明内容 0005 基于上述原因， 本申请人通过科学的试验研究， 对脑蛋白水解物进行研究， 申请 人发现脑蛋白水解物在酸性环境中吸收率较高， 在碱性环境中吸收率较低， 其在上消化道 ( 口腔至胃 ) 具有良好的吸收， 可以明显提高生物利用度， 充分发挥其药理作用。以此为基 础， 申请人以脑蛋白水解物为原料制备成滴丸制剂， 通过对滴丸基质进行研究， 发现水溶性 基质制备成的滴丸， 具有圆整率高、 溶散时限好、 丸重差异低等优点。 0006 申请人对脑蛋白水解物制备方法进行研究， 改进了传统方法， 该方法采用离子交 换柱方法、 超滤方法等步骤得到新的脑。
11、蛋白水解物， 本发明制备方法得到的脑蛋白水解物 有效成份为小分子多肽和16种天然游离氨基酸， 为天然水解物， 含有小分子多肽与16种游 离氨基酸， 不需要另外添加氨基酸即能达到标准要求， 多肽分子量为 5000-10000 道尔顿， 游离氨基酸为 L 型氨基酸， pH 值为 6.0-8.0， 更加适合人体吸收利用。 说 明 书 CN 102552870 A 3 2/7 页 4 0007 本发明通过下述技术方案实现的。 0008 一种脑蛋白水解物滴丸， 滴丸中脑蛋白水解物与基质的重量比为 1 3-10。 0009 上述滴丸基质为聚乙二醇1000、 聚乙二醇1500、 聚乙二醇4000、 聚乙二醇。
12、6000、 硬 脂酸聚烃氧 (40) 酯、 硬脂酸钠和泊洛沙姆一种或几种。 0010 上述脑蛋白水解物的制备方法为 ： 0011 将猪脑组织加入纯水， 匀浆， 在 65-90保温 15-45 分钟， 冷却至 30-50， 加入草 酸溶液调pH值为2.0-4.0， 搅拌加入猪脑重量1.5-3.0的胃蛋白酶， 搅拌， 30-50保温 2-6 小时， 收集上清液， 沉淀离心， 合并上清液， 上清液减压浓缩到猪脑重量的 1/2-1/5， 用 碱溶液调 pH 值 5.0-8.0， 100 -120灭活 3-6 小时， 加水至猪脑重量， 用氢氧化钙溶液调 pH 值 6.5-7.5， 过滤， 活性炭吸附， 。
13、脱碳， 得清液 ； 加入清液重量 1-3的胰蛋白酶， 35-45 保温 1-4 小时， 煮沸 15-30 分钟灭酶， 冷却， 静置， 过滤， 得水解液 ； 水解液上离子交换柱， 用纯水洗脱， 洗脱液弃去， 用浓度为 5 -15的氨水洗脱， 收集洗脱液， 浓缩， 用碱溶液调 pH 值 6.9-7.5， 减压浓缩， 去除氨至尽， 浓缩液静置， 过滤， 去除沉淀， 得原液， -20以下 冻结保存 ； 解冻， 过滤， 去除沉淀， 纯水稀释至每毫升含氮 6.00.6mg， 加入稀释液重量的 0.03 -0.1亚硫酸氢钠， 调配液用 6000-10000 分子量超滤膜超滤， 收集过滤液， 0.2m 膜除菌。
14、过滤， 冷冻干燥， 得到脑蛋白水解物。 0012 上述所述制备方法中酸溶液为盐酸、 磷酸、 甲酸、 乙酸、 草酸溶液中的一种。 0013 上述制备方法中碱为氢氧化钠、 氢氧化钾、 碳酸氢钠、 碳酸氢钾、 氢氧化钙中的一 种。 0014 上述制备方法中离子交换柱为强酸型阳离子交换柱。 0015 上述滴丸的制备方法为 ： 0016 调整滴丸机的温度控制系统， 使滴丸机的滴头温度加热并保持在 50 -70， 冷 凝剂的温度冷却并保持在 0至 10 ； 待滴丸机滴头和冷凝柱内冷凝剂的温度分别达到所 述温度状态时， 将含有脑蛋白水解物和基质的熔融液置于滴丸机的滴头罐内， 通过滴头滴 入冷凝剂中收缩成形即。
15、得。 0017 上述制备的冷凝剂是甲基硅油、 液体石蜡、 植物油中的一种或几种。 0018 一、 制剂组方筛选试验 0019 脑蛋白水解物制备 ： 将猪脑组织加入水， 捣碎， 在 75保温 30 分钟， 冷却至 40， 加入草酸溶液调 pH 值为 3.0， 加入猪脑重量 2的胃蛋白酶， 搅拌， 40保温 4 小时， 收集 上清液， 沉淀离心， 合并上清液， 上清液减压浓缩到猪脑重量的 1/3， 用碱溶液调 pH 值 7.5， 110灭活 4.5 小时， 加水至猪脑重量， 用氢氧化钙溶液 pH 值 7.0， 过滤， 活性炭吸附， 脱 碳， 得清液 ； 加入清液重量 2的胰蛋白酶， 40保温 3 。
16、小时， 煮沸 15 分钟， 冷却， 静置， 过 滤， 得水解液 ； 水解液上强酸型阳离子交换柱， 用水洗脱， 洗脱液弃去， 用浓度为 10的氨 水洗脱， 收集洗脱液， 浓缩， 用氢氧化钠溶液调 pH 值 7.0， 减压浓缩， 去除氨至尽， 浓缩液静 置， 过滤， 去除沉淀， 得原液， -20以下冻结保存 ； 解冻， 过滤， 去除沉淀， 稀释至每毫升含氮 6.0mg， 加入稀释液重量的 0.06亚硫酸氢钠， 得到调配液 ； 调配液用 8000 分子量超滤膜超 滤， 收集过滤液， 0.2m 膜除菌过滤， 冷冻干燥， 得到脑蛋白水解物。 0020 将脑蛋白水解物分别与 PEG1500、 PEG400。
17、0、 PEG6000、 硬脂酸聚烃氧 (40) 酯、 硬脂 酸钠、 泊洛沙姆、 聚乙烯吡咯烷酮、 羧甲基纤维素、 虫蜡、 单硬脂酸甘油酯、 倍他环糊精混合， 说 明 书 CN 102552870 A 4 3/7 页 5 脑蛋白水解物与基质的重量比为13 ； 使滴丸机的滴头温度加热并保持在65， 冷凝剂的 温度冷却并保持在 0-4； 待滴丸机滴头和冷凝柱内冷凝剂的温度分别达到所述温度状态 时， 将含有药物提取物和基质的熔融液置于滴丸机的滴头罐内， 通过滴头滴入冷凝剂中收 缩成形即得。 0021 试验结果见表 1。 0022 表 1 试验结果 0023 0024 0025 试验结论 ： 上述预实验。
18、结论表明， 以本发明工艺方法得到的脑蛋白水解物， 制备成 滴丸， 基质中聚乙二醇 1000、 聚乙二醇 1500、 聚乙烯吡咯烷酮、 倍他环糊精、 虫蜡、 十二烷基 硫酸钠、 羧甲基纤维素、 单硬脂酸甘油酯制备得到的滴丸成品率低、 溶散时限超过 30 分钟、 不合格率超过 10， 质量不符合要求， 不适合作为本发明滴丸的基质使用 ； 而基质聚乙二 醇4000、 聚乙二醇6000、 硬脂酸聚烃氧(40)酯、 硬脂酸钠或泊洛沙姆制备的滴丸， 质量符合 要求， 可以作为本发明滴丸的基质使用。 0026 二、 制备实施例 0027 实施例 1 0028 滴丸处方 ： 脑蛋白水解物 9g， 基质 PEG。
19、4000 为 27g ； 0029 (1) 脑蛋白水解物的制备方法 0030 将猪脑组织加入水， 捣碎， 在 65保温 45 分钟， 冷却至 30， 加入草酸溶液调 pH 值为2.0， 加入猪脑重量1.5的胃蛋白酶， 搅拌保温50， 保温6小时， 收集上清液， 沉淀离 心， 合并上清液， 上清液减压浓缩到猪脑重量的 1/5， 用氢氧化钾溶液调 pH 值 5.0， 100 灭活 3 小时， 加水至猪脑重量， 用氢氧化钙溶液调 pH 值 6.5， 过滤， 活性炭吸附， 脱碳， 得清 液 ； 加入清液重量 1的胰蛋白酶， 45保温 4 小时， 煮沸 30 分钟， 冷却， 静置， 过滤， 得水解 液 。
20、； 水解液上强酸型离子交换柱， 用水洗脱， 洗脱液弃去， 用浓度为 5的氨水洗脱， 收集洗 说 明 书 CN 102552870 A 5 4/7 页 6 脱液， 浓缩， 用碳酸氢钠溶液调 pH 值 6.9， 减压浓缩， 去除氨至尽， 浓缩液静置， 过滤， 去除沉 淀， 得原液， -20以下冻结保存 ； 解冻， 过滤， 去除沉淀， 稀释至每毫升含氮 5.4mg， 含游离 氨基酸 25mg， 加入稀释液重量的 0.03亚硫酸氢钠， 得到调配液 ； 调配液用 6000 分子量超 滤膜超滤， 收集过滤液， 0.2 膜除菌过滤， 冷冻干燥， 得到脑蛋白水解物， 每克水解物含氮 67.5mg， 含游离氨基。
21、酸 325mg。 0031 (2) 滴丸的制备 0032 调整滴丸机的温度控制系统， 使滴丸机的滴头温度加热并保持在 50， 冷凝剂的 温度冷却并保持在 0-5； 待滴丸机滴头和冷凝柱内冷凝剂的温度分别达到所述温度状态 时， 将含有脑蛋白水解物和基质的熔融液置于滴丸机的滴头罐内， 通过滴头滴入冷凝剂中 收缩成形即得， 冷凝剂为甲基硅油。 0033 实施例 2 0034 制剂处方为 ： 脑蛋白水解物 9g， 基质 PEG4000 为 45g ； 0035 (1) 脑蛋白水解物的制备方法 0036 将猪脑组织加入水， 捣碎， 在 90保温 15 分钟， 冷却至 50， 加入草酸溶液调 pH 值为4。
22、.0， 加入猪脑重量4.5的胃蛋白酶， 搅拌保温50， 保温2小时， 收集上清液， 沉淀离 心， 合并上清液， 上清液减压浓缩到猪脑重量的 1/2， 用氢氧化钠溶液调 pH 值 8.0， 120灭 活 3 小时， 加水至猪脑重量， 用氢氧化钙溶液调 pH 值 7.5， 过滤， 活性炭吸附， 脱碳， 得清液 ； 加入清液重量 3的胰蛋白酶， 45保温 1 小时， 煮沸 15 分钟， 冷却， 静置， 过滤， 得水解液 ； 水解液上强酸型离子交换柱， 用水洗脱， 洗脱液弃去， 用浓度为 25的氨水洗脱， 收集洗脱 液， 浓缩， 用氢氧化钠溶液调 pH 值 6.9-7.5， 减压浓缩， 去除氨至尽， 。
23、浓缩液静置， 过滤， 去除 沉淀， 得原液， -20以下冻结保存 ； 解冻， 过滤， 去除沉淀， 稀释至每毫升含氮 6.8mg， 含游 离氨基酸 50mg， 加入稀释液重量的 0.1亚硫酸氢钠， 得到调配液 ； 调配液用 10000 分子量 超滤膜超滤， 收集过滤液， 0.2m 膜除菌过滤， 冷冻干燥， 得到脑蛋白水解物， 每克水解物含 氮 81.6mg， 含游离氨基酸 600mg。 0037 (2) 滴丸的制备 0038 调整滴丸机的温度控制系统， 使滴丸机的滴头温度加热并保持在 70， 冷凝剂的 温度冷却并保持在 4-8； 待滴丸机滴头和冷凝柱内冷凝剂的温度分别达到所述温度状态 时， 将含。
24、有脑蛋白水解物和基质的熔融液置于滴丸机的滴头罐内， 通过滴头滴入冷凝剂中 收缩成形即得， 冷凝剂为液体石蜡油。 0039 实施例 3 0040 制剂处方为脑蛋白水解物 9g， 基质 PEG4000 90g ； 0041 (1) 脑蛋白水解物的制备方法 0042 将猪脑组织加入水， 捣碎， 在 70保温 20 分钟， 冷却至 35， 加入草酸溶液调 pH 值为2.5， 加入猪脑重量2.0的胃蛋白酶， 搅拌保温35， 保温3小时， 收集上清液， 沉淀离 心， 合并上清液， 上清液减压浓缩到猪脑重量的 1/3， 用碳酸氢钠溶液调 pH 值 6.0， 105灭 活 5.5 小时， 加水至猪脑重量， 用。
25、氢氧化钙溶液调 pH 值 7.0， 过滤， 活性炭吸附， 脱碳， 得清 液 ； 加入清液重量 2的胰蛋白酶， 40保温 3 小时， 煮沸 20 分钟， 冷却， 静置， 过滤， 得水解 液 ； 水解液上强酸型离子交换柱， 用水洗脱， 洗脱液弃去， 用浓度为 15的氨水洗脱， 收集 洗脱液， 浓缩， 用氢氧化钠溶液调 pH 值 7.2， 减压浓缩， 去除氨至尽， 浓缩液静置， 过滤， 去除 说 明 书 CN 102552870 A 6 5/7 页 7 沉淀， 得原液， -20以下冻结保存 ； 解冻， 过滤， 去除沉淀， 稀释至每毫升含氮 5.8mg， 含游 离氨基酸 35mg， 加入稀释液重量的 。
26、0.08亚硫酸氢钠， 得到调配液 ； 调配液用 7000 分子量 超滤膜超滤， 收集过滤液， 0.2m 膜除菌过滤， 冷冻干燥， 得到脑蛋白水解物， 每克水解物含 氮 72.5mg， 含游离氨基酸 430mg。 0043 (2) 滴丸的制备 0044 调整滴丸机的温度控制系统， 使滴丸机的滴头温度加热并保持在 55， 冷凝剂的 温度冷却并保持在 3-7； 待滴丸机滴头和冷凝柱内冷凝剂的温度分别达到所述温度状态 时， 将含有脑蛋白水解物和基质的熔融液置于滴丸机的滴头罐内， 通过滴头滴入冷凝剂中 收缩成形即得， 冷凝剂为液体石蜡。 0045 实施例 4 0046 制剂处方为 ： 脑蛋白水解物 9g。
27、， 基质硬脂酸钠为 36g ； 0047 (1) 脑蛋白水解物的制备方法 0048 将猪脑组织加入水， 捣碎， 在 65-90保温 35 分钟， 冷却至 45， 加入草酸溶液 调 pH 值为 2.5， 加入猪脑重量 3.0的胃蛋白酶， 搅拌保温 45， 保温 5.5 小时， 收集上清 液， 沉淀离心， 合并上清液， 上清液减压浓缩到猪脑重量的 1/4， 用碳酸钠溶液调 pH 值 5.5， 115灭活 4 小时， 加水至猪脑重量， 用氢氧化钙溶液调 pH 值 7.5， 过滤， 活性炭吸附， 脱碳， 得清液 ； 加入清液重量 2的胰蛋白酶， 45保温 2 小时， 煮沸 25 分钟， 冷却， 静置，。
28、 过滤， 得 水解液 ； 水解液上强酸型离子交换柱， 用水洗脱， 洗脱液弃去， 用浓度为 15的氨水洗脱， 收集洗脱液， 浓缩， 用氢氧化钠调 pH 值 7.2， 减压浓缩， 去除氨至尽， 浓缩液静置， 过滤， 去除 沉淀， 得原液， -20以下冻结保存 ； 解冻， 过滤， 去除沉淀， 稀释至每毫升含氮 6.4mg， 含游 离氨基酸 45mg， 加入稀释液重量的 0.08亚硫酸氢钠， 得到调配液 ； 调配液用 9000 分子量 超滤膜超滤， 收集过滤液， 0.2m 膜除菌过滤， 冷冻干燥， 得到脑蛋白水解物， 得到脑蛋白水 解物， 每克水解物含氮 76.8mg， 含游离氨基酸 540mg。 0。
29、049 (2) 滴丸的制备 0050 调整滴丸机的温度控制系统， 使滴丸机的滴头温度加热并保持 60， 冷凝剂的温 度冷却并保持在 5-10 ； 待滴丸机滴头和冷凝柱内冷凝剂的温度分别达到所述温度状态 时， 将含有脑蛋白水解物和基质的熔融液液置于滴丸机的滴头罐内， 通过滴头滴入冷凝剂 中收缩成形即得， 冷凝剂为植物油。 0051 实施例 5 0052 制剂处方为 ： 脑蛋白水解物 9g， 基质泊洛沙姆为 45g ； 0053 (1) 脑蛋白水解物的制备方法 0054 将猪脑组织加入水， 捣碎， 在 70保温 20 分钟， 冷却至 35， 加入草酸溶液调 pH 值为 2.5， 加入猪脑重量 2.。
30、5的胃蛋白酶， 搅拌保温 40， 保温 4 小时， 收集上清液， 沉淀 离心， 合并上清液， 上清液减压浓缩到猪脑重量的 1/3， 用氢氧化钠溶液调 pH 值 5.5， 115 灭活 4 小时， 加水至猪脑重量， 用氢氧化钙溶液调 pH 值 6.5， 过滤， 活性炭吸附， 脱碳， 得清 液 ； 加入清液重量 1.5的胰蛋白酶， 45保温 2 小时， 煮沸 20 分钟， 冷却， 静置， 过滤， 得水 解液 ； 水解液上强酸型离子交换柱， 用水洗脱， 洗脱液弃去， 用浓度为 10的氨水洗脱， 收 集洗脱液， 浓缩， 用氢氧化钠调 pH 值 7.0， 减压浓缩， 去除氨至尽， 浓缩液静置， 过滤， 。
31、去除沉 淀， 得原液， -20以下冻结保存 ； 解冻， 过滤， 去除沉淀， 稀释至每毫升含氮 5.6mg， 含游离 说 明 书 CN 102552870 A 7 6/7 页 8 氨基酸 30mg， 加入稀释液重量的 0.05亚硫酸氢钠， 得到调配液 ； 调配液用 6000-10000 分 子量超滤膜超滤， 收集过滤液， 0.2m 膜除菌过滤， 冷冻干燥， 得到脑蛋白水解物每克水解 物含氮 70mg， 含游离氨基酸 375mg。 0055 (2) 滴丸的制备 0056 调整滴丸机的温度控制系统， 使滴丸机的滴头温度加热并保持在 70， 冷凝剂的 温度冷却并保持在 5-9； 待滴丸机滴头和冷凝柱内。
32、冷凝剂的温度分别达到所述温度状态 时， 将含有脑蛋白水解物和基质的熔融液置于滴丸机的滴头罐内， 通过滴头滴入冷凝剂中 收缩成形即得， 冷凝剂为甲基硅油。 0057 三、 药理试验例 0058 试验 1 0059 小鼠耐缺氧实验 0060 试验动物 ： 昆明种小鼠， 体重 18-22g。 0061 实验药物 ： 0062 试验 1 组 ： 市售脑蛋白水解物片 ； 0063 试验 2 组 ： 本发明制备实施例 1 滴丸 ； 0064 试验 3 组 ： 本发明制备实施例 2 滴丸 ； 0065 试验方法 ： 将小鼠随机分为不同试验药物组。 试验1-3组灌胃给药， 给药量2g/kg， 对照组给予蒸馏水。
33、 ； 给药后 1h 快速将小鼠放入事先备好的密闭广口瓶内， 记录小鼠自入瓶 开始至死亡时的存活时间为小鼠耐缺氧时间 ( 以小鼠呼吸停止为死亡指标 )。 0066 实验结果 ： 结果见表 2。 0067 表 2 对小鼠耐缺氧作用影响 0068 0069 注 ： 与对照组比较 *P 0.01 ； 与试验 1 组比较 #P 0.05。 0070 试验 2 0071 对大鼠脑梗塞的保护作用 0072 试验动物 ： SD 大鼠， 250-300g， 雌雄各半。 0073 试验药物 ： 0074 试验 1 组 ： 市售脑蛋白水解物片 ； 0075 试验 2 组 ： 本发明实施例 3 滴丸 ； 说 明 书 。
34、CN 102552870 A 8 7/7 页 9 0076 试验 3 组 ： 本发明实施例 4 滴丸 ； 0077 试验 4 组 ： 本发明实施例 5 滴丸 0078 试验试剂 ： 水合氯醛 ； LNPT。 0079 试验方法 ： 将大鼠随机分组， 试验 1-4 组灌胃给药， 给药量为 1.3g/kg， 对照组给予 生理盐水， 等容不等量。给药 30 分钟后， 水合氯醛 300mg/kgip 麻醉大鼠， 颈部切口， 分离并 结扎右侧颈总动脉， 缝合肌肉皮肤后， 右侧位固定， 在右耳和右眼外眦连线中点切开皮肤， 分离颞肌， 暴露颧突及颞骨， 在颧突的头端 1 2mm 处开一约 33mm 的骨窗，。
35、 暴露大脑中动 脉 (MCA)， 将 MCA 灼断， 缝合切口。参考 Bederson 法给药， 处死动物， 取右大脑半球， ， 切成 5 片， 置于 2g/LNPT 中 37温育 15min 染色， 仔细挖取并称重未被染成兰色的白色梗塞脑组 织。 0080 实验结果 ： 结果见表。 0081 表 3 不同制剂对大鼠脑梗塞保护情况 0082 0083 0084 注 ： 与对照组比较 *P 0.01 ； 与试验 1 组比较 #P 0.05。 0085 试验结论 ： 上述试验表明， 本发明滴丸比市售脑蛋白水解物的制剂具有更好的药 理作用， 充分说明本发明滴丸具有科学意义。 说 明 书 CN 102552870 A 9 。