乌司他丁作为制备治疗系统性红斑狼疮药物的用途及其药物组合物.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 101954071 B (45)授权公告日 2013.09.25 CN 101954071 B *CN101954071B* (21)申请号 201010299500.1 (22)申请日 2010.10.08 A61K 38/57(2006.01) A61P 37/02(2006.01) A61P 13/12(2006.01) (73)专利权人 广东天普生化医药股份有限公司 地址 510520 广东省广州市天河区高唐科技 产业园高普路 89 号 (72)发明人 傅和亮 邹春芽 吴蓉蓉 华明娟 陈颖 EP 1364023 B1,2006.06.07, CN 101439。

2、181 A,2009.05.27, CN 101439180 A,2009.05.27, (54) 发明名称 乌司他丁作为制备治疗系统性红斑狼疮药物 的用途及其药物组合物 (57) 摘要 本发明涉及乌司他丁作为制备治疗系统性红 斑狼疮药物的一种应用。本发明涉及药物来源于 人尿提纯的天然蛋白药物， 质量稳定可靠， 不良反 应少， 克服了现有糖皮质激素、 环磷酰胺、 硫唑嘌 呤及环孢素 A 等治疗系统性红斑常用药物存在的 副作用较多， 影响患者的生活质量甚至死亡等缺 点。 通过对狼疮动物模型的疗效对比研究， 发现乌 司他丁疗效与激素对照组相同。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 李。

3、岚 权利要求书 1 页 说明书 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书6页 (10)授权公告号 CN 101954071 B CN 101954071 B *CN101954071B* 1/1 页 2 1. 乌司他丁用于制备治疗系统性红斑狼疮药物的用途， 所述药物含有治疗有效量的乌 司他丁以及药学上可接受的载体。 2. 根据权利要求 1 的用途， 其中所述的系统红斑狼疮包括盘状红斑、 蝶形红斑及狼疮 性肾炎。 3. 根据权利要求 1 的用途， 其中所述药物的给药量是每天给药 1-4 次， 每次给药 10 万 100 万单位 / 支。 4. 根据权。

4、利要求 1 的用途， 其中所述药物为冻干粉针剂， 载体可选用葡萄糖、 氯化钠、 甘露醇、 乳糖或水解明胶中的一种或其任意混合物。 5. 据权利要求 1 的用途， 其中所述药物为注射液， 载体可选用注射用水、 葡萄糖、 氯化 钠或甘露醇的一种或其任意混合物。 6. 根据权利要求 3 所述的用途， 其中所述的药物还含有选自甘露醇、 右旋糖苷、 水解明 胶、 柠檬酸钠或甘氨酸的添加剂。 7. 根据权利要求 4 所述的用途， 其中所述的药物还含有选自甘露醇、 氯化钠或葡萄糖 的添加剂。 权 利 要 求 书 CN 101954071 B 2 1/6 页 3 乌司他丁作为制备治疗系统性红斑狼疮药物的用途及。

5、其药 物组合物 技术领域 0001 本发明涉及药物化学领域。具体而言， 本发明涉及一种治疗系统性红斑狼疮的药 物， 特别涉及乌司他丁作为治疗系统性红斑狼疮药物的一种应用。 背景技术 0002 系统性红斑狼疮 (SLE) 是一种严重危害人类健康的自身免疫性疾病， 在我国人群 的患病率接近千分之一， 全国患病总人数高达 100 万。迄今为止， 国内外尚无特异的有效治 疗手段。 0003 系统性红斑狼疮 (SLE) 是一种临床表现复杂多样， 累及多系统、 多脏器的自身免 疫性疾病。其病因目前仍不完全清楚， 可能是在遗传因素的基础上， 受环境因素刺激， 促发 异常的免疫应答， 持续产生大量的致病性自身。

6、抗体和免疫复合物， 免疫复合物广泛沉积于 组织器官， 从而引发相应的病理损害。SLE 的免疫应答异常可以出现在多个方面和多个水 平， 并与许多细胞因子密切相关。自身免疫系统调节功能失调、 细胞因子网络失衡是 SLE 及 狼疮性肾炎 (LN) 发生、 发展的重要因素。 0004 SLE 的标准治疗是使用糖皮质激素和免疫抑制剂如环磷酰胺等， 它们可用于缓解 症状， 然而不能治愈 SLE， 长期或高剂量的激素治疗常常伴有严重的副作用如感染、 性腺抑 制、 及肿瘤等， 且不能显著地影响疾病的进展或转为危及生合的肾并发症 ( 狼疮性肾炎 )。 新的免疫抑制剂、 生物制剂、 血浆置换、 自体干细胞移植等治。

7、疗方法不仅疗效尚需长期临床 验证， 并且治疗费用少则数万元/年， 多则数十万元/年， 患者多难以承受， 因此需要在技术 上发展治疗 SLE 的新方法。 0005 乌司他丁， 又名人尿胰蛋白酶抑制剂 (Human Urinary Trypsin Inhibitor， UTI， Urinastatin ； 或 Ulinastatin)， 是从人体尿液中分离纯化的由 143 个氨基酸组成的酸性糖 蛋白， 它不仅是一种广谱蛋白酶抑制剂， 还有抗炎、 抗肿瘤及免疫调节等多种作用， 可以抑 制免疫细胞的活化增殖， 调节细胞因子网 络。 发明内容 0006 本发明的目的是为治疗系统红斑狼疮提供一种高效、 安。

8、全且副作用少的方法。 0007 本发明的乌司他丁对系统性红斑狼疮有明显的治疗作用， 一般以药物组合物的形 式使用， 这种组合物含有治疗有效量的作为活性成分的乌司他丁和可药用辅料， 主要剂型 包括冻干粉针剂和注射液剂， 通常以静脉注射途径给药。 0008 经静脉注射给药的乌司他丁组合物， 一般是固体的灭菌组合物形式。这些组合物 还可以含有添加剂， 特别是甘露醇、 右旋糖苷、 水解明胶、 柠檬酸钠、 甘氨酸等。在使用时溶 解于灭菌注射用水或其它注射用灭菌介质中。 0009 经静脉注射给药的乌司他丁组合物也可以是水溶液形式， 组合物还可以含有添加 剂， 特别是甘露醇、 氯化钠、 葡萄糖等。 说 明 。

9、书 CN 101954071 B 3 2/6 页 4 0010 乌司他丁的剂量根据病情的严重程度、 治疗时间而定， 一般静脉注射给药量是每 天给药 1-4 次， 每次给药 10 万 100 单位 / 支 ( 瓶 )， 优选 20-60 万单位。 具体实施方式 0011 以下通过具体实施例对本发明作进一步说明。 0012 实施例 1 制备乌司他丁干粉针 0013 取过滤灭菌乌司他丁水溶液 10000 万单位， 加 20 克甘露醇溶解， 调节 PH 到中性， 加注射用水至2000毫升， 加氯化钠调节等渗， 无菌过滤， 分装于1000个西林瓶中， 无菌条件 下冷冻干燥， 即得。 0014 实施例 2。

10、 制备乌司他丁注射液 0015 取过滤灭菌的乌司他丁水溶液 10000 万单位， 调节 PH 到中性， 加注射用水至 2000 毫升， 加氯化钠调节等渗， 无菌过滤， 分装 1000 个西林瓶中， 即得。 0016 实施例 3 乌司他丁对红斑狼疮小鼠的治疗作用 0017 第一部份 ： 慢性移植物抗宿主病狼疮样小鼠模型的选择与建立 0018 慢性移植物抗宿主病狼疮样 (cGVHD) 小鼠模型是一个良好的狼疮鼠肾炎的范例。 模型体内可出现数种自身抗体， 包括抗 dsDNA、 ssDNA、 及组蛋白抗体， 还可出现致命性狼疮 样肾炎。 实 验动物取6-8周龄雌性(C57BL/6JDBA/2)F1杂交。

11、鼠及6-8周龄雌性DBA/2小 鼠， 体重 (18-20)g， 清洁级。于造模前后定期进行血、 尿及基本状态的观察、 检测、 评估。在 无菌条件下， 取出 DBA/2 小鼠脾脏、 淋巴结 ( 肠系膜、 腹股沟、 和颈部 ) 和胸腺， 剪碎， 研磨， PBS冲洗过筛， 过筛后细胞悬液， 按11比例沿离心管壁缓缓加入鼠淋巴细胞分离液之上， 1800r/min 离心 20 分钟， 吸出淋巴细胞层， 用 PBS 稀释洗涤 3 次， 第一次 1800r/min 离心 10 分钟， 以后均为 1800r/min 离心 5 分钟， 最后用 PBS 制备成适量、 混匀的淋巴细胞悬液。显 微镜下观察细胞存活状况。

12、， 活细胞至少 90以上， 并计算细胞数量。每次取 50106个活淋 巴细胞， 从尾静脉注射到一只F1杂交鼠体内， 注射时间分别为0、 3、 7、 10天。 共造模小鼠72 只。 0019 第二部分 ： 乌司他丁治疗 SLE 动物模型的实验研究 0020 选取诱导六周的慢性移植物抗宿主病狼疮样小鼠模型 72 只， 随机分为六组 ： 空白 对照组、 溶剂对照组、 激素治疗组、 乌司他丁治疗 I 组、 乌司他丁治疗 II 组、 乌司他丁治疗 III 组。空白对照组不予治疗 ； 溶剂对照组为等容积的含有选自甘露醇、 氯化钠或葡萄糖的 添加剂组成的缓冲液， 其成份比与乌司他丁注射液内添加剂相同 ； 激。

13、素治疗组为甲基强的 松龙， 剂量 30mg/kg， 每日 1 次， 持续 5 天一个疗程 ； 乌司他丁 I 组剂量为 50,000 单位 /kg， II 组剂量为 200,000 单位 /kg， III 组剂量为 400,000 单位 /kg， 均为每日一次， 持续 5 天一 个疗程。各组用药途径均采用尾静脉注射方法， 每月一个疗程。 0021 主要检测项目为 ： 血清检测肾功能、 自身抗体、 尿液蛋白定量分析， 肾脏病理及免 疫检查。 0022 结果 ： 0023 1. 各治疗组间一般情况的比较 0024 造模小鼠从第四周开始 . 活动度减少 ； 第六周起， 小鼠毛发略暗， 部分出现皮下水 。

14、肿， 及少量腹水， 体重较造模前有所下降。 第十二周， 空白及溶剂对照组小鼠精神萎靡， 活动 说 明 书 CN 101954071 B 4 3/6 页 5 明显减少， 部分鼠出现大量腹水， 28 周观察期分别死亡 4 只和 3 只 ； 激素治疗组小鼠情况好 于对照组， 但依然活动减少， 28 周观察期死亡 2 只 ； 乌司他丁治疗组特别是 II， III 组小鼠 体重逐步增加， 活动良好， 进食正常， I 组死亡 2 只， II 组及 III 组分别为 0 只和 1 只。从 诱导开始到实验结束的 24 周内， 中 / 高剂量乌司他丁治疗组可以减少 SLE 小鼠的死亡率。 0025 表 1 各试。

15、验组大鼠观察期死亡比较 0026 0027 2. 自身抗体比较 0028 抗双链 DNA(ds-DNA) 在 cGVHD 狼疮样小鼠血清中呈阳性， 不同治疗方案对造模小 鼠血清抗 dsDNA 值的改变均有显著性差异 (#P 0.05)， 其中乌司他丁 II 组及 III 组改变 更明显。各治疗组治疗前后抗 dsDNA 值的改变也均有显著性差异 (*P 0.05)。其中乌司 他丁治疗 II 组和 III 组比激素治疗组更优越。 0029 表 2 各治疗组小鼠不同时点血抗 ds-DNA 滴度变化的统计 (XS) 0030 0031 3.24 小时尿蛋白定量比较 0032 不同治疗方案对造模小鼠 2。

16、4 小时尿蛋白定量值的改变均有 显著性差异 (#P 0.05)， 对照组溶剂对照组乌司他丁治疗 I 组激素治疗组乌司他丁治疗 II 组 乌司他丁治疗 III 组。各治疗组小鼠在治疗前后不同时点 24 小时尿蛋白值也有显著性 说 明 书 CN 101954071 B 5 4/6 页 6 差异 (*P 0.05)。 0033 表 3 各治疗组小鼠不同时点 24 小时尿蛋白定量 (mg) 变化的统计 (XS) 0034 0035 4. 血清肌酐 (cr) 比较 0036 与对照组相比， 不同治疗方案均可降低 SLE 小鼠血清 cr 值水平， 二组相比有显著 性差异 (#P 0.05)， 乌司他丁治疗。

17、 II 组及 III 组治疗前后血清 Cr 水平明显下降， 二组相 比有显著性差异 (*P 0.05)。 0037 表 4 各治疗组小组不同时点血清 cr 变化的统计 ( 章 J) 0038 0039 5. 肾脏病理检查比较 0040 光镜下观察 SLE 小鼠肾脏病理切片 HE、 Masson 及 PSAM 染色发现造模 24 周时出现 系膜细胞中至重度增生， 内皮下大量嗜复红物质沉积， 都分肾小球有白金耳样改变， 球囊粘 连， 肾小管蛋白管型和肾间质大量炎细胞浸润， 局灶或节段肾小球出现硬化。 治疗组小鼠肾 说 明 书 CN 101954071 B 6 5/6 页 7 脏切片均有不同程度的改。

18、善 . 以乌司他丁治疗组 II 最明显 (P 005)。 0041 表 5 各治疗组小鼠造模后 24 周肾脏病理变化的统计 0042 0043 7. 肾脏免疫复合物检测结果比较 0044 各组IgG和C3荧光强度均明显低于对照组， 差异有统计学意义(*P0.05)， 其中 乌司他丁治疗 II 组和 III 组与又明显低于对照组， 差异有统计学意义 (#P 0.05)。 0045 表 6 各治疗组小鼠 IgG 荧光强度检测比较 分 ( 例 ) 0046 0047 表 6 各治疗组小鼠 C3 荧光强度检测比较 分 ( 例 ) 0048 说 明 书 CN 101954071 B 7 6/6 页 8 0049 本试验表明 ： 乌司他丁能明显抑制系统性红斑狼疮的发生发展， 为临床应用提供 了可靠依据。 说 明 书 CN 101954071 B 8 。