六神曲及其制备方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610838670.X (22)申请日 2016.09.21 (71)申请人 北京中医药大学 地址 100029 北京市朝阳区北三环东路11 号 (72)发明人 史新元 戚岑聪 马维维 (74)专利代理机构 北京悦成知识产权代理事务 所(普通合伙) 11527 代理人 高艳丽 (51)Int.Cl. A61K 36/899(2006.01) A61P 1/04(2006.01) A61P 1/00(2006.01) A61P 1/14(2006.01) (54)发明名称 六。

2、神曲及其制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种六神曲及其制备方法。 本 发明的六神曲制备方法包括发酵步骤： 将赛氏曲 霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液接种入六神曲 基质中； 所述赛氏曲霉的种子液的浓度为120 个菌丝球/ml， 所述枯草芽孢杆菌的种子液的浓 度为1081010CFU/ml， 且所述赛氏曲霉与所述枯 草芽孢杆菌的菌液体积比为101:110。 本发 明的制备方法得到的六神曲健脾和胃、 化食消积 作用更佳， 且发酵过程易于控制和检测， 产品质 量高， 稳定性更好。 权利要求书1页 说明书8页 CN 106389904 A 2017.02.15 CN 106389904 A 1.一种六神。

3、曲的制备方法， 其特征在于， 所述制备方法包括发酵步骤： 将赛氏曲霉种子 液和枯草芽孢杆菌种子液接种入六神曲基质中； 所述赛氏曲霉的种子液的浓度为120个 菌丝球/ml， 所述枯草芽孢杆菌的种子液的浓度为1081010CFU/ml， 且所述赛氏曲霉与所述 枯草芽孢杆菌的菌液体积比为101:110。 2.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述赛氏曲霉的种子液的浓度为2 15个菌丝球/ml， 所述枯草芽孢杆菌的种子液的浓度为1091010CFU/ml； 所述赛氏曲霉与所 述枯草芽孢杆菌的菌液体积比为51:15。 3.根据权利要求1所述的制备方法， 其特征在于， 所述赛氏曲霉种子液和所述。

4、枯草芽孢 杆菌种子液的接种总量为所述六神曲基质的612wt。 4.根据权利要求13任一项所述的制备方法， 其特征在于， 所述六神曲基质通过如下 方式获得： 将28重量份赤小豆、 28重量份苦杏仁、 18重量份青蒿、 18重量份苍耳草、 18重量份辣蓼和50150重量份小麦加工品粉碎， 混合， 然后灭菌； 所述的小麦加工品选 自面粉和/或麦麸。 5.根据权利要求13任一项所述的制备方法， 其特征在于， 通过所述的发酵步骤得到 发酵后的产物； 在该发酵步骤中， 发酵温度为2832， 发酵湿度为7590， 发酵时间为6 12天。 6.根据权利要求5所述的制备方法， 其特征在于， 发酵温度为2830，。

5、 发酵湿度为80 90， 发酵时间为710天。 7.根据权利要求5所述的制备方法， 其特征在于， 所述的制备方法还包括干燥步骤： 将 所述发酵后的产物置于3550下干燥520小时。 8.根据权利要求17任一项所述的制备方法制得的六神曲。 9.一种六神曲制剂， 其特征在于， 所述制剂中含有根据权利要求17任一项所述的制 备方法制得的六神曲或所述六神曲的炮制品， 所述六神曲的炮制品为炒神曲、 焦神曲或麸 制神曲。 10.根据权利要求17任一项所述的制备方法制得的六神曲或所述六神曲的炮制品用 于制备健脾和胃或者化食消积的药物的用途。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106389904 A 。

6、2 六神曲及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及六神曲的制备方法， 尤其是多菌种发酵工艺制备六神曲的方法， 还涉 及采用该方法制备得到的六神曲。 背景技术 0002 六神曲又名神曲， 是由苦杏仁、 赤小豆、 青蒿、 苍耳草、 辣蓼等中药加入面粉或麦麸 混合后制成的曲剂， 因其消食调中、 健脾和胃的功效显著， 临床应用十分广泛。 0003 目前不同产地的六神曲生产所依据的标准不同， 其原料、 原料配比及加入方式、 生 产工艺等均存在差异， 且六神曲的质量评价标准尚不完善。 由于六神曲的传统生产工艺采 用自然发酵方式， 导致不同产地甚至是相同产地不同批次的产品质量不尽相同， 其中存在 的某些。

7、杂菌还会产生有毒的代谢产物， 如黄曲霉素， 极大地影响了六神曲临床应用的安全 性。 因此， 规范化六神曲发酵工艺， 建立完善客观的质量评价指标是稳定六神曲质量的首要 任务。 0004 目前， 针对六神曲制备工艺的改进多集中在各味药材的发酵前处理方法上， 例如 中国专利申请201010606944.5、 201110283818.5等。 而针对六神曲发酵菌种及工艺的优化， 多尝试采用单菌种发酵， 例如程亦雄等报道了采用赛氏曲霉作为单一菌种发酵神曲的工艺 (赛氏曲霉深层发酵神曲的工艺优选， 中国实验方剂学杂志， 第19卷第19期， 2013年10月)。 单菌种发酵与自然发酵工艺相比， 具有缩短生产。

8、周期、 发酵过程易于控制和检测、 提高产品 质量及稳定性等优势。 但本申请发明人认为， 尽管单菌种发酵存在上述优势， 但六神曲传统 的自然发酵法是多种微生物共同作用的结果， 单一菌种的代谢作用及代谢产物不能完全替 代传统发酵体系中多菌种的作用， 由此可能影响六神曲的治疗效果。 0005 因此， 需要一种既能够控制产品的安全性和质量稳定性， 同时又具有良好的治疗 效果的六神曲制备方法。 发明内容 0006 申请人认为， 在六神曲天然发酵过程中， 不同的微生物有不同的代谢途径和代谢 产物， 不同微生物之间可能存在协同作用， 从而达到单一菌种所不能达到的效果。 通过研究 多种菌种的不同组合和接种量配。

9、比发酵得到的六神曲， 发明人意外地发现， 当采用赛氏曲 霉与枯草芽孢杆菌这两种微生物组合、 并按照特定接种量配比对六神曲药质培养基进行共 同发酵后， 所获得的六神曲的健脾和胃、 化食消积作用更佳， 甚至优于自然发酵得到的六神 曲。 0007 本发明的第一目的是提供六神曲的制备方法， 采用该方法制备得到的六神曲具有 更好的健脾和胃作用。 0008 本发明第二目的是提供上述制备方法制得的六神曲， 该六神曲。 0009 本发明的第三目的是提供含有上述六神曲的制剂。 0010 本发明的第四目的是提供上述六神曲在制备具有健脾和胃、 化食消积作用的药物 说 明 书 1/8 页 3 CN 106389904。

10、 A 3 中的用途。 0011 本发明的目的是通过如下技术方案实现的。 0012 本发明提供一种六神曲的制备方法， 其特征在于， 所述制备方法包括发酵步骤： 将 赛氏曲霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液接种入六神曲基质中； 所述赛氏曲霉的种子液的浓 度为120个菌丝球/ml， 所述枯草芽孢杆菌的种子液的浓度为1081010CFU/ml， 且所述赛 氏曲霉与所述枯草芽孢杆菌的菌液体积比为101:110。 0013 根据本发明的制备方法， 优选地， 所述赛氏曲霉的种子液的浓度为215个菌丝 球/ml， 所述枯草芽孢杆菌的种子液的浓度为1091010CFU/ml； 所述赛氏曲霉与所述枯草芽 孢杆菌的菌液体。

11、积比为51:15。 0014 根据本发明的制备方法， 优选地， 所述赛氏曲霉种子液和所述枯草芽孢杆菌种子 液的接种总量为所述六神曲基质的612wt。 0015 根据本发明的制备方法， 优选地， 所述六神曲基质通过如下方式获得： 将28重量 份赤小豆、 28重量份苦杏仁、 18重量份青蒿、 18重量份苍耳草、 18重量份辣蓼和50 150重量份小麦加工品粉碎， 混合， 然后灭菌； 所述的小麦加工品选自面粉和/或麦麸。 0016 根据本发明的制备方法， 优选地， 通过所述的发酵步骤得到发酵后的产物； 在该发 酵步骤中， 发酵温度为2832， 发酵湿度为7590， 发酵时间为612天。 0017 根。

12、据本发明的制备方法， 优选地， 发酵温度为2830， 发酵湿度为8090， 发 酵时间为710天。 0018 根据本发明的制备方法， 优选地， 所述的制备方法还包括干燥步骤： 将所述发酵后 的产物置于3550下干燥520小时。 0019 本发明还提供根据上述的制备方法制得的六神曲。 0020 本发明还提供一种六神曲制剂， 所述制剂中含有根据上述的制备方法制得的六神 曲或所述六神曲的炮制品， 所述六神曲的炮制品为炒神曲、 焦神曲或麸制神曲。 0021 本发明还提供根据上述的制备方法制得的六神曲或所述六神曲的炮制品用于制 备健脾和胃和/或化食消积的药物的用途。 0022 本发明的制备方法得到的六神。

13、曲采用了特定配比和用量的赛氏曲霉和枯草芽孢 杆菌作为发酵菌种， 所得六神曲的健脾和胃、 化食消积作用更佳， 甚至优于自然发酵得到的 六神曲。 同时， 本发明的六神曲制备方法， 其发酵过程易于控制和检测， 产品质量高， 稳定性 更好。 具体实施方式 0023 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明， 但本发明的保护范围并不限于 此。 0024 本发明中的论述中， 包括实施例和对比例中， 制备六神曲基质的各味药材配比均 为重量配比； 所述的青蒿、 苍耳草和辣蓼这三味药材均为干品。 需要说明的是， 本发明也可 以采用所述三味药材的鲜品制备六神曲基质， 其用量根据鲜品与干品的重量换算即可。 通 常，。

14、 上述三味药材鲜品与干品的重量比例为约3:1。 0025 为了避免自然发酵和单菌种发酵的各自的缺点， 发明人研究了多菌种对六神曲基 质发酵的影响， 试验了多种单菌种、 各菌种的不同种类的组合、 和各菌种不同接种量的配比 说 明 书 2/8 页 4 CN 106389904 A 4 对六神曲基质发酵的影响， 意外地发现， 当采用赛氏曲霉与枯草芽孢杆菌这两种微生物的 组合、 并按照特定接种量配比对六神曲药质培养基进行共同发酵时， 所获得的六神曲的蛋 白酶和淀粉酶活力更高， 且通过药效学验证， 其具有优异的健脾和胃、 化食消积作用， 甚至 优于自然发酵得到的六神曲。 0026 六神曲的制备方法 00。

15、27 本发明中， 所述赛氏曲霉拉丁名为Aspergillus sydowii， 可以来自市售， 也可以 按照现有文献记载的方法制备得到。 所述枯草芽孢杆菌拉丁名为Bacillus subtilis， 可以 来自市售， 也可根据现有文献记载的方法制备。 0028 本发明的制备方法包括发酵步骤以及干燥步骤。 0029 本发明的发酵步骤为： 所述制备方法包括发酵步骤： 将赛氏曲霉种子液和枯草芽 孢杆菌种子液接种入六神曲基质中； 所述赛氏曲霉的种子液的浓度为120个菌丝球/ml， 所述枯草芽孢杆菌的种子液的浓度为1081010CFU/ml， 且所述赛氏曲霉与所述枯草芽孢杆 菌的菌液体积比为101:11。

16、0。 本发明的制备方法中， 优选地， 所述赛氏曲霉与所述枯草 芽孢杆菌的菌液体积比为51:15， 更优选为1:13。 根据本发明一个优选的实施方式， 所述赛氏曲霉与枯草芽孢杆菌的菌液体积比为约1:2。 本发明的制备方法中， 优选地， 所述 赛氏曲霉种子液的赛氏曲霉浓度为215个菌丝球/ml， 所述枯草芽孢杆菌种子液的枯草芽 孢杆菌浓度为1091010CFU/ml。 更优选地， 所述赛氏曲霉种子液的赛氏曲霉浓度为38个 菌丝球/ml， 所述枯草芽孢杆菌种子液的枯草芽孢杆菌浓度为15109CFU/ml。 当赛氏曲 霉和枯草芽孢杆菌的比例在上述范围内时， 六神曲基质发酵的蛋白酶和淀粉酶活力均较 高。。

17、 0030 本发明中， 优选地， 所述赛氏曲霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液的接种总量为所 述六神曲基质的612wt， 更优选为710wt。 采用本发明的接种浓度时， 六神曲基质的 发酵的蛋白酶和淀粉酶活力均较高， 且发酵时间缩短。 0031 本发明中， 所述赛氏曲霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液可通过任何常规方法制 备， 只要达到上述浓度即可。 根据本发明优选的实施方式， 所述赛氏曲霉种子液的制备方法 为： 将赛氏曲霉斜面活化13次， 接种于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)液体培养基中， 于2533 、 转速120200rmin-1(即rpm)条件下振荡培养14天。 优选地， 所述赛氏曲霉种子液的 制备方。

18、法为： 将赛氏曲霉斜面活化12次， 接种于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)液体培养基中， 于2830、 转速150180rmin-1条件下振荡培养23天。 根据本发明一个优选的实施方 式， 所述赛氏曲霉种子液的制备方法为： 将赛氏曲霉斜面活化2次， 接种于马铃薯葡萄糖琼 脂(PDA)液体培养基中， 于28、 转速160rmin-1条件下振荡培养3天， 得到赛氏曲霉种子 液。 采用本发明的方法得到的赛氏曲霉种子液， 赛氏曲霉活力更好， 更有利于六神曲基质的 发酵。 0032 根据本发明优选的实施方式， 所述枯草芽孢杆菌种子液的制备方法为： 将枯草芽 孢杆菌斜面活化13次， 接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基。

19、中， 于2533、 转速120 200rmin-1条件下振荡培养14天。 优选地， 所述枯草芽孢杆菌种子液的制备方法为： 将枯 草芽孢杆菌斜面活化12次， 接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中， 于2830、 转速150 180rmin-1条件下振荡培养23天。 根据本发明一个优选的实施方式， 所述枯草芽孢杆菌 种子液的制备方法为： 将枯草芽孢杆菌斜面活化2次， 接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中， 说 明 书 3/8 页 5 CN 106389904 A 5 于30、 转速160rmin-1条件下振荡培养3天， 得到枯草芽孢杆菌种子液。 发明人发现， 采用 本发明的方法制备的枯草芽孢杆菌种子液， 枯草。

20、芽孢杆菌活力更好， 更有利于六神曲基质 的发酵。 0033 可通过测定赛氏曲霉种子液的浓度和枯草芽孢杆菌种子液的浓度， 计算二者分别 接种入六神曲基质中的种子液的体积。 测定菌液浓度的方法可采用重量法、 比浊法或平板 计数法。 0034 本发明中， 所述六神曲基质是指待发酵处理的六神曲药质培养基， 其是通过将原 料赤小豆、 苦杏仁、 青蒿、 苍耳草、 辣蓼和小麦加工品混合， 灭菌后得到的。 所述的小麦加工 品选自面粉和/或麦麸。 优选地， 其中赤小豆28重量份、 苦杏仁28重量份、 青蒿18重量 份、 苍耳草18重量份、 辣蓼18重量份、 小麦加工品50150重量份粉碎， 混合， 灭菌后得 到。

21、的。 当小麦加工品同时包含面粉和麦麸时， 二者重量配比不限。 根据本发明一个优选的实 施方式， 面粉与麦麸的重量比为12:12， 更优选为1:12。 根据本发明一个优选的实施 方式， 所述六神曲基质是通过将原料赤小豆2.4重量份、 苦杏仁2.4重量份、 青蒿1.4重量份、 苍耳草1.4重量份、 辣蓼1.4重量份、 面粉40重量份、 麦麸20重量份粉碎， 混合， 灭菌后得到 的。 本发明中， 所述赤小豆、 苦杏仁、 青蒿、 苍耳草和辣蓼可以是经过直接粉碎得到的， 也可 根据现有方法在粉碎前后经过多种方式的预处理， 对此没有特别限定。 根据本发明一个优 选的实施方式， 将赤小豆、 苦杏仁、 青蒿、。

22、 苍耳草、 辣蓼、 面粉和/或麦麸粉碎， 混合均匀， 加 水， 置于120140下高压灭菌2030分钟， 更优选为121下灭菌25min。 0035 本发明的制备方法中， 优选地， 发酵步骤的发酵温度为2832， 更优选为2830 。 优选地， 发酵湿度为7590， 更优选为8090。 优选地， 发酵时间为612天， 更优选 为710天。 根据本发明一个优选的实施方式， 发酵步骤的发酵温度为2830， 发酵湿度 为8090， 发酵时间为710天， 得到发酵后的产物。 根据本发明一个特别优选的实施方 式， 所述发酵步骤的发酵温度为30， 发酵湿度为85， 发酵时间为8天。 采用上述发酵步骤 时，。

23、 所得的六神曲具有较高的淀粉酶和蛋白酶活力。 0036 本发明的六神曲制备方法还包括干燥步骤： 将发酵后的产物干燥。 优选地， 将发酵 后的产物置于3550下干燥520小时， 优选置于3842下干燥815小时， 更优选置 于40下干燥12小时。 0037 根据本发明一个优选的实施方式， 所述六神曲的制备方法为： 0038 采用赛氏曲霉和枯草芽孢杆菌对六神曲基质进行发酵处理， 所述赛氏曲霉与所述 枯草芽孢杆菌的重量比为31:13， 所述六神曲基质是通过将赤小豆28重量份、 苦杏仁 28重量份、 青蒿18重量份、 苍耳草18重量份、 辣蓼18重量份、 面粉和/或麦麸50 150重量份粉碎， 混合，。

24、 置于120140下高压灭菌2030分钟得到的； 发酵处理的发酵温 度为2830， 发酵湿度为8090， 发酵时间为710天， 得到发酵后的产物； 将所述发酵 后的产物置于3550下干燥520小时， 得到六神曲。 0039 六神曲及其炮制品 0040 本发明的六神曲是根据上述制备方法制得的。 与自然发酵得到的六神曲产品及单 菌种发酵得到的六神曲产品相比， 本发明的六神曲产品的蛋白酶活力和淀粉酶活力更强； 更重要的是， 经药效实验证明， 本发明的六神曲的健脾和胃、 化食消积作用更强。 本发明的 六神曲的炮制品包括将上述制备方法制得的六神曲分别进行炒制、 炒焦、 麸制而分别获得 说 明 书 4/8。

25、 页 6 CN 106389904 A 6 的炒神曲、 焦神曲、 麸制神曲。 0041 六神曲制剂 0042 本发明的六神曲制剂是采用上述方法制得的六神曲和/或上述六神曲炮制品作为 药用原料制得的制剂。 具体而言， 本发明的六神曲制剂含有上述制备方法制得的六神曲， 可 以不含有或含有其他药用组分或药用原料， 可含有或不含有药学上可接受的辅料。 在本发 明中， 药学上可接受的辅料可以是领域内常规使用的那些， 并没有特别限定， 具体的实例包 括但不限于淀粉、 糖粉、 糊精、 乳糖、 微晶纤维素、 甘露醇、 水(包括注射用水)、 植物油等。 本 发明的药物制剂形式并没有特别限制， 例如可以是片剂、 。

26、胶囊剂、 颗粒剂、 丸剂、 散剂、 栓剂、 注射剂、 口服液等。 本发明所提供的各种药物剂型均可以以药学常规方法制备而成。 0043 0044 本发明的六神曲和/或其炮制品可用于制备健脾和胃、 化食消积的药物制剂， 且本 发明的六神曲的健脾和胃、 化食消积效果明显优于现有的自然发酵六神曲和单菌种发酵六 神曲。 0045 实施例1 0046 六神曲A的制备方法： 0047 将粉碎、 过40目筛后的赤小豆2.4重量份、 苦杏仁2.4重量份、 青蒿1.4重量份、 苍耳 草1.4重量份、 辣蓼1.4重量份、 面粉40重量份、 麦麸20重量份混合均匀， 加入26重量份蒸馏 水， 于121下灭菌25min。

27、， 冷却， 得到六神曲基质。 0048 将赛氏曲霉斜面活化2次， 接种于PDA液体培养基中， 于28下、 转速160rmin-1条 件下振荡培养3d， 得到赛氏曲霉种子液， 该赛氏曲霉种子液的浓度为约56个菌丝球/ml。 将枯草芽孢杆菌斜面活化2次， 接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中， 于30、 转速160r min-1条件下振荡培养3天， 得到枯草芽孢杆菌种子液， 该枯草芽孢杆菌种子液的浓度为约 3.2109CFU/ml。 0049 将赛氏曲霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液按照体积比2:1、 总体积为六神曲基质 重量的10wt， 接种于上述六神曲基质中， 在发酵温度为30， 发酵湿度为85的条件下。

28、， 发酵8天， 置于40下干燥12小时， 得到六神曲A。 0050 实施例2 0051 六神曲B的制备方法： 0052 将粉碎、 过40目筛后的赤小豆8重量份、 苦杏仁8重量份、 青蒿5重量份、 苍耳草5重 量份、 辣蓼5重量份、 面粉100重量份混合均匀， 加入50重量份蒸馏水， 于121下灭菌25min， 冷却， 得到六神曲基质。 0053 将赛氏曲霉斜面活化2次， 接种于PDA液体培养基中， 于30下、 转速200rmin-1条 件下振荡培养2天， 得到赛氏曲霉种子液， 该赛氏曲霉种子液的浓度为67个菌丝球/ml。 将 枯草芽孢杆菌斜面活化1次， 接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中， 于28。

29、、 转速150rmin-1 条件下振荡培养4天， 得到枯草芽孢杆菌种子液， 该枯草芽孢杆菌种子液的浓度为约5.5 109CFU/ml。 0054 将赛氏曲霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液按照体积比3:1、 总体积为六神曲基质 重量的12wt， 接种于上述六神曲基质中， 在发酵温度为28， 发酵湿度为75的条件下， 发酵10天， 置于40下干燥12小时， 得到六神曲B。 说 明 书 5/8 页 7 CN 106389904 A 7 0055 实施例3 0056 除了将实施例1中赛氏曲霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液的体积比设为1:3， 其他 操作与实施例1相同， 得到六神曲C。 0057 实施例4 00。

30、58 除了将实施例1中赛氏曲霉种子液和枯草芽孢杆菌种子液的总体积比设为六神曲 基质重量的7wt， 其他操作与实施例1相同， 得到六神曲D。 0059 实施例5 0060 将实施例1得到的六神曲A， 用小火炒至表面焦黄， 取出， 放凉， 得到炒神曲。 0061 实施例6 0062 将实施例1得到的六神曲A， 炒至外焦黑内焦黄， 取出， 放凉， 得到焦神曲。 0063 实施例7 0064 将10重量份的麸皮撒入热锅内， 待起烟时， 倒入100重量份的实施例1得到的六神 曲A， 拌炒至深黄色， 取出， 筛去麸皮， 放凉， 得到麸制神曲。 0065 对比例 0066 自然发酵六神曲E的制备： 0067。

31、 将粉碎、 过40目筛后的赤小豆2.4重量份、 苦杏仁2.4重量份、 青蒿1.4重量份、 苍耳 草1.4重量份、 辣蓼1.4重量份、 面粉40重量份、 麦麸20重量份混合均匀， 加入26重量份蒸馏 水， 于121下灭菌25min， 冷却， 得到六神曲基质。 将该六神曲基质敞口置于34， 湿度为 90的恒温恒湿箱中发酵10天， 取出后置于40烘箱中干燥12小时， 粉碎过筛， 得到自然发 酵的六神曲。 0068 通过对上述六神曲AE的淀粉酶活力和蛋白酶活力的测定， 发现六神曲AD中上 述两种酶的活力均高于六神曲E。 而为了进一步观察本发明的六神曲是否具有不劣于现有 方法制备的六神曲的药效， 申请人。

32、进行了药效实验， 并惊奇地发现， 本发明的六神曲药效明 显优于对比例的六神曲， 也优于市场上销售的同仁堂生神曲产品。 0069 实验例 0070 实验动物与药物 0071 ICR雄性小鼠， 体重1820g， 购自北京斯贝福实验动物科技有限公司。 0072 实验采用的协同发酵六神曲是实施例1方法制得的六神曲A， 自然发酵六神曲是对 比例1方法制得的， 同仁堂生神曲是市售的北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂生产 的生神曲。 以上三种六神曲分别粉碎过100目筛， 加蒸馏水配制成40的混悬液， 置于冰箱 储藏待用。 0073 复方地芬诺酯片(常州康普药业有限公司， 产品批号： 201406004)，。

33、 配制成1.0mg/ ml的复方地芬诺酯混悬液备用。 0074 自制营养糊为采用飞鹤奶粉(批号： 20150213)配制。 0075 神曲对正常及肠动力障碍模型小鼠小肠推进的影响 0076 神曲对正常小鼠小肠推进的影响： 0077 取ICR雄性小鼠40只， 按体重随机分成4组， 即空白对照组、 协同发酵六神曲组、 自 然发酵六神曲组和同仁堂生神曲组。 空白对照组灌服与药物等体积的蒸馏水， 给药组每天 给予40wt六神曲混悬液， 4g/kg体重， 连续给药5d， 实验前禁食不禁水18h； 在末次给药2h 说 明 书 6/8 页 8 CN 106389904 A 8 后， 各组分别墨汁灌胃(0.3。

34、ml/只)， 5min后立即脱颈椎处死小鼠， 完整取出自胃幽门至小肠 末端的部分， 测定幽门至墨水运行最远的距离及小肠的总长度， 计算推进率。 推进率计算公 式为： 0078 推进率墨水推进长度/总长度100。 0079 神曲对肠动力障碍模型小鼠小肠推进的影响： 0080 取ICR雄性小鼠50只， 按体重随机分成5组， 即空白对照组、 胃肠动力障碍模型组、 协同发酵六神曲组、 自然发酵六神曲组和同仁堂生神曲组。 空白对照组和模型组均灌服与 药物等体积的蒸馏水， 给药组每天给予40药物混悬液， 4g/kg体重， 连续给药5d， 实验前禁 食不禁水18h， 在末次给药2h后， 不同六神曲组及胃肠动。

35、力障碍模型组分别给予复方地芬诺 酯(10mg/kg体重)灌胃， 空白对照组灌服等体积蒸馏水， 0.5h后， 各组分别给予墨汁灌胃 (0.3ml/只)， 5min后测定小肠推进率， 测定和计算方法同上。 实验结果见表1。 0081 表1不同神曲对正常及肠动力障碍模型小鼠小肠推进功能的影响 0082 0083 注： 和空白组比较， *表示有差异， P0.05； *表示有显著性差异， P0.05)， 表明其不能提高正常小鼠的小肠推进率。 复方地芬诺酯组与空白组相比， 显著降低了小鼠 的小肠推进率(P0.01)， 认为模型有效； 与模型组相比， 协同发酵六神曲组改善了肠动力障 碍模型小鼠的肠推进率(P。

36、0.05)， 而自然发酵六神曲组和同仁堂生神曲组未能显著改善肠 动力障碍模型小鼠的肠推进率。 0085 不同神曲对正常小鼠体重增加的影响 0086 取ICR雄性小鼠40只， 按体重随机分成4组， 即空白对照组、 协同发酵六神曲组、 自 然发酵六神曲组和同仁堂生神曲组。 空白对照组灌服与药物等体积的蒸馏水， 给药组每天 给予40wt神曲混悬液， 4g/kg体重， 连续给药5d， 每组小鼠均饲喂等量饲料(200g/kg体 重)， 不限制饮水， 记录每只小鼠体重变化情况。 实验结果见表2。 0087 表2不同神曲对正常小鼠体重增加的影响 0088 0089 注： 和空白组比较， *表示有差异， P0。

37、.05， *表示有显著性差异， P0.01。 0090 由表可见， 与空白组相比， 在饲喂等量饲料的条件下， 协同发酵六神曲可以提高小 说 明 书 7/8 页 9 CN 106389904 A 9 鼠体重增量(P0.05)， 其他神曲对小鼠体重的增加无统计学意义。 这说明协同发酵的神曲 对小鼠的吸收功能有积极的影响。 0091 不同神曲对正常小鼠胃酸分泌和胃残留率的影响 0092 不同神曲对正常小鼠胃酸分泌的影响： 0093 取ICR雄性小鼠40只， 按体重随机分成4组， 即空白对照组、 协同发酵六神曲组、 自 然发酵六神曲组和同仁堂生神曲。 空白对照组灌服与药物等体积的蒸馏水， 给药组每天给。

38、 予40药物混悬液， 4g/kg， 连续给药5d， 实验前禁食不禁水18h， 末次给药1h后， 立刻脱颈椎 处死小鼠。 立即取出胃， 充分剪开， 置于50ml锥形瓶中， 加5ml蒸馏水并震荡， 滴入酚酞试剂 作为显色剂， 混匀， 用0.01mo/L的NaOH溶液进行滴定， 边滴边震荡摇匀， 直至酚酞显色为止， 记录所用NaOH溶液体积。 0094 不同神曲对正常小鼠胃残留率的影响： 0095 取ICR雄性小鼠50只， 按体重随机分成5组， 即空白对照组、 协同发酵六神曲组、 自 然发酵六神曲组、 同仁堂生神曲组和复方地芬诺酯组。 其中空白对照组灌服与药物等体积 的蒸馏水， 给药组每天给予40药。

39、物混悬液， 4g/kg体重， 复方地芬诺酯组每天给予10mg/kg 体重。 连续给药5d， 实验前禁食不禁水18h， 末次给药1h后， 每只小鼠灌胃1g自制营养糊， 15min后脱颈椎处死小鼠， 打开腹腔， 结扎胃贲门和幽门， 取胃， 用滤纸擦干后称全重， 然后 沿胃大弯剪开胃体， 洗去胃内容物后擦干， 称净重。 以胃全重和胃净重之差为胃内残留物重 量， 计算胃内残留物占所灌半固体糊的重量百分比为胃内残留率。 实验结果见表3。 0096 表3不同神曲对正常小鼠胃酸分泌和胃残留率的影响 0097 0098 注： 和空白对照组比较， *表示有差异， P0.05； *表示有显著性差异， 0099 P。

40、0.01。 0100 由表可见， 与空白对照组相比， 实验室自制协同发酵、 自然发酵六神曲都可显著促 进小鼠胃酸的分泌(P0.01)； 同仁堂市售神曲没有使小鼠胃酸分泌增多。 与空白对照组相 比， 协同发酵组和自然发酵组的胃残留率均显著高于空白对照组， 市售的同仁堂生神曲组 胃残留率与空白组差异无统计学意义； 复方地芬诺酯组极显著地增加了小鼠的胃残留率， 远高于六神曲组， 说明六神曲抑制小鼠胃排空的药效比较温和。 0101 本发明并不限于上述实施方式， 在不背离本发明的实质内容的情况下， 本领域技 术人员可以想到的任何变形、 改进、 替换均落入本发明的范围。 说 明 书 8/8 页 10 CN 106389904 A 10 。