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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201510508034.6 (22)申请日 2015.08.18 (71)申请人 华南理工大学 地址 510006 广东省广州市番禺区广州大 学城华南理工大学 (72)发明人 谭文 殷春霞 陈耀旭 尚瑾玲 杨莹莹 (74)专利代理机构 广州市华学知识产权代理有 限公司 44245 代理人 苏运贞 (51)Int.Cl. A61K 31/355(2006.01) A61P 9/06(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 9/12(2006.01) A2。
2、3L 33/15(2016.01) (54)发明名称 维生素E在制备防治缺血再灌注诱发的心律 失常药物中的应用 (57)摘要 本发明公开一种维生素E在制备防治缺血再 灌注诱发的心律失常药物中的应用， 属于制药领 域。 本发明的结果表明维生素E具有抗缺血再灌 注导致心律失常的作用， 把维生素E用于制备防 治心脏缺血再灌注后QT间期延长及相关心律失 常的药物， 此种药物是作用靶点明确， 分子结构 已知的新型抗缺血再灌注后QT间期延长的药物。 通过离体心脏缺血再灌注模型证明此种药物可 以减少缺血再灌注引起的QT间期延长， 即可以减 少相关心律失常发生的风险。 权利要求书1页 说明书4页 CN 106。
3、466312 A 2017.03.01 CN 106466312 A 1/1 页 2 1.维生素 E 在制备预防和 / 或治疗缺血再灌注诱发的心律失常药物中的应用。 2.根据权利要求 1 所述的应用， 其特征在于 ： 所述的心律失常为室性、 房性或窦性心律 失常。 3.根据权利要求 1 所述的应用， 其特征在于 ： 所述的心律失常为伴随 QT 间期延长的心 律失常。 4.根据权利要求 1 所述的应用， 其特征在于 ： 所述的心律失常是糖尿病、 心肌肥大或高 血压引起的心律失常。 5.根据权利要求 1 所述的应用， 其特征在于 ： 所述的维生素 E 通过减少活性氧对 hERG 电流的抑制而起预防。
4、和 / 或治疗作用。 6.根据权利要求 1 所述的应用， 其特征在于 ： 所述的维生素 E 制成片剂、 针剂或吸入制 剂。 7.根据权利要求 1 所述的应用， 其特征在于 ： 所述的维生素 E 是口服、 静脉注射、 肌肉 注射或经肺吸入给药方式。 8.一种组合药物或食品， 其特征在于包含维生素 E。 权 利 要 求 书 CN 106466312 A 2 1/4 页 3 维生素 E 在制备防治缺血再灌注诱发的心律失常药物中的 应用 技术领域 0001 本发明涉及维生素 E 在制药领域的新用途， 具体地说涉及维生素 E 在制备预防和 / 或治疗缺血再灌注诱发的心律失常药物中的应用。 背景技术 00。
5、02 近年来冠心病发病率逐年上升并呈年轻化趋势， 急性心肌梗死 (Acute myocardial infarction， AMI) 是冠心病最为严重的一种类型， 我国每年将近百万患者死于 急性心肌梗死， 因此， 该病被视为 “人类健康第一杀手” 。 急性心肌梗死最有效的治疗措施是 在冠状动脉已开通的基础上实现心肌组织的完全再灌注， 即实现心肌微循环再灌注。目前 常用的治疗手段包括溶栓法和冠状动脉介入手术治疗法。但是， 溶栓法和冠状动脉介入手 术治疗后往往造成缺血再灌注损伤。 如何防治缺血再灌注损伤及改善心肌组织再灌注已成 为急需解决的难题。 0003 心肌缺血再灌注损伤是一个极为复杂的病理生。
6、理变化过程， 除了导致心肌梗死面 积增加， 心肌细胞损伤和心室肌坏死， 也会导致严重的心律失常， 甚至导致心脏猝死。研究 表明 QT 间期延长会增加心律失常的发生率， 所以可采用这个指标评估心律失常发生的风 险。目前临床没有有效的药物用于治疗缺血再灌注诱发的心律失常， 而常用的抗心律失常 药物常常具有致心律失常作用。 发明内容 0004 为了克服现有技术的缺点与不足， 本发明的目的在于提供一种维生素 E 在制备预 防和 / 或治疗缺血再灌注诱发的心律失常药物中的应用。 0005 本发明的目的通过下述技术方案实现 ： 0006 本发明提供一种维生素E在制备预防和/或治疗缺血再灌注诱发的心律失常药。
7、物 中的应用。 0007 所述的心律失常为室性、 房性或窦性心律失常 ； 0008 所述的心律失常为伴随 QT 间期延长的心律失常 ； 0009 所述的心律失常也可以是糖尿病、 心肌肥大或高血压等疾病引起的心律失常 ； 0010 所述的维生素 E 通过减少活性氧对 hERG 电流的抑制而起预防和 / 或治疗作用 ； 0011 所述的维生素 E 可以制成片剂、 针剂或吸入制剂 ； 0012 所述的维生素 E 可以是口服、 静脉注射、 肌肉注射或经肺吸入给药方式 ； 0013 所述的维生素 E 还可以和其它药物或食品制成组合， 用于治疗用药物的应用。 0014 一种组合药物或食品， 包含维生素 E。
8、。 0015 本发明相对于现有技术， 具有如下的优点及效果 ： 0016 (1)研究表明维生素E能够降低梗死心肌的面积， 从而对心脏发挥保护作用。 但维 生素 E 对缺血再灌注引起 QT 间期延长及相关心律失常的治疗或预防作用， 至今未见报道。 说 明 书 CN 106466312 A 3 2/4 页 4 0017 (2) 本发明针对上述问题经过研究发现维生素 E 具有抗缺血再灌注导致心律失常 的作用， 把维生素 E 用于制备防治心脏缺血再灌注后 QT 间期延长及相关心律失常的药物， 此种药物是作用靶点明确， 分子结构已知的新型抗缺血再灌注后 QT 间期延长的药物。通过 离体心脏缺血再灌注模型。
9、证明此种药物可以减少缺血再灌注引起的 QT 间期延长， 即可以 减少相关心律失常发生的风险。 具体实施方式 0018 下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述， 但本发明的实施方式不限于此。 0019 实施例 1 维生素 E 抗离体豚鼠心脏缺血再灌注后引起 QT 间期延长作用试验 0020 方法 ： 于手术前准备手术器械， 用 75 (v/v) 酒精浸泡过夜。配制好 K-H 溶液后， 取适量倒入玻璃培养皿中， 并把玻璃培养皿放在冰上 (4左右 )， 充氧。采用腹腔注射方式 给予 0.5mL 1 (m/v) 肝素， 20 30min 后， 腹腔注射 5 (m/v) 戊巴比妥钠 (0.2mL/10。
10、0g) 麻醉， 深度麻醉后， 将豚鼠(Guinea pig)(成年普通级hartly豚鼠， 购自广州中医药大学实 验动物中心 ) 仰面置于手术台上， 用医用胶带固定四肢， 沿胸前壁正中剪开皮肤至剑突， 用 止血钳夹稳剑突， 快速开胸暴露心脏和血管， 用镊子夹住心脏根部， 剪断上下腔静脉、 肺动 脉、 主动脉及心脏周围组织， 取出心脏， 主动脉根部留 0.5cm 左右长度以备插管用。 0021 心脏取出后立即置于预先氧饱和处理过的冷 K-H 液中， 用手指轻压心室以利于 其中剩于血液的排出。用注射器从主动脉根部注入氧饱和处理过的冷 K-H 液， 一方面能 使心脏停止跳动从而减少能量消耗， 另一方。
11、面可通过冲洗冠状血管， 清除残流血液从而避 免形成小凝血块堵塞血管。将心脏迅速转移， 经主动脉逆行插管， 用动脉夹夹住， 以 3-0 手术丝线结扎并固定于 power Lab 心脏 Langendorff 灌流装置 ( 澳大利亚 AD 公司， 型号 ML176-220) 上， 用 K-H 液进行常规恒速 (10mL/min) 灌流， 保持灌流液温度恒定为 37， 并 充 95 (v/v)O2+5 (v/v)CO2饱和。将心电图记录装置连好， 按照文献描述的离体心脏心 电图记录方法， 采用三根银丝贴在心脏表面， 正极在心尖， 负极在右心耳， 地线在主动脉根 部处。心脏灌流开始后先稳定 20min。
12、， 然后停止灌流使心脏造成全心缺血， 30min 后再灌注， 正常组再灌注 30min。维生素 E 组在再灌注 15min 后灌注含 200M 维生素 E 的 K-H 液灌 流。整个过程中都记录心率和心电图。信号的采集通过 Power Lab 自带软件 Labchart 中 windows 采集， QT 间期采用 ECG Analysis 分析处理。QTc 是经过心率校准的 QT 间期。 0022 结果表明相比于缺血前， 再灌注后 QT 间期明显增加， 再灌注时给予 200M 维 生素 E 后 QT 间期恢复到缺血前状态。QT 间期在缺血前是 361.105.90ms， 再灌注后 400.11。
13、7.92ms， 再灌注时给予 200M 维生素 E 后 368.695.99ms。具体见表 1 所示。 0023 表 1 对缺血再灌注后 QT 间期的影响 0024 0025 与正常组相比， *P0.01 ； 与缺血再灌注组相比，#p0.05。 说 明 书 CN 106466312 A 4 3/4 页 5 0026 注 ： 表中为同一心脏自身对照， 总共 6 只豚鼠心脏。 0027 实施例 2 维生素 E 减少缺血再灌注对 IKr电流 (hERG 相关电流 ) 的抑制作用试验 0028 心肌细胞分离方法 ： 取出心脏部分见实施例 1， 取出心脏后， 找到主动脉， 将主动 脉套在套管底部， 注意。
14、不要插过主动脉瓣， 并用缝合线扎紧。用无钙台氏液灌流 4 5min， 泵出血污， 使心脏的血液完全排出。然后用 95 (v/v)O2+5 (v/v)CO2氧饱和的 15mL 0.4mg/mL II 型胶原酶 (worthington) 酶液循环灌流。不断检查心脏硬度， 心脏变软后滴 少量 0.4mg/mL II 型胶原酶酶液于倒置显微镜下观察是否有心肌细胞， 待视野中有几个心 肌细胞时立刻剪下心室部分， 在新鲜 10mL 0.4mg/mL II 型胶原酶 (worthington) 中将心 脏剪碎， 并于 37水浴中轻轻吹打， 使细胞加速分离， 吹打 5min 后用 250m 的细胞筛过 滤，。
15、 用吸管将滤液吸至 15mL 圆底离心管中， 离心 (500rpm， 1min)， 舍弃上清。加入含 50M 钙台氏液重悬细胞， 待细胞自然沉降， 依次加入到含 200M Ca2+， 500M Ca2+和 1mM Ca 2+ 的台氏液中复钙， 得到耐钙心肌细胞 ； 最后把细胞重悬于 M199 培养基中并于 CO2培养箱中 培养待细胞贴壁 ( 培养皿中加入 laminin(sigma) 促进细胞贴壁 )1h 后细胞贴壁可用于膜 片钳实验。将已贴壁的待用心肌细胞置于 35mm 的培养皿中， 加入 2mL 缺血液模拟缺血过 程， 缺血液中分别加入 2- 脱氧葡萄糖 ( 糖酵解抑制剂， sigma)，。
16、 乳酸 ( 模拟乳酸堆积， 阿拉 丁)， 将pH调至6.5模拟酸中毒， 加入1mM连二亚硫酸钠(sigma)并用封口膜封住培养皿造 成缺氧， 置于 37培养箱中， 缺血 1 小时后， 用正常台氏液洗 2 次， 加入 2mL 台氏液再灌注 15min， 待做膜片钳试验。利用全细胞膜片钳电压钳模式记录心肌细胞 IKr电流， 结果表明， 缺血再灌注对IKr电流具有显著的抑制作用。 缺血前IKr尾电流密度为1.440.06pA pF -1， 缺血再灌注后 IKr尾电流密度为 0.520.04pApF -1， 再灌注时加入 100M 维生素 E 后， IKr电流密度为 0.940.09pApF -1。同。
17、时在再灌注给予 10M 对照药线粒体 ROS 清除剂 Mito-tempo(sigma) 后， IKr电流也增加， 其电流密度为 0.970.08pApF -1； 具体见表 2 所 示。添加外源性活性氧 (reactive oxygen species， ROS) 成分过氧化氢对心肌细胞进行 预处理 10min， 再利用全细胞膜片钳电压钳模式记录心肌细胞 IKr电流， 发现 IKr电流也被抑 制， 且抑制程度与缺血再灌注抑制程度相当 ； 具体见表 3 所示。 0029 表 2 对缺血再灌注后 IKr电流的影响 0030 0031 与正常组相比， *P0.01 ； 与缺血再灌注组相比，#p0.05。 0032 表 3 过氧化氢预处理对 IKr电流的影响 0033 说 明 书 CN 106466312 A 5 4/4 页 6 0034 与正常组相比， *P0.01。 0035 上述实施例为本发明较佳的实施方式， 但本发明的实施方式并不受上述实施例的 限制， 其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、 修饰、 替代、 组合、 简化， 均应为等效的置换方式， 都包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 CN 106466312 A 6 。