用于治疗血脂异常和其它脂质病症的化合物
发明领域
本发明涉及一类苯并异唑化合物和其药学上可接受盐，其可以用 作治疗化合物，特别是治疗和控制高脂血症、高胆固醇血症、血脂异 常和其它脂质病症，以及延迟以下疾病的发作或降低其病症和后遗症 的风险，所述相关病症包括动脉粥样硬化和2型糖尿病，通常称为非胰 岛素依赖型糖尿病(NIDDM)。
发明背景
脂类代谢的疾病(血脂异常)包括不同的情况，其特征为一种或多种 脂类(即胆固醇和甘油三酯)和/或载脂蛋白(即载脂蛋白A、B、C和E)， 和/或脂蛋白(即由脂类和载脂蛋白形成的大分子络合物，其允许脂类在 血液中循环，如低密度脂蛋白(LDL)、极低密度脂蛋白(VLDL)和中间 密度脂蛋白(IDL))的不正常浓度。胆固醇大多被携带在低密度脂蛋白 (LDL)中，通常该组分被称为“坏的”胆固醇，因为已经证实了LDL- 胆固醇升高与增加患冠心病的危险密切相关。通常胆固醇较小的组分 携带在高密度脂蛋白(HDL)中，被称为“好的”胆固醇。事实上，众所 周知HDL的主要功能是接受沉积在动脉壁的胆固醇，并通过肠将它运 回肝脏处理。尽管希望降低LDL胆固醇升高的水平，但也希望升高HDL 胆固醇的水平。通常，人们发现HDL水平的增加与冠心病(CHD)的风 险降低有关。参见例如Gordon等的Am.J.Med.，62，707-714(1977)； Stampfer，等人，N.England J.Med.，325，373-381(1991)；和Kannel，等 人，Ann.Internal Med.，90，85-91(1979)。HDL升高药物的例子为烟酸， 其为具有有限利用度的药物，因为获得HDL升高的剂量与不需要的作 用，如潮红有关。
Fredrickson根据上述的结合变化对血脂异常进行了初始分类。 Fredrickson分类包括6种表型(即I、IIa、IIb、III、IV和V)，其中最通 常是分离的高胆固醇血症(或类型IIa)，其通常伴随着升高的总的和 LDL胆固醇的水平。高胆固醇血症初步治疗常常是改变饮食为低脂肪 和低胆固醇，结合适当的体育锻炼，当通过饮食和锻炼不能满足LDL- 降低目标后进行药物治疗。
第二种血脂异常的普通类型是混合或合并的高脂血症或 Fredrickson分类的类型IIb和III。该血脂异常通常普遍存在于患有2型 糖尿病、肥胖和代谢综合症的患者中。在该血脂异常中有LDL-胆固醇 的适度上升，伴随低密度的LDL-胆固醇颗粒、VLDL和/或IDL(即甘油 三酯富集脂蛋白)和总甘油三酯更明显的上升。此外，HDL的水平往往 较低。
过氧化物酶体增殖物是结构不同的一组化合物，当给予啮齿动物 时可引起肝和肾过氧化物酶体的大小和数目的急剧增加，并伴随通过 增加β-氧化周期的酶的表达而增加过氧化物酶体代谢脂肪酸的能力。 该组化合物包括但不限于贝特类(fibrate)脂类调节药物、除草剂、邻 苯二甲酸酯增塑剂和格列酮类(glitazones)，一类在研究中用于治疗2 型糖尿病的化合物。过氧化物酶体增生也受饮食或生理因素如高脂饮 食以及冷气候适应的引发。
人们已经发现并描述了三种亚型的激活的过氧化物酶体增殖活化 受体(PPAR)；它们为过氧化物酶体增殖活化受体α(PPARα)、过氧化 物酶体增殖活化受体γ(PPARγ)和过氧化物酶体增殖活化受体δ (PPARδ)。PPARα是由许多中等长度的脂肪酸和长链脂肪酸激活的， 并且其与脂肪酸β-氧化的刺激有关。PPARα也与啮齿动物和人体中 fibrate和脂肪酸的活性有关。Fibric酸衍生物如氯贝丁酯、非诺贝特、 苯扎贝特(benzafibrate)、环丙贝特、苄氯贝特和依托贝特以及吉非 贝齐，各个为PPARα配体和/或活化剂，可以产生血浆甘油三酯的相 当大的降低以及HDL的一些增加。对LDL胆固醇的影响是不一致的， 并且可能依赖于化合物和/或血脂异常的表型。出于这些原因，这类化 合物过去常主要是用于治疗高甘油三酯血症(即Fredrickson类型TV和 V)和/或混合高脂血症。
PPARγ受体亚型与脂肪细胞分化程序的激活有关，而与肝脏中刺 激过氧化物酶体增殖无关。有两个已知的PPARγ的蛋白同种型：PPAR γ1和PPARγ2，它们的不同仅在于PPARγ2在氨基末端含有另外的28 个氨基酸。这些人类同种型的DNA序列由Elbrecht等在BBRC 224； 431-437(1996)中描述。在小鼠中，PPARγ2在脂肪细胞中特异表达。 Tontonoz等在Cell 79：1147-1156(1994)中提供了证据表明PPARγ2的 一种生理作用是诱导脂肪细胞分化。作为核激素受体超家族的其它成 员，PPARγ2通过与其它蛋白相互作用并与激素效应元件如效应基因 的5’侧翼区结合来调节基因的表达。PPARγ2效应基因的一个实例为 组织特异性脂肪细胞P2基因。尽管过氧化物酶体增殖物(包括贝特类和 脂肪酸)可以激活PPAR的转录活性，但是只有前列腺素J2衍生物被识 别为PPARγ亚型的潜在天然配体，该亚型也可以以高的亲和力与噻唑 烷二酮抗糖尿病药结合。
从人类骨肉瘤细胞cDNA文库中克隆了人类核受体基因PPARδ (hPPARδ)，并且在A.Schmidt等的Molecular Endocrinology，6： 1634-1641(1992)中有全面描述，在此引入该文献内容作参考。应该注 意到PPARδ在文献中也被称为PPARβ和NUC1，这些名称的每一个 均指相同的受体；在Schmidt等的文献中，该受体被称为NUC1。
在WO96/01430中公开了一个人类PPAR亚型hNUC1B。 hNUC1B的氨基酸序列与人类的PPARδ(在此称为hNUC1)的不同之 处在于一个氨基酸，即292位的丙氨酸。基于在此描述的体内试验， 作者认为hNUC1B蛋白阻抑hPPARα和甲状腺激素受体蛋白的活性。
WO97/28149中公开了PPARδ激动剂可以用于提高HDL血浆水 平。最近WO2002/100351公开了作为可用于治疗不同炎症疾病如类风 湿性关节炎的PPARδ激动剂。WO97/27857、97/28115、97/28137和 97/27847中公开了可以用作抗糖尿病药、抗肥胖症药、抗动脉粥样硬化 症药和抗高血脂药的化合物，并且它们可激活PPARs。
人们一般认为格列酮类是通过与过氧化物酶体增殖物激活受体 (PPAR)家族的受体结合、控制与上述生物本体有关的某些转录元件来 显示作用。格列酮类是苄基-2，4-噻唑烷二酮衍生物。参见Hulin等的 Current Pharm.Design(1996)2，85-102)。
许多PPAR激动剂格列酮类已被核准用于治疗糖尿病。它们包括曲 格列酮、罗格列酮和吡格列酮，它们都是主要或排它的PPARγ激动 剂。许多更新的目前处于研制或临床试验中的PPAR激动剂不具有格列 酮结构，它们具有双重的PPARα和γ活性，如muraglitazar、 naveglitazar(LY-818)、TAK-559和tesaglitazar。PPARα/γ激动剂被期 望可改善患有NIDDM患者的胰岛素增敏和脂质曲线。
作为各种PPAR亚型的激动剂的化合物被期望可用于治疗对用 PPAR激动剂治疗有响应的疾病或病症。它们包括血脂异常、糖尿病和 相关病症。PPARα激动剂通过减少LDL水平的升高、减少甘油三酯水 平的升高和增加HDL水平来改善脂质曲线和缓解血脂异常。PPARγ激 动剂改善胰岛素增敏，减少患有NIDDM患者对胰岛素促分泌素和胰岛 素注射液的需要。PPARδ的作用较少被明确定义，但是PPARδ也似 乎帮助控制2型糖尿病患者控制高脂血症和高血糖。
发明概述
在此描述的此类型化合物是一种新类型有效和选择性的PPAR激 动剂。该化合物通常对PPARα受体显示高活性。许多这些化合物对 PPARγ和PPARδ受体显示很少活性或没有活性，这可由它们的试验 数据证明，所以它们对PPARα具有选择性。所述化合物可用于治疗可 通过PPARα激动剂治疗或改善的疾病、病症和症状。
所述化合物用于治疗一种或多种下列病症：混合型或糖尿病型血 脂异常；其它的脂质疾病，包括表现为LDL-C和/或非HDL-C增高的孤 立性高胆固醇血症、高载脂蛋白B血症、高甘油三酯血症、富含甘油三 酯的脂蛋白增加(elevated triglyceride-rich-lipoproteins)以及低的HDL 胆固醇浓度。所述化合物还具有治疗动脉粥样硬化、肥胖和血管再狭 窄的功用。它们也可以用于治疗炎症疾病和胰岛素增敏。由于所述化 合物在治疗和减轻一种或多种脂质疾病、肥胖、血脂异常和胰岛素敏 感性方面的作用，该化合物同时可以有效的治疗或改善代谢的综合 症，又名综合症X，由此减少动脉粥样硬化发展的风险。
本发明提供了一种具有式I结构的化合物，包括其药学上可接受的 盐和这些化合物的前药：
在具有式I的化合物中：
X和Y各自独立为O或S；
A选自H、-C1-C3烷基，其任选被1-5个卤素、-CR4R5-和-CR4R5O- 所取代，其中当A为-CR4R5或-CR4R5O-时，A和式I苯环之间的虚线代 表单键，并且当A为-CR4R5O-时，-CR4R5O-的O连接到苯环，以及当A 为H或-C1-C3烷基时，虚线不表示键。
R为H或C1-6烷基，其任选被1-5个卤素所取代；
R1选自H、卤素和C1-C4烷基，其任选被1-5个卤素所取代；
R2或R3各自独立选自H、卤素、C2-C4烯基和C1-C4烷基，其中C1- C4烷基和C2-C4烯基任选被1-5个卤素所取代；
R4或R5各自独立选自H、卤素和C1-C3烷基，其中C1-C3烷基任选被 1-5个卤素所取代；
m是0、1或2；
n是0、1或2；
Ar是苯基，其任选被独立选自卤素、-C1-C4烷基、-OC1-C4烷基和- NR6R7的1-3个取代基团所取代，其中-C1-C4烷基和-OC1-C4烷基任选被 1-5个卤素所取代；和
R6和R7各自独立为H或C1-C3烷基。
在上面的概述中，通过碳原子数引用的烷基，如-C3烷基或C3-C6烷基指的是直链和支链的烷基。
上述的化合物在治疗对使用PPARα激动剂治疗有响应的疾病或 病症中是有效的。化合物期望有效治疗和改善一种或多种下列疾病或 病症：高脂血症、血脂异常、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、高血 糖和肥胖。化合物还可以有效治疗非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM)和/ 或常常与NIDDM有关的疾病，但是其也可以存在于非糖尿病患者中， 包括高脂血症、血脂异常、高胆固醇血症、高甘油三酯血症和肥胖。 所述化合物可有效治疗动脉粥样硬化、高胰岛素血症、血管再狭窄和 炎性疾病。所述化合物可有效延迟或降低一些NIDDM的后遗症的风 险，如动脉粥样硬化、血管再狭窄和视网膜病，通过改善可能导致上 述疾病发展的症状而实现。所述化合物可有效减少患有代谢综合症的 人类患者中的血管事件，如冠心病，通过缓解一些与代谢综合症有关 的风险因素而实现。
发明详述
本发明具有许多的实施方案。几种优选的化合物的亚组描述如 下：
在本发明的一个实施方案中，式I化合物包括药学上可接受的盐定 义如下：X和Y为O，彼此为间位或对位；
R1选自-CH3、-C2H5、n-C3H7和-CH(CH3)2；
R2和R3各自独立选自卤素、-C1-C3烷基和-C2-C3烯基，其中-C1-C3烷基和-C2-C3烯基任选被1-3个卤素所取代；
m和n各自独立为0或1；
A选自H、-CH3、-CH2-和-CH2O-，其中当A为H或-CH3时，虚线不 表示键；以及其中当A为-CH2-或-CH2O-时，A和图I苯环之间的虚线代 表单键，并且-CH2O-的O连接到苯环。
Ar是苯基，其任选被独立选自-CF3、-OCF3、-C1-C3烷基、卤素和 -NR6R7的1-2个取代基团所取代；
R6和R7各自独立选自H和-C1-C3烷基。
式I化合物的一个亚组为式Ia，如下所示，包括其药学可接受的盐：
式Ia中取代基团具有如上提供的定义。
在其它的实施方案中，Ia的取代基，包括药学上可接受的盐，定义 如下：
R1选自-CH3、-C2H5、n-C3H7和-CH(CH3)2；
R2和R3各自独立选自卤素、-C1-C3烷基和-C2-C3烯基，其中-C1-C3烷基和-C2-C3烯基任选被1-3个卤素所取代；
m和n各自独立为0或1；
Ar是苯基，其任选被独立选自-CF3、-OCF3、-C1-C3烷基、卤素和 NR6R7的1-2个基团所取代；和
R6和R7各自独立选自H和-C1-C3烷基。
式I化合物的一个亚组为式Ib，如下所示，包括其药学可接受的盐：
式Ib中取代基团具有如上提供的定义。
在其它的实施方案中，如Ib的取代基定义如下，包括药学上可接 受的盐：
R1选自-CH3、-C2H5、n-C3H7和-CH(CH3)2；
R2和R3各自独立选自卤素、-C1-C3烷基和-C2-C3烯基，其中-C1-C3烷基和-C2-C3烯基任选被1-3个卤素所取代；
m和n各自独立为0或1；
Ar是苯基，其任选被独立选自-CF3、-OCF3、-C1-C3烷基、卤素和 NR6R7的1-2个取代基团所取代；
R6和R7各自独立选自H和-C1-C3烷基。
式I化合物的一个亚组为式Ic，包括药学上可接受的盐，显示如下：
在式Ic化合物中，取代基团具有如下定义：
Y为O，与在Y连接的苯环上O取代基彼此为间位或对位；
A选自H和-C1-C3烷基，其任选被1-5个卤素取代。
其它取代基如前所定义。
在其它的实施方案中，Ic的取代基定义如下，包括药学上可接受的 盐：
R1选自-CH3、-C2H5、n-C3H7和-CH(CH3)2；
A为H或-CH3；
R2和R3各自独立选自卤素、-C1-C3烷基和-C2-C3烯基，其中-C1-C3烷基和-C2-C3烯基任选被1-3个卤素所取代；
m和n各自独立为0或1；
Ar是苯基，其任选被独立选自-CF3、-OCF3、-C1-C3烷基、卤素和 NR6R7的1-2个取代基团所取代；
R6和R7各自独立选自H和-C1-C3烷基。
一般的，本发明的化合物R的优选值为H。
一般的，本发明的化合物R1的优选值为C1-C4烷基。
具体化合物通过下表1中给出的化学结构来说明。紧跟着表1，表2 中命名了这些化合物。具体化合物也包括药学上可接受的盐。
表2
实施例1：2-甲基-2-{3-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧 基]苯氧基}-丙酸；
实施例2：2-甲基-2-{4-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧 基]-苯氧基}-丙酸；
实施例3：2-甲基-2-{3-[3-(4-三氟甲氧基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基 氧基]-苯氧基}-丙酸；
实施例4：2-甲基-2-{3-[3-(4-氯-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-苯 氧基}-丙酸；
实施例5：2-甲基-2-{3-[3-(4-异丙基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧 基]-苯氧基}-丙酸；
实施例6：2-甲基-2-{3-[3-(4-乙基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]- 苯氧基}-丙酸；
实施例7：2-甲基-2-{3-[3-(3-三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基 氧基]-苯氧基}-丙酸；
实施例8：2-{3-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-苯 氧基}-丙酸；
实施例9：2-{3-[3-(4-氯-苯基)-苯并[d]异唑1-6-基氧基]-苯氧基}- 丁酸；
实施例10：2-{3-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-苯 氧基}-丁酸；
实施例11：3-甲基-2-{3-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基 氧基]-苯氧基}-丁酸；
实施例12：2-{2-氟-3-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧 基]-苯氧基}-丁酸；
实施例13：2-{3-[3-(4二甲基氨基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]- 苯氧基}-2-甲基-丙酸；
实施例14：2-乙基-5-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑1-6-基氧 基]-2，3-二氢-苯并呋喃-2-羧酸；
实施例15：2-异丙基-5-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基 氧基]-2，3-二氢-苯并呋喃-2-羧酸；
实施例16：2-异丙基-5-[3-(4-异丙基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧 基]-2，3-二氢-苯并呋喃-2-羧酸；
实施例17：2-异丙基-5-[3-(4-氯-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]- 2，3-二氢-苯并呋喃-2-羧酸；
实施例18：2-异丙基-5-[3-(4-三氟甲氧基-苯基)-苯并[d]异唑-6- 基氧基]-2，3-二氢-苯并呋喃-2-羧酸；
实施例19：2-甲基-7-[3-(4三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧 基]-2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-2-羧酸；
实施例20：2-乙基-7-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧 基]-2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-2-羧酸；
和实施例21：2-乙基-7-[3-(4-三氟甲氧基-苯基)-苯并[d]异唑-6- 基氧基]-2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烯-2-羧酸。
此外本发明包括含有上述任选化合物的药物组合物，包括药学上 可接受的盐和药学上可接受的载体。
本发明包括含有在此描述的化合物或药学上可接受的盐作为唯一 的活性成分和药学上可接受的载体的药物组合物，本发明还包括含有 在此描述的化合物或药学上可接受的盐，和一种或多种其它的活性成 分，以及药学上可接受的载体的药物组合物。
定义
除非碳链另有定义，“烷基”，以及具有前缀“烷(alk)”的其 它基团，如烷氧基或烯基一样，意指碳链可以是直链或支链，包括具 有多个分支点的链。烷基的例子包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁 基、仲和叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基等。异丙基和仲和 叔丁基为分支的。
“烯基”意指包含至少一个碳-碳双键的碳链，其可以是直链或支 链。烯基的例子包括乙烯基、烯丙基、异丙烯基、戊烯基、己烯基、 庚烯基、1-丙烯基、2-丁烯基、2-甲基-2-丁烯基等。
除非另有说明，“环烷基”意指具有从3-10碳原子的单或双环的饱 和碳环。该术语也包括单环或双环饱和碳环，其与另一个环基如芳基 稠合。环烷基的例子包括环丙基、环戊基、环己基、环庚基等。
当“芳基”(和“亚芳基”)用于描述在一个结构中的取代基或基团 时，其意指单环或二环或三环基团或取代基，其中所有的环是芳香性 的，并且仅包含碳环原子。“芳基”基团可以与其它环基稠合，如环 烷基或杂环基团。芳基取代基的例子包括苯基和萘基。苯基是优选的 芳基基团。
“杂环”意指一种包含至少一个选自N、S和O的杂原子的完全或 部分饱和环，除非另有定义，此处的环具有3至10个原子。
“杂芳基”(和“杂亚芳基”)意指包含至少一个选自N、O和S(包 括SO和SO2)的杂原子的芳环，在此该环包含5-6原子。杂芳基的例子包 括吡咯基、异唑基、异噻唑基、吡唑基、吡啶基、唑基、二唑基、 噻二唑基、噻唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、三嗪基、噻 吩基、嘧啶基、哒嗪基和吡嗪基。杂芳基和芳环可以稠合在一起形成 二环或三环体系，例子如苯并异唑基、苯并唑基、苯并噻唑基、苯 并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基(包括S-氧化物和二氧化物)、喹啉 基、吲哚基、异喹啉基、二苯并呋喃等。
“卤素”包括氟、氯、溴和碘。在烷基上的卤素取代基通常最优 选氟。
“Me”和“Et”各自代表甲基和乙基。
术语化合物的“给药(acministration of)”或“给药 (administering)”意指对向需要治疗的患者提供本发明的化合物或本 发明的化合物的药学上可接受的盐或本发明的化合物的前药。
治疗疾病或病症意指用特定方式处理疾病或病症。
疾病或病症的改善意指改善疾病或病症或使它变轻。
“代谢综合症”在国家胆固醇教育项目专家组在发现、估价和治 疗成人(ATP-III)高血胆固醇的第三次报告(Third Report of the National Cholesterol Education Program Expert Panel on Detection，Evaluation and Treatment ofHigh Blood Cholesterol In Adults(ATP-III)E.S.Ford et al.，JAMA，vol.287(3)，Jan.16，2002，pp 356- 359中定义。简单的说，如果一个人具有三个或更多以下症状：腹部肥 胖、高甘油三酯血症、低HDL胆固醇、高血压和高空腹血糖，就可以 定义为患有代谢综合症。用于这些症状的标准在ATP-III中定义。
本发明的化合物可以针对给药的“患者”选自哺乳动物，包括灵 长类动物，如猴子和猿；牛科动物如奶牛；马科动物如马；犬科动物 如狗；猫科动物如猫；羊如山羊和绵羊；以及啮齿类如小鼠、大鼠和 豚鼠。患者可以同时包括非哺乳动物种类如小鸡和其它鸟类。优选的 患者为人类。
如药物组合物中的术语“组合物”意指包括包含一种或多种活性 成分和构成载体的一种或多种惰性成分的产品，以及任何由任何两种 或更多种所述成分组合、络合或集合直接或间接产生，或者由一种或 多种所述成分解离产生，或者由一种或多种所述成分的其它类型反应 或相互作用产生的产品。因此，本发明药物组合物包括任何通过将本 发明化合物和药学上可接受载体混合制备的组合物。
光学异构体-非对映体-几何异构体-互变异构体
式I化合物可包含一个或多个不对称中心。因此化合物可作为外消 旋混合物、单一对映体、非对映体混合物和单一非对映体存在。本发 明意在包括式I化合物的所以这些异构体形式。本发明具体地包括显示 具有立体化学构型的化合物的对映体和外消旋混合物，以及未显示立 体化学代表的化合物的单一立体异构体。
在此描述的一些化合物包含烯双链，因此除非特别指明外意在包 括E和Z两种几何异构体。
在此描述的一些化合物可以与双键位移偶合的氢的不同连接点而 存在，被称为互变异构体。一个例子是羰基(例如酮)和它的烯醇形式， 常常称为酮-烯醇互变异构体。单一互变体及其混合物包括在式I的化合 物内。
如果想要，可使用传统的拆分法通过与对映纯酸或碱生成盐的分 级结晶来分离式I化合物的外消旋混合物。其它非对映异构衍生物可通 过式I化合物外消旋混合物与对映纯化合物偶合而形成。通过标准色谱 法或重结晶方案可分离该非对映体混合物。然后可通过裂解手性残基 将该非对映体混合物变为式I化合物的纯对映体。式I化合物的外消旋混 合物也可以直接通过色谱法利用手性固定相分离，其中许多实施例在 文献中公开。
另外地，通式I的化合物的任选对映体可通过使用已知构型的光学 纯原料或试剂立体选择性合成而得到。
具有一个以上不对称中心的式I化合物以及其非对映异构混合物存 在，可以通过标准方法类似地被分离成单一非对映体，并可以如上所 述分离为单一的对映体。
盐
术语“药学上可接受盐”意指从药学上可接受非毒性碱或酸(包括 无机或有机碱和无机或有机酸)制备的盐。对于式I的羧酸化合物，其 盐源自无机碱包括铝盐、铵盐、钙盐、铜盐、铁盐、亚铁盐、锂盐、 镁盐、三价锰盐、二价锰盐、钾盐、钠盐和锌盐等。特别优选是铵盐、 钙盐、镁盐、钾盐和钠盐。固态盐可存在于大于一种晶体结构，也可 以水合物形式存在。药学上可接受有机、非毒性碱衍生的盐包括伯胺、 仲胺和叔胺的盐、取代胺包括天然存在取代的胺、环胺和碱性离子交 换树脂的盐，如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N，N’-二苄基乙二胺、 二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基 吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖(glucosamine)、组氨酸、海 巴明(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、 哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙 胺、氨丁三醇等的盐。
对于碱性的化合物，可以从药学上可接受非毒性酸制备，非毒性 酸包括无机和有机的酸。这些酸包括乙酸、苯磺酸、安息香酸、樟脑 磺酸、柠檬酸、乙磺酸、反丁烯二酸、葡糖酸、谷氨酸、氢溴酸、盐 酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝 酸、扑酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、对甲苯磺酸等。特 别优选的酸为柠檬酸、氢溴酸、盐酸、马来酸、磷酸、硫酸和酒石酸。
应当理解，如在此处所用式I化合物也包括其药学上可接受的盐。
代谢产物-前药
前药是指对患者给药时或对患者给药后转变为所要求的化合物的 化合物。前药是本发明的化合物，前药的活性的代谢物，在此具有式I 的代谢物也是本发明的化合物。本发明羧酸的前药的非限定性例子是 羧酸酯，如C1-C6的酯，或一种酯，其对患者给药后具有更容易水解的 功能性。
这类化合物前药的例子包括其中在式I中的羧基-C(＝O)的形式是- C(＝O)G的化合物，在此G是在对哺乳动物患者给药期间或之后的生理 条件下容易被除去以释放其羧酸或羧酸盐的基团。
式Ia前药的例子包括以下化合物，其中G选自-ORa、-OCH2ORa、 -OCH(CH3)ORa、-OCH2OC(O)Ra、-OCH(CH3)OC(O)Ra、- OCH2OC(O)ORa、-OCH(CH3)OC(O)ORa和-NRbRb，在此Ra各自独立 选自C1-6烷基，其被一个或两个选自-CO2H、-CONH2、-NH2、-OH、- OAc、-NHAc和苯基的基团任选取代；并且Rb各自独立选自H和Ra。 应用
本发明的化合物为各种过氧化物酶体增殖活化受体亚型特别是 PPARα的有效的激动剂，通常相对于PPARγ和PPARδ具有很少或没 有活性。因此，本发明的化合物为一种亚型PPARα的选择性和强效激 动剂。一些化合物同时具有PPARγ和/或PPARδ的激动剂活性。本发 明的化合物可以用于治疗、控制或改善疾病、障碍或病症，其中治疗、 控制或改善通过活化PPARα亚型而实现。
本发明的一个重要方面提供治疗、控制或改善哺乳动物各种脂类 病症的方法，所述脂类病症包括血脂异常、高胆固醇血症、高脂血症、 高甘油三酯血症、低HDL水平、高LDL水平和动脉粥样硬化及其后遗 症，该方法包括给予需要这种治疗的哺乳动物治疗有效量的式I化合 物。
可以用此处定义的本发明化合物治疗、控制或改善一种或多种下 列需要治疗的哺乳动物或人类患者的疾病或病症，其中治疗包括给予 需要治疗的患者治疗有效量的式I化合物：
(1)脂类病症；
(2)高脂血症；
(3)低HDL-胆固醇；
(4)高LDL-胆固醇；
(5)高胆固醇血症；
(6)高甘油三酯血症；
(7)血脂异常，包括高LDL胆固醇和低HDL胆固醇；和
(8)动脉粥样硬化，包括动脉粥样硬化的后遗症(心绞痛，跛行，心 脏病发作，中风等)。
更一般地，式I、Ia、Ib和Ic化合物可用来治疗、控制或改善一种 或多种以下疾病、障碍和病症，给予治疗有效量的化合物：(1)脂类病 症，(2)血脂异常，(3)高脂质血症，(4)高甘油三酯血症，(5)高胆固醇 血症，(6)低HDL水平，(7)高LDL水平，(8)动脉粥样硬化和它的后遗症， (9)肥胖，包括腹部肥胖，(10)血管再狭窄，(11)视网膜病，(12)非胰岛 素依赖型糖尿病(NIDDM)，(13)高血糖，(14)葡萄糖耐量受损，(15)胰 岛素抗性，(16)过敏性肠综合征，(17)炎症性肠病，包括克罗恩氏病和 溃疡性结肠炎，(18)胰腺炎，(19)其它的炎症疾病，(20)神经变性的疾 病，(21)阿尔茨海默氏病，(22)牛皮癣，(23)寻常痤疮，(24)由PPAR调 节的其它皮肤病和皮肤学病症，(25)高血压，(26)恶病质，以及(27)代 谢综合症，有时被称为综合症X。
化合物还可用于治疗(1)肿瘤病症，(2)脂肪细胞肿瘤，(3)脂肪细胞 癌如脂肉瘤，(4)前列腺的癌和其它癌，包括胃癌、乳腺癌、膀胱癌和 结肠癌，以及(5)血管生成。
本发明可以治疗的其它疾病包括卵巢雄激素过多症(多囊卵巢综合 症)、恶病质和其它障碍，其中胰岛素抗性是一种。
本发明更进一步涉及式I化合物或其药学上可接受的盐在制备药物 上的用途，所述药物用于治疗通过给药PPARα激动剂治疗的疾病或病 症。
本发明另一个方面提供一种治疗恶病质的方法。PPARα已知对于 饥饿的适当能量节约响应是必要的，不适当的代谢和能量利用显然是 由于恶病质的消耗。本发明化合物因此可用于治疗恶病质。
在另一个方面，本发明提供一种通过给药有效量的式I的PPARα 激动剂治疗炎症疾病的方法，包括炎症性肠病、克罗恩氏病和溃疡性 结肠炎。本发明可治疗的其它炎症疾病包括痛风、类风湿性关节炎、 骨关节炎、多发性硬化、哮喘、ARDS、牛皮癣、血管炎、缺血/再灌 注损伤和相关疾病。
本发明的另一个方面提供一种通过给予需要这样治疗的哺乳动物 或人类患者治疗有效量的式I化合物，治疗各种PPARα激动剂调节的 皮肤病和皮肤学病症的方法。这些疾病和病症包括牛皮癣和寻常痤 疮。其它可治疗的皮肤病和皮肤学病症的例子包括湿疹；与狼疮相关 的皮肤损伤(lupus associated skin lesions)；皮炎如脂溢性皮炎和日光性 皮炎；角化病如脂溢性角化病、老年角化病、光化性角化病、光诱导 角化病和毛囊角化病；瘢痕瘤和预防瘢痕瘤生成，疣包括疣、湿疣或 尖锐湿疣，以及人乳头状瘤病毒(HPV)感染如性病湿疣、病毒性疣、传 染性软疣、粘膜白斑病、扁平苔癣、角膜炎、皮肤癌如基底细胞癌、 皮肤T细胞淋巴瘤和局部良性表皮肿瘤(皮肤角化病，表皮痣)。
给药和剂量范围
可以使用任何适当的给药途径为哺乳动物(特别是人类)提供有效 剂量的本发明的化合物。例如，可以采用口服、直肠、局部、肠胃外、 眼、肺、鼻等途径。剂型包括片剂、锭剂、分散剂、悬浮剂、溶液、 胶囊、霜剂、膏剂、气雾剂等。优选口服给予式I化合物。
使用的活性组分的有效剂量可以根据下列因素变化：所使用的具 体化合物、给药方式、所治疗的疾病以及所治疗疾病的严重程度。此 剂量可以由本领域技术人员容易地确定。
当治疗高血糖、高甘油三酯血症、血脂异常、高脂血症和其它式 I化合物适用的疾病时，一般当以每公斤动物体重约0.1mg至约100mg 的日剂量给予本发明的化合物时可获得令人满意的结果，优选以单一 日剂量给药或以分剂量在一天中分二至六次给药，或者以缓释形式给 药。对于大多数大的哺乳动物而言，总的日剂量为约1.0mg至约 1000mg，优选约1mg至约50mg。所以，在为70kg成人的情况下，总日 剂量一般为约7mg至约350mg。根据特定化合物以及患者改变给药方 案。可以在列举范围之内、之上或甚至超过那些范围对剂量方案进行 调整以获得最佳治疗反应。患者日剂量的实例是1、2.5、5、7.5、10、 15、25、40、50、75、100、150、200、250、300和350mg。
药用组合物
本发明的另一个方面提供药用组合物，它含有式I化合物和药学 上可接受的载体。本发明的药用组合物含有作为活性组分的式I化合 物或其药学上可接受的盐或其前药，以及药学上可接受的载体和任选 的其它治疗组分。更典型地，所选择的式I化合物，或其药学可接受的 盐，是组合物中唯一的活性成分。术语“药学上可接受的盐”指由药 学上可接受的非毒性碱或酸(包括无机碱或酸和有机碱或酸)制备的 盐。
所述组合物包括适用于下列途径给药的组合物：口服、直肠、局 部、肠胃外(包括皮下、肌内和静脉内)、眼(眼用)、肺(鼻或颊吸入)或 经鼻给药，尽管在任何情况下最适用的途径取决于所治疗的疾病的性 质和严重程度以及所述活性组分的性质。可以以任何制药领域熟知的 方法以单位剂型方便地提供和制备这些组合物。
在实际应用中，可以根据常规制药混合技术将作为活性组分的式 I化合物与药用载体混合为紧密混合物。根据给药所需的制剂形式如 口服或肠胃外(包括静脉内)给药所需的制剂形式，所述载体可以为多种 形式。在制备口服给药剂型的组合物时，可以使用任何有用的药用介 质，例如在为口服液体制剂(如悬浮剂、酏剂和溶液剂)的情况下，可以 使用水、二元醇、油、醇、矫味剂、防腐剂、着色剂等；或者在为口 服固体制剂(如粉末、硬和软胶囊以及片剂)的情况下，可以使用载体如 淀粉、糖、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等，相对于液 体制剂而言更优选固体口服制剂。
由于易于给药，所以片剂和胶囊剂为最有利的口服单位剂型，在 这种情况下很明显需要使用固体药用载体。如果需要，可以采用标准 水溶液或非水溶液技术对片剂进行包衣。此类组合物和制剂应该含有 至少0.1％的活性化合物。当然，活性化合物在这些组合物中的百分比 可以变化，但是有利地为所述单位重量的约2至约60％。调整活性化 合物在此类治疗有效组合物中的量使得可以获得有效剂量。也可以将 所述活性化合物以如液体滴剂或喷雾剂的形式鼻内给药。
片剂、丸剂、胶囊剂等也可以含有粘合剂如黄蓍胶、阿拉伯胶、 玉米淀粉或明胶；赋形剂如甘露醇、微晶纤维素或磷酸二钙；崩解剂 如玉米淀粉、马铃薯淀粉、藻酸或交联羧甲基纤维素钠；润滑剂如硬 脂酸镁和甜味剂如蔗糖、乳糖或糖精。当剂量单位形式为胶囊剂时， 除上述类型的物质外，它还可以含有液体载体如脂肪油。
各种其它物质可以作为包衣物存在或者用于对剂量单位的物理形 式进行改性。例如，可以用虫胶、糖或两者对片剂进行包衣。除所述 活性组分外，糖浆或酏剂还可以含有作为甜味剂的蔗糖、作为防腐剂 的羟基苯甲酸甲酯和羟基苯甲酸丙酯、染料和矫味剂如樱桃香精或橙 香精。
也可以经肠胃外给予式I化合物。可以在与表面活性剂如羟丙基 纤维素适当混合的水中制备这些活性化合物的溶液或悬浮液。也可以 用甘油、液体聚乙二醇或它们在油中的混合物制备分散剂。在储存和 使用的通常条件下，这些制剂可以含有防腐剂以阻止微生物的生长。
适用于注射使用的制剂形式包括无菌水溶液或分散液以及用于无 菌注射溶液或分散液即时配制的无菌粉剂。在所有这些情况下，所述 形式必须是无菌的，并且必须为流体以存在容易的可注射性。在生产 和储存条件下它必须是稳定的，并且可以保存而不受微生物如细菌和 真菌作用的污染。所述载体可以为溶剂或分散介质，包括如水、乙醇、 多元醇(如甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)、它们的适当混合物以及植物 油。
联合治疗
可以将本发明化合物与也可以用于治疗式I化合物用于治疗的疾 病或病症的其它药物联合使用。可以将这些其它药物通过通常使用的 途径和用量与式I化合物一起同时或顺序给药。当将式I化合物与一 种或多种其它药物同时使用时，优选含有此类其它药物和式I化合物 的单位剂型的药用组合物。然而，联合治疗也包括式I化合物与一种 或多种其它药物在不同的重叠时间表给药的治疗。我们也认为当与一 种或多种其它活性组分联合使用时，可以以比它们各自单独使用时更 低的剂量使用本发明的化合物和其它的活性组分。因此，本发明的药 用组合物包括那些除含有式I化合物外还含有一种或多种其它的活性 组分的药用组合物。
例如，式I化合物与一种或多种其它降脂药物结合给药，包括(1)胆 固醇生物合成抑制剂，包括而不限于，HMG-CoA还原酶抑制剂如洛伐 他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀、利伐他丁、匹 伐他汀、罗苏伐他汀和ZD-4522；(2)胆固醇吸收抑制剂(如甾烷醇酯 (stanol ester)、植物甾醇苷如替奎安或氮杂环丁酮(azetidinone)如 依泽替米贝)；(3)ACAT抑制剂(如阿伐麦布)，(4)烟酸；(5)胆汁酸螯合 剂；(6)微粒体甘油三酯转运抑制剂；(7)胆汁酸再摄取抑制剂；(8)PPAR α/γ激动剂如muraglitazar；和(9)CETP抑制剂如torcetrapib。这些联 合治疗被期望在治疗或控制一种或多种选自血脂异常、高胆固醇血 症、高脂血症、高甘油三酯血症、低HDL水平、高LDL水平和动脉粥 样硬化及其后遗症的脂质病症或病症中特别有效。联合治疗可以使在 使用一种或两种活性组分的减少量获得治疗控制和/或获得比基于当仅 仅使用其中一种化合物时的脂类控制获得预期更好的脂类控制成为可 能。联合治疗可以使获得治疗控制一种或多种脂质病症和糖尿病成为 可能。优选联合用药包括式I化合物和一种或多种其它选自胆固醇吸收 抑制剂如依泽替米贝、他汀类(如辛伐他汀、阿托伐他汀或罗苏伐他 汀)、ACAT抑制剂或另一种PPARα激动剂如非诺贝特或其它贝特类。 非常优选的联合用药包括基本上由本发明的化合物与胆固醇吸收抑制 剂(依泽替米贝)，或本发明的化合物与他汀(如辛伐他汀)，或本发明的 化合物与他汀和胆固醇吸收抑制剂组成的组合。
更一般的，可与式I化合物相结合，或单独或在相同药物组合物中 给药的治疗类化合物的例子，包括，但不限于：
(a)胰岛素增敏剂；
(b)抗糖尿病化合物；
(c)胆固醇降低药；
(d)抗肥胖化合物；
(e)抗炎化合物；和
(f)抗高血压药。
可以与具有式I化合物结合给药的化合物类的例子包括：
(a)PPARγ激动剂和部分激动剂如格列酮类(例如曲格列酮、吡格 列酮、恩格列酮、MCC-555、罗格列酮等)；
(b)PPARα/γ双重的激动剂，比如muraglitazar；
(c)其他PPARα激动剂，比如非诺贝酸衍生物，包括吉非贝齐 (gemfibrizol)、氯贝丁酯、非诺贝特和苯扎贝特；
(d)PPARδ激动剂，例如在WO97/28149中公开的那些；
(e)双胍类如二甲双胍和苯乙双胍；
(f)蛋白酪氨酸磷酸酶-IB(PTP-IB)抑制剂；
(g)二肽基肽酶IV(DP-IV)抑制剂如西他列汀(sitagliptin)、维格列 汀(vildagliptin)和saxagliptin；
(h)胰岛素或胰岛素模拟物；
(i)磺酰脲类如甲苯磺丁脲和格列吡嗪或相关物；
(j)α-葡糖苷酶抑制剂(如阿卡波糖)；
(k)胰高血糖素受体拮抗剂；
(l)糖原磷酸化酶抑制剂；
(m)11-β-HSD-1型酶抑制剂；
(n)11-β-HSD-1受体拮抗剂；
(o)exendin-4、exendin-3、GLP-1、GLP-1模拟物和GLP-1受体激动 剂如exenatide，例如在WO00/42026和WO00/59887中公开的那些；
(p)GIP、GIP模拟物，例如在WO00/58360中公开的那些，以及GIP 受体激动剂；
(q)PACAP、PACAP模拟物和PACAP受体3激动剂，例如在 WO01/23420中公开的那些；
(r)HMG-CoA还原酶抑制剂(洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟 伐他汀、阿托伐他汀、利伐他汀、伊伐他汀、罗苏伐他汀、ZD-4522 和其它他汀类)；
(s)胆汁酸螯合剂(消胆胺、考来替泊和交联右旋糖酐的二烷基氨基 烷基衍生物)；
(t)烟醇、烟酸或其盐；
(u)依泽替米贝和其它胆固醇吸收抑制剂；
(v)酰基辅酶A(acyl CoA)：胆固醇酰基转移酶抑制剂(ACAT抑制 剂)，其例子如阿伐麦布；
(w)酚抗氧化剂如普罗布考；
(x)回肠胆汁酸转运蛋白抑制剂；
(y)意图用于治疗炎症疾病的药物如阿斯匹林、非甾体抗炎药物、 糖皮质激素、柳氮磺吡啶和环加氧酶2选择性抑制剂；
(z)抗肥胖化合物如芬氟拉明、右芬氟拉明、苯丁胺、西布曲明、 奥利司他、神经肽Y5抑制剂和β3肾上腺素能受体激动剂；
(aa)甲状腺激素模拟物；
(bb)LXR激动剂；
(cc)FXR激动剂；
(dd)PLTP抑制剂；
(ee)CETP抑制剂如torcetrapib；
(ff)糖皮质激素；和
(gg)TNF螯合剂。
上述联合用药通常包括本发明一种化合物与一种其它活性物质的 结合。然而，考虑到联合用药也可同时包括两种以上上文所列活性组 分，其选自一种或多种本发明化合物和上面所列出的一种或多种其它 活性物质。非限制的例子包括一种或多种式I化合物与两种或多种选自 胰岛素增敏剂、抗糖尿病化合物、胆固醇降低药物、抗肥胖化合物、 抗炎症化合物和抗高血压药物的联合。
可适合于伴有血脂异常的2型糖尿病患者的联合用药包括一种或 多种式I化合物和一种或多种选自抗糖尿病化合物，包括双胍类、磺酰 脲类、PPARγ激动剂、PTP-IB抑制剂、DP-IV抑制剂、胰岛素和抗肥 胖化合物的化合物。
生物测定
A)PPAR结合测定
为了制备重组人的PPARγ、PPARδ和PPARα，将人PPARγ2、 人PPARδ和人PPARα作为gst-融合蛋白在大肠杆菌中培养。将PPAR γ2的全长人cDNA亚克隆到pGEX-2T表达载体(Pharmacia)内。将 PPARδ和PPARα的全长人cDNA亚克隆到pGEX-2T表达载体 (Pharmacia)内。将含有各自质粒的大肠杆菌繁殖，诱导和通过离心收 获。将重悬的离心沉淀在French压力机中打碎，通过以12,000×g离心 来除去碎屑。通过在谷胱甘肽琼脂糖上的亲和色谱来纯化重组的人 PPAR受体。施加到柱上并洗涤一次后，用谷胱甘肽洗脱受体。加入甘 油(10％)以稳定受体，并将等份试样在-80℃贮存。
为了与PPARγ结合，按照Berger等人(新的过氧物酶体增殖剂激 活受体(PPARγ)和PPARδ配体产生不同的生物作用(Novel peroxisome proliferator-activated receptor(PPARγ)and PPARδligands produce distinct biological effects.J.Biol.Chem.(1999)，274：6718-6725)的描述，将 等份试样的受体在含有0.1％的脱脂乳粉和2.5nM[3H2]L-783483(17 Ci/mmol)±受试化合物的TEGM(10mM Tris，pH7.2，1mM EDTA，10％ 甘油，7μL/100mL-巯基乙醇，10mM钼酸钠，1mM二硫苏糖醇，5μg/mL 抑酶肽，2μg/mL亮肽素，2μg/mL苄脒和0.5mM PMSF)中培养。(L- 783483是3-氯-4(3-(7-丙基-3-三氟甲基-6-苄基(benz)-(4，5)-异 唑氧基)丙硫基)苯乙酸，见WO97/28137中的实施例20)将测定物以 150μL的最终体积于4℃培养～16小时。通过与100μL葡聚糖/明胶包被 的木炭一起在冰上培养约10分钟来除去未结合的配体。以3000rpm于4 ℃离心10分钟后，将50μL上清液组分在Topcount中计数。
为了与PPARα结合，将等份试样的受体在含有0.1％的脱脂乳粉和 5.0nM[3H2](3-(4-(3-苯基-7-丙基-6-苄基-(4.5)-异唑氧基)丁氧 基)苯乙酸(34Ci/mmol)±受试化合物的TEGM(10mM Tris，pH 7.2，1mM EDTA，10％甘油，7μL/100mL β-巯基乙醇，10mM钼酸钠，1mM 二硫苏糖醇，5μg/mL抑酶肽，2μg/mL亮肽素，2μg/mL苄脒和0.5mM PMSF)中培养。这是WO77/28137中的实施例62的氘标记的变体。将测 定物以150μL的最终体积于4℃培养约16小时。通过与100μL葡聚糖/ 明胶包被的木炭一起在冰上培养约10分钟来除去未结合的配体。以 3000rpm于4℃离心10分钟后，将50μL上清液组分在Topcount中计 数。
B)Gal-4hPPAR反式激活试验
嵌合受体表达构造物，pcDNA3-hPPARγ/GAL4、pcDNA3-hPPAR δ/GAL4、pcDNA3-hPPARα/GAL4是通过将酵母GAL4转录因子DBD 分别插到hPPARγ、hPPARδ、hPPARα的配体结合域(LBD)相邻处 而制备的。报道基因构造物pUAS(5×)-tk-luc通过插入5份拷贝的GAL4 响应元件到疱疹病毒最小胸苷激酶启动子和荧光素酶报道基因的上游 而制备的。pCMV-lacZ含有在巨细胞病毒启动子调控下的半乳苷酶Z基 因。在37℃于湿润的10％CO2气氛下，在含有10％木炭剥离的胎牛血清 (Gemini Bio-Products，Calabasas，CA)、非必需氨基酸、100单位/ml青霉 素和100mg/ml硫酸链霉素的高葡萄糖Dulbecco的改良的Eagle培养基 (DMEM)中，将COS-1细胞以12×103个细胞/孔的量接种到96孔细胞培 养板中。24小时后，根据生产商的说明用Lipofectamine(GIBCO BRL， Gaithersburg，MD)进行转染。简言之，对于每个孔，转染混合物含有 0.48μl Lipofectamine、0.00075μg pcDNA3-PPAR/GAL4表达载体、 0.045μg pUAS(5×)-tk-luc报道基因载体和0.0002μg pCMV-lacZ作为 反式激活效力的内部对照。在37℃于湿润的10％CO2气氛下，将细胞在 转染混合物中培养5小时。然后将细胞在含有5％木炭剥离的胎牛血 清、非必需氨基酸、100单位/ml青霉素G和100mg/ml硫酸链霉素±浓度 不断增加的受试化合物的高葡萄糖DMEM中培养约48小时。因为化合 物在DMSO中溶解，所以将对照细胞与相同浓度的DMSO一起培养； 最终的DMSO浓度≤0.1％，经表明该浓度不影响反式激活活性。根据 生产商的说明，使用报道基因裂解缓冲液(Reporter Lysis Buffer) (Promega，Madison，WI)产生细胞溶胞产物。在ML3000光度计 (Dynatech Laboratories，Chantilly，VA)中，使用荧光素酶测定缓冲液 (Promega，Madison，WI)测定细胞提取物中的荧光素酶活性。使用β- D-吡喃半乳糖苷(Calbiochem，San Diego，CA)测定β-半乳糖苷酶活 性。
C)体内试验
将雄性db/db小鼠(10-11周龄的C57B1/KFJ，Jackson Labs，Bar Harbor，ME)以5只/笼饲养，并让其随意得到磨碎的Purina啮齿动物食 物和水，将动物及其食物每两天称重一次，每天通过管饲法给予指定 剂量的载体(0.5％羧甲基纤维素)±受试化合物。在试验期间，以3-5天 的间隔通过尾部取血来获得血液，由此测定血浆葡萄糖和甘油三酯浓 度，葡萄糖和甘油三酯测定是在Boehringer Mannheim Hitachi 911自动 分析仪(Boehringer Mannheim，Indianapolis，IN)上使用标准盐水进行 1∶6(v/v)稀释的肝素化血浆进行的。瘦的动物是以相同方式保持的年龄 匹配的杂合小鼠。
称重～150g的雄性金黄地鼠用来测定测试化合物的脂质调节效 果。地鼠放入盒子(每盒5只)，让其随意得到正常啮齿动物的食物，并 自由得到水。每天通过管饲法给予地鼠悬浮在0.5％纤维素甲醚中的化 合物连续9天(每组10只地鼠)。在第10天的早上，用二氧化碳对地鼠进 行安乐死，并借助于心穿刺术得到血样。测定总胆固醇和甘油三酯的 血清水平。
平均称重～15kg的成熟雄性猎兔犬，用来测定测试化合物的脂质 调节效果。猎兔犬各自被放入盒子，喂以不含胆固醇的食物，并自由 得到水。在实验开始之前，每周从其颈静脉提取血样并测定血清胆固 醇浓度。为了测试化合物在血清胆固醇上的效果，每天通过管饲法给 予猎兔犬悬浮在0.5％纤维素甲醚中的化合物连续2周(每组5只猎兔 犬)。在给药周期期间和之后提取血样，测定总胆固醇和甘油三酯的血 清水平。
合成方法
本发明化合物的制备方法在以下方案1中作一般性的描述。
方案1
式III适当取代的6-氟苯并[d]异唑可以通过1，3-二氟苯和取代苯 酰氯之间进行Friedel-Crafts反应，然后生成异唑环而生成。可以用多 种方法制备式IV的苯酚中间体。在无机碱如碳酸铯并在非质子性极性 溶剂例如N，N-二甲基乙酰胺中用式IV的苯酚置换式III的化合物中的 氟，得到式V的最终化合物。在含水碱性条件下通过酯水解可以得到想 要的式V的酸形式。
制备6-氟-3-(取代苯基)-苯并[d]-异唑的一般方法1
步骤1.将1，3-二氟苯(3.42g，30mmol)和取代苯甲酰氯(10mmol)溶于 三氟甲磺酸(5.0ml)。在60℃下加热所得溶液1小时然后用乙酸乙酯 (100ml)稀释，依次用水(2×50ml)和饱和NaHCO3水溶液洗涤。干燥有 机相并浓缩得到基本上纯净的取代2′，4′-二氟二苯甲酮。
步骤2.将从步骤1得到的二苯甲酮产物(10mmol)、盐酸羟氨 (3.0g，50mmol)和乙酸钠(4.1g，5mol)在甲醇(50ml)中混合，在50℃下搅拌 得到的悬浮液6小时。除去甲醇并用乙酸乙酯研磨残留固体。通过硅胶 短柱过滤，并浓缩滤液。残余物由肟的Z/E混合物组成，溶于无水 DMF(50ml)中，将Cs2CO3(6.5g，20mml)加入到溶液中。然后在80℃下搅 拌14小时，用乙酸乙酯稀释混合物，水洗涤，并用MgSO4干燥。除去 溶剂后，用硅胶色谱法纯化残余物得到70-95％产率的6-氟-3-(取代苯 基)-苯并[d]-异唑(两步骤)。
中间体1
根据一般方法1使用4-三氟甲基苯甲酰氯作为取代苯甲酰氯得到白 色固体的标题化合物。1H NMR(CDCl3，500MHz)δ8.10 (d，J＝8.5Hz，2H)，7.90(dd，J＝8.5，5.0Hz，1H)，7.88(d，J＝8.5Hz，2H)，7.40(dd，J＝ 8.5，2Hz，1H)，7.22(dt，J＝8.5，2.0Hz，1H)。
MS(ESI，m/z)：294(M++1)。
中间体2
根据一般方法1使用4-三氟甲氧基苯甲酰氯作为取代苯甲酰氯得到 白色固体的标题化合物。1H NMR(CDCl3，500MHz)δ7.90 (d，J＝8.5Hz，2H)，7.85(dd，J＝8.5，5.0Hz，1H)，7.80(d，J＝8.5Hz，2H)，7.40(dd，J＝ 8.5，2Hz，1H)，7.22(dt，J＝8.5，2.0Hz，1H)。
中间体3
根据一般方法1使用4-氯苯甲酰氯作为取代苯甲酰氯得到白色固体 的标题化合物。1H NMR(CDCl3，500MHz)δ7.85 (d，J＝8.5Hz，2H)，7.80(dd，J＝8.5，5.0Hz，1H)，7.70(d，J＝8.5Hz，2H)，7.35(dd，J＝ 8.5，2Hz，1H)，7.12(ddd，J＝8.5，8.5，2.0Hz，1H)。
中间体4
根据一般方法1使用4-乙基苯甲酰氯作为取代苯甲酰氯得到白色固 体的标题化合物。1H NMR(CDCl3，500MHz)δ7.86 (d，J＝8.5Hz，2H)，7.80(dd，J＝8.5，5.0Hz，1H)，7.40(d，J＝8.5Hz，2H)，7.25(dd，J＝ 8.5，2Hz，1H)，7.22(ddd，J＝8.5，2.0Hz，1H)，2.74(q，J＝7.8Hz，2H)，1.28 (t，J＝7.8Hz，3H)。
中间体5
根据一般方法1使用4-异丙基苯甲酰氯作为取代苯甲酰氯得到白色 固体的标题化合物。1HNMR(CD3OD，500MHz)δ7.87 (d，J＝8.5Hz，2H)，7.80(dd，J＝8.5，5.0Hz，1H)，7.40(d，J＝8.5Hz，2H)，7.25(dd，J＝ 8.5，2Hz，1H)，7.22(ddd，J＝8.5，2.0Hz，1H)，3.0(m，1H)，1.30(d，J＝7.0Hz，6H)。
中间体6
根据一般方法1使用3-三氟甲基苯甲酰氯作为取代苯甲酰氯得到白 色固体的标题化合物。1H NMR(CD3OD，500MHz)δ8.25 (m，2H)，8.05(dd，J＝8.7，5.0Hz，1H)，7.91(brd，J＝8.0Hz，1H)，7.83(t，J＝7.8Hz， 1H)，7.55(dd，J＝8.6，2.2Hz，1H)，7.31(dt，J＝8.9，2.2Hz，1H)。
MS(ESI，m/z)：282.0(M++1)。
中间体7
根据一般方法1使用4-(二甲基胺基)苯甲酰氯作为取代苯甲酰氯得 到白色固体的标题化合物。
制备取代苯酚中间体的一般方法2
步骤1.在60℃下搅拌3-苄氧基苯酚(4.0g，20mmol)和2-溴链烷酸酯 (40mmol)和Cs2CO3(14.3g，40mmol)在DMF(100ml)的溶液2-8小时。用乙 酸乙酯稀释反应混合物并用水洗涤。MgSO4干燥有机相并浓缩。硅胶 色谱法纯化残余物，用9∶1(v/v)己烷/乙酸乙酯洗脱得到2-(苄氧基苯氧基) 烷酸酯。
步骤2.将步骤1得到的产物溶于乙酸乙酯，在氢气(1大气压)中 10％Pd-C存在下搅拌3小时。通过硅藻土垫过滤反应混合物，并浓缩得 到无色油状标题化合物。
根据一般方法2使用2-溴-2-甲基丙酸甲酯作为2-溴烷酸酯得到油状 的标题化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.14(t，J＝8.0Hz，1H)， 6.50(m，1H)，6.41(m，1H)，6.39(t，J＝2.0Hz，1H)，3.80(s，3H)，1.62(s，6H)。
中间体9
根据一般方法2使用2-溴-丙酸甲酯作为2-溴烷酸酯得到油状的标 题化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.14(t，J＝9.0Hz，1H)， 6.47(dd，J＝15Hz，2.5Hz，1H)，6.47(s，1H)，6.42(t，J＝2.5Hz，1H)，4.77(q，J＝6.5H z，1H)，3.79(s，3H)，1.63(d，J＝6.5Hz，3H)。
中间体10
根据一般方法2使用2-溴-2-丁酸甲酯作为2-溴烷酸酯得到油状的标 题化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.14(t，J＝8.0Hz，1H)，6.48 (m，2H)，6.43(t，J＝2.5Hz，1H)，4.48(t，J＝6.5Hz，1H)，3.78(s，3H)，2.0(m，2H)，1.0 9(t，J＝6.5Hz，3H)。
中间体11
根据一般方法2使用2-溴-3-甲基丁酸甲酯作为2-溴烷酸酯得到油状 的标题化合物。
中间体12
根据一般方法2使用2-溴-2-甲基丙酸甲酯作为2-溴烷酸酯得到油状 的标题化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.02(d，J＝7.0，2H)， 6.69(d，J＝7.0，2H)，3.80(s，3H)，1.59(s，6H)。
中间体13
使用如下所述步骤制备中间体13
步骤1.(E)-2-乙基-3-(2-氟苯基)丙烯酸乙酯。
将2-氟苯甲醛(6.2g，50mmol)和2-(三苯基亚正膦基)丁酸乙酯 (18.8g，50mmol)在四氢呋喃(200mL)的溶液回流2小时。浓缩反应混合物 并用1∶1己烷∶乙酸乙酯研磨残余物。通过硅胶过滤除去沉淀，浓缩滤 液。硅胶色谱法纯化残余物，用8∶2(v/v)己烷/乙酸乙酯洗脱得到(E)-2- 乙基-3-(2-氟苯基)丙烯酸乙酯。
步骤2.(2S，3S)-2-乙基-3-(2-氟苯基)-2，3-二羟基丙酸乙酯
将步骤1得到的产物(4.4g，20mmol)、AD-mix-β(28.0g)和甲基磺酰 胺(1.9g，2.0mmol)在1∶1 t-BuOH∶H2O(200mL)中混合。4℃下搅拌得到的 混合物2天，通过加入Na2SO3(2N，20mL)水溶液淬灭。用乙酸乙酯 (200mL)稀释混合物，盐水(2x100mL)洗涤并干燥。除去溶剂得到97％ee 的(2S，3S)-2-乙基-3-(2-氟苯基)-2，3-二羟基丙酸乙酯，用30％异丙醇/庚 烷作为流动相，使用Chiracel OD柱通过HPLC进行检测。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.57(dt，J＝8.0，2.0Hz，1H)，7.31(m，1H)， 7.19(m，1H)，7.05(m，1H)，5.30(s，1H)，4.38(m，2H)，1.84(m，1H)，1.38(t，J＝7.5H z，3H)，1.25(m，1H)，0.79(t，J＝7.5Hz，3H)。
步骤3.(2S)-2-乙基-2-羟基-3-(2-氟苯基)丙酸
从步骤2得到的产物(5.2g，20mmol)、10％钯/碳(2.5g)和浓硫酸 (0.53mL，10mmol)在乙酸(100mL)中混合。在45psi下氢化反应混合物48 小时。加入乙酸钠(1.7g，20mmol)，在通过硅胶柱过滤之前，搅拌反应 混合物10分钟。浓缩滤液得到基本纯净的(2S)-2-乙基-2-羟基-3-(2-氟苯 基)丙酸乙酯，用KOH(2N，25ml)的甲醇(150ml)溶液水解该乙酯得到白 色固体的标题化合物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.22-7.30(m，2H)，7.08(t，J＝7.8Hz，1H)， 7.03(dd，J＝7.8，9.0Hz，1H)，3.17(d，J＝14.0Hz，1H)，3.08(d，J＝14Hz，1H)，2.03 (dq，J＝13.8，7.8Hz，1H)，1.76(dq，J＝13.8，7.8Hz，1H)，0.97(t，J＝7.8Hz，3H)。
步骤4.(2S)-2-乙基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-2-羧酸甲酯
将步骤3得到的产物(4.0g，20mmol)溶于1∶4 DMF/甲苯(100ml)溶 液，分三批加入60％NaH的矿物油。N2保护、110℃下搅拌反应混合物4 小时。冷却反应至室温并泼入冷水(100ml)中。用己烷(50ml)洗涤水层， 用2NHCl水溶液酸化，乙酸乙酯(3×50ml)萃取。盐水(50ml)洗涤萃取 液，干燥并浓缩。残余物溶于7∶1苯/甲醇(80ml)，用TMSCHN2(1M的己 烷溶液)处理直到停止放出气体。浓缩反应物，硅胶色谱法纯化残余物， 用85∶15(v/v)己烷/乙酸乙酯洗脱得到标题化合物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.16(m，2H)，6.90(m，2H)，3.80(s，3H)， 3.60(d，J＝16Hz，1H)，3.23(d，J＝16Hz，1H)，2.12(m，1H)，2.02(m，1H)，1.02(t，J＝ 7.5Hz，3H)。
步骤5.(2S)-5-乙酰基-2-乙基-2，3-二氢-1-苯并呋喃-2-羧酸甲酯
将步骤4得到的产物(3.1g，15mmol)与乙酰氯(3.5g，45mmol)和氯 化铝(6.0g，45mmol)在二氯甲烷(100ml)中混合。25℃下搅拌反应混合物1 小时，然后泼入1N HCl(100ml)溶液中。分离有机层并用二氯甲烷(50ml) 萃取水相。合并萃取液，用盐水洗涤，浓缩得到标题化合物，其可以 直接在下一步骤中使用。
步骤6.将步骤5得到的产物(3.8g，约15mmol)、间氯过苯甲酸 (70％，7.7g，30mmol)和NaHCO3(3.8g，45mmol)在二氯甲烷(150mL)中回 流搅拌2小时。依次用饱和亚硫酸钠水溶液(100mL)和NaHCO3水溶液(2 ×100ml)洗涤反应混合物。除去溶剂后，残余物溶于甲醇(100ml)，在0 ℃下用KOH水溶液(5N，3ml)处理5分钟。乙酸中和反应物，过滤并浓 缩。硅胶色谱法纯化残余物，用8∶2己烷/乙酸乙酯洗脱得到白色固体的 中间体13。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ6.72(d，J＝8.5Hz，1H)，6.67(d，J＝3Hz，1H)， 6.61(dd，J＝8.5，3.0，1H)，3.80(s，3H)，3.54(d，J＝14.0Hz，1H)，3.16(d，J＝14.0Hz，1 H)，2.05(m，2H)，1.0(t，J＝7.5Hz，3H)。
MS(ESI，m/z)：223(M++1)。
中间体14
用如下所述步骤制备中间体14
步骤1.(2S)-2-异丙基-2-羟基-3-(2-氟苯基)丙酸
将由相应的邻氟苄基溴(9.45g，50.0mmol)和镁屑(1.32g，55.0mmol)制 备的(邻氟苯基)溴化镁在乙醚(100ml)的溶液加入到在-78℃下冷却的3- 甲基-2-氧代丁酸乙酯(7.2，50mmol)的乙醚(50ml)溶液中。在-78℃下保持 30分钟后，将反应混合物升温至0℃，泼入饱和NH4Cl水溶液中。盐水 洗涤有机层，干燥并浓缩。残余物溶于甲醇(200ml)，50℃下在2N KOH(75ml)中保存2小时。用水稀释反应混合物，己烷洗涤。用2NHCl 酸化水层，加入氯化钠使之饱和，乙酸乙酯萃取。除去溶剂得到标题 化合物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.30-7.35(m，1H)，7.18-7.23(m，1H)， 7.06(t，，J＝7.8Hz，1H)，7.00(dd，J＝7.8，9.0Hz，1H)，3.17(d，J＝14.0Hz，1H)，3.05 (d，J＝14.0Hz，1H)，2.18(m，1H)，1.1(t，J＝7.5Hz，3H)，0.90(t，J＝7.5Hz，3H)。
步骤2.根据如用于制备中间体13的步骤4、5和6所描述的相同方法 将步骤1得到的产物变为中间体14的外消旋体。在制备Chiracel OD柱上 用10∶90异丙醇/庚烷洗脱分离外消旋体。收集后流出的组分并浓缩得到 油状的中间体14。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ6.72(d，J＝8.5Hz，1H)，6.67(d，J＝3.0Hz， 1H)，6.61(dd，J＝8.5，3.0，1H)，3.80(s，3H)，3.53(d，J＝16.0Hz，1H)，3.10(d，J＝16.0 Hz，1H)，1.61(s，3H)。
中间体15
中间体15根据如下所述步骤制备。
步骤1.4-甲氧基-2-(甲氧基乙氧基)甲氧基苯甲醛。
25℃下搅拌4-甲氧基-2-羟基苯甲醛(6.5g，40mmol)、MEM氯代物 (10.0g，80mmol)和二异丙基乙胺(21mL，120mmol)混合物在二氯甲烷 (200mL)中的溶液14小时。浓缩反应混合物至很小体积，乙醚(200ml) 稀释，并通过一根短硅胶柱过滤。浓缩滤液得到粗的4-甲氧基-2-(甲氧 基乙氧基)甲氧基苯甲醛，其纯度足够以在下一步中使用。
步骤2.4-甲氧基-2-(甲氧基乙氧基)甲氧基苯酚
将步骤1得到的醛(9.5g，40mmol)溶于二氯甲烷(400mL)，接着加入 间氯过苯甲酸(70％，约80mmol)和固体碳酸氢钠(10.1g，120mmol)。然后 在25℃下用力搅拌2小时，将反应混合物泼入碳酸氢钠饱和溶液(400ml) 中，搅拌1小时。分离有机层，用二氯甲烷萃取水相。依次用饱和亚硫 酸氢钠和碳酸氢钠溶液洗涤合并的有机相，Mg2SO4干燥并浓缩。硅胶 色谱法纯化残余物得到7.1g(78％产率)的标题化合物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ6.88(d，J＝8.5Hz，1H)，6.83 (d，J＝2.5Hz，1H)，6.60(dd，J＝8.5，2.5Hz，1H)，5.0(s，2H)，3.88(m，2H)，3.61(m，2 H)，3.80(s，3H)，3.42(s，3H)，
步骤3.2-甲基-7-甲氧基苯并[1，4]-二氧杂环己烷-2-醇
25℃下用力搅拌步骤2得到的产物(2.28g，10mmol)、氯丙酮 (4.6g，40mmol)和Cs2CO3在DMF(100ml)中的溶液16小时。将混合物倒入 水(200ml)中，用乙酸乙酯(3×80ml)萃取。用水(2×100ml)洗涤合并萃 取液，然后浓缩。残余物溶于THF(100ml)，用5NHCl(20ml)在45℃下处 理1小时。盐水(100ml)稀释反应混合物，乙酸乙酯萃取。盐水洗涤有机 相，MgSO4干燥并浓缩。硅胶色谱法纯化残余物，用8∶2乙酸乙酯/己烷 洗脱得到1.3g的标题化合物。
步骤4.2-甲氧基-2-甲基-7-甲氧基苯并[1，4]二氧杂环己烷
将步骤3得到的产物溶于含有约1％氯化氢的无水甲醇(50ml)中。然 后在25℃下保持6小时，用三乙胺淬灭溶液并浓缩。用乙醚稀释残余 物，通过一根短硅胶柱过滤。蒸发溶剂得到1.3g标题化合物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ6.81(d，J＝8.5Hz，1H)，6.59 (d，J＝2.5Hz，1H)，6.36(dd，J＝8.5，2.5Hz，1H)，4.19(d，J＝11.0Hz，1H)，3.81(d，J ＝11.0Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.35(s，3H)，1.60(s，3H)。
步骤5.2-氰基-2-甲基-7-甲氧基苯并[1，4]苯并二氧杂环己烷
将三氟醚酸硼(Trifluoroboron etherate)(mL，9.6mmol)加入到步 骤4得到的产物(1.0g，4.8mmol)、三甲基氰化硅(2.5mL，9.6 mmol)在二氯 甲烷(25mL)的溶液中，在冰浴中冷却。0℃下持续反应1小时，并在30 分钟内加热至25℃。加入甲醇(2.0ml)，然后加水(50ml)。相分离和萃取 后，硅胶色谱法纯化粗产物得到0.73g(74.8％产率)的标题化合物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ6.91(d，J＝8.5Hz，1H)，6.56(dd，J＝8.5， 2.5Hz，1H)，6.51(d，J＝2.5Hz，1H)，4.4(d，J＝11.0Hz，1H)，3.9(d，J＝11.0Hz，1H)， 3.79(s，3H)，1.80(s，3H)。
步骤6.(±)-2-甲基-7-羟基苯并[1，4]二氧杂环己烷-2-羧酸甲酯
用2N KOH的乙醇溶液处理步骤5得到的产物(0.6g，2.9mmol)，在回 流下反应4小时。除去乙醇并用2N HCl酸化残余物得到粗酸，将其溶于 二氯甲烷(ml)，并与三溴化硼(1M在己烷中，ml，mmol)在0℃下反应1小 时。反应用水淬灭，二氯甲烷萃取。用盐水洗涤合并的萃取液，MgSO4干燥。除去溶剂得到一种残余物，其溶于7∶1苯/甲醇中，并用过量的 trimethylsilyldiazo methane(1M在己烷中)处理。除去溶剂，用硅胶色谱 法纯化残余物得到0.48g(75％产率)的油状标题化合物。
步骤7.在制备Chiracel OD柱上用10∶90异丙醇/庚烷洗脱分离步骤6 得到的外消旋产物。收集后流出的组分，浓缩得到白色固体的中间体 15。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ6.74(d，J＝8.5Hz，1H)，6.53(d，J＝2.5Hz， 1H)，6.36(dd，J＝8.5，2.5Hz，1H)，5.08(br.s，1H)，4.50(d，J＝11.0Hz，1H)，3.90 (d，J＝11.0Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.42(s，3H)，1.60(s，3H)。
中间体16
根据中间体15描述的相同合成路线，在步骤3中使用1-溴-2-丁酮代 替氯丙酮来制备中间体16。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ6.74(d，J＝8.5Hz，1H)，6.54(d，J＝2.5Hz， 1H)，6.36(dd，J＝8.5，2.5Hz，1H)，5.08(br.s，1H)，4.51(d，J＝11.0Hz，1H)，3.90 (d，J＝11.0Hz，1H)，3.80(s，3H)，3.42(s，3H)，2.09(m，1H)，1.79(m，1H)，1.00(t，J＝ 7.5Hz，3H)。
用于制备苯并[d]异唑基羧酸衍生物的一般方法3
步骤1. 苯酚中间体和6-氟-3-(取代苯基)苯并[d]异唑的偶合。100 ℃下搅拌苯酚(0.42g，2.0mmol)和6-氟-3-(取代苯基)苯并[d]异恶唑 (0.28g，1.0mmol)和Cs2CO3(0.65g，2.0mmol)在二甲基乙酰胺(10mL)的混 合物6-16小时。乙酸乙酯稀释反应物，用1NHCl和水洗涤。除去溶剂后， 由粗偶合产物和相应的酸组成的残余物溶于苯/甲醇(7∶1，v/v，ml)，并用 (三甲基甲硅烷)重氮甲烷(2M在己烷中)反应直到停止放出气体。蒸干溶 剂，硅胶色谱分离残余物得到偶合产物。
步骤2. 偶合产物的水解。将步骤1得到的产物溶于甲醇(10ml)，25- 50℃下用2N NaOH(2ml，4.0mmol)处理2-6小时。用2NHCl酸化反应物至 pH2-3。用100×20mm YMC C-18柱的制备HPLC纯化残余物，使用包 含0.1％TFA的10-100％梯度CH3CN-H2O作为洗脱液得到最终的羧 酸。
实施例1
2-甲基-2-{3-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d ]异唑-6-基氧基]-苯氧基}-丙酸
按照一般方法3使用中间体8和中间体1偶合反应来制备标题化 合物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.20(d，J＝8.0Hz，2H)，8.03(d，J＝9.0Hz， 1H)，7.92(d，J＝8.0Hz，2H)，7.32(t，J＝8.0Hz，1H)，7.19(m，2H)，6.77(dd，J＝ 14.0Hz，2.5Hz，1H)，6.77(t，J＝3.0Hz，1H)，6.66(t，J＝3.0Hz，1H)，1.58(s，6H)。
MS(ESI，m/z)：458.0(M++1)。
实施例2
2-甲基-2-{4-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d ]异唑-6-基氧基]-苯氧基}-丙酸
按照一般方法3使用中间体12和中间体1偶合反应来制备标题化合 物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.16(d，J＝7.0Hz，2H)，7.97(d，J＝7.0Hz， 1H)，7.89(d，J＝7.0Hz，2H)，7.13(dd，J＝7.0，1.5Hz，1H)，7.07(d，J＝1.5Hz，1H)， 7.04(d，J＝7.0，2H)，6.99(d，J＝7.0，2H)，1.59(s，6H)。
MS(ESI，m/z)：458.4(M++1)。
实施例3
2-甲基-2-{3-[3-(4-三氟甲氧基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-苯氧基}-丙酸
按照一般方法3使用中间体8和中间体2偶合反应来制备标题化合 物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.11(d，J＝8.5Hz，2H)，7.97(d，J＝9.5Hz， 1H)，7.52(d，J＝8.0Hz，2H)，7.26(t，J＝8.5Hz，1H)，7.15(m，2H)，6.80(dd，J＝ 8.0Hz，2.5Hz，1H)，6.71(t，J＝3.0Hz，1H)，6.64(dd，J＝8.0Hz，2.5Hz，1H)，1.54(s， 6H)。
MS(ESI，m/z)：474.3(M++1)。
实施例4
2-甲基-2-{3-[3-(4-氯-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-苯氧基}-丙酸
按照一般方法3使用中间体8和中间体3偶合反应来制备标题化 合物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.95(d，J＝8.5Hz，2H)，7.60(m，3H)，7.30 (t，J＝7.8Hz，1H)，7.14(d，J＝1.8Hz，1H)，7.12(dd，J＝9.0，1.8Hz，1H)，6.74(m，2H)， 6.63(t，J＝2.0，1H)，1.57(s，6H)。
MS(ESI，m/z)：424.3(M++1)。
实施例5
2-甲基-2-{3-[3-(4-异丙基-苯基)-苯并[d ]异唑-6-基氧基]-苯氧基}-丙酸
按照一般方法3使用中间体8和中间体5偶合反应来制备标题化合 物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.95(d，J＝8.7Hz，1H)，7.87(d，J＝ 8.1Hz，2H)，7.45(d，J＝8.1Hz，2H)，7.29(t，J＝8.2Hz，1H)，7.12(m，2H)，6.74 (m，2H)，6.63(t，J＝2.3Hz，1H)，3.52(d，J＝16.9Hz，1H)，3.00(m，1H)，1.58(s，6H)， 1.30(d，J＝7.0Hz，6H)。
MS(ESI，m/z)：432.4(M++1)。
实施例6
2-甲基-2-{3-[3-(4-乙基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-苯氧基}-丙酸
按照一般方法3使用中间体8和中间体4偶合反应来制备标题化合 物。
1H NMR(600MHz，CD3OD)δ7.96(d，J＝8.4Hz，1H)，7.86(d，J＝8.4Hz， 2H)，7.42(d，J＝7.8Hz，2H)，7.30(t，J＝8.4Hz，1H)，7.13(d，J＝1.8Hz，1H)，7.11 (dd，J＝8.4Hz，1.8Hz，1H)，6.74(m，2H)，6.63(t，J＝2.4Hz，1H)，2.74(q，J＝7.8Hz，2 H)，1.57(s，6H)，1.28(t，J＝7.8Hz，3H)。
MS(ESI，m/z)：418.3(M++1)。
实施例7
2-甲基-2-{3-[3-(3-三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-苯氧基}-丙酸
按照一般方法3使用中间体8和中间体6偶合反应来制备标题化合 物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.24(m，2H)，7.97(d，J＝9.4Hz，1H)， 7.89(brd，J＝7.8Hz，1H)，7.82(t，J＝7.8Hz，1H)，7.32(t，J＝8.2Hz，1H)，7.17 (m，2H)，6.76(m，2H)，6.66(brm，1H)，1.58(s，6H)。
MS(ESI，m/z)：458.0(M++1)。
实施例8
2-{3-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d ]异唑-6-基氧基]-苯氧基}-丙酸
按照一般方法3使用中间体9和中间体1偶合反应来制备标题化合 物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.19(d，J＝8.3Hz，2H)，8.02(d，J＝8.4Hz， 1H)，7.91(d，J＝8.2Hz，2H)，7.34(t，J＝8.2Hz，1H)，7.19(m，2H)，6.79(dd，J＝8.2， 2.1Hz，1H)，6.73(dd，J＝8.2，2.1Hz，1H)，6.73(dd，J＝8.2，2.1Hz，1H)，6.68(m，1H)， 4.81(m，1H)，1.59(d，J＝6.7Hz，3H).
MS(ESI，m/z)：444.3(M++1)。
实施例9
2-{3-[3-(4-氯-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-苯氧基}-丁酸；
按照一般方法3使用中间体10和中间体3偶合反应来制备标题化合 物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.91(d，J＝8.5Hz，2H)，7.82(d，J＝8.5Hz， 1H)，7.57(d，J＝9.0Hz，2H)，7.34(t，J＝8.0Hz，1H)，7.17(d，J＝1.5Hz，1H)，7.14 (dd，J＝8.0Hz，1.5Hz，1H)，6.77(m，2H)，6.71(t，J＝2.0Hz，1H)，4.66(t，J＝6.0Hz，1 H)，2.07(m，2H)，1.13(t，J＝7.5Hz，3H)。
MS(ESI，m/z)：424.3(M++1)。
实施例10
2-{3-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-苯氧基}-丁酸
按照一般方法3使用中间体10和中间体1偶合反应来制备标题化合 物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.19(d，J＝8.0Hz，2H)，8.02(d，J＝8.6Hz， 1H)，7.91(d，J＝8.2Hz，2H)，7.35(t，J＝8.2Hz，1H)，7.19(m，2H)，6.79 (dd，J＝8.2，2.2Hz，1H)，6.73(dd，J＝8.2，1.9Hz，1H)，6.73(dd，J＝8.2，1.9Hz，1H)， 6.68(t，J＝2.3Hz，1H)，4.66(m，1H)，1.98(m，2H)，1.08(t，J＝7.3Hz，3H)。
MS(ESI，m/z)：458.4(M++1)。
实施例11：
3-甲基-2-{3-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-苯氧基}-丁酸
按照一般方法3使用中间体11和中间体1偶合反应来制备标题化合 物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.20(d，J＝8.2Hz，2H)，8.03(d，J＝8.7Hz， 1H)，7.92(d，J＝8.2Hz，2H)，7.35(t，J＝8.2Hz，1H)，7.19(m，2H)，6.80 (dd，J＝8.3，2.2Hz，1H)，6.73(dd，J＝8.0，2.0Hz，1H)，6.68(t，J＝2.3Hz，1H)，4.47(d， J＝4.8Hz，1H)，2.28(m，1H)，1.09(d，J＝6.9Hz，6H)。
MS(ESI，m/z)：472.4(M++1)。
实施例12
2-{2-氟-3-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-苯氧基}-丁酸
60℃下加热实施例10的标题化合物(92mg，0.2mmol)和 SELECTFLUORTM(Aldrich，70mg，0.2mmol)在乙腈(2.0ml)的溶液16小 时。用100×20mm YMC C-18柱的制备HPLC，使用0.1％TFA改进 CH3CN-H2O溶剂体系作为洗脱液直接纯化反应混合物得到标题化合 物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.17(d，J＝8.1Hz，2H)，8.00(d，J＝9.3Hz， 1H)，7.89(d，J＝8.1Hz，2H)，7.17(m，3H)，6.77(m，1H)，6.70(m，1H)，4.63(m，1H)， 1.99(m，2H)，1.08(t，J＝7.4Hz，3H)。
MS(ESI，m/z)：476.3(M++1)。
实施例13
2-{3-[3-(4二甲基氨基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-苯氧基}-2-甲基-丙酸
按照一般方法3使用中间体8和中间体7偶合反应来制备标题化合 物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.14(d，J＝9.0Hz，2H)，7.84 (d，J＝9.5Hz，1H)，7.77(d，J＝8.5Hz，2H)，7.34(t，J＝8.5Hz，1H)，7.17(m，2H)， 6.84(m，2H)，6.74(t，J＝2.5Hz，1H)，3.63(q，J＝7.0Hz，2H)，1.67(s，6H)，1.28(t，J＝7. 0Hz，3H)。
MS(ESI，m/z)：461.1(M++1)。
实施例14
(2S)-2-乙基-5-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑1-6-基氧基]-2，3-二氢-苯并呋喃-2-羧酸
按照一般方法3使用中间体13和中间体1偶合反应来制备标题化 合物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.16(d，J＝7.8Hz，2H)，7.96(dd，J＝9.0Hz， 3.0Hz，1H)，7.89(d，J＝7.8Hz，2H)，7.13(d，J＝9.0Hz，1H)，7.05(s，1H)，7.00 (s，1H)，6.92(d，J＝9.0Hz，1H)，6.86(d，J＝9.0Hz，1H)，3.56(d，J＝16.8Hz，1H)，3.26 (d，J＝16.2Hz，1H)，2.09(m，1H)，2.00(m，1H)，1.03(t，J＝7.2Hz，3H)。
MS(ESI，m/z)：470.3(M++1)。
实施例15
(2R)-2-异丙基-5-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-2，3-二氧-苯并呋喃-2-羧酸
按照一般方法3使用中间体14和中间体1偶合反应来制备标题化 合物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.16(d，J＝7.0Hz，2H)，7.96(d，J＝7.5Hz， 1H)，7.88(d，J＝7.0Hz，2H)，7.13(dd，J＝7.5，1.5Hz，1H)，7.04(d，J＝1.5Hz，1H)， 6.98(d，J＝1.0Hz，1H)，6.89(dd，J＝7.0，1.0Hz，1H)，6.85(d，J＝7.0Hz，1H)，3.53(d， J＝11.4Hz，1H)，3.35(d，J＝11.4Hz，1H)，2.32(m，1H)，1.06(d，J＝6.6Hz，3H)，0.99 (d，J＝6.6Hz，3H)。
MS(ESI，m/z)：484.5(M++1)。
实施例16
(2R)-2-异丙基-5-[3-(4-异丙基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-2，3-二氢-苯并呋喃-2-羧酸
按照一般方法3使用中间体14和中间体5偶合反应来制备标题化 合物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.90(d，J＝8.8Hz，1H)，7.85(d，J＝8.1Hz， 2H)，7.44(d，J＝6.2Hz，2H)，7.08(dd，J＝8.8，2.1Hz，1H)，7.00(d，J＝1.9Hz，1H)， 6.98(d，J＝2.3Hz，1H)，6.89(m，1H)，6.85(m，1H)，3.52(d，J＝16.9Hz，1H)，3.36(d， J＝16.9Hz，1H)，2.99(m，1H)，2.32(m，1H)，1.29(d，J＝7.0Hz，6H)，1.05(d，J＝6.8H z，3H)0.99(d，J＝6.8Hz，3H)。
MS(ESI，m/z)：458.4(M++1)。
实施例17
(2R)-2-异丙基-5-[3-(4-氯-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-2，3-二氢-苯并呋喃-2-羧酸
按照一般方法3使用中间体14和中间体3偶合反应来制备标题化合 物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.95(d，J＝7.0Hz，2H)，7.92(d，J＝7.5Hz， 1H)，7.59(d，J＝7.0Hz，2H)，7.10(dd，J＝7.5，1.5Hz，1H)，7.02(d，J＝1.5Hz，1H)， 6.98(d，J＝1.0Hz，1H)，6.90(dd，J＝7.5，1.5Hz，1H)，6.85(d，J＝7.5Hz，1H)，3.53(d， J＝11.4Hz，1H)，3.36(d，J＝11.4Hz，1H)，2.32(m，1H)，1.06(d，J＝6.6Hz，3H)，0.99 (d，J＝6.6Hz，3H)。
MS(ESI，m/z)：450.3(M++1)。
实施例18
(2R)-2-异丙基-5-[3-(4-三氟甲氧基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-2，3-二氢-苯并呋喃-2-羧酸
按照一般方法3使用中间体14和中间体2偶合反应来制备标题化合 物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.06(d，J＝7.0Hz，2H)，7.95(d，J＝7.5Hz， 1H)，7.46(d，J＝7.0Hz，2H)，7.13(dd，J＝7.5，1.5Hz，1H)，7.04(d，J＝1.5Hz，1H)， 6.98(d，J＝1.0Hz，1H)，6.89(dd，J＝7.0，1.0Hz，1H)，6.85(d，J＝7.0Hz，1H)，3.53(d， J＝11.4Hz，1H)，3.35(d，J＝11.4Hz，1H)，2.32(m，1H)，1.06(d，J＝6.6Hz，3H)， 0.99(d，J＝6.6Hz，3H)。
MS(ESI，m/z)：500.5(M++1)。
实施例19
(2R)-2-甲基-7-[3-(4三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烷-2-羧酸
按照一般方法3使用中间体15和中间体1偶合反应来制备标题化 合物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.17(d，J＝7.0Hz，2H)，7.98 (d，J＝7.5Hz，1H)，7.89(d，J＝7.0Hz，2H)，7.15(dd，J＝7.5，1.5Hz，1H)，7.11(d，J＝ 1.5Hz，1H)，6.91(d，J＝7.0Hz，1H)，6.73(d，J＝2.0Hz，1H)，6.63(dd，J＝7.0，2.0Hz， 1H)，4.57(d，J＝11.4Hz，1H)，3.92(d，J＝11.4Hz，1H)，1.55(s，3H)。
MS(ESI，m/z)：472.0(M++1)。
实施例20
(2R)-2-乙基-7-[3-(4-三氟甲基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烷-2-羧酸
按照一般方法3使用中间体16和中间体1偶合反应来制备标题化 合物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.19(d，J＝8.0Hz，2H)，8.00(d，J＝9.0Hz， 1H)，7.91(d，J＝8.0Hz，2H)，7.18(dd，J＝9.0Hz，2.0Hz，1H)，7.14(d，J＝2Hz，1H)， 6.92(d，J＝9.0Hz，1H)，6.77(d，J＝3.0Hz，1H)，6.64(dd，J＝9.0Hz，3.0Hz，1H)， 4.56(d，J＝11.5Hz，1H)，3.97(d，J＝11.0Hz，1H)，1.99(m，1H)，1.87(m，1H)，1.07(t， J＝7.5Hz，3H)。
MS(ESI，m/z)：486.0(M++1)。
实施例21
(2R)-2-乙基-7-[3-(4-三氟甲氧基-苯基)-苯并[d]异唑-6-基氧基]-2，3-二氢-苯并[1，4]二氧杂环己烷-2-羧酸
按照一般方法3使用中间体16和中间体2偶合反应来制备标题化合 物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.08(m，2H)，7.95(d，J＝8.7Hz，1H)， 7.49(d，J＝8.3Hz，2H)，7.14(m，1H)，7.10(d，J＝2.0Hz，1H)，6.88(d，J＝8.6Hz，1H)， 6.75(d，J＝2.5Hz，1H)，6.59(dd，J＝8.6，2.6Hz，1H)，4.52(d，J＝11.1Hz，1H)，3.95( d，J＝11.1Hz，1H)，1.96(m，1H)，1.83(m，1H)，1.04(t，J＝7.2Hz，3H)。
MS(ESI，m/z)：502.2(M++1)。
实施例22
用直接压片法生产一种式I化合物作为活性药物成分(API)的50mg 剂量的片剂，方法如下。药片包含50mg的化合物、65mg的微晶纤维素、 65mg的甘露糖醇(或65mg的磷酸二钙)、4mg的交联羧甲纤维素钠、4mg 的硬脂酸镁和8mg的Opadry White(一种用Colorcon，West Point，PA制 备的药物涂料)。首先混合API、微晶纤维素、甘露糖醇(或磷酸二钙) 和交联羧甲纤维素钠，然后用硬脂酸镁润滑混合物并压成片。然后用 Opadry White包衣。
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