一种防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂及其制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103919816 A (43)申请公布日 2014.07.16 CN 103919816 A (21)申请号 201410176927.0 (22)申请日 2014.04.24 A61K 36/064(2006.01) A61K 35/74(2006.01) A61K 9/12(2006.01) A61P 1/12(2006.01) (71)申请人 新乡医学院 地址 453003 河南省新乡市红旗区金穗大道 601 号新乡医学院 (72)发明人 杨帆 孙爱平 秦卫玲 魏纪东 马玉龙 (54) 发明名称 一种防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂 及其制备方法 (57) 。

2、摘要 本发明公开了一种防治新生家畜腹泻的复 合益生菌喷雾剂， 同时公开了一种该喷雾剂的制 备方法， 其中防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷 雾剂是由以下重量份的原料制备而成 ： 吸附载体 200-1000 份， 包被载体 400-2000 份， 益生菌组合 100-200 份。该制剂具有调理新生幼畜的肠道微 生态平衡， 保持肠道的正常生理功能， 增强机体免 疫力， 提高机体抗病能力， 尤其能有效预防幼畜生 理性和病理性的腹泻。 本发明剂型独特， 应用方便 高效， 更适合新生幼畜的使用， 适合在畜牧业生产 中推广应用。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和。

3、国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书5页 (10)申请公布号 CN 103919816 A CN 103919816 A 1/1 页 2 1. 一种防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂， 其特征在于 ： 由以下重量份的原料制 备而成 ： 吸附载体 200-1000 份， 包被载体 400-2000 份， 益生菌组合 100-200 份。 2. 根据权利要求 1 中所述防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂， 其特征在于 ： 所述 益生菌为枯草芽胞杆菌、 地衣芽孢杆菌、 蜡样芽胞杆菌、 乳酸杆菌、 双歧杆菌、 粪肠球菌、 植 物乳杆菌、 酵母菌和嗜热链球菌中的至少三种的组合。。

4、 3. 根据权利要求 1 中所述防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂， 其特征在于 ： 所述 吸附载体为脱脂奶粉、 大豆蛋白粉、 海藻糖、 乳酸钠， 半胱氨酸中的任一种、 两种或多种。 4. 根据权利要求 1 中所述防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂， 其特征在于 ： 所述 包被载体为蔗糖、 葡萄糖、 可溶性淀粉、 糊精、 香精、 甘露糖、 沸石粉、 海藻酸钠中的任一种、 两种或多种。 5. 权利要求 1 所述防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂的制备方法， 其特征在于 ： 1) 将益生菌接种到各自最适培养基中， 在适当的条件下进行培养 18-48 小时后转接到 发酵罐中进行大量培养， 当发酵液中。

5、活菌浓度达到 2108CFU/ml 时， 取发酵液进行高速离 心， 转速为 3000 6000 转 / 分， 收集菌体后按一定比例混合。 2) 将吸附载体在 110高压灭菌 15 分钟， 按一定的重量比与步骤 1) 所得益生菌混合， 在低于 20的环境中按 50 转 / 分的速度搅拌 30 60 分钟， 使菌体彻底吸附到载体上。 3) 取包被载体和步骤 2) 所得混合物按一定比例混合， 在低于 20的环境中按 50 转 / 分的速度搅拌 30 分钟， 再按比例 ( 体积比 1 10 20) 向混合物中喷入 2 8的蔗糖 溶液， 继续搅拌 30 分钟， 室温通风干燥后， 包装即得。 权 利 要 。

6、求 书 CN 103919816 A 2 1/5 页 3 一种防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂及其制备方法 技术领域 0001 本发明属于兽药技术领域， 具体涉及一种防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂 及其制备方法。 背景技术 0002 新生家畜(包括猪、 牛、 羊、 马等)腹泻病一直是困扰养殖业的难题之一， 也是目前 危害养殖业的主要疾病。 据统计， 在规模化的养猪场和养羊场， 新生仔猪和羔羊腹泻病的发 病率高达 75和 62， 腹泻病的发生不仅导致幼畜死亡率增高、 成活率下降， 而且使幼畜 生长性能降低、 饲料转化率下降， 增大了养殖成本， 降低养殖效益， 每年由此带来的经济损 失可数十。

7、亿元。引起新生幼畜腹泻的原因是多方面的， 第一， 病原性因素， 包括细菌、 病毒、 寄生虫等病原体感染引起 ； 第二， 应激性因素 ： 包括环境的改变、 外界的刺激等。第三， 生理 性因素， 由于幼畜缺乏先天免疫力和消化机能发育不完善。其中机体自身的因素占主导， 由于新生幼畜的免疫系统和消化系统没有发育完全， 尤其是消化道内的正常菌群区系没有 完全建立， 对外界的抵抗力很弱， 幼畜在和外界接触或吃乳的过程中， 接触病原微生物引起 腹泻。这种腹泻发病期为出生到断奶后 1 个月。目前， 在养殖业上对新生幼畜腹泻的防治 主要是疫苗预防和抗生素的治疗， 由于疫苗免疫是特异性免疫， 加之病原易发生变异，。

8、 故疫 苗预防的效果是有限的， 而且成本较高， 除了养猪业上， 其它养殖业并未使用疫苗来防治该 病 ； 现阶段， 在养殖业中， 用抗生素预防和治疗幼畜腹泻非常普遍， 但随着抗生素的广泛应 用， 由此引出的一系列问题引起人们的高度重视， 尤其是幼畜长期或大量使用抗生素会抑 制免疫器官的发育， 破坏肝、 肾等实质器官， 造成免疫抑制。 另外， 抗生素的使用会毫无选择 的杀死有益菌群， 引起肠道菌群失调， 从而诱发腹泻及其它疾病的发生。近年来， 研究发现 在幼龄动物使用抗生素可诱发抗生素相关性腹泻， 因此世界各国纷纷采取强制措施， 对饲 用抗生素种类、 使用方法、 剂量等方面严加限制， 欧美的一些国。

9、家明令禁止在动物养殖及饲 料中添加使用抗生素。 因此， 养殖业生产中急需一种高效、 无毒副作用的制剂来预防和治疗 幼畜腹泻病。 0003 益生菌制剂是一类微生物活菌制剂， 其具有维持肠道微生态平衡、 抑制病原菌的 定植和繁殖、 增强机体免疫功能、 产生有益的代谢产物和减少胺、 吲哚等有害物质产生等功 效， 现逐渐被人们认识并成为抗生素替代产品之一。近年来， 国内外开发了许多益生菌制 剂， 多以乳酸杆菌、 双歧杆菌和芽孢杆菌等为主的单一或复合制剂。 不同类型的制剂针对不 同生理阶段的动物产生的效果是不一样的， 如有些制剂对幼龄动物有很好的效果， 但对成 年动物效果不佳。目前我们查新了关于益生菌制。

10、剂方面的中国专利和相关文献， 发现大多 以饲料添加剂的形式出现， 而新生幼畜还不能吃饲料， 故这样的益生菌制剂在新生幼畜应 用中受到了限制。 发明内容 0004 本发明的目的是提供一种防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂， 以克服现有产 说 明 书 CN 103919816 A 3 2/5 页 4 品的不足， 更适合新生家畜使用， 本发明能使有益菌群尽早定植在幼畜肠道内， 达到肠道微 生态的平衡， 从而预防和治疗幼畜腹泻病的发生。 0005 为了实现以上目的， 本发明提供的一种复合益生菌喷雾剂是由以下重量份的原料 制备而成 ： 吸附载体 200-1000 份， 包被载体 400-2000 份， 。

11、益生菌 100-200 份。 0006 其中， 所述的益生菌包括枯草芽胞杆菌、 地衣芽孢杆菌、 蜡样芽胞杆菌、 乳酸杆菌、 双歧杆菌、 粪肠球菌、 植物乳杆菌、 酵母菌， 嗜热链球菌中的至少三种的组合物。 为达到本发 明的目的， 所用菌种为纯菌种， 且培养菌液的活菌数不低于 2108CFU/ml。 0007 本发明所述吸附载体为脱脂奶粉、 大豆蛋白粉、 海藻糖、 乳酸钠、 半胱氨酸中的任 一种、 两种或多种。 0008 本发明所述包被载体为蔗糖、 葡萄糖、 可溶性淀粉、 糊精、 香精、 甘露糖、 沸石粉、 海 藻酸钠中的任一种、 两种或多种。 0009 本发明的目的还在于提供了一种防治新生家畜。

12、腹泻的复合益生菌喷雾剂的制备 方法。 0010 本发明的防治新生家畜腹泻的复合益生菌喷雾剂的制备方法包括 ： 0011 1) 发酵液的制备 ： 将枯草芽胞杆菌、 地衣芽孢杆菌、 蜡样芽胞杆菌、 乳酸杆菌、 双 歧杆菌、 粪肠球菌、 植物乳杆菌、 酵母菌， 嗜热链球菌等益生菌分别接种到各自最适培养基 中， 在适当的条件下进行培养 18-48 小时达到其对数生长期， 然后转接到发酵罐中进行大 量培养， 当达到对数生长期即发酵液中活菌浓度达到 2108CFU/ml 以上时， 停止培养。 0012 2)菌体的制备 ： 取发酵液进行高速离心， 按转速为30006000转/分， 离心15 30 分钟收集菌。

13、体备用。 0013 3)将吸附载体在110高压灭菌15分钟， 冷却待用 ； 按一定重量比将步骤2)所得 的不同菌体混合， 取其 100 200 份和吸附载体 200 1000 份混合， 在低于 20的环境中 按 50 转 / 分的速度搅拌 30 60 分钟， 使菌体彻底吸附到载体上。 0014 4) 取包被载体 400 2000 份和步骤 3) 所得混合物按一定比例混合， 并按步骤 3) 的方法搅拌 30 分钟， 再按比例 ( 体积比 1 10 20) 向混合物中喷入 2 8的蔗糖溶 液， 继续搅拌 30 分钟， 室温通风干燥， 包装即得。 0015 本发明喷雾剂的应用步骤是将本发明的喷雾剂按。

14、质量比 1 50 200 的比例和 水混合摇匀， 装入喷雾器中， 在幼畜出生后及哺乳时直接喷洒到母畜的乳房部位及体表即 可。也可将本发明喷洒于饲料表面， 供幼畜自由采食。 0016 本发明的优点在于 ： 1、 本发明优选的益生菌均为非致病的有益菌， 能定植到新生 幼畜的肠道内， 并大量增殖， 通过优势菌群、 生物拮抗、 产生有益的代谢产物等作用， 改善肠 道微生态环境， 维持肠道的正常生理功能。从而能有效预防新生幼畜生理性和病理性的腹 泻。2、 本发明的制备工艺选择双层包被技术， 能有效保护益生菌进入幼畜胃内不被胃酸及 蛋白酶破坏， 进而到达肠道内发挥作用 ； 同时该工艺能延长益生菌活性的保存。

15、期限， 克服现 有益生菌产品保存期限短的缺点。 3、 本发明剂型独特， 应用方式简单有效， 尤其适合于新生 幼畜的使用。 0017 通过本发明的疗效试验看出， 本发明在防治新生家畜腹泻病方面疗效确实， 本发 明使用益生菌来预防和治疗腹泻， 有效避免了应用抗生素及化学药物产生的耐药性、 药物 残留及疗效差等问题。 同时本发明结合了新生幼畜用药的特点， 将药物制成喷雾剂， 在应用 说 明 书 CN 103919816 A 4 3/5 页 5 时， 直接将其喷洒到母畜的体表及乳房上， 幼畜在吃初乳时就能接触益生菌， 达到迅速起效 的目的。本发明应用方法简单、 方便、 有效， 适合在畜牧业生产中推广应。

16、用。 具体实施方式 0018 下面结合实例对本发明做进一步说明， 但本发明不受其限制。 0019 实施例 1 0020 本实施例的复合益生菌喷雾剂的制备方法如下 ： 0021 1) 将枯草芽胞杆菌、 蜡样芽胞杆菌、 粪肠球菌、 酵母菌分别接种到各自最适培养基 中， 37培养24小时， 各取培养液100ml转接到发酵罐中进行扩大培养， 当发酵液中活菌浓 度达到2108CFU/ml以上时， 停止培养。 取发酵液进行离心， 3000转/分进行离心20分钟， 收集菌体。 0022 2) 将上述菌体按重量比为 1 1 2.5 2 均匀混合， 取混合物 100 份、 脱脂奶粉 300 份、 甘露糖 50 。

17、份、 半胱氨酸 50 份均匀混合， 并按 50 转 / 分的速度搅拌 30 分钟， 使菌体 彻底吸附到载体上。 0023 3)取糊精400份、 海藻酸钠400份和步骤2)所得混合物混合， 并按步骤2)的方法 搅拌 30 分钟， 再向混合物中喷入 5的蔗糖溶液 100 份， 继续搅拌 30 分钟， 室温通风干燥， 包装即得。 0024 实施例 2 0025 本实施例的复合益生菌喷雾剂的制备方法如下 ： 0026 1) 将地衣芽孢杆菌、 乳酸杆菌、 双歧杆菌、 嗜热链球菌分别接种到各自最适培养基 中， 37培养36小时， 各取培养液100ml转接到发酵罐中进行扩大培养， 当发酵液中活菌浓 度达到2。

18、108CFU/ml以上时， 停止培养。 取发酵液进行离心， 4000转/分进行离心15分钟， 收集菌体。 0027 2) 将上述菌体按重量比为 0.5 1.5 2 1 均匀混合， 取混合物 100 份、 脱脂奶 粉 200 份、 大豆蛋白粉 200 份、 乳酸钠 50 份均匀混合， 并按 50 转 / 分的速度搅拌 30 分钟， 使菌体彻底吸附到载体上。 0028 3)取可溶性淀粉600份、 甘露糖200份、 沸石粉200份和步骤2)所得混合物混合， 并按步骤2)的方法搅拌30分钟， 再向混合物中喷入8的蔗糖溶液300份， 继续搅拌30分 钟， 室温通风干燥， 包装即得。 0029 实施例 3。

19、 0030 本实施例的复合益生菌喷雾剂的制备方法如下 ： 0031 1) 将蜡样芽胞杆菌、 双歧杆菌、 粪肠球菌、 植物乳杆菌、 嗜热链球菌分别接种到各 自最适培养基中， 37培养24小时， 各取培养液100ml转接到发酵罐中进行扩大培养， 当发 酵液中活菌浓度达到 2108CFU/ml 以上时， 停止培养。取发酵液进行离心， 4500 转 / 分进 行离心 30 分钟， 收集菌体。 0032 2) 将上述菌体按重量比为 1 2 2.5 1 1 均匀混合， 取混合物 200 份、 脱脂 奶粉 100 份、 大豆蛋白粉 300 份、 半胱氨酸 100 份均匀混合， 并按 50 转 / 分的速度搅。

20、拌 30 分钟， 使菌体彻底吸附到载体上。 0033 3) 取葡萄糖 600 份、 可溶性淀粉 600 份、 海藻酸钠 300 份和步骤 2) 所得混合物混 说 明 书 CN 103919816 A 5 4/5 页 6 合， 并按步骤 2) 的方法搅拌 30 分钟， 再向混合物中喷入 2的蔗糖溶液 400 份， 继续搅拌 30 分钟， 室温通风干燥， 包装即得。 0034 试验例 1 ： 0035 本试验例是按照实施例所制备的一种预防和治疗新生家畜腹泻的复合益生菌喷 雾剂对新生仔猪的效果试验。 0036 1.1 试验材料 0037 受试药物 ： 本发明实施例的喷雾剂、 实施例中的益生菌组合物 。

21、( 枯草芽胞杆菌、 蜡 样芽胞杆菌、 粪肠球菌、 酵母菌 )、 包被载体 ( 糊精、 海藻酸钠 )、 吸附载体 ( 脱脂奶粉、 甘露 糖、 半胱氨酸 )， 包被载体与吸附载体混合物， 载体混合比例均按照实施例配制。 0038 试验动物 ： 1 日龄杜 x 长 x 大三元杂交仔猪。 0039 1.2 试验方法 0040 1.2.1 动物分组将 75 头 1 日龄杜 x 长 x 大三元杂交仔猪随机分为 5 组， 即为实验 组 I( 本发明制剂 )， 实验组 II( 包被载体 )， 实验组 III( 吸附载体 )， 实验组 IV( 包被载体 和吸附载体混合物 ) 和对照组， 每组 15 头。 004。

22、1 1.2.2 试验方法 0042 将试验中的药物按1100的比例与水均匀混合， 装入喷雾器中， 直接喷洒于母猪 的乳房和体表， 每日 4 次， 连续给药直到断奶 (30 日龄 )。在试验的全过程观察记录仔猪的 腹泻情况， 计算腹泻率和腹泻频率 ； 在试验前和结束后分别对各组仔猪体重测量， 确定增重 量。腹泻率腹泻头数 / 总头数 100， 腹泻频率 ( 腹泻头数 腹泻天数 )/( 试验头 数 试验天数 )100。 0043 1.3 试验结果 ： 0044 本发明各实施例试验效果见表 1， 从表 1 可看出， 在使用本发明产品后， 能显著降 低新生仔猪腹泻病的发生率和腹泻频率， 而且在仔猪的平均增重方面， 试验组 I 明显的高 于其它试验组和对照组。 0045 结论 ： 本发明复合益生菌制剂使有益菌在新生仔猪肠道内迅速定植， 调整肠道微 生态平衡， 提高仔猪的免疫力和抗病能力， 能有效防治新生仔猪腹泻， 同时能显著提高新生 仔猪的生长性能。本发明的剂型为喷雾剂， 克服了现有剂型的给药不方便， 用药量大， 用药 成本高等缺点， 适合于养殖业中推广应用。 说 明 书 CN 103919816 A 6 5/5 页 7 0046 说 明 书 CN 103919816 A 7 。