技术领域
本发明涉及一种抑制增生性疤痕的中药组合物及其制备方法及用途。
背景技术
疤痕是皮肤软组织的严重损伤而不能完全自行正常修复，转由纤维组织替代修复留下的 既影响外观又影响功能的局部症状。而增生性疤痕是成纤维细胞异常增殖所导致的一种病理 性结果。增生性疤痕表现为局部组织的潮红,组织高出皮面,严重者可引发挛缩畸形,造成关节 的屈曲畸形或器官移位给患者带来的是巨大的肉体痛苦和精神痛苦。
目前常用的几种疤痕治疗方法有切除疤痕无创缝合、软组织扩张器扩张正常皮肤后修复 疤痕、疤痕内药物注射、激光除疤、疤痕磨削术等方法。这些疤痕修复方法存在着恢复期较 长、心理压力较重、费用较高、副作用大等问题。中医修复疤痕是一种相对安全、绿色、无 副作用的治疗方法。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种抑制增生性疤痕的中药组合物。
本发明的第二个目的是提供一种抑制增生性疤痕的中药组合物的制备方法。
本发明的第三个目的是提供一种抑制增生性疤痕的中药组合物的用途。
本发明的技术方案概述如下：
一种抑制增生性疤痕的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
（1）按重量份数称取：大黄35-45份、川芎25-35份、三七15-25份、地龙5-15份；
（2）取大黄，粉碎，用大黄质量6-10倍的石油醚、氯仿或乙酸乙酯加热回流提取1-3次， 每次2-4小时，提取液过滤，减压浓缩至密度为1-2g/mL的稠膏；
（3）取川芎，粉碎，用川芎质量6-10倍的体积分数为95%的乙醇水溶液回流提取1-3次， 每次2-4小时，提取液过滤，减压浓缩除去乙醇得浓缩液，将浓缩液放入相当浓缩液体积1-3 倍的水中，搅拌均匀，过滤除去沉淀，按体积比为1:1-2的比例将滤液用石油醚萃取；再按 体积比为1:1-2的比例将经石油醚萃取后的滤液用乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液减压浓 缩至密度为1-2g/mL的稠膏；
（4）取三七，粉碎，用三七质量6-10倍的体积分数为65%-75%的乙醇水溶液加热回流提取 1-3次，每次2-4小时，提取液过滤减压浓缩至密度为1-2g/mL的稠膏；
（5）取地龙，粉碎，用地龙质量6-10倍的水浸泡30分钟后回流提取1-3次，每次2-4小时， 提取液滤过，浓缩至密度为1-2g/mL的稠膏；
（6）将步骤（2）、（3）、（4）和（5）获得的稠膏混合均匀，得到一种抑制增生性疤痕的中药 组合物。
上述制备方法制备的抑制增生性疤痕的中药组合物。
上述一种抑制增生性疤痕的中药组合物在制备抑制增生性疤痕的药品中的用途。
上述一种抑制增生性疤痕的中药组合物在制备抑制增生性疤痕的化妆品中的用途。
本发明的中药组合物中大黄是一味传统中药，它具有泻下攻积、清热泻火、凉血解毒、 逐瘀通经、利湿退黄的功效，大黄本身具有广谱抗菌作用,还对其它抗菌药物有协同增效作 用,且不易产生耐药性，大黄的主要功效成分蒽醌类化合物具有抗菌消炎的药理作用；三七 是中国特有的名贵中药材，具有止血、增强免疫力、抗炎、抗纤维化、消除自由基、抗氧化 等药理作用；川芎味辛，性温，归肝、胆、心经，气香升散，具有活血行气，祛风止痛的功 效；地龙具有通经活络、活血化瘀、预防治疗心脑血管疾病的作用；地龙中提取胶原酶、纤 溶酶、蚓激酶、核酸、微量元素等多种成分已被广泛的应用在药物中，具有通经活络、活血 化瘀的作用。一种抑制增生性疤痕的中药组合物把传统的中医理论与现代中药技术相结合， 根据皮肤的生理和疤痕形成的原因，结合多年的临床经验，筛选而成。
附图说明
图1为本发明的组合物对成纤维细胞（HSF）增殖和对乳酸脱氢酶（LDH）活力的影响。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明，本发明的实施例是为了使本领域的技术 人员能够更好的理解本发明，但并不对本发明作任何限制。
实施例1
一种抑制增生性疤痕的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
（1）按重量份数称取：大黄35份、川芎35份、三七15份、地龙15份。
（2）取大黄，粉碎，用大黄质量6倍的石油醚加热回流提取3次，每次2小时，提取液过滤， 减压浓缩至密度为2g/mL的稠膏；
（3）取川芎，粉碎，用川芎质量6倍的体积分数为95%的乙醇水溶液回流提取3次，每次2 小时，提取液过滤，减压浓缩除去乙醇得浓缩液，将浓缩液放入相当浓缩液体积1倍的水中， 搅拌均匀，过滤除去沉淀，按体积比为1:1的比例将滤液用石油醚萃取；再按体积比为1:1 的比例将经石油醚萃取后的滤液用乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液减压浓缩至密度为2g/mL 的稠膏；
（4）取三七，粉碎，用三七质量6倍的体积分数为75%的乙醇水溶液加热回流提取3次，每 次2小时，提取液过滤减压浓缩至密度为2g/mL的稠膏；
（5）取地龙，粉碎，用地龙质量6倍的水浸泡30分钟后回流提取3次，每次2小时，提取 液滤过，浓缩至密度为2g/mL的稠膏；
（6）将步骤（2）、（3）、（4）和（5）获得的稠膏混合均匀，得到一种抑制增生性疤痕的中药 组合物。
实施例2
一种抑制增生性疤痕的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
（1）按重量份数称取：大黄40份、川芎30份、三七20份、地龙10份；
（2）取大黄，粉碎，用大黄质量8倍的乙酸乙酯加热回流提取2次，每次3小时，提取液过 滤，减压浓缩至密度为1.5g/mL的稠膏；
（3）取川芎，粉碎，用川芎质量8倍的体积分数为95%的乙醇水溶液回流提取2次，每次3 小时，提取液过滤，减压浓缩除去乙醇得浓缩液，将浓缩液放入相当浓缩液体积2倍的水中， 搅拌均匀，过滤除去沉淀，按体积比为1:1.5的比例将滤液用石油醚萃取；再按体积比为 1:1.5的比例将经石油醚萃取后的滤液用乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液减压浓缩至密度 为1.5g/mL的稠膏；
（4）取三七，粉碎，用三七质量8倍的体积分数为70%的乙醇水溶液加热回流提取2次，每 次3小时，提取液过滤减压浓缩至密度为1.5g/mL的稠膏；
（5）取地龙，粉碎，用地龙质量8倍的水浸泡30分钟后回流提取2次，每次3小时，提取 液滤过，浓缩至密度为1.5g/mL的稠膏；
（6）将步骤（2）、（3）、（4）和（5）获得的稠膏混合均匀，得到一种抑制增生性疤痕的中药 组合物。
实施例3
一种抑制增生性疤痕的中药组合物的制备方法，包括如下步骤：
（1）按重量份数称取：大黄45份、川芎25份、三七25份、地龙5份；
（2）取大黄，粉碎，用10倍体积的氯仿加热回流提取1次，4小时，提取液滤过，减压浓 缩至密度为1g/mL的稠膏；
（3）取川芎，粉碎，用川芎质量10倍的体积分数为95%的乙醇水溶液回流提取1次，4小时， 提取液过滤，减压浓缩除去乙醇得浓缩液，将浓缩液放入相当浓缩液体积3倍的水中，搅拌 均匀，过滤除去沉淀，按体积比为1:2的比例将滤液用石油醚萃取；再按体积比为1:2的比 例将经石油醚萃取后的滤液用乙酸乙酯萃取，将乙酸乙酯萃取液减压浓缩至密度为1g/mL的 稠膏；
（4）取三七，粉碎，用三七质量10倍的体积分数为65%的乙醇水溶液加热回流提取1次，4 小时，提取液过滤减压浓缩至密度为1g/mL的稠膏；
（5）取地龙，粉碎，用地龙质量10倍的水浸泡30分钟后回流提取1次，4小时，提取液滤 过，浓缩至密度为1g/mL的稠膏；
（6）将步骤（2）、（3）、（4）和（5）获得的稠膏混合均匀，得到一种抑制增生性疤痕的中药 组合物。
实施例4
成纤维细胞(HSF)增殖抑制率和乳酸脱氢酶(LDH)活力的测定
成纤维细胞购于上海拜力生物技术有限公司；
DMEM高糖培养基购于美国Hyclone公司；
MTS溶液购于美国Promega公司；
胎牛血清购自以色列Biological Industries公司；
胰蛋白酶，美国Gibco公司；
乳酸脱氢酶（LDH）试剂盒，南京建成生物工程研究所。
增生性疤痕病理本质是以疤痕成纤维细胞(HSF)为主的细胞过度增殖和以胶原为主的细 胞外基质过度沉积的结果。
（1）对数生长期成纤维细胞用0.25%胰蛋白酶（0.25%胰蛋白酶是0.25g胰蛋白酶用100ml 的双蒸水配制而成，并用碳酸氢钠调节pH值至7.2）消化，悬于含有胎牛血清、青霉素和链 霉素的DMEM高糖培养基中，（基中，含质量浓度为10%胎牛血清、1%青霉素和1%链霉素）， 调整细胞密度为5×104/mL，接种于96孔培养板，每孔100μL，于5%CO2、37℃培养12h 后，除去上清液，加入第二种培养基，分为对照组，氢化可的松阳性对照组，实施例1、2、 3组，其中，对照组：含1%胎牛血清的DMEM高糖培养基；氢化可的松阳性对照组：将氢化可 的松用含1%胎牛血清的DMEM高糖培养基配制成浓度为100μg/mL的溶液；实施例1、2、3 组：将实施例1、2、3获得的稠膏分别用含1%胎牛血清的DMEM高糖培养基配制成浓度为50 μg/mL的溶液。各组培养24h后，每孔加入120μL MTS稀释液（MTS稀释液是MTS溶 液用5体积倍的DMEM高糖培养基稀释而成），5%CO2、37℃继续培养4h，取上清液，分别 进行细胞增殖抑制率测定和乳酸脱氢酶（LDH）活力评价。
（2）用酶标仪测步骤（1）获得的上清液490nm处吸光度（A）值，计算成纤维细胞增殖抑 制率。[增殖抑制率＝(1-A样品/A对照)×100%]
（3）药物的细胞毒性通过受损细胞释放到培养基中的乳酸脱氢酶进行评价，取步骤（1）中 对照组，氢化可的松阳性对照组，实施例1、2、3组的培养基按乳酸脱氢酶试剂盒(酶标法) 说明书进行，450nm测吸光度值计算乳酸脱氢酶的活力。
（4）试验结果表明，在各组细胞乳酸脱氢酶无显著差异的条件下，实施例1、2、3抑制增生 性疤痕的中药组合物组均能抑制成纤维细胞的增殖。见图1。
实施例5
抑制增生性疤痕的中药组合物溶液剂的制备
表1抑制增生性疤痕的中药组合物溶液剂配方
1、准确称量A相中的各项，将其放入水相罐中加热，加热至85℃时将混合均匀的B相加入，
保持20分钟后抽入乳化罐中，打开冷却水循环降温；
2、降温至40℃将称量准确的C相加入，搅拌20分钟后出料，即制成抑制增生性疤痕的中药 组合物的溶液剂。
马齿苋提取液购自上海浩泰生物科技有限公司；
实施例6
抑制增生性疤痕的中药组合物膏剂的制备
表2抑制增生性疤痕的中药组合物膏剂配方
1、准确称量A相中各项，将其加入到油相加热罐中，加热至80℃，保温20分钟灭菌，备用；
2、准确称量B中各项，将其加入到水相加热罐中，加热至80℃，保温20分钟灭菌，备用；
3、将B相抽入乳化罐中，保持乳化罐温度在80℃，开启均质与搅拌，搅拌速度为20转/分 钟，将A相缓慢加入到B相中，完全加入后均质300秒，均质结束后，持续搅拌15分钟，开 启冷却水，将转速降为12转/分钟；
4、降温至40℃，将C相加入乳化罐中，持续搅拌30分钟后出料，即制成抑制增生性疤痕的 中药组合物膏剂。
实施例7
抑制增生性疤痕的中药组合物霜剂的制备
表3抑制增生性疤痕的中药组合物霜剂配方
1、准确称量A相中各项，将其加入到油相加热罐中，加热至80℃，保温20分钟灭菌，备用；
2、准确称量B中各项，将其加入到水相加热罐中，加热至80℃，保温20分钟灭菌，备用；
3、将B相抽入乳化罐中，保持乳化罐温度在80℃，开启均质与搅拌，搅拌速度为20转/分 钟，将A相缓慢加入到B相中，完全加入后均质300秒，均质结束后，持续搅拌15分钟，开 启冷却水，将转速降为12转/分钟；
4、降温至40℃时，将C相加入乳化罐中，持续搅拌30分钟后出料，即制成抑制增生性疤痕 的中药组合物霜剂。
实施例8
将上述制得的实施例5、6、7进行临床试用观察。
（1）试用例数：选则增生性瘢痕患者；瘢痕直径小于4cm；瘢痕形成时间3个月-2年， 年龄18-60周岁，其中女性60例，随机分成三组，男性60例，随机分成三组。
（2）临床有效性评价指标
疤痕严重程度分类的积分标准:色泽：鲜红计3分,淡红、按压后消失计2分,不红，有 些灰暗计1分,正常肤色计0分；疤痕高度：8mm以上计3分,4mm＜高度≤8mm计2分,1～ 4mm计1分,平坦或稍凹陷计0分；硬度：坚硬如软骨计3分，硬度似橡皮计2分，稍软 计1分，柔软似正常皮肤计0分；瘙痒：剧烈或持续性并有抓痕计3分，时常有但不太剧 烈，可忍受计2分，有时痒计1分，无瘙痒计0分；疼痛：很强烈的“痛觉过敏”计3分， 中等强度的过敏性疼痛计2分，有时疼痛计1分，无疼痛计0分。
总评分1～5分为轻度。6～10分为中度，11-15分为重度。
疗效评价标准:从疤痕厚度是否变薄、质地是否变软及颜色是否有改善等来评价疗效，靶 皮损疗效指数=(治疗前总评分-治疗后总评分)/治疗前总评分x100％。靶皮损疗效评估按基 本治愈、显效、进步、无效4个标准。基本治愈为疗效指数≥90％，显效为60％～89％，进 步为20％～59％,无效为<20％。
（3）使用方法：用盐水或酒精消毒皮肤后，涂抹本发明的实施例5、6、7适量于所需部 位，轻轻按摩至吸收，一天2-3次，28天为1个疗程。
（4）临床试验结果表明使用2个疗程后实施例5的有效率为90%；实施例6的有效率为 97.5%；实施例7的有效率为95%；总有效率为94%。
本发明的抑制增生性疤痕的中药组合物能够有效治疗疤痕，并且疗效好，见效快，并且 治愈后不易复发，减少患者的痛苦。