异佛司可林在防治慢性阻塞性肺病中的应用.pdf

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1、(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201410083987.8 (22)申请日 2014.03.10 A61K 31/352(2006.01) A61P 11/00(2006.01) (73)专利权人 昆明医科大学 地址 650500 云南省昆明市呈贡新城雨花街 道春融西路 1168 号 (72)发明人 杨为民 王蕾 翁稚颖 王涛 许云龙 刘霞 王鹏 张玲 卿晨 (74)专利代理机构 北京科亿知识产权代理事务 所 ( 普通合伙 ) 11350 代理人 汤东凤 CN 103120740 A,2013.05.29, CN 1539493 A,2004.10.27, US 20。

2、11159048 A1,2011.06.30, CN 101843366 A,2010.09.29, (54) 发明名称 异佛司可林在防治慢性阻塞性肺病中的应用 (57) 摘要 本发明提供了一种化合物异佛司可林 （ISOF） 防治慢性阻塞性肺病 (COPD) 的新应用， 其中， ISOF 可单独作为药用或保健有效成分， 也可与其 它无排斥作用的组分制备成片剂、 口含片、 胶囊 剂、 颗粒剂、 口服液、 注射液、 气雾剂、 贴膏剂等。 本发明采用 ISOF 口服灌胃给药及腹腔注射等给 药方式， 在弹性蛋白酶、 香烟烟雾吸入诱发小鼠 COPD两种动物模型上进行实验研究， 证明ISOF对 弹性蛋白酶。

3、及香烟烟雾吸入诱发 COPD 有明显的 预防治疗作用。此外， 本发明的 ISOF 经急性毒性 及长期毒性试验结果证明应用是安全的， 成人每 日用量为 10 120mg， 给药方式包括口服、 注射、 喷雾。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 焦士勇 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书1页 说明书6页 附图5页 CN 103860543 B 2016.05.11 CN 103860543 B 1/1 页 2 1.一种异佛司可林在制备防治慢性阻塞性肺病药物中的应用， 其特征在于， 所述药物 通过以下方法制备得到 ： (1) 取 10kg 滇产毛喉鞘蕊花。

4、干品， 在室温下用 50 升 95乙醇提取 3 次， 提取液经减压 浓缩得到乙醇提取物， 提取物加入少量水拌匀后， 依次用石油醚、 氯仿、 正丁醇进行分配， 减 压浓缩后， 得到各自的提取物 ； (2)取氯仿提取物120g上硅胶柱， 用递增比例的石油醚-丙酮洗脱， 以薄层层析TLC监 测洗脱结果， 得到有效部位 ； (3) 有效部位再经过反复地层析和重结晶纯化， 获得毛喉鞘蕊花的纯粹的异佛司可 林 ； (4) 将异佛司可林制备成防治慢性阻塞性肺病的药物。 2.如权利要求 1 所述的应用， 其特征在于， 所述异佛司可林为片剂、 胶囊剂、 颗粒剂、 口 服液、 注射液、 气雾剂、 喷雾剂或者贴膏剂。

5、。 权 利 要 求 书 CN 103860543 B 2 1/6 页 3 异佛司可林在防治慢性阻塞性肺病中的应用 技术领域 0001 本发明属于肺部疾病的治疗药物领域， 尤其涉及一种二萜类化合物 - 异佛司可 林在防治慢性阻塞性肺病中的应用。 背景技术 0002 慢性阻塞性肺病 （COPD） 主要由吸烟、 大气污染和肺部慢性感染等导致， 阶段性进 程主要包括慢性支气管炎、 肺气肿及哮喘等。 COPD系终末细支气管远端部分 （包括呼吸性细 支气管、 肺泡管、 肺泡囊和肺泡） 膨胀， 并伴有气腔壁的破坏， 是一种以气流受限为特征的肺 部疾病， 气流受限不完全可逆， 呈进行性发展成为 COPD， 主。

6、要累及肺部， 但也可以引起肺部 以外各器官的损害。COPD 居当前全世界死亡原因的第 4 位， 由于其患病人数多， 死亡率高， 社会经济负担重， 成为一个重要的公共卫生问题。 0003 异佛司可林 （Isoforskolin， ISOF） 是仅分布于我国云南东北部的滇产毛喉鞘蕊花 （Coleus forskolin） 植物中的主要活性成分， 属于二萜类化合物， 分子式为 C22H34O7， 分子量 为 410， 结构式如下式 （1） 所示 ： 0004 0005 ISOF 具有解痉、 祛痰、 抗炎、 降压、 抗血小板聚集、 降低眼内压等作用。 发明内容 0006 本发明的目的在于提供一种二萜类。

7、化合物异佛司可林 （ISOF） 在防治慢性阻塞性 肺病 (COPD) 中的应用， 旨在发掘 ISOF 的新功能以及通过该 ISOF 对 COPD 进行积极有效的 预防和治疗。 0007 本发明是这样实现的， 一种 ISOF 在防治 COPD 中的应用。 0008 优选地， 所述 ISOF 为片剂、 口含片、 胶囊剂、 颗粒剂、 口服液、 注射液、 气雾剂、 喷雾 剂或者贴膏剂。 0009 本发明克服现有技术的不足， 提供一种 ISOF 在防治 COPD 中的应用， ISOF 可单独 作为药用或保健有效成分， 也可与其它无排斥作用的组分配伍， 制成相应剂型的药剂或保 健品， 例如可以制备成片剂、。

8、 口含片、 胶囊剂、 颗粒剂、 口服液等多种口服剂型， 也可以制备 成注射液、 气雾剂、 贴膏剂等剂型。 说 明 书 CN 103860543 B 3 2/6 页 4 0010 本发明采用 ISOF 口服灌胃给药及腹腔注射等给药方式。在弹性蛋白酶、 香烟烟 雾吸入诱发小鼠 COPD 两种动物模型上进行实验研究， 证明 ISOF 对弹性蛋白酶及香烟烟雾 吸入诱发 COPD 有明显的预防治疗作用。其中， 在弹性蛋白酶诱导小鼠 COPD 实验中， 与模 型组比较， ISOF（1mg/kg） 组能显著减少弹性蛋白酶诱发小鼠肺气肿模型的肺体积体重比 （P0.01） ； ISOF（1、 4mg/kg） 组。

9、能明显减少弹性蛋白酶诱发小鼠肺气肿模型的平均肺泡面积 （MAA） （P0.05） ， 能明显增加肺气肿小鼠的平均肺泡数 （MAN） （P0.05） ， 提示 ISOF 对弹性 蛋白酶诱发小鼠肺气肿模型的病理损害有明显的改善作用 ； 且肺部病理组织学切片显示， 与模型组相比， ISOF 各剂量组的肺泡扩张， 肺泡间隔断裂及肺泡融合等情况均得到了显著 的改善。在香烟烟雾吸入 （3 个月） 诱导小鼠 COPD 实验中， ISOF（灌胃给药） 对香烟烟雾吸 入 COPD 模型小鼠的病理损害有明显的改善作用 ； 且肺部病理组织学切片显示， 与模型组相 比， ISOF 各剂量组的肺泡扩张， 肺泡间隔断裂及。

10、肺泡融合等情况均得到了显著的改善 ； 与 模型组比较， ISOF（2、 8mg/kg） 组能非常显著地减少血清中 IL-6 的含量。 0011 此外， 本发明中 ISOF 经急性毒性及长期毒性试验结果证明应用是安全的。成人每 日用量为 10 120mg， 给药方式包括口服、 注射、 喷雾。 附图说明 0012 图 1 是本发明实施例 2 中 ISOF 对 PPE 诱导 COPD 小鼠肺组织病理形态学的影响及 对 COPD 小鼠的平均肺泡面积及平均肺泡数的影响结果图。 0013 图 2 是本发明实施例 2 中 ISOF 对 PPE 诱导 COPD 小鼠的肺体积体重比的影响结果 图 ； 0014 。

11、图 3 是本发明实施例 3 中 ISOF 对香烟烟雾吸入诱导 COPD 小鼠肺组织病理形态学 的影响及对 COPD 小鼠的平均肺泡面积及平均肺泡数的影响结果图 ； 0015 图 4 是本发明实施例 3 中 ISOF 对香烟烟雾吸入诱导 COPD 小鼠肺体积体重比的影 响结果图 ； 0016 图 5 是本发明实施例 3 中 ISOF 对香烟烟雾吸入诱导 COPD 小鼠血清中 IL-6 含量 的影响结果图。 具体实施方式 0017 为了使本发明的目的、 技术方案及优点更加清楚明白， 以下结合附图及实施例， 对 本发明进行进一步详细说明。 应当理解， 此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明， 并 。

12、不用于限定本发明。 0018 实施例 1ISOF 的制备 0019 （1） 取 10kg 滇产毛喉鞘蕊花 （Coleus forskohlii） 干品， 在室温下用 50 升 95% 乙 醇 （ethanol） 提取 3 次， 提取液经减压浓缩得到乙醇提取物， 提取物加入少量水拌匀后， 依 次用石油醚、 氯仿、 正丁醇进行分配， 减压浓缩后， 得到各自的提取物。 0020 （2） 取氯仿提取物 120g 上硅胶柱， 用递增比例的石油醚 - 丙酮洗脱， 以薄层层析 TLC 监测洗脱结果， 得到有效部位 CF-E。 0021 （3） 有效部位 CF-E 再经过反复地层析和重结晶纯化， 可以获得毛喉。

13、鞘蕊花的纯粹 的 ISOF。 说 明 书 CN 103860543 B 4 3/6 页 5 0022 （4） 将 ISOF 加入淀粉或相应的辅料， 混匀后制粒， 压制成片剂或胶囊等口服制剂， 或者加入其他辅料制成口服液、 喷雾气雾剂、 贴膏剂等， 或者加入注射溶媒及其他辅料等制 成注射剂。 0023 实施例 2 在弹性蛋白酶 （PPE） 诱导小鼠 COPD 模型上， ISOF 对 COPD 的防治作用实 验研究 0024 1、 试验方法 0025 模型建立及实验分组处理 ： 小鼠随机分成正常对照组与造模组， 将猪胰弹性蛋白 酶 （PPE， 0.3U/10g 体重） 滴入小鼠鼻腔， 制备小鼠 C。

14、OPD 模型。正常对照组采用相同的方法 于小鼠鼻腔内滴入等量的生理盐水。成模小鼠随机分成 3 组 ： COPD 模型对照组、 ISOF（1、 4mg/kg） 组及氨茶碱 （20mg/kg） 对照组。各组小鼠每天腹腔注射给药 1 次， 正常对照组及 COPD 模型对照组给予等容量溶媒， 连续给药 11 天。 0026 血氧分压的测定 ： 颈总动脉血液取血立即测定， 使用雅培 i-stat300 便携式血气 分析仪 （Abbotti-STAT System） 。 0027 左肺体积的测定及肺部病理组织学检查 ： 取小鼠左肺浸入 10% 福尔马林液中， 测 量其排液量， 获得左肺组织体积 （V） ，。

15、 固定24h以上。 每只小鼠取左肺最大横径处肺组织， 常 规石蜡包埋切片， 行 HE 染色， 观察病理组织学变化。同时每只小鼠观测两张切片， 每张切片 随机选择 5 个视野， 测量时避开支气管及大、 中血管。 0028 2、 实验结果 0029 （1） ISOF 对 PPE 诱导 COPD 小鼠肺组织病理形态学的影响及对 COPD 小鼠的平均肺 泡面积 （MAA） 及平均肺泡数 （MAN） 的影响， 结果如图 1 以及如下表 1 所示 ： 0030 0031 表 1ISOF 对 PPE 诱导 COPD 小鼠的平均肺泡面积及平均肺泡数的影响 0032 表 1 中， 数据表示为 meanSE， 数。

16、据统计学方法采用 one way ANOVA method （Student-Newman-keuls test） ， vs Model， *p0.05， *P0.01。 0033 从图 1 和表 1 中可以看出， 与模型组比较， ISOF（1、 4mg/kg） 组能显著减少 PPE 诱 说 明 书 CN 103860543 B 5 4/6 页 6 发小鼠 COPD 模型的平均肺泡面积 （MAA） （P0.05） ， 均能显著增加 COPD 小鼠的平均肺泡数 （MAN） （P0.05） ， 提示 ISOF 及 FSK 对 PPE 诱发小鼠 COPD 模型的病理损害有明显的改善作 用。 0034。

17、 （2） ISOF 对 PPE 诱导 COPD 小鼠的肺体积体重比 （V/W） 的影响， 结果如图 2 以及如 下表 2 所示 ： 0035 0036 表 2ISOF/FSK 对 PPE 诱导 COPD 小鼠的肺体积体重比的影响 0037 表 2 中， 数据表示为 meanSE， 数据统计学方法采用 one way ANOVA method （Student-Newman-keuls test） ， vs Model， *p0.05， *P0.01。 0038 从图 2 和表 2 可以看出， 与模型组比较， ISOF（1mg/kg） 组能非常显著地减少 PPE 诱发小鼠COPD模型的肺体积体重。

18、比 （P0.05） 。 说 明 书 CN 103860543 B 6 5/6 页 7 0044 实施例 3 在香烟烟雾吸入诱导小鼠 COPD 模型上， ISOF 对 COPD 的防治作用实验研 究 0045 1、 实验方法 0046 模型建立及实验分组处理 ： 小鼠随机分成正常对照组与 COPD 造模组。COPD 造模 组小鼠香烟烟雾吸入两个月之后每天灌胃给药 1 次， 连续给药 30 天， 期间持续香烟烟雾吸 入， 共烟雾吸入 3 个月。正常对照组小鼠亦同时放入另一有机玻璃箱中， 呼吸空气。造模小 鼠随机分成 3 组 ： COPD 模型对照组、 ISOF（2、 8mg/kg） 组。正常对照组。

19、及 COPD 模型对照组 给予等容量溶媒。 0047 左肺体积的测定及肺部病理组织学检查 ： 取小鼠左肺浸入 10% 福尔马林液中， 测 量其排液量， 获得左肺组织体积 （V） ， 固定24h以上。 每只小鼠取左肺最大横径处肺组织， 常 规石蜡包埋切片， 行 HE 染色， 观察病理组织学变化。同时每只小鼠观测两张切片， 每张切片 随机选择 5 个视野， 测量时避开支气管及大、 中血管。 0048 血清IL-6的测定 ： 颈总动脉取血， 低温下离心标本， 取血清上清液， -80保存。 用 酶联免疫吸附法 （ELISA 法） 测定血清中 IL-6 的含量， 具体操作按照试剂说明书进行。 0049 。

20、2、 试验结果 0050 （1） ISOF 对香烟烟雾吸入诱导 COPD 小鼠肺组织病理形态学的影响及对 COPD 小鼠 的平均肺泡面积 （MAA） 及平均肺泡数 （MAN） 的影响， 结果如图 3 及如下表 4 所示 ： 0051 0052 表 4ISOF 对香烟烟雾吸入诱导 COPD 小鼠平均肺泡面积及平均肺泡数的影响 0053 表 4 中， 数据表示为 meanSE, 数据统计学方法采用 one way ANOVA method （Student-Newman-keuls test） ， vs Model， *p0.05。 0054 从表 4 和图 3 中可以看出， 与模型组相比， IS。

21、OF 组肺泡间质炎症明显减轻， 肺泡扩 张融合及肺泡间隔断裂都有明显改善。与模型组比较， ISOF（2、 8mg/kg） 组均能显著减少 COPD 小鼠的平均肺泡面积 （MAA） （P0.05） ， 均能显著增加 COPD 小鼠的平均肺泡数 （MAN） （P0.05） ， 提示 ISOF 对香烟烟雾吸入 COPD 模型小鼠的病理损害有明显的预防保护作用。 0055 （2） ISOF 对小鼠肺体积体重比 （V/W） 的影响， 结果如图 4 和如下表 5 所示 ： 0056 说 明 书 CN 103860543 B 7 6/6 页 8 0057 表 5ISOF 对香烟烟雾吸入诱导 COPD 小鼠肺。

22、体积体重比的影响 0058 表 5 中， 数据表示为 meanSE， 数据统计学方法采用 Kruskal-Wallis One Way Analysis of Variance on Rank， vs Model,*p0.05。 0059 从表 5 和图 4 中可以看出， 与 COPD 模型组比较， ISOF（8mg/kg） 组能减少肺体积 体重比， 但无统计学差异。 0060 （3） ISOF 对香烟烟雾吸入诱导 COPD 小鼠血清中 IL-6 含量的影响， 结果如图 5 和 如下表 6 所示 ： 0061 0062 表 6ISOF 对香烟烟雾吸入诱导 COPD 小鼠血清中 IL-6 含量的。

23、影响 0063 表 6 中， 数据表示为 meanSE， 数据统计学方法采用 one way ANOVA method （Fisher LSD Method） ， vs Model， *p0.05， *P0.01， *P0.001。 0064 从图 5 和表 6 中可以看出， 与模型组比较， ISOF（2、 8mg/kg） 组均能非常显著地减 少血清中 IL-6 的含量 （P0.001） 。 0065 相比与现有技术的缺点和不足， 本发明具有以下有益效果 ： 本发明可单独作为药 用或保健有效成分， 也可与其它无排斥作用的组分配伍， 制成相应剂型的药剂或保健品， 应 用到防治慢性阻塞性肺病中， 。

24、具有良好的预防和治疗效果， 并且安全无毒。 0066 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已， 并不用以限制本发明， 凡在本发明的精 神和原则之内所作的任何修改、 等同替换和改进等， 均应包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 CN 103860543 B 8 1/5 页 9 图 1 说 明 书 附 图 CN 103860543 B 9 2/5 页 10 图 2 说 明 书 附 图 CN 103860543 B 10 3/5 页 11 图 3 说 明 书 附 图 CN 103860543 B 11 4/5 页 12 图 4 说 明 书 附 图 CN 103860543 B 12 5/5 页 13 图 5 说 明 书 附 图 CN 103860543 B 13 。