技术领域
本发明涉及医药领域，具体地说，本发明涉及一种含有川芎的药物组合物在抗阿司匹林 抵抗药物中的应用。
背景技术
阿司匹林(Aspirin)又称阿司匹林或乙酰水杨酸，应用于临床已有80多年的历史，是一种 古老的解热、镇痛药。近年来随着前列腺素研究的深入，对阿司匹林又有了新的认识：临床 上除了传统上用于解热、镇痛、抗炎外，还用于抗血小板聚集等。临床试验表明阿司匹林是 心脑血管疾病高危患者一级预防有效的抗血小板药物，对心肌梗死和缺血性血管事件的二级 预防也有效。
但是目前在临床上使用治疗剂量的阿司匹林，仍然有部分心脑血管疾病患者发生了冠脉 血栓和中风，加大治疗剂量，不仅未能达到治疗及预防目的，而且不良反应增加，这种现象 称为“阿司匹林抵抗”(Aspirin Resistance，AR)。
经过长期随访，原因如下：第一血小板被其它途径激活，不能被阿司匹林阻断[Valles J， Santos MT，Aznar J，et al.Erythrocyte Promotion of platelet reactivity decreases the effectiveness of aspirin as an antithrombotic therapeutic modality：the effect of low-dose aspirin is less than optimal in patients with vascular disease due to prothrombotic effects of erythrocytes on platelet reactivity.Circulation，1998；97：350-355]；第二有些患者需要比常规剂量更大的剂量才能得到 最佳抗栓效果，没有证据表明阿司匹林抗栓作用与剂量相关[Patrono C.Prevention of myocardial infarction and stroke by aspirin：different mechanisms？Different dosage？Thromb.Res.， 1998；92：S7-S12]；第三某些患者尽管应用常规剂量阿司匹林也能生成TXA2[Tayllor DW， Low-dose and high-dose acetylsalicylic acid for patients undergoing carotid endarterectomy：a randomized controlled trail；ASA and Carotid Endarterectomy(ACE)Trial Collaborators.Lancet， 1999；353：2179-2184]。
研究表明，AR的发生与下列机制有关。
红细胞提高血小板反应性
血小板-红细胞相互作用影响血小板反应性，通过血小板释放反应、类花生酸类物质合成 和血小板募集导致阿司匹林抵抗。红细胞引起TXA2合成增加，5-HT、β-TG和ADP释放，表 明红细胞调节血小板花生酸类物质的生成[Valles J，et al.Erythrocyte metabolically enhances collagen-induced platelet responsiveness via increased thromboxane production，adenosine diphosphate release，and recruitment.Blood，1991；78：154-162]。
花生四烯酸(PGF2)代谢
花生四烯酸经脂质过氧化产生一系列有生物活性的PGF2见复合物。F2-isoprostanes是血 管疾病重要的新的预测因子。不稳定心绞痛、稳定性心绞痛、变异性心绞痛患者和健康人， 服用阿司匹林100mg/d测量8-iso-PGF2(质脂过氧化作用的标志物)和11脱氢-TXA2(TXA2生 物合成的标志物)的研究表明，不稳定心绞痛患者8-iso-PGF2尿排泄量明显高于稳定心绞痛患 者和对照组；TXA2的排泄量明显高于稳定性心绞痛患者。不稳定心绞痛患者氧化剂应激增加， 8-iso-PGF2增多，血小板对其他激动剂的反应增强。
吸烟刺激
吸烟是心血管疾病主要的危险因素。资料表明阿司匹林能抑制血小板聚集率降低引起的 血小板聚集[Davis JW，et al.Cigarette smoking-induced enhancement of platelet function：lack if prevention by aspirin in men with coronary artery disease.J Lab Clin Med，1982；126：637-639]。吸 烟后血小板聚集率降低。不吸烟者和吸烟成瘾者吸烟前服用阿司匹林能防止血小板聚集率下 降。
儿茶酚胺水平增加血小板聚集增加
体外血小板对肾上腺素的敏感性表明儿茶酚胺引起的血小板活化和急性冠脉综合征之间 存在联系[Larsson PT et al，Norepinephrine-induced human platelet activation in vivo is only partly counteracted by aspirin.Circulation，1994；89：1951-1957]。40个急性心肌梗死患者随机分为华法 林组和阿司匹林组。踏车试验前后取血，比较两组的基线特征，运动时间和最大心率。在基 线时华法林组比阿司匹林组血小板聚集率明显降低，说明阿司匹林有抗血小板聚集的作用。 运动时两组的血小板聚集率均降低，表明血小板聚集能力增加。其原因可能是去甲肾上腺素 水平增加导致血小板活化。
血小板对胶原的敏感性增加
胶原是生理性的重要的血小板聚集的激动剂。两个试验研究阿司匹林应答和胶原之间的 关系。一个试验(n＝8健康男性)服用阿司匹林324mg/kg前，服药2小时后测量出血时间， 区分阿司匹林应答者和无应答者。8个人中7个参与了第二个试验，给予胶原0.15-4μg/ml 确定阿司匹林应答者和无应答者血小板对胶原的敏感性。第一个试验8个患者中，5个阿司 匹林应答者，3个无应答者。阿司匹林应答者和无应答者服药前出血时间无差别[(408±121) 和(330±30)秒，P＞0.05]，服药后有明显差别[(720±225)和(330±52)秒]。第二个试验7 个患者中，4个阿司匹林应答者，3个无应答者。阿司匹林应答者和无应答者服药前出血时间 无差别[(405±52)和(357±31)秒，P＞0.05]，服药后有明显差别[(623±189)和(345±54) 秒][Kawasaki T，el at.Incresed platelet sensitivity to cllagen in individuals resistant to low aspirin. Stroke，2000；31：591-595]。
环氧化酶-2(COX-2)(p900)
Cox是前列腺素合成的限速酶。Cox-1在大多数细胞和组织中表达。Cox-2的mRNA和 蛋白质正常情况下在大多数组织中不能检测到。最近Webr等[Weber AA，et al. Cyclooxygenase-2 in human platelet as a possible factor in aspirin resistance.Lancet，1993； 353：900]报道Cox-2的蛋白质和mRNA在健康人的循环血小板中表达，这可能是阿司匹林抵 抗的一个原因。
药物相互作用
阿司匹林和其他非甾体类消炎药(NSAIDS)的相互作用能够削弱阿司匹林对血小板的作 用。阿司匹林对丝氨酸残基的乙酰化作用，需要首先与赖氨酸-120结合，赖氨酸-120是所有 NSAIDS共同作用的位点。NSAIDS对赖氨酸-120的亲和力较强，从而阻止了阿司匹林对血 小板Cox-1的抑制作用。
以上阐述了阿司匹林抵抗的可能机制。明确血小板活化机制和可逆的危险因素，有助于 减少阿司匹林抵抗的发生，改善患者的预后。
阿司匹林抵抗是指服用阿司匹林后不能有效阻止血栓素A2的合成，即阿司匹林失去了对 心脑血管系统的保护作用，这种现象被称之为阿司匹林抵抗。对大多数患者来说，阿司匹林 能使心血管危险降低25％，但是阿司匹林抵抗的患者应用阿司匹林治疗心血管疾病，不能预 防心血管事件的发生，反而会增加心梗和卒中的发生率，这些发现限制阿司匹林的使用。因 此，这些心血管疾病在本发明当中称之为阿司匹林抵抗性心血管疾病，特别是指使用阿司匹 林治疗无效的冠心病、心绞痛。本发明将对阿司匹林抵抗性心血管疾病具有治疗作用的药物 称之为抗阿司匹林抵抗的药物，这种治疗作用称之为抗阿司匹林抵抗作用。
目前，对于治疗阿司匹林抵抗的报道还不是很多。Yusuf S等[Effects of pretreatment with clopidogrel and aspirin followed by long-term therapy in patients undergoing percutaneous coronary intervention：the PCI-CURE study.Lancet，2001]报道了在阿司匹林治疗的基础上加用 氯毗格雷能减少急性冠脉综合征患者包括经皮冠状动脉介入治疗的患者早期和长期的严重心 血管事件的发生率。
中药理血药，特别是活血化瘀类药物是历代医家所常用的药物，本类药物具有活血调经、 破血消癥、化瘀止痛、消肿生肌的功效，现代药理学证实，理血药具有扩展冠状动脉、增加 冠脉流量，降低心肌耗氧，降低外周血管阻力，抑制血小板聚集，改善微循环，抑制血栓形 成，增强纤维蛋白溶解活性，抗凝血系统，改善微循环，降压，缓解平滑肌痉挛等作用。理 血药中的川芎、丹参、益母草、桃仁、红花、水蛭等的临床作用不断的拓展。
经过长期的临床研究发现，中医认为冠心病的病因病理多由于“阴阳失调、气机逆乱导 致心血瘀滞、心脉痹阻、不通则痛”。根据上述原则，有人选取了肉桂、川芎、香附制成制剂， 该制剂具有温经活血，理气止痛之功效，用于寒凝气滞，血瘀阻络，胸痹心痛，遇寒发作， 舌苔色白，有瘀斑者症。由于其疗效确切，不良反应少，是临床治疗胸痹心痛的常用中成药。 目前对该制剂的研究主要集中在冠心病症引起的心绞痛症的研究上，有关该制剂治疗阿司匹 林抵抗作用尚未见报道。为了减轻心脑血管患者使用阿司匹林药物治疗心脑血管疾病时会产 生阿司匹林抵抗的现象，目前一些科研工作者正在寻找能够替代或减轻阿司匹林抵抗现象的 药物，本发明正是在此基础上对目前现在一些药物进行试验，以求发现其药物新用途，以解 决目前阿司匹林用药易产生阿司匹林抵抗现象。
发明内容
本发明的目的在于提供一种药物组合物在制备抗阿司匹林抵抗的药物中的应用。
所述的中药组合物由包括下列的原料药制成：肉桂、川芎、香附；优选的所述的中药组 合物由包括下列的原料药制成：肉桂25～50g、川芎250～500g、香附(醋炙)150～300g；最 佳的所述的中药组合物由包括下列的原料药制成：肉桂39.2g、川芎392.4g、香附(醋炙)235.4g。
所述的中药组合物可以制成滴丸、颗粒剂、胶囊、片剂、冲剂、散剂、口服液制剂形式。
所述的中药组合物的有效成分的制备可以采用以下方法：水提法、水提醇沉法、萃取法、 浸渍法、渗漉法、回流提取法、连续回流提取法、大孔树脂吸附法制备。例如，可将这些原 料药研成粉末混合均匀制成散剂冲服；也可以将这些药物一起水煎，然后浓缩水煎液，制成 口服液；但是为了使该药物各原料药更好地发挥药效，优选对原料采用如下工艺提取，但是 这不能限制本发明的保护范围。
所述的中药组合物的制备方法可以采用如下步骤：
取肉桂39.2g、川芎392.4g、香附(醋炙)235.4g备用；
以上三味，肉桂、川芎提取挥发油，挥发油另器收集；药渣加水煎煮二次，第一次为2.5 小时，第二次2小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.20～1.25(50℃)，加等量乙醇使沉淀，吸 取上清液，滤过，滤液备用。香附粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(附录I O)用80％乙醇作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集渗漉液约2000ml，与肉桂、川芎过 滤液合并，回收乙醇，并浓缩至约70ml；取挥发油，加乙醇适量溶解，加4ml吐温-80，制 成增溶液；取500g聚乙二醇-6000，加热熔融后，加入清膏及挥发油增溶液，搅拌均匀，保 持温度在60～90℃，滴入液体石蜡中(0～5℃)，滴制成丸，即得。
以上组成在生产时可按照相应的比例增大或减少，如大规模生产可以以公斤或以吨为单 位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或减小，但各组成之间的生药材料重量配 比比例不变。
为了更好地理解本发明的实质，下面通过临床观察本药物组合物在抗“阿司匹林抵抗” 的试验结果，说明其在制药领域中的新用途。
本发明采用目前常用的对阿司匹林抵抗的研究方法，应用免疫酶标法测定患者提供尿样 本，用来分析11-脱氢血栓素B2(TXB2)水平的变化，判断患者在服用本发明药物后是否 具有降低阿司匹林抵抗的作用，本发明通过临床研究观察，证明了本发明药物在制备抗阿司 匹林抵抗的药物中的应用，本发明药物具有抗阿司匹林抵抗的作用，为了更好地理解本发明， 下面用本发明药物组合物的临床试验结果说明其在制药领域中的新用途。
实验例 本发明药物组合物(按照实施例1方法制备)减少阿司匹林抵抗作用实验
本研究采用回顾性方法：正常值参照澳大利亚关于阿司匹林抵抗研究结果
一般资料
本组90例病人选自门诊病人，并且是经实验测定具有阿司匹林抵抗倾向的心血管疾病患 者。其中男性75人，女性15人。年龄70岁～80岁，平均年龄75岁。服阿司匹林者30人； 服用本发明药物组合物30人；合用者30人(全部病人至采样之日，至少已连续服药半年以 上)。
材料与方法
所采尿样为第一次晨尿中段，取后立即投入液氮中，后保存于-86℃低温冰箱中备用。 应用免疫酶标法检测11-脱氢TXB2，试剂盒采用Cayman Chemical公司产品，全部实验在 天士力研究院生物所完成，病人分组状况对实验室人员及后期数据统计人员实行双盲。
结果
如表1所示。
表1.各组病人尿值11-脱氢TXB2(ng/mmol)X±SD 阿司匹林(n＝30例) 本发明药物组合物(n＝30例) 阿司匹林与本发明药物组合物合用(n＝30例) 尿值11-脱氢TXB2(ng/mmol) 尿值11-脱氢TXB2(ng/mmol) 尿值11-脱氢TXB2(ng/mmol) 26.14±9.58 21.89±9.28 气 20.31±9.45
结论：本发明药物组合物与阿司匹林合用组与阿司匹林单独使用组组间尿中TXB2排泄 量之间有明显统计学差异，p＜0.05；本发明药物组合物组与阿司匹林组组间尿中TXB2排泄 量之间无明显统计学差异，p＞0.05；本发明药物组合物组与本发明药物组合物合用阿司匹林 组组间尿中TXB2排泄量之间无明显统计学差异，p＞0.05。
该实验结果证明，本发明药物组合物合用阿司匹林可使尿中的TXB2排泄量减少，即在 体内可阻断血栓素A2(TXA2)的形成，减少血小板的黏附和凝血，从而抑制血小板聚集， 减少动脉硬化、心肌梗塞的发生，结果说明本发明药物组合物合用阿司匹林具有抗阿司匹林 抵抗作用，对阿司匹林无效的心血管病患者，依然有改善生命指标的作用。该药物是否通过 其它作用机制减少阿司匹林抵抗，尚需进一步研究。
本发明药物是通过以下实施例制备而成，以下具体实施例是对本发明的解释，并不能限 制本发明。
具体实施方式
实施例1：
取肉桂39.2g、川芎392.4g、香附(醋炙)235.4g备用；
以上三味，肉桂、川芎提取挥发油，挥发油另器收集；药渣加水煎煮二次，第一次为2.5 小时，第二次2小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.20～1.25(50℃)，加等量乙醇使沉淀，吸 取上清液，滤过，滤液备用。香附粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(附录I O)用80％乙醇作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集渗漉液约2000ml，与肉桂、川芎过 滤液合并，回收乙醇，并浓缩至约70ml；取挥发油，加乙醇适量溶解，加4ml吐温-80，制 成增溶液；取500g聚乙二醇-6000，加热熔融后，加入清膏及挥发油增溶液，搅拌均匀，保 持温度在60～90℃，滴入液体石蜡中(0～5℃)，滴制成丸，即得。
实施例2：
取25g、川芎250g、香附(醋炙)300g备用；
以上三味，肉桂、川芎提取挥发油，挥发油另器收集；药渣加水煎煮二次，第一次为2.5小 时，第二次2小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.20～1.25(50℃)，加等量乙醇使沉淀，吸取 上清液，滤过，滤液备用；香附粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(附录I O) 用80％乙醇作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集渗漉液约2000ml，与肉桂、川芎过滤液 合并，回收乙醇，并浓缩至约70ml；取挥发油，加乙醇适量溶解，加4ml吐温-80，制成增 溶液；取500g聚乙二醇-6000，加热熔融后，加入清膏及挥发油增溶液，搅拌均匀，保持温 度在60～90℃，滴入液体石蜡中(0～5℃)，滴制成丸，即得。
实施例3：
取50g、川芎500g、香附(醋炙)150g备用； 以上三味，肉桂、川芎提取挥发油，挥发油另器收集；药渣加水煎煮二次，第一次为2.5小 时，第二次2小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.20～1.25(50℃)，加等量乙醇使沉淀，吸取 上清液，滤过，滤液备用。香附粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(附录I O) 用80％乙醇作溶剂，浸渍24小时后进行渗漉，收集渗漉液约2000ml，与肉桂、川芎过滤液 合并，回收乙醇，并浓缩至约70ml；取挥发油，加乙醇适量溶解，加4ml吐温-80，制成增 溶液；取500g聚乙二醇-6000，加热熔融后，加入清膏及挥发油增溶液，搅拌均匀，保持温 度在60～90℃，滴入液体石蜡中(0～5℃)，滴制成丸，即得。
实施例4：
取肉桂100g、川芎400g、香附(醋炙)150g备用；
以上三味，肉桂、川芎提取挥发油，挥发油另器收集；药渣加水煎煮二次，第一次为3.5 小时，第二次3小时，合并煎液，浓缩至相对密度为1.02～1.15(40℃)，加等量乙醇使沉淀， 吸取上清液，滤过，滤液备用；香附粉碎成粗粉，照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法(附录 I O)用70％乙醇作溶剂，浸渍20小时后进行渗漉，收集渗漉液约2000ml，与肉桂、川芎 过滤液合并，回收乙醇，并浓缩至约70ml；取挥发油，加乙醇适量溶解，加3ml吐温-80， 制成增溶液；取500g聚乙二醇-6000，加热熔融后，加入清膏及挥发油增溶液，搅拌均匀， 保持温度在60～90℃，滴入植物油中(-10～10℃)，滴制成丸，即得。