本发明涉及的是一种心肌细胞生长刺激肽(CMGSP),临床应用于心肌炎和心脏外科手术后的恢复治疗。
现有技术中具有刺激心肌细胞DNA和蛋白的合成,促进细胞分裂增殖的刺激因子,主要是从自发性高血压大鼠或实验性高血压动物的心肌中提取,生物活性较低。
本发明的目的在于提供一种从健康幼年哺乳类动物的心肌中提取出的具有较高生物活性的心肌细胞生长刺激肽(CMGSP),供临床上用于治疗心肌疾病和心脏外科手术后的恢复治疗。可口服和肌肉注射,或与其它药物配伍静脉。
本发明利心康药物是一种稳定的心肌细胞生长刺激肽(CMGSP),具有如下特征:
(1)在PH2-9范围内稳定;
(2)加热95-100℃10分钟,60-70℃30分钟条件下生物活性不改变;
(3)在多种蛋白水解酶,37℃,2小时条件下生物活性丧失;
(4)在水溶液22-30℃条件下可形成聚合体,但生物活性改变不明显;
(5)在加入3-8%甘露醇冻干密封条件下,室温贮存1.5年,4℃贮存2年,-20℃贮存3年,生物活性不改变;
(6)在HPLC分析条件下,由4个组份组成,各组份相对峰面积为:峰1 10.4%,峰26.4%,峰3 36.3%,峰4 7.3%,各峰保留时间分别为峰1 2.88分,峰2 3.93分,峰3 5.09分,峰4 7.41分。每个组份单独实验,均有生物活性;
(7)经SDS-PAGE分析,显示2条带,其分子量分别为8500Da,10800Da,经HPLC分析,CMGSP的数均分子量为9800Da, 重均分子量为10500Da,2个组份均有生物活性。
经紫外扫描光谱图为,在195±2nm及255±2nm处有两个特征性的吸收峰。
利心康是为一类具有刺激原代培养的心肌细胞的DNA合成和蛋白质合成,促进心肌细胞的分裂增殖及保护心肌细胞膜的分子量为5000-12000Da的小分子多肽混合物。
其分成四个组份,单一组份或二种及多组份组合使用均有效。
附图1为本发明HPLC分析
本发明药物生物活性表现方法实例:
取SD胚胎鼠(孕12-16天),无菌分离心脏,胰蛋白酶分离心肌细胞,用DMEM培养基洗涤3次后,用含10%小牛血清的DME/F12培养基配制2-5×105个细胞/ml,置96孔培养板内,每孔0.15ml,37℃,5%CO2条件下孵育24小时。用无血清DME/F12培养基换液后,实验孔加入5-40μg/孔的CMGSP,对照孔仅加DME/F12培养基,继续培养48小时,每孔加入5μlMTT(1.5mg/ml,DME培养基配制),继续培养4-6小时,每孔加入二甲基亚砜100μl终止反应置酶标仪570nm条件下测OD值,以实验孔/对照孔>1.7倍为有活性。测定结果如下:
CMGSP对培养中心肌细胞线粒体脱氢酶活力的影响
n OD 倍数 P值
对照组 8 0.108±0.01
实验组(μg)
5 4 0.143±0.02 1.3 >0.05
10 4 0.233±0.03 2.2 <0.01
20 4 0.243±0.02 2.3 <0.01
40 4 0.195±0.04 1.8 <0.05
本发明药物的药理作用实现如下:
取SD大鼠,雌雄不限,每kg体重注射异丙肾上腺素2mg,24小时后,用CMGSP治疗,每只大鼠给CMGSP4mg,每日一次,连续三天。用生理盐水作对照,3天后杀鼠,取心脏做
TYPE:AREA PERCENT RUN NUMBER:1 INDEX:1
WAVELENGTH:254nm
PEAK# AREA% RT AREA BC
1 0.061 0.28 128537 02
2 0.121 0.98 257530 02
3 1.015 2.69 2150812 02
4 ① 10.356 2.88 21943700 02
5 1.844 3.14 3908476 02
6 1.041 3.35 2205808 02
7 0.874 3.67 1851837 02
8 ② 6.431 3.93 13629270 08
9 1.533 4.51 3248245 06
10 ③ 36.337 5.09 76999441 08
11 0.123 5.69 261684 06
12 0.182 6.16 385149 06
13 0.204 6.36 432545 06
14 0.329 6.75 696258 06
15 ④ 7.266 7.41 15398112 06
16 2.333 8.29 4942818 06
17 0.667 8.75 1414685 06
18 1.387 9.09 2938040 06
19 0.24 10.19 508311 06
20 1.352 11.15 2864678 06
21 0.804 11.22 1705749 06
22 5.537 12.01 11731315 06
23 3.617 12.13 3426588 06
24 0.348 12.27 737765 06
28 0.632 17.01 1340201 06
29 0.089 17.11 188882 06
30 0.069 17.14 146296 06
31 0.799 17.37 1692180 06
32 0.311 19.66 659510 07
TOTAL 100 211906886
病理切片,观察治疗组与对照组的病变差异。
结果发现:
对照组的病理改变主要表现为心肌细胞变性(水泡样变为主),严重的坏死多见小A周围,心肌横纹变浅,心肌细胞之间有断裂现象,淋巴细胞浸润程度明显。而CMGSP组心肌细胞变性坏死的程度均较对照组为轻,坏死细胞的数量也较少,淋巴细胞浸润程度轻,心肌细胞结构清晰。
本发明药物可单独使用,亦可与其它促进心肌代谢、修复心肌损伤,改善心肌血液循环的中西药单方或复方合用。