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1、(10)申请公布号 CN 102274260 A (43)申请公布日 2011.12.14 CN 102274260 A *CN102274260A* (21)申请号 201110226352.5 (22)申请日 2011.08.09 A61K 36/258(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61K 125/00(2006.01) A61K 127/00(2006.01) A61K 131/00(2006.01) A61K 133/00(2006.01) A61K 135/00(2006.01) (71)申请人 北京中海康医药科技发展有限公司 地址 100044 北京市。
2、海淀区西直门北大街 32 号院 2 号楼 6 层 603 (72)发明人 孙武兴 宋华先 郑建华 黄海 秦玉霞 (54) 发明名称 一种三七提取物的药物组合物及其制备方法 (57) 摘要 本发明涉及一种三七提取物的药物组合物及 其制备方法。该药物组合物包含三七总皂苷提取 物和三七总黄酮提取物。其中三七总皂苷提取物 与三七总黄酮提取物的重量比为 1 0.25 4 ； 并且三七总皂苷提取物和三七总黄酮提取物占 三七提取物的重量百分比为 80。其制剂含有 治疗有效量的三七总皂苷、 三七总黄酮以及医药 上可接受的辅料。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请。
3、 权利要求书 1 页 说明书 12 页 CN 102274262 A1/1 页 2 1. 一种三七提取物的药物组合物， 其特征在于， 含有治疗有效量的三七总皂苷提取物 与三七总黄酮提取物。 2. 根据权利要求 1 所述的三七提取物的药物组合物， 其特征在于， 三七总皂苷提取物 与三七总黄酮提取物的重量比为 1 0.25 4， 三七总皂苷提取物与三七总黄酮提取物占 三七提取物的重量百分比为 80。 3. 根据权利要求 1 所述的三七提取物的药物组合物， 其特征在于， 三七总皂苷提取物 与三七总黄酮提取物的重量比为 1 0.25 0.5。 4. 根据权利要求 2 所述的三七提取物的药物组合物， 其。
4、特征在于， 三七总皂苷提取物 与三七总黄酮提取物的重量比为 1 0.25。 5. 根据权利要求 1 所述的三七提取物的药物组合物， 其特征在于， 所述的三七总皂苷 提取物中三七总皂苷的重量百分含量为 80。 6. 根据权利要求 1 所述的三七提取物的药物组合物， 其特征在于， 所述的三七总黄酮 提取物中三七总黄酮的重量百分含量为 80。 7. 权利要求 1 至 6 任一所述的药物组合物的制备方法， 其特征在于， 包括以下步骤 ： (1) 三七总皂苷提取物的制备 ： 取干燥三七药用部位， 粉碎， 用 4-8 倍药材重量的浓度 为 20 80乙醇溶液回流提取 2-5 次， 每次 0.5-2 小时，。
5、 合并提取液， 回收乙醇至尽， 浓 缩液上大孔吸附树脂柱， 先用6-10倍柱体积的去离子水洗脱， 弃去洗脱液， 再用515 乙醇溶液洗脱， 用薄层色谱控制洗脱终点， 弃去洗脱液， 再用3-7倍柱体积的3080乙 醇溶液洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 干燥即得三七总皂苷提取物 ； (2) 三七总黄酮提取物的制备 ： 取干燥三七药用部位， 粉碎， 用 5-10 倍药材重量的浓度 为 30 95乙醇溶液回流提取 2-5 次， 每次 0.5-2 小时， 合并提取液， 回收乙醇至尽， 浓 缩液上大孔吸附树脂柱， 先用8-10倍柱体积的去离子水洗脱， 弃去洗脱液， 再用515 乙醇溶液洗脱， 用薄层色谱。
6、控制洗脱终点， 弃去洗脱液， 再用4-6倍柱体积的4095乙 醇溶液洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 干燥即得三七总黄酮提取物。 (3) 将步骤 (1) 所得的三七总皂苷提取物和步骤 (2) 所得的三七总黄酮提取物按一定 的比例混合， 即得。 8. 根据权利要求 7 所述的药物组合物的制备方法， 其特征在于， 所述的三七药用部位 选自于三七的根、 根茎、 茎叶、 绒根、 果实、 果梗、 种子、 花蕾或其组合。 9. 一种含有权利要求 1 所述的三七提取物的药物组合物制剂， 其特征在于， 所述的剂 型为粉针剂、 水针剂、 片剂或胶囊剂。 10. 根据权利要求 9 所述的药物组合物制剂， 其特征在。
7、于， 所述的剂型为粉针剂。 权 利 要 求 书 CN 102274260 A CN 102274262 A1/12 页 3 一种三七提取物的药物组合物及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种含有三七总皂苷提取物与三七总黄酮提取物的三七提取物的药 物组合物及其制备方法。 背景技术 0002 三七为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根及根茎。 其 性温， 味甘、 微苦， 入胃经。功能主治为化瘀止血， 消肿定痛。用于咯血， 吐血， 便血， 崩漏， 外 伤出血， 胸腹刺痛， 跌扑肿痛。主产于云南文山、 砚山、 广南、 马关及广西靖西、 睦边、 。
8、百色等 地。 0003 三七中含有多种成分， 迄今从三七的根、 根茎、 茎叶、 果梗、 果实、 种子、 花蕾等药用 部位分离得到了皂苷、 黄酮苷、 三七素、 甾醇、 聚炔醇、 氨基酸、 多糖、 挥发油、 有机酸、 环二 肽、 生物碱以及各种微量元素等化学成分。 其中， 三七总皂苷成分主要分布于三七的根及根 茎， 三七总黄酮成分主要分布于三七的茎叶。 药理研究结果表明， 三七总皂苷具有抑制血小 板聚集、 预防心脑梗塞、 缓解心绞痛、 保护脑组织、 改善脑血液循环、 抗冠心病、 增强免疫力、 调节血糖和血脂等活性。 三七总黄酮具有扩张冠脉血管、 增加冠脉血流量、 改善心肌血氧供 应、 抑制心肌收缩。
9、力、 减慢心率、 降低外周血管阻力、 降低心肌耗氧量、 抗脂质过氧化、 抗病 毒， 抗癌等活性。因此， 三七总皂苷与三七总黄酮配伍使用将影响到药物组合物的疗效。 0004 现有上市产品主要围绕三七总皂苷来开发， 却忽视三七总皂苷与三七中其他类成 分之间的协同增效作用， 尤其是具有很好的抗心肌缺血的三七总黄酮。虽然三七总皂苷与 三七总黄酮作用机制不同， 但药理活性有很多的相似之处， 都具有抑制血小板聚集、 扩张血 管、 增加血流量、 改善微循环、 抗肿瘤、 抗衰老等作用。但通过对比发现， 三七总皂苷不仅明 显扩张冠脉血管、 增加冠脉血流量， 而且对周围血管也有扩张作用 ； 而三七总黄酮具有明显 。
10、抗心肌缺血、 缺氧作用 ； 三七总皂苷作为三七的主要活性成分之一， 以它为主成分开发的已 上市销售的血栓通注射液、 血塞通注射液， 主要用于心脑血管疾病的治疗， 临床疗效良好， 无明显不良反应。三七总黄酮也是三七的活性成分之一， 目前还没有以它为主成分开发的 药品上市。本发明药物组合物使用三七总皂苷提取物与三七总黄酮提取物配伍， 与上述已 上市的制剂比较， 增加了药物活性成分， 并且综合了三七总皂苷与三七总黄酮的功效， 具有 更加显著的药理作用。 因此， 三七总皂苷与三七总黄酮配伍使用既增加了作用靶点和途径， 又增加了疗效。 发明内容 0005 本发明旨在提供一种高纯度的三七提取物的药物组合物。
11、， 其包含三七总皂苷提取 物与三七总黄酮提取物， 其特征在于， 三七总皂苷提取物与三七总黄酮提取物的重量比为 1 0.25 4 ； 并且三七总皂苷提取物和三七总黄酮提取物占三七提取物的重量百分比为 80。 0006 本发明所述的三七提取物的药物组合物， 其中三七总皂苷提取物和三七总黄酮提 说 明 书 CN 102274260 A CN 102274262 A2/12 页 4 取物的重量比为 1 0.25 4， 优选为 1 0.25 0.5， 最优选为 1 0.25。 0007 本发明还提供三七提取物的药物组合物的制备方法， 包括以下步骤 ： 0008 取干燥三七药用部位， 粉碎， 用 4-8 。
12、倍药材重量的浓度为 20 80乙醇溶液回 流提取 2-5 次， 每次 0.5-2 小时， 合并提取液， 回收乙醇至尽， 浓缩液上大孔吸附树脂柱， 先 用6-10倍柱体积的去离子水洗脱， 弃去洗脱液， 再用515乙醇溶液洗脱， 用薄层色谱 控制洗脱终点， 弃去洗脱液， 再用 3-7 倍柱体积的 30 80乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 干燥即得三七总皂苷提取物 ； 0009 取干燥三七药用部位， 粉碎， 用5-10倍药材重量的浓度为3095乙醇溶液回 流提取 2-5 次， 每次 0.5-2 小时， 合并提取液， 回收乙醇至尽， 浓缩液上大孔吸附树脂柱， 先 用8-10倍柱体积的去离子水。
13、洗脱， 弃去洗脱液， 再用515乙醇溶液洗脱， 用薄层色谱 控制洗脱终点， 弃去洗脱液， 再用 4-6 倍柱体积的 40 95乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 干燥即得三七总黄酮提取物。 0010 取三七总皂苷提取物和三七总黄酮提取物按一定比例混合， 即得三七提取物。 0011 所述的三七药用部位选自于三七的茎叶、 根、 绒根、 根茎、 果实、 果梗、 种子、 花蕾或 其组合。 0012 本发明还提供包含所述三七提取物的药物组合物的药物制剂， 含有治疗有效量的 三七总皂苷提取物和治疗有效量的三七总黄酮提取物以及药学上可接受的载体。 所述药物 制剂的剂型可包括口服制剂， 例如片剂、 胶囊。
14、等 ； 注射制剂， 例如粉针、 水针等。 0013 相对现有技术来说， 本发明采用药效学指标对三七总皂苷提取物、 三七总黄酮提 取物进行不同比例的考察， 得出更优的配伍比例， 从而保证不同批次产品间疗效的均一稳 定 ； 同时本发明对三七总皂苷提取物和三七总黄酮提取物进行了纯化， 更多的保留疗效确 切的组分， 所制备的三七提取物做成粉针后无需乙醇溶解， 只需注射用水、 生理盐水或葡萄 糖注射液溶解即可， 因此， 使用更方便， 刺激性更小。 具体实施方式 0014 下面以具体实施例对本发明作详细说明， 本发明所述的三七提取物是按如下实施 例所表示的方法制造或发现的， 但以下实施例不得理解为任何意义。
15、上的对本发明权利要求 的限制。 0015 ( 一 ) 制备实施例 0016 制备实施例 1 ： 0017 取干燥三七根及根茎 20.0kg， 使用中草药粉碎机 ( 购自天津市泰斯特仪器有限公 司 ) 粉碎， 用 8 倍药材重量的浓度为 40乙醇溶液回流提取 3 次， 每次 1.0 小时， 合并提取 液， 回收乙醇至尽， 浓缩液上D101型大孔吸附树脂(购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司) 柱， 先用 6 倍柱体积的去离子水洗脱， 弃去洗脱液， 再用 5乙醇溶液洗脱， 用薄层色谱控制 洗脱终点， 弃去洗脱液， 再用 3 倍柱体积的 50乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 干燥 即得三七总皂苷。
16、提取物 2153.6g( 三七总皂苷含量为 90.6 )。 0018 取三七茎叶20.0kg， 使用中草药粉碎机(购自天津市泰斯特仪器有限公司)粉碎， 用 5 倍药材重量的浓度为 90乙醇溶液回流提取 2 次， 每次 1.5 小时， 合并提取液， 回收乙 醇至尽， 浓缩液上 AB-8 型大孔树脂 ( 购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司 ) 柱， 先用 5 倍 说 明 书 CN 102274260 A CN 102274262 A3/12 页 5 柱体积的去离子水洗脱， 弃去洗脱液， 再用 5乙醇溶液洗脱， 用薄层色谱控制洗脱终点， 弃 去洗脱液， 再用 4 倍柱体积的 90乙醇溶液洗脱， 收集洗。
17、脱液， 减压浓缩， 干燥即得三七总 黄酮提取物 563.9g( 三七总黄酮含量为 86.3 )。 0019 将所得的三七总皂苷提取物和三七总黄酮提取物按一定重量比 (4 1、 2 1、 1 1、 1 2、 1 4) 混合得到三七提取物 1-5 组。 0020 表 1 三七提取物 1-5 组 0021 0022 制备实施例 2 ： 0023 取干燥三七根茎 20.0kg， 使用中草药粉碎机 ( 购自天津市泰斯特仪器有限公司 ) 粉碎， 用6倍药材重量的浓度为60乙醇溶液回流提取3次， 每次1.5小时， 合并提取液， 回 收乙醇至尽， 浓缩液上 AB-8 型大孔吸附树脂 ( 购自沧州宝恩吸附材料科。
18、技有限公司 ) 柱， 先用 8 倍柱体积的去离子水洗脱， 弃去洗脱液， 再用 10乙醇溶液洗脱， 用薄层色谱控制洗 脱终点， 弃去洗脱液， 再用 5 倍柱体积的 30乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 干燥即 得三七总皂苷提取物 2009.2g( 三七总皂苷含量为 89.4 ) ； 0024 取干燥三七绒根 20.0kg， 使用中草药粉碎机 ( 购自天津市泰斯特仪器有限公司 ) 粉碎， 用 8 倍药材重量的浓度为 75乙醇溶液回流提取 3 次， 每次 1.0 小时， 合并提取液， 回收乙醇至尽， 浓缩液上 AB-8 型大孔树脂 ( 购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司 ) 柱， 先 用 8 。
19、倍柱体积的去离子水洗脱， 弃去洗脱液， 再用 10乙醇溶液洗脱， 用薄层色谱控制洗脱 终点， 弃去洗脱液， 再用 5 倍柱体积的 75乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 干燥即得 三七总黄酮提取物 605.5g( 三七总黄酮含量为 85.7 )。 0025 制备实施例 3 ： 0026 取干燥三七绒根 20.0kg， 使用中草药粉碎机 ( 购自天津市泰斯特仪器有限公司 ) 粉碎， 用4倍药材重量的浓度为80乙醇溶液回流提取2次， 每次2.0小时， 合并提取液， 回 收乙醇至尽， 浓缩液上 HPD-100 型大孔吸附树脂 ( 购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司 ) 柱， 先用 6 倍柱体积的。
20、去离子水洗脱， 弃去洗脱液， 再用 15乙醇溶液洗脱， 用薄层色谱控 制洗脱终点， 弃去洗脱液， 再用 7 倍柱体积的 80乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 干 燥即得三七总皂苷提取物 2108.3g( 三七总皂苷含量为 88.1 )。 0027 取干燥三七根茎 20.0kg， 使用中草药粉碎机 ( 购自天津市泰斯特仪器有限公司 ) 粉碎， 用 10 倍药材重量的浓度为 50乙醇溶液回流提取 5 次， 每次 0.5 小时， 合并提取液， 回收乙醇至尽， 浓缩液上 AB-8 型大孔树脂 ( 购自沧州宝恩吸附材料科技有限公司 ) 柱， 先 用 10 倍柱体积的去离子水洗脱， 弃去洗脱液， 。
21、再用 15乙醇溶液洗脱， 用薄层色谱控制洗 脱终点， 弃去洗脱液， 再用 6 倍柱体积的 50乙醇溶液洗脱， 收集洗脱液， 减压浓缩， 干燥即 说 明 书 CN 102274260 A CN 102274262 A4/12 页 6 得三七总黄酮提取物 548.1g( 三七总黄酮含量为 83.4 )。 0028 制备实施例 4 0029 三七提取物粉针 0030 0031 取制备实施例 1 制得的三七总皂苷提取物 100g 和三七总黄酮提取物 25g， 乳糖 35g， 加适量注射用水加热溶解， 加入 0.3针用活性炭 (w/v)， 加热煮沸， 保温 30 分钟， 过 滤， 加注射用水补充至总体积。
22、 2000ml， 调节 pH 至 6.0 7.0， 滤过、 分装、 冻干、 轧盖、 制成 1000 支， 即得。规格为 ： 每支含三七总皂苷提取物 100mg， 三七总黄酮提取物 25mg。 0032 制备实施例 5 0033 三七提取物粉针 0034 0035 取制备实施例 1 制得的三七总皂苷提取物 200g 和三七总黄酮提取物 100g， 甘露 醇 30g， 加适量注射用水加热溶解， 加入 0.3针用活性炭 (w/v)， 加热煮沸， 保温 30 分钟， 过滤， 加注射用水补充至总体积 4000ml， 调节 pH 至 6.0 7.0， 滤过、 分装、 冻干、 轧盖、 制成 1000 支， 。
23、即得。规格为 ： 每支含三七总皂苷提取物 200mg， 三七总黄酮提取物 100mg。 0036 制备实施例 6 0037 三七提取物粉针 0038 0039 取制备实施例 2 制得的三七总皂苷提取物 150g 和三七总黄酮提取物 75g， 加适量 注射用水加热溶解， 加入 0.3针用活性炭 (w/v)， 加热煮沸， 保温 30 分钟， 过滤， 加注射用 水补充至总体积 3000ml， 调节 pH 至 6.0 7.0， 滤过、 分装、 冻干、 轧盖、 制成 1000 支， 即得。 规格为 ： 每支含三七总皂苷提取物 150mg， 三七总黄酮提取物 75mg。 0040 制备实施例 7 0041。
24、 三七提取物粉针 说 明 书 CN 102274260 A CN 102274262 A5/12 页 7 0042 0043 取制备实施例 2 制得的三七总皂苷提取物 250g 和三七总黄酮提取物 62.5g， 加适 量注射用水加热溶解， 加入 0.3针用活性炭 (w/v)， 加热煮沸， 保温 30 分钟， 过滤， 加注射 用水补充至总体积 3000ml， 调节 pH 至 6.0 7.0， 滤过、 分装、 冻干、 轧盖、 制成 1000 支， 即 得。规格为 ： 每支含三七总皂苷提取物 250mg， 三七总黄酮提取物 62.5mg。 0044 制备实施例 8 0045 三七提取物粉针 0046。
25、 0047 取制备实施例3制得的三七总皂苷提取物400g和三七总黄酮提取物100g， 加适量 注射用水加热溶解， 加入 0.3针用活性炭 (w/v)， 加热煮沸， 保温 30 分钟， 过滤， 加注射用 水补充至总体积 4000ml， 调节 pH 至 6.0 7.0， 滤过、 分装、 冻干、 轧盖、 制成 1000 支， 即得。 规格为 ： 每支含三七总皂苷提取物 400mg， 三七总黄酮提取物 100mg。 0048 制备实施例 9 0049 三七提取物水针 0050 0051 取制备实施例 1 制得的三七总皂苷提取物 100g 和三七总黄酮提取物 25g， 加适量 注射用水溶解， 加入0.2。
26、针用活性炭(w/v)， 加热煮沸， 保温30分钟， 冷藏， 过滤除碳， 调pH 值为 7.0， 加注射用水补充至总体积 2000ml， 过滤除菌、 灌封， 制成 1000 支， 即得。规格为 ： 每 ml 含三七总皂苷提取物 50mg， 三七总黄酮提取物 12.5mg。 0052 制备实施例 10 0053 三七提取物胶囊 说 明 书 CN 102274260 A CN 102274262 A6/12 页 8 0054 0055 取制备实施例1制得的三七总皂苷提取物40g和三七总黄酮提取物10g， 粉碎成细 粉， 加入 48g 淀粉， 2g 滑石粉， 混匀， 填充胶囊， 即得。 0056 制备。
27、实施例 11 0057 三七提取物胶囊 0058 0059 取制备实施例 2 制得的三七总皂苷提取物 100g 和三七总黄酮提取物 50g， 粉碎成 细粉， 加入 74g 淀粉， 4g 滑石粉， 混匀， 填充胶囊， 即得。 0060 制备实施例 12 0061 三七提取物片剂 0062 0063 取制备实施例3制得的三七总皂苷提取物100g、 三七总黄酮提取物25g、 交联羧甲 基纤维素钠10g、 乳糖57g混合均匀， 用适量聚维酮乙醇溶液制颗粒， 干燥， 整理后加入3g硬 脂酸镁， 混合均匀， 压片即得。 0064 ( 二 ) 试验实施例 0065 试验实施例 1 ： 过敏试验 0066 取。
28、制备实施例 1 制备的三七提取物 1-5， 分别用生理盐水溶解制成 1ml 含 50mg 三七提取物的溶液。取制备实施例 4 制备的粉针 1 支， 加注射用水 4ml 溶解。 说 明 书 CN 102274260 A CN 102274262 A7/12 页 9 0067 取体重300-400g的健康豚鼠12只， 连续3次， 间日腹腔注射供试品溶液0.5ml， 然 后分为两组， 每组6只， 分别在第一次注射后第14天及第21天静脉注射供试品溶液1ml， 在 注射后 15 分钟内， 均未出现过敏反应。 0068 试验实施例 2 ： 溶血试验 0069 取制备实施例1制备的三七提取物1-5， 分别。
29、用生理盐水溶解制成1ml含8mg三七 提取物的溶液 ； 取制备实施例 4 制备的粉针 1 支， 加注射用水 3ml 溶解。 0070 2红血球混悬液的制备 ： 取兔或羊血数毫升， 放入含玻璃珠的三角瓶中振摇 10 分钟， 或用玻璃棒搅动血液， 除去纤维蛋白质， 使之成为脱纤维血液， 加约 10 倍量的生理盐 水， 摇匀， 1000r/min 离心 15 分钟， 除去上清液， 沉淀的红细胞再用生理盐水按上述方法洗 涤 2-3 次， 至上清液不显红色为止， 将所得红细胞用生理盐水配成 2混悬液， 供试验用。 0071 试验方法 ： 取试管 8 支， 编号， 1-6 号管为供试品管， 7 号管为阴性。
30、对照管， 8 号管为 阳性对照管。按表 2 所示依次加入 2红细胞混悬液、 生理盐水或蒸馏水、 供试品， 混匀后， 立即置于 37恒温箱中进行温育， 开始每隔 15 分钟观察 1 次， 1 小时后， 每隔 1 小时观察 1 次， 观察 3 小时， 如溶液呈透明红色， 表示溶血。如溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀， 表示 有红细胞凝聚作用。 0072 表 2 体外溶血试验 0073 0074 结果发现， 1-6 号管中红细胞全部下沉， 上清液无色透明， 且在阴性对照管无溶血 和凝聚发生， 阳性对照管有溶血发生时， 1-6 号管中溶液在 3 小时内未发生溶血和凝聚。结 果表明， 受试的三七提取物及其。
31、制剂均无溶血， 符合规定。 0075 试验实施例 3 ： 对大鼠脑血管阻断行为障碍的改善作用 0076 1 供试品和对照品 0077 供试品 ： 三七提取物 1-5( 制备实施例 1)， 三七提取物粉针组 ( 制备实施例 4-8)， 三七提取物水针组 ( 制备实施例 9)， 三七提取物口服组 ( 制备实施例 10-12) 0078 阳性对照品 ： 注射用血塞通 (R1 Rg1 Rb1 约 1 4 2， 生产厂家 ： 黑龙江省 珍宝岛制药有限公司 ) 0079 溶媒 ： 生理盐水 0080 2 实验动物 0081 Wistar 大鼠， 体重 210-240g， 雌雄兼用 0082 3 动物分组及。
32、给药 0083 3.1 动物分组 0084 将 160 只成年健康大鼠进行随机分组， 每组 10 只， 共分为 16 组 ： 生理盐水对照组 (NS， iv)、 三七提取物 1-5 组、 三七提取物粉针组、 三七提取物水针组、 三七提取物口服组、 注射用血塞通组。 说 明 书 CN 102274260 A CN 102274262 A8/12 页 10 0085 3.2 给药途径 0086 根据拟临床用药途径， 生理盐水对照组、 三七提取物 1-5 组、 三七提取物粉针组、 三七提取物水针组、 注射用血塞通组均采用静脉给药， 三七口服组采用灌胃给药。 0087 配制方法 ： 试验前加入生理盐水。
33、， 轻轻摇匀使成透明溶液。 0088 3.3 给药量 ( 供试品以三七提取物计， 阳性对照品以三七总皂苷计 ) 0089 静脉给药量为 100mg/kg， 口服灌胃给药量为 200mg/kg。 0090 3.4 给药频率 0091 每天 1 次， 连续三天。 0092 4 试验方法 0093 大鼠腹腔注射水合氯醛 (350mg/ml) 麻醉。侧卧固定。于亚无菌手术条件下， 经眼 外眦与外耳道连线间开口， 剪断颧骨， 固定创口， 在手术显微镜下， 颅骨底处开颅窗， 暴露大 脑中动脉， 用高频电刀灼断， 止血后， 缝合创口， 回笼饲养。术后 24 小时按表 1 评定缺血损 伤程度， 根据分数高低搭。
34、配分组， 并开始给药。药后 2 小时评分， 以后每天给药一次， 并在给 药后 2 小时评分。第三次给药， 评分后断头。取大脑组织切成 5 片， 常规下 TTC 染色， 用 1 甲醛固定后， 根据落点法 (100 点 /cm2) 计算梗塞面积占脑切片面积的百分比。 0094 5 动物给药后反应 0095 5.1 观察指标 ： 0096 观察给药前及给药后的动物行为及脑梗塞面积占脑切片的百分比。 动物缺血损伤 的行为按表 3 所列指标观察、 打分。分数越高示损伤越严重。 0097 表 3MCAO 大鼠行为障碍的评分标准 0098 0099 0100 * 如介于两级之间时则取两级的平均分 0101 。
35、5.2 观察时间 ： 在给药前及给药后每天都要观察动物缺血损伤后的行为 ； 在首次 给药后三天， 即在第三次给药后 2 小时， 对动物行为评为后断头， 取脑组织切片、 染色、 固 定， 观察并统计脑梗塞面积占脑切片面积的百分比。 说 明 书 CN 102274260 A CN 102274262 A9/12 页 11 0102 6 试验结果 0103 6.1 数据及统计学处理 0104 各组给药前及各次给药后的分值均表示为平均值用配对 t 检验， 判定给药 前后分值差异的显著性 ； 以分值改善率 ( 药后每天均分 / 药前分 ) 的组间非配对 t 检验比 较不同组间的疗效。 0105 梗塞面积。
36、占脑切片的百分比， 以组间非配对 t 检验判定差异的显著性。 0106 6.2 试验结果 0107 各给药组和对照组， 给药前及给药期间的每天行为评分如表 4 所示。由表可见， 给 药前各组动物的损伤程度比较一致， 未见显著差异(P0.05)， 表明分组合理。 从改善率结 果看， 阳性组和样品组与生理盐水组相比均有显著改善作用， 样品组中三七总皂苷提取物 与三七总黄酮提取物比例为 4 1 时效果最强。 0108 表 4 对 MCAO 大鼠行为评分及其改善率的影响 (XSD) 0109 0110 0111 *P 0.05， *P 0.01， *P 0.001 与各自给药前相比 ； #P 0.05。
37、，#P 0.01 与 NS 组对比。 0112 根据对MCAO大鼠脑梗塞面积百分比的影响。 三七提取物1-5、 三七提取物粉针组、 三七提取物水针、 三七提取物口服组、 注射用血塞通的梗塞面积均小于空白对照组 (NS) ； 其中三七提取物 1、 制备实施例 4、 制备实施例 7-10、 制备实施例 12 的梗塞面积均小于注射 用血塞通， 且均显著小于空白对照 (P 0.05)， 表明增加脑血流量、 减少梗塞面积是本发明 三七提取物改善脑缺血损伤的作用基础之一。 说 明 书 CN 102274260 A CN 102274262 A10/12 页 12 0113 7 试验结论 0114 结果显示。
38、， 三七提取物及其制剂均能缩小缺血所致脑梗塞面积， 改善脑缺血所致 的行为障碍， 表明本发明三七提取物及其制剂对局部缺血损伤有改善作用， 尤其是在总皂 苷提取物与总黄酮提取物重量比 4 1 的条件下， 改善效果更明显。此外试验结果也表明， 增加脑血流量、 减少梗塞面积是本发明三七提取物改善脑缺血损伤的作用基础之一。 0115 试验实施例 4 ： 对家兔脑血管的影响 0116 1 供试品和对照品 0117 供试品 ： 三七提取物粉针组 ( 制备实施例 4、 7、 8)， 三七提取物水针组 ( 制备实施 例 9)， 三七提取物口服组 ( 制备实施例 10、 12)。 0118 阳性对照品 ： 注射。
39、用血塞通 (R1 Rg1 Rb1 约 1 4 2， 生产厂家 ： 黑龙江省 珍宝岛制药有限公司 )。 0119 溶媒 ： 生理盐水 0120 2 实验动物 0121 名称 ： 中国白兔 0122 性别 ： 雌雄兼用 0123 体重 ： 1.5-2.5kg 0124 3 动物分组及给药 0125 3.1 动物分组 0126 将 40 只家兔进行随机分组， 每组 5 只， 共分为 8 组 ： 空白对照组、 三七提取物粉针 组、 三七提取物口服组、 注射用血塞通组 ( 阳性对照 )。 0127 3.2 给药途经 0128 根据临床用药途径， 三七提取物粉针组、 注射用血塞通组、 生理盐水对照组均采用。
40、 耳缘静脉注射给药 ； 三七提取物口服组， 灌胃给药。 0129 配制方法 ： 耳缘静脉注射给药， 试验前将生理盐水注入粉针安瓿内， 轻轻摇匀使成 透明溶液 ； 灌胃给药， 试验前将生理盐水溶解胶囊内容物和片剂， 制成水溶液。 0130 3.3 给药量 ( 供试品以三七提取物计， 阳性对照品以三七总皂苷计 ) 0131 静脉给药量为 50mg/kg。口服灌胃给药量为 100mg/kg。 0132 3.4 给药频率 0133 单次给药 0134 4 试验方法 0135 各组动物耳缘静脉注射 25乌拉坦 (4ml/kg)， 仰位固定， 切开颈部皮肤， 分离两 侧总动脉， 于左侧颈总动脉处插管， 以。
41、 MPU-0.5 型压力换能器测血压曲线， 于右侧颈总动脉 头端进一步分离， 接 MF-27 型电磁流量计， 显示右侧颈内动脉血流， 可粗略代表前半部血流 量。将针形电极插入四肢皮下， 测量 II 导联心电图。上述指标同步记录于 RM-46 型多导仪 上。阳性对照组动物上腹部切口， 胃插管， 以备给药。 0136 待各项指标稳定 30 分后， 各组动物分别静脉注射给药或灌胃给药， 读取红药前后 颈内动脉血流量 (ICBF)、 血压 ( 平均血压， BP) 及心率 (HR)。 0137 实验结束后， 取出全脑称重， 计算每 100g 脑组织血流量 (CBF) 及脑血管阻力 (CVR)。 说 明 。
42、书 CN 102274260 A CN 102274262 A11/12 页 13 0138 CVR MAP/CBF 0139 5 动物给药后反应 0140 5.1 观察指标 ： 主要观察 ICBF， 同时观察 HR、 BP， 计算 CBF 及 CVR。 0141 5.2 观察时间 ： 60 分钟。 0142 6 试验结果 0143 6.1 数据及统计学处理 0144 各组数据以表示， 以 t 检验比较给药前后的的差异。 0145 6.2 结果见表 5。 0146 表 5 对家兔脑血流量 (CBF， ml/100g， min) 的影响 (XSD) 0147 0148 0149 *P 0.01 。
43、与给药前比较 0150 根据对家兔脑血流量 (CBF) 的影响。三七提取物粉针组、 三七提取物水针组及 三七提取物口服组较注射用血塞通明显增加家兔血流量， 且粉针组高于口服组。 0151 7 试验结论 0152 本发明三七提取物能够显著增加家兔脑血流量、 降低脑血管阻力， 给药后 5-10 分 钟开始发挥作用， 约 20 分钟时作用最强， 作用至少持续 30 分钟以上。表明， 三七总皂苷提 取物和三七总黄酮提取物重量比为 4 1 配伍使用能够显著的增加家兔脑血流量。但对家 兔心率及血压无显著性影响。 0153 此外， 本发明确定了三七提取物中三七总皂苷提取物和三七总黄酮提取物的最佳 配比 ； 。
44、通过对大鼠脑血管阻断行为障碍的改善药效学研究表明， 本发明的三七提取物能缩 小缺血所致脑梗塞面积， 改善脑缺血所致的行为障碍。 对家兔脑血管的影响试验结果表明， 本发明的三七提取物能够显著增加家兔脑血流量、 降低脑血管阻力。 说 明 书 CN 102274260 A CN 102274262 A12/12 页 14 0154 最后， 本发明所采用的提取工艺步骤少， 并且未采用毒性大的有机试剂， 所制备的 三七总皂苷提取物和三七总黄酮提取物更容易达到临床用药的要求。 经过敏试验及溶血试 验表明， 该纯度的三七提取物均未出现过敏反应和溶血现象， 安全性高。 0155 综上所述， 通过选择最佳配比， 可以保证三七总皂苷提取物和三七总黄酮提取物 批次之间的重现性， 从而保证产品质量的稳定可控， 安全有效。 说 明 书 CN 102274260 A 。