技术领域
本发明涉及例如去铁酮(L1)、deferitrin和4-[3，5-双(2-羟基苯 基)-[1，2，4]-三唑-1-基]苯甲酸(后文中称作“化合物I”)或其药学上可接受的 盐的铁螯合剂在制备用于预防和/或治疗例如人的肝病的药物组合物中的 用途，其中铁在该病的发病机制中发挥作用，所述肝病包括病毒性疾病， 如乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、庚型肝炎、戊型肝炎、慢性丙型肝炎 病毒感染、巨细胞病毒感染、HIV感染；和非病毒性疾病，如非酒精性脂 肪性肝炎和非酒精性脂肪肝病；以及肝癌，如肝腺癌(例如肝细胞癌，也称 作肝癌)，本发明还涉及预防所述疾病恶化的方法。
背景技术
在美国，肝病是造成死亡的十大诱因之一，每年造成超过30000人死 亡，例如参见Vong S等人，肝脏病学(Hepatology)；2004，39：476-483。
丙型肝炎的慢性感染是导致肝病的最主要原因，也是引起肝纤维化和 肝硬化的主要原因。在部分被感染的个体中，它还与肝细胞癌的恶化有关。 采用当前治疗标准，即用干扰素和利巴韦林进行治疗时，只能使约一半的 被治疗患者体内的病毒得到清除。
非酒精性脂肪性肝炎是一种与肝纤维化有关的代谢综合征，有大约 20％的病例会发展成肝硬化，例如参见Ong等人，Am.J Gastroenterol 2003，98：1915-1917。当前治疗标准，即控制代谢参数和减轻体重，只对少 数患者有效。非酒精性脂肪性肝炎(或称为NASH)是一种常见的并且经常 是“潜伏的(silent)”肝病。它与酒精性肝病类似，但是这种疾病发病于少量 饮酒或不饮酒的人群。NASH的主要特征是肝肥大，并伴有炎症和损伤。 大多数NASH患者感觉良好并没有意识到他们的肝脏有问题。然而，NASH 可能是很严重的并可导致肝硬化，在肝硬化中，肝脏永久性地被损伤而不 再能很好地工作。2％到5％的美国人受到NASH的影响。
非酒精性脂肪肝病(NAFLD)是造成肝功能试验升高的常见原因，组织 学上表现为在肝细胞中可见到脂肪沉淀、原发性大囊泡。尽管在大多数病 例中为良性病症，但是高达20％的NAFLD患者患有非酒精性脂肪性肝炎 (NASH)，并可发展成肝硬化、肝衰竭和肝细胞癌。NAFLD的一些风险因 素已得到确认，包括体重指数(BMI)升高、2型糖尿病、年龄增加和高甘油 三脂血症。认为NAFLD的病理生理学基础是胰岛素抵抗。多数专家认为 NAFLD是代谢综合症的肝脏表象，包括那些同时具有胰岛素抵抗、肥胖、 高血压和血脂异常的患者。NAFLD患者会发展成胰岛素抵抗。
化合物I为4-[3，5-双(2-羟基苯基)-[1，2，4]-三唑-1-基]苯甲酸，其结构式 如下：
美国专利No.6465504 B1中公开了游离酸形式、其盐和其晶体形式的 化合物I。化合物I为活性组分。
化合物I为一种铁螯合剂，其已显示出能有效地选择性除去模型系统 和人中的铁，例如参见Hershko C等人，血液(Blood)，2001，97：1115-1122； Nisbet Brown E等人，柳叶刀(Lancet)，2003，361：1597-1602。
但是，人们并不知道化合物I对治疗上述肝病是有效的。特别是，需 要找到一种可供选择的肝病的治疗方法，所述肝病例如为铁在其中发挥作 用的肝病，例如由病毒性感染引起的肝病，例如慢性丙型肝炎。另外，还 需要找到一种肝病(例如，慢性丙型肝炎)的治疗方法，在用标准治疗方法 如干扰素和利巴韦林治疗时，所述肝病是难治的、不响应的或不能完全治 愈或难以持续控制。
除非另有说明，后文中“化合物I”是指化合物I的游离酸形式、其药学 上可接受的盐以及其晶体形式。
下式
的Deferitrin：(4S)-2-(2，4-二羟基苯基)-4-甲基-4，5-二氢-1，3-噻唑-4-甲酸及 其制备方法公开在2000年3月9日公开的WO00/12493中。
EP093498 B1中公开了去铁酮：3-羟基-1，2-二甲基-4-(1，4)吡啶酮及其 药学上可接受的制剂。
本发明人已证实化合物I可用于除去体内的铁，并提出除去体内的铁 (例如将铁除至近缺乏状态或缺乏状态)对某些肝病将是有益的，所述肝病 例如为病毒性肝病，如乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、庚型肝炎、戊型 肝炎、慢性丙型肝炎病毒感染、巨细胞病毒感染、HIV感染、非酒精性脂 肪性肝炎和非酒精性脂肪肝病，所述益处可以是但不限于预防或减少肝纤 维化和/或肝硬化。
本发明人已证实化合物I可用于从体内(例如肝脏内)除去铁，并提出除 去体内的铁(例如将铁除至近缺乏状态或缺乏状态)，并联合随后或同时给 予的抗病毒药物对某些肝病将是有益的，所述抗病毒药物例如但不限于生 物反应调节剂(例如细胞因子、干扰素、α-干扰素)和/或核苷类抗代谢物(如 利巴韦林)，所述肝病例如为病毒性肝病，例如乙型肝炎、丙型肝炎、丁型 肝炎、庚型肝炎、戊型肝炎、慢性丙型肝炎病毒感染、巨细胞病毒感染、 HIV感染、非酒精性脂肪性肝炎和非酒精性脂肪肝，所述益处可以是但不 限于预防或减少肝纤维化和/或肝硬化。
铁的近缺乏状态或缺乏状态是指肝脏内铁的含量低于正常值，特别是 指每克干重肝脏中铁的含量低于0.5mg。正常值是指每克干重肝脏中铁的 含量为0.5至1.5mg。例如，根据本发明，肝脏中铁的含量为0.4mg/g肝 脏干重，就相当于处于近缺乏状态或缺乏状态。也可以通过测量铁蛋白的 水平来监测铁的近缺乏状态或缺乏状态。血液中铁蛋白的浓度为约10到 30ng/ml血液时相当于正常的铁蛋白水平。例如，血液中铁蛋白的浓度为 5ng/ml血液时就可以认为相当于处于铁的近缺乏状态或缺乏状态。
生物反应调节剂，也称作细胞因子，包括一组能够改变免疫防御从而 能够提高、指挥或恢复身体与疾病斗争的能力的产品。所述生物反应调节 剂例如包括：
●集落刺激因子(粒细胞集落刺激因子)--G-CSFs，
●粒细胞巨噬细胞集落刺激因子--GM-CSFs，
●干细胞生长因子(SCGF)，
●红细胞生成素、干扰素、白介素(ILs)，
●肿瘤坏死因子(TNF)抑制剂，以及
●胸腺肽α1，也称作胸腺法新，ZADAXIN。
根据本发明，所述生物反应调节剂优选干扰素。
“核苷类抗代谢物”是指能够干扰病毒遗传物质复制的核苷类抗代谢药 物。根据本发明，“核苷类抗代谢物”例如为但不限于利巴韦林，其结构式 为1-(β-D-呋喃核糖基)-1H-1，2，4-三唑-3-甲酰胺，或者Valeant Pharmaceuticals International公司生产的viramidine，即ICN3142，其结 构式为1-[(2R，3R，4S，5S)-3，4-二羟基-5-(羟甲基)氧杂环戊-2-基]-1，2，4-三唑 -3-甲酰胺(通常也称作1-(β-D-呋喃核糖基)-1，2，4-三唑-3-甲酰胺)，或者为 valopicitabine，即NM283(Indenix Pharmaceutical)。
发明内容
本发明涉及化合物I或者deferitrin或去铁酮在治疗铁在其发病机制中 发挥作用的肝病中的用途，例如治疗会导致肝纤维化和/或肝硬化和/或发展 成肝癌，如肝腺癌(例如肝细胞癌)，且铁在其发病机制中发挥作用的肝病。
本发明还涉及化合物I或者deferitrin或去铁酮在制备用于治疗铁在其 发病机制中发挥作用的肝病的药物中的用途，所述肝病会导致肝纤维化和/ 或肝硬化和/或肝炎，例如病毒性肝病，如乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、 庚型肝炎、戊型肝炎、慢性丙型肝炎病毒(例如1、2、3、4或5基因型慢 性肝炎病毒)感染、巨细胞病毒感染、HIV感染。
本发明还涉及化合物I或者deferitrin或去铁酮在制备治疗铁在其发病 机制中发挥作用的肝病的药物中的用途，所述肝病可导致肝纤维化和/或肝 硬化和/或肝炎，例如非病毒性肝病，例如，非酒精性脂肪性肝炎和非酒精 性脂肪肝病。
本发明还涉及化合物I或者deferitrin或去铁酮在制备治疗铁在其发病 机制中发挥作用的肝病的药物中的用途，所述肝病可导致肝纤维化和/或肝 硬化和/或肝炎如病毒性肝病，例如乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、庚型 肝炎、戊型肝炎、慢性丙型肝炎病毒感染、巨细胞病毒感染、HIV感染， 并随后或同时给予抗病毒药物，例如生物反应调节剂(如干扰素、IFNα、 聚乙二醇干扰素)和/或核苷类抗代谢物(如利巴韦林)。
本发明的药物组合物可以用本身已知的方法来制备，这些药物组合物 适于经肠内(例如口服)和胃肠外给药至温血动物(包括人类)，该药物组合物 包含治疗有效量的至少一种药理学上的有效成分，它可以单独使用或与一 种或多种药学上可接受的载体组合使用，所述载体特别是那些适合于肠内 或胃肠外使用的载体。本发明剂型的优选给药途径为口服。在国际专利申 请公开文本WO97/49395和WO 2004/035026中公开了化合物I的口服制 剂。
本发明涉及治疗患有铁在其发病机制中发挥作用的肝病的温血动物 (例如人类)的方法，所述方法包括将化合物I或deferitrin或去铁酮给药至 需要此种治疗的动物，给药剂量为在治疗上可以有效地除去铁的剂量，在 患有丙型肝炎(如丙型慢性肝炎)的情况下，随后或者同时给予抗病毒药物， 或者在患有非酒精性脂肪性肝炎的情况下，同时使用或不使用其它治疗方 法。
本发明涉及将化合物I或deferitrin或去铁酮给药至患有铁在其发病机 制中发挥作用的肝病的人类患者的方法。
在本发明的一个实施方案中，化合物I被制成分散片。
在本发明的一个实施方案中，化合物I以多晶型A形式存在。
在本发明的一个实施方案中，化合物I以多晶型A形式存在，并被制 成分散片。
本发明涉及化合物I或者deferitrin或去铁酮在制备治疗肝病的药物中 的用途，所述肝病例如病毒性肝病(如慢性丙型肝炎)，当用生物反应调节 剂治疗(如用IFN、IFN-α治疗)或者用生物反应调节剂(如IFN)和核苷类抗 代谢物(如利巴韦林)的组合产品治疗时，所述肝病是难治的、不响应的或 是不能完全控制的、或难以持续性响应的。
本发明涉及商品包装产品，该商品包装产品包含化合物I以及将所述 化合物给药至患有肝病(如病毒性肝病、慢性丙型肝炎)的患者的使用说明 书。
本发明还涉及组合产品，该组合产品例如为组合制剂或者药物组合物， 其包含(a)铁鳌合剂和(b)生物反应调节剂和/或核酸类抗代谢物。
本发明还涉及组合产品，该组合产品例如为组合制剂或者药物组合物， 其包含(a)选自化合物I、deferitrin和去铁酮的铁鳌合剂和(b)生物反应调 节剂和/或核酸类抗代谢物。
本发明还涉及组合产品，该组合产品例如为组合制剂或者药物组合物， 其包含(a)铁鳌合剂，其为化合物I或deferitrin和(b)生物反应调节剂和/ 或核酸类抗代谢物。
在一个实施方案中，本发明涉及组合产品，该组合产品包含(a)化合 物I和(b)生物反应调节剂和/或核酸类抗代谢物。
在另一个实施方案中，本发明涉及组合产品，该组合产品包括(a)化 合物I和(b)选自干扰素α-2a、干扰素α-2b、复合干扰素、聚乙二醇干扰素 α-2b或聚乙二醇干扰素α-2a的干扰素和/或选自利巴韦林、viramidine或 valopicitabine的核酸类抗代谢物。
本文中所用的术语“组合制剂”特别定义为“套装产品(kit of part)”， 意思是上述定义的组合搭档(a)和(b)可以独立给药，或者以含有不同量的组 合搭档(a)和(b)的不同的固定组合产品使用，上述使用(给药)例如可以在同 时或在不同时间点进行。然后可将“套装产品”中的各部分例如同时或者 按时间顺序错开给药，即在不同的时间点并以相同或不同的时间间隔将“套 装产品”中的任何一部分给药。例如，为了满足被治疗的患者亚群的需要 或者单个患者的需要，在组合制剂中被给药的组合搭档(a)的总量与组合搭 档(b)的总量的比例可以变化。
本发明还涉及所述组合产品在制备治疗铁在其发病机制中发挥作用的 肝病的药物中的用途，所述肝病能导致肝纤维化和/或肝硬化和/或肝炎，例 如病毒性肝病，例如乙型肝炎、丙型肝炎、丁型肝炎、庚型肝炎、戊型肝 炎、慢性丙型肝炎病毒感染、巨细胞病毒感染、HIV感染，优选为慢性丙 型肝炎。
本发明涉及商品包装产品，该商品包装产品包含化合物I以及选自生 物反应调节剂(例如干扰素，例如干扰素α)和核酸类抗代谢物(如利巴韦林) 的抗病毒药物。
本发明涉及商品包装产品，该商品包装产品包含化合物I以及将化合 物I和至少一种选自生物反应调节剂(例如干扰素，例如干扰素α)和核酸类 抗代谢物(如利巴韦林)的抗病毒药物一起给药的使用说明书。
本发明涉及deferitrin在治疗铁在其发病机制中发挥作用的肝病中的 用途，例如用于治疗铁在其发病机制中发挥作用，且能导致肝纤维化和/ 或肝硬化和/或发展成肝癌的肝病，例如肝腺癌(例如肝细胞癌)。
本发明涉及deferitrin在治疗病毒性肝病(例如慢性丙型肝炎)中的用 途。
发明详述
相关领域的技术人员完全能够选择适当的试验模型，以证明上述的除 去过量的铁对肝病的有益作用。这样的化合物的药理学活性例如可以通过 下述实施例的方法，由体外试验和体内试验或适当的临床研究来证实。适 当的临床研究是例如对肝病患者进行的开放性非随机性剂量递增的铁清除 研究，以及对肝病患者进行的随机性双盲安慰剂对照的铁清除试验。
根据所使用的药物组合物、给药方式、个体内存在的铁过量的程度、 要治疗的肝病类型或肝病的严重程度，化合物I的有效剂量可以改变。还 可以根据包括个体的肾功能和肝功能的状况的许多其它因素来选择给药方 案。本领域普通的医师、临床医师或兽医可以很容易地确定和开处使铁缺 乏或近缺乏的有效量的化合物，从而达到有效治疗。
根据所述的患者的年龄、个体状况、给药方式和临床表象，将有效剂 量，例如将日剂量为100到3000mg活性成分的化合物I给药至体重约为 70kg的温血动物(例如人类)，例如5-40mg/kg体重/天。温血动物优选为人 类。化合物I可以以5-40mg/kg/天的剂量给药。对儿童而言，剂量优选为 5-40mg/kg体重/天。化合物I的日剂量例如为每天将100到3000mg的活 性成分给药至温血动物(例如人类)。对日剂量没有足够响应的患者而言， 可以考虑安全地进行剂量递增，只要他们能够得到有益的治疗并且不出现 最大容许毒性就可以。
例如以商标Copegus、Rebetol、Ribasphere、Vilona、Virazole市售的利巴韦林可以根据生产商的使用说明书进行给药，或者例如以每天 约200mg、最高至约1200mg的剂量给药。利巴韦林是一种口服药物。依 据体重，利巴韦林可以以200mg的胶囊每日给药2次作为总的日剂量。对 于体重少于75千克(165磅)的患者而言，利巴韦林的标准剂量例如可以为 1000mg，对体重超过75千克的患者而言，利巴韦林的标准剂量例如可以 为1200mg。在某些情况下，可以建议为800mg的剂量(每日2次，每次 400mg)。
干扰素例如为干扰素α-2a(Roferon-A；Hoffmann-La Roche)；干扰素 α-2b(Intron-A；Schering-Plough)；复合干扰素(Infergen；Intermune)；以 及聚乙二醇干扰素(peginterferon)(有时也称作聚乙二醇干扰素(pegylated interferon))，例如聚乙二醇干扰素α-2b(Peg-Intron；Schering-Plough)和聚 乙二醇干扰素α-2a(Pegasys；Hoffmann-La Roche)；干扰素ω(Intarcia)； Multiferon(Viragen)、水母干扰素(Flamel Technologies)和 Albuferon(Human genome Sciences)。例如可以皮下给药聚乙二醇干扰素 α-2a，例如以固定剂量，例如每周180微克(mcg)。例如可以以基于重量的 剂量每周一次皮下给药聚乙二醇干扰素α-2b，例如1.5mcg/千克/周，例如 每周75至150mcg。
例如根据体重，可以以每天1百万至1千万单位剂量将干扰素给药。 可以连续2周每天给药一次，随后每周给药3次或者例如每周3次将干扰 素给药。聚乙二醇干扰素α例如可以每周给药一次。
本发明涉及将药学上有效量的化合物I每日一次给药至患有肝病的人 类患者的方法，所述肝病与例如慢性丙型肝炎感染或非酒精性脂肪性肝炎 的诱因有关。
本发明涉及将药学上有效量的化合物I和生物反应调节剂和/或核苷 类抗代谢物给药至患有肝病的人类患者的方法，所述肝疾与例如慢性丙型 肝炎感染或非酒精性脂肪性肝炎的诱因有关，所述生物反应调节剂例如干 扰素，例如选自干扰素α-2a、干扰素α-2b、复合干扰素、聚乙二醇干扰素 α-2b或聚乙二醇干扰素α-2a，所述核苷类抗代谢物例如选自利巴韦林、 viramidine或valopicitabine。
本发明特别涉及这样一种方法，其中每日给予成年人或儿童剂量为50 至4000mg的化合物I。在有丙型肝炎感染的情况中，给予化合物I的同时 或随后可以给予抗病毒药物(例如生物反应调节剂，例如干扰素，例如干扰 素α)和/或核苷类抗代谢物(例如viramidine、valopicitabine或利巴韦林)。
本发明可特别涉及从患有肝病的个体中去除铁，去除铁对这些个体是 有益的，这些个体由于其同时患有贫血症或其它禁忌症，不能采用静脉切 开术来治疗。另外，本发明可特别涉及对标准抗病毒治疗方法不响应的丙 型肝炎患者。
本发明还涉及每日一次周期性给予患有肝病的人类患者药学上有效量 的化合物I的方法，所述周期优选为每2个月或3个月给药14天或2周或 者每月给药7天。本发明特别涉及这样一种方法，其中给予成年人或儿童 化合物I的每日剂量为50至4000mg，优选为1000mg。
本发明涉及：
-具有下式的化合物I在制备治疗铁在其发病机制中发挥作用的肝病的 药物中的用途，
-化合物I在制备治疗铁在其发病机制中发挥作用的肝病的药物中的用 途，所述肝病为慢性丙型肝炎或非酒精性脂肪性肝炎，
-化合物I在制备治疗铁在其发病机制中发挥作用的肝病的药物中的用 途，所述肝病如慢性丙型肝炎或非酒精性脂肪性肝炎，其中经所述治疗后 铁处于缺乏或近缺乏状态，
-化合物I在制备治疗过量的铁在其发病机制中发挥作用的肝病的药物 中的用途。
-上述用途，其中以相当于50mg至4000mg化合物I的日剂量将化合 物I给药。
-治疗患有铁在其发病机制中发挥作用的肝病的哺乳动物的方法，所述 方法包括将可去除过量铁的有效量的化合物I给药至需要此种治疗的哺乳 动物。
-组合产品，该组合产品包含化合物I和生物反应调节剂和/或核苷类 抗代谢物，所述生物反应调节剂例如为干扰素，例如选自干扰素α-2a、干 扰素α-2b、复合干扰素、聚乙二醇干扰素α-2b或聚乙二醇干扰素α-2a。
-组合产品，该组合产品包含化合物I和生物反应调节剂和/或核苷类 抗代谢物，所述生物反应调节剂例如为干扰素，例如选自干扰素α-2a、干 扰素α-2b、复合干扰素、聚乙二醇干扰素α-2b或聚乙二醇干扰素α-2a，所 述核苷类抗代谢物例如选自利巴韦林、viramidine或valopicitabine。
-组合产品，该组合产品包含化合物I和生物反应调节剂和/或核苷类抗 代谢物，所述生物反应调节剂例如为干扰素，例如选自干扰素α-2a、干扰 素α-2b、复合干扰素、聚乙二醇干扰素α-2b和聚乙二醇干扰素α-2a，所述 核苷类抗代谢物例如选自利巴韦林、viramidine和valopicitabine。
-组合产品，该组合产品包含化合物I和生物反应调节剂和/或核苷类抗 代谢物，所述生物反应调节剂例如为干扰素，例如选自干扰素α-2a、干扰 素α-2b、复合干扰素、聚乙二醇干扰素α-2b或聚乙二醇干扰素α-2a，所述 核苷类抗代谢物例如选自利巴韦林。
-包含化合物I和生物反应调节剂和/或核苷类抗代谢物的组合产品在 制备治疗对标准治疗方法不响应的慢性丙型肝炎患者的药物中的用途，所 述生物反应调节剂例如为干扰素，例如选自干扰素α-2a、干扰素α-2b、复 合干扰素、聚乙二醇干扰素α-2b或聚乙二醇干扰素α-2a，所述核苷类抗代 谢物例如选自利巴韦林、viramidine或valopicitabine。
-包含化合物I和生物反应调节剂和/或核苷类抗代谢物的组合产品在 制备治疗对标准治疗方法不响应的慢性丙型肝炎患者的药物中的用途，所 述生物反应调节剂例如为干扰素，例如选自干扰素α-2a、干扰素α-2b、复 合干扰素、聚乙二醇干扰素α-2b和聚乙二醇干扰素α-2a，所述核苷类抗代 谢物例如选自利巴韦林、viramidine和valopicitabine。
下述实施例用以举例说明本发明。但是，应当理解，本发明并不只限 于这些实施例中所述的特定的条件或细节。
实施例
实施例1：证实化合物I铁螯合作用的临床研究
在24名成年β-地中海贫血症患者中对化合物I进行随机、双盲、安慰 剂对照的剂量递增试验，在试验中评价化合物I的安全性、耐受性、PK和 12天的累积铁平衡量(10mg/kg(n＝5)、20mg/kg(n＝6)、40mg/kg(n＝7)、安 慰剂(n＝6))。
将化合物I给药后，它很快被吸收，并在整个间隔期一直存在于血液 中。单剂量给药后，化合物I的暴露量(Cmax和AUC)会随化合物I的剂量 成比例地稍微增大，但在稳定状态期间还是近似成正比的。在所有剂量水 平时，药代动力学的稳定状态时与单剂量给药后相比，Cmax提高了约25％ 至40％，化合物I的暴露量提高了1.8倍至2.2倍。与单剂量给药后相比， 在稳定状态时化合物I及其铁络合物的平均消除半衰期t1/2趋于延长。总体 来说，在稳定状态，化合物I的t1/2约为12至13小时，铁络合物的t1/2通 常更长一些(12至21小时)。在整个收集间隔内，化合物I及铁络合物的尿 排泄很低(为化合物I剂量的0.04％至0.15％)。
在该试验中，铁平衡研究表明铁的排泄呈剂量依赖性增加，几乎全部 从粪便排泄掉。螯合率是基于平均每天铁的净排泄量而来的，以相对于体 重理论上可被鳌合的铁的量与实际上排泄的铁的量的比值来计算螯合率。 认为鳌合一个铁原子需要2分子的化合物I，从而得到铁的理论量。化合 物I的分子量为373.4，铁为55.85。因此鳌合率可以通过下式来计算：
鳌合率＝(铁排泄*2*373.4)/(剂量化合物×55.85)×100％
剂量化合物和铁排泄的单位为mg/kg体重。
在活性药物的全部3个剂量，都得到负的铁平衡，10mg/kg剂量时平 均约为0.127mg/kg/天，20mg/kg剂量时平均约为0.343mg/kg/天，40mg/kg 剂量时平均约为0.564mg/kg/天。在40mg/kg剂量组观察到显著性差异。
观察到的鳌合率为16％(10mg/kg剂量组)、22％(20mg/kg剂量组)、 15％(40mg/kg剂量组)，参见Nisbet-Brown等，柳叶刀，361：1597-1602。
实施例2：证实化合物I去除铁的安全性和有效性的临床研究
该临床研究是一个分为两部分的试验，用以测试日给药剂量为5至 40mg/kg时化合物I将血清铁蛋白(体内贮存铁的指标)水平降至低于 100mcg/L的能力。在该试验的第一部分，选择最佳的安全和有效剂量；在 该试验的第二部分，每天以mg/kg给予该剂量的化合物I和每天以mg给 予大约相似剂量的化合物I，并将其与采用静脉切开术减少铁的疗法的安 全性和有效性进行比较。
实施例3：化合物I缓解LEC大鼠的自发性肝炎
Long-Evans cinnamon(LEC)大鼠是一种表现遗传性肝炎和自发性 肝癌的突变品系。将化合物I对LEC大鼠急性肝炎模型的有效性进行了测 试。
方法：将雄性LEC大鼠经管饲给予化合物I，剂量为0、14和28mg/kg/ 天，从6周龄开始并持续到18周龄。在第9、12、14、16和18周龄时， 在化合物1处理组和对照组中分别处死4只大鼠。
大鼠处死后，收集外周血以检测生化指标(包括血清丙氨酸转氨酶 (ALT))。对肝组织进行组织学检查。
结果：非处理组的大鼠(对照组)，血清ALT从第16周龄开始增加， 在第18周龄达到250 UI/L。与对照组相比，经化合物I处理组中的大鼠在 18周龄时血清ALT的平均值±SD(标准偏差)显著降低。用普鲁士蓝染色 方法测定肝脏中铁的积聚量，与对照组相比，经化合物I处理组的肝脏中 铁的积聚量显著降低。
化合物I可以有效缓解LEC大鼠中由铁导致的急性肝炎。
实施例4：对肝炎大鼠模型的测试
Long-Evans cinnamon(LEC)大鼠是一种表现遗传性肝炎和自发性 肝癌的突变品系。测试化合物I是否对LEC大鼠模型的肝炎进展有有利的 作用。
方法和材料：
1)动物品种和数量
Long-Evans cinnamon(LEC)大鼠(n＝45只/组)。分别在第12、13、 14、16、20、24周时各处死6只大鼠。
2)给药方式：口服
3)给药剂量和持续时间：14mg/kg和28mg/kg，最多至24周。
实施例5：化合物I提高人肝脏中的ALT值
ALT(谷丙转氨酶，也称作SGPT，即血清谷丙转氨酶)是肝损伤的特殊 标识物。ALT是肝脏细胞(例如肝细胞)产生的一种酶；与其它酶相比，ALT 对肝病的诊断更有特异性。当肝脏有损伤，例如肝炎、例如细胞膜损伤时， ALT通常会增加。在无肝损伤的普通患者中，ALT值约为零。
铁超负荷的患者会发展为肝损伤，从而引起ALT值升高。所附试验结 果表明化合物I可将ALT值升高的患者的ALT水平降回到基线水平值。
上述患者为铁超负荷的患者，并用不同剂量的化合物I治疗1年。
采用常规的生物医学技术来测定ALT，例如用Brinkmann T、Dreier J、Diekmann J、Gotting C、Klauke R、Schumann G、Kleesiek K所描述 的国际临床化学联合会参考方法(International Federation of Clinical Chemistry reference method)。用新的国际临床化学联合会参考方法在37 ℃时筛选供血者的谷丙转氨酶的截断值(cut-offvalue)，见Vox Sang，2003， 85(3)：159-64。
所附试验结果表明适当剂量的化合物I可以使具有ALT参数的患者的 ALT值保持在基线值，也就是说，使其ALT值不超过基线ALT值。
基线ALT值的定义为由临床试验登记阶段的患者确定的患者的ALT 值，也就是说，ALT基线值为在开始用化合物1治疗之前患者的ALT值。
患者接受各种剂量的化合物I，在一个适当剂量时，其体内的铁含量 降低(如下所示，剂量为20和30mg/kg体重/天时的ALT值)。ALT值保 持在基线值左右或者低于基线值。
表1：用不同剂量的化合物I治疗1年后，地中海贫血症患者的ALT 值(独立试验，与表1的结果比较)
化合物I 患者数 ALT的平均值(单位/升) 5mg/kg/天 2 35.25 10mg/kg/天 8 26.62 20mg/kg/天 21 3.17 30mg/kg/天 52 -23.56
表2：用不同剂量的化合物I治疗1年后，不常贫血患者的ALT值
化合物I 患者数 ALT的平均值(单位/升)
5mg/kg/天 4 67.42 10mg/kg/天 10 14.22 20mg/kg/天 24 -3.27 30mg/kg/天 41 -14.19
实施例6：
将化合物I给药至患有慢性丙型肝炎(例如1基因型)的患者，所述患者 对治疗方法(包括干扰素(如聚乙二醇化干扰素)和利巴韦林)不响应或不能 持续响应。
测试了2到3个不同剂量的化合物I。
每组患者数：8-12。
实施例7：
给予患者：
-化合物I与生物反应调节剂(例如干扰素α)的组合产品，
-化合物I与生物反应调节剂(例如干扰素α)及核苷类抗代谢物(例如 利巴韦林)的组合产品，
-化合物I与利巴韦林的组合产品。