技术领域
本发明涉及新型ACE抑制剂的合成及其应用。具体地说，本发明涉及2-烷氧 羰基-3-苯丙酸酯衍生物的合成及其应用于高血压等疾病的治疗。
技术背景
ACE抑制剂主要用于高血压、充血性心力衰竭、心肌梗死、肾功能障碍等疾 病的治疗，已经上市的药物有：卡托普利(captopril)、依拉普利(enalapril)、 贝拉普利(benazepril)等。虽然这些药物具有较好的临床治疗效果，然而这类 药物存在着明显不良反应，其中以剧烈干咳、味觉异常、蛋白尿、血尿和低血 压等最常见；另外还有一些可能危及生命的不良反应如：急性血小板减少症、 高血钾、严重心律失常和肾功能衰竭。因此，寻找新型的毒副作用更小、合成 方法简单的ACE抑制剂用于高血压等疾病的治疗是非常必要的。
2-烷氧羰基-3-苯丙酸酯衍生物，例如，JTP20993，在体内活性测试中显示 较好的降血糖和降血脂作用，它是一类潜在的抗2型糖尿病和血脂异常药物。 我们发现具有结构通式I特征的一类2-烷氧羰基-3-苯丙酸酯衍生物具有ACE抑 制活性，其中，某些化合物的活性高于阳性对照品卡托普利。
发明内容
本发明的技术方案是具有结构通式I特征的一类2-烷氧羰基-3-苯丙酸酯衍 生物的合成。
本发明提供了具有结构通式I特征的一类2-烷氧羰基-3-苯丙酸酯衍生物作 为ACE抑制剂，用于高血压、充血性心力衰竭、心肌梗死、肾功能障碍、降血 糖以及降血脂等疾病的治疗。
具体实施方式
以化合物T1的合成为例
在催化量的醋酸哌啶催化作用下，使用4-苄氧基苯甲醛3与丙二酸二甲酯 发生缩合反应，高收率地而得到了化合物4，4在常温、常压下经过催化加氢反 应，一步完成双键加氢和脱苄基反应，以较好的收率获得了中间体1。中间体1 与中间体2发生缩合反应可以得到目标物T1。
Scheme 1a)PhCH3，CH2(COOMe)2，acetate pyridine，reflux，88％；b)dioxane， Pd/C，H2，rt.95％；c)PhCH3，K2CO3，reflux，78％.
中间体2的合成
以二苯甲酮(5)为原料，先用硼氢化钠将其还原得到相应的醇(6)，然后通 过羟基的氯代反应生成二芳基氯甲烷(7)。氯代物7与2-甲氨基乙醇于100℃下直 接反应生成化合物8，通过对8分子中的羟基甲磺酰化，我们得到了中间体 2(Scheme 2)。
Scheme 2a)NaBH4，MeOH，rt.93％；b)SOCl2，benzene，reflux；c)CH3NHCH2CH2OH， 100℃；d)CH3SO2Cl，CH2Cl2，Et3N，rt.，88％.
2-甲氧羰基-3-(4-苄氧苯基)丙烯酸甲酯(4)的合成
在装有分水器的烧瓶中，分别加入甲苯(40ml)、3(4.24g，20mmol)、丙 二酸二甲酯(2.64g，20mmol)以及催化量的醋酸哌啶，加热回流反应12h，TLC 监控反应完成。将反应混合物冷却，水(50ml)加入反应混合物中，然后用甲苯 (20ml×4)提取。提取液经水洗、无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸去溶剂，得 浅黄色油状液体，再硅胶柱分离，洗脱剂为石油醚/乙酸乙酯(6/1，v/v)， 得到无色油状液体，放置，固化成白色固体4，重为6.06g，收率为88％，mp 61-62 ℃。IR vmax(KBr)cm-1：3440，3031，2949，2871，1734，1634，1604，1571， 1512，1435，1379，1319，1256，1205，1175，1154，1104，1026，843，750， 714，695；ESI-MS：m/z(％)＝365([M+K]+，32)，349([M+Na]+，100)，327 ([M+H]+，11)，325([M-H]-，89)，311([M-CH3]-，53)；1H NMR(600MHz，CDCl3)： δ3.84(s，3H，-OCH3)，3.87(s，3H，-O CH3)，5.10(s，2H，-OCH2Bz)，6.97 (d，J＝8.4Hz，2H)，7.347.36(t，J＝7.2Hz，1H)；7.387.43(m，6H)， 7.72(s，1H，-CH＝)。
2-甲氧羰基-3-(4-羟基苯基)丙酸甲酯(1)合成
4(3.44g，10mmol)、二氧六环(30ml)、5％的P/C催化剂(0.34g)的混合物， 于常温、常压下通入氢气，反应混合物剧烈搅拌反应18h，TLC监控反应完全。 过滤催化剂，催化剂用甲醇(10ml×3)洗涤。合并滤液和洗液，减压蒸去溶剂， 得无色油状液体1，重为2.26g，收率为95％。IR vmax(KBr)cm-1：3440，3019， 2955，1735，1614，1596，1516，1437，1349，1235，1173，1155，1104，1026， 829，772；ESI-MS：m/z(％)＝277([M+K]+，17)，261([M+Na]+，97)，237([M-H]-， 66)；1H NMR(600MHz，CDCl3)：δ3.15(d，J＝7.9Hz，2H，-CH2CH-)，3.64 (t，J＝7.9Hz，1H，-CH2CH-)，3.70(s，6H，OCH3)，5.89(brs，1H，-OH)， 6.72(d，J＝8.2Hz，2H)，7.03(d，J＝8.2Hz，2H)。
二苯基甲醇(6)的合成
将5(1.80g，10mmol)、甲醇(20ml)的混合液于冰水浴下冷却至0-5℃， 分批加入硼氢化钠(0.76g，10mmol)，待氢气完全放出，室温继续搅拌2h， 反应完成(TLC监控反应)。水(50ml)缓缓加入反应液混合物中，静置，析出白 色固体，过滤，干燥，得到6为白色粉末1.69g(93％)，mp 67-68℃。
N-甲基-(N-二苯甲基)-2-氨基乙醇(8)的合成
在苯(15ml)和6(1.82g，10mmol)的混合物中，缓慢滴加二氯亚砜(2.38g， 20mmol)，滴完后，反应混合物加热回流12h。反应混合物冷却，加入水(50ml)， 分出有机层，水层乙酸乙酯(20ml×3)提取。合并的有机层和提取液分别用饱 和碳酸氢钠溶液和水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸去溶剂，得到黄褐 色液体二芳基氯甲烷7的粗产品，不必进一步纯化。直接在粗品中加入N-甲基 -2-氨基乙醇(4ml)，加热至100℃，反应8h。反应混合物冷却，水(50ml) 加入反应体系中，然后用乙酸乙酯(20ml×4)提取，提取液经水洗、无水硫酸 镁干燥，过滤，减压蒸去溶剂，得浅黄色油状液体。液体用硅胶柱分离，洗脱 剂为石油醚/乙酸乙酯(10/1，v/v)，得到8为无色液体1.06g，氯代与缩合 两步反应的总收率44％；IR vmax(KBr)cm-1：3401，3060，3026，2965，2879，2847， 1598，1492，1452，1268，1080，1017，759，746，706；ESI-MS：m/z(％)＝243 ([M+H+1]+，8)，242([M+H]+，67)；1H NMR(600MHz，CDCl3)：δ2.18(s，3H， -NCH3)，2.56(t，J＝7.2Hz，2H，-CH2CH2OH)，3.64(t，J＝7.2Hz，2H， -CH2CH2OH)，4.50(s，1H，-CHNCH2CH2OH)，7.21(t，J＝7.2Hz，2H)，7.32(t， J＝7.6Hz，4H)，7.39(d，J＝7.2Hz，4H).
中间体2的合成
将8(0.481g，2mmol)、二氯甲烷(10ml)、三乙胺(0.61g，6mmol)的混 合液冷却至0～5℃，然后滴加二氯甲烷(3ml)、甲烷磺酰氯(0.344g，3mmol) 的混合液，滴完后，室温反应8h。水(30ml)加入反应混合物中，分出有机层， 水层用二氯甲烷(15ml×3)提取，合并的有机层和提取液，经水洗、无水硫酸 镁干燥，过滤，蒸馏回收二氯甲烷，得浅黄色油状液体为20.581g(91％)。
化合物T1的合成
中间体2(0.638g，2mmol)、甲苯(20ml)、碳酸钾(1.10g，8mmol)的 混合物加热至70℃，然后滴加甲苯(3ml)和中间体1(476mg，2mmol)的混合 液，滴完后，回流反应10h，TLC监控反应完成。反应混合物冷却，水(40ml) 加入反应混合物中，分出有机层，水层用甲苯(20ml×3)提取。合并有机层和 提取液，经水洗、无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸干，得到浅黄色油状液体， 再用硅胶柱分离，洗脱剂石油醚/乙酸乙酯(6/1，v/v)，得到无色粘状液体 T 7.83g，以中间体1计算的收率85％。IR vmax(KBr)cm-1：3060，3027，2953， 2848，2782，1753，1737，1612，1512，1492，1452，1436，1343，1244，1178， 1152，1023，926，828，760，747，708；ESI-MS：m/z(％)＝485([M+Na+1]+， 8.5)，484([M+Na]+，27)，462([M+H]+，25)；1H NMR(600MHz，CDCl3)：δ2.28 (s，3H，-NCH3-)，2.80(t，J＝6.0Hz，2H，-NCH2CH2O-)，3.16(d，J＝7.8 Hz，2H，-CH2CH-)，3.63(t，J＝7.8Hz，2H，-CH2CH-)，3.71(s，6H，-OCH3)， 4.06(t，J＝6.1Hz，2H，-NCH2CH2O-)，4.48(s，1H，-CHNCH3-)，6.77(d，J ＝8.6Hz，2H)，7.09(d，J＝8.6Hz，2H)，7.19(t，J＝7.6Hz，2H)，7.28 (t，J＝7.6Hz，4H)，7.44(d，J＝7.6Hz，4H)；13C NMR(150MHz，CDCl3)： δ34.0，41.5，52.5，53.8，53.9，66.3，75.9，114.5，126.9，128.0，128.4， 129.7，129.8，142.9，157.7，169.3；HRESI-MSm/z.484.2116([M+Na]+，calcd. for C28H31NNaO5：484.2094).
ACE抑制活性测试
试剂与材料邻二苯甲醛(O-phthaldialdehyde)，马尿酰-组胺酰-亮氨酸(HHL)。
大鼠或家兔肺组织ACE制备
ACE的制备参照文献[1，2]并略加修改，取家兔或大鼠肺组织，用10mmol/L 磷酸钾缓冲液清洗，切成小块后匀浆；在4℃，5000r/min离心10min，弃去沉 淀，上层清液用磷酸钾缓冲液低温透析过夜，换液4次，每次1L；于4℃条件下， 40000r/min离心40min，收集上层清液，得到ACE酶提取物，测定ACE酶提 取物的总蛋白含量，分装保存于-20℃备用。
测试方法
血管紧张素转化酶(ACE)的活性用荧光法的方法测定[1-2]。通常，向10μl 的ACE提取物(相当于10μg总蛋白)中加入10μl浓度为0.01mg/ml的样品 溶液，在37℃的烘箱中加热15min，然后冷至室温，加入1mol/L的NaOH(40 μl)溶液和20g/L邻苯二甲醛(10μl)反应10min，最后加入3mol/L的HCl(20 μl)溶液终止反应。在405nm(激发光)和535nm(发射光)波长下，用荧光光度 计(Wallac Victor，USA)测定产品His-Le的荧光强度。
ACE活性测定通过大鼠或家兔来源的ACE对底物HHL水解产生的荧光强度判 定，其准确性或敏感性通过阳性药物captopril(卡托普利)确立。对于每一个样 品都设立空白对照、阴性对照和阳性对照，假设字母N、S、B分别代表阴性对 照的荧光强度、测定样品的荧光强度和空白对照的荧光强度，那么，ACE抑制率 ％＝100％×(N-S)/(N-B)。每个样品的检测均重复3次。按照上述测试方法，目 标化合物T1～T6ACEI活性测试结果如table 1。
Table1 ACE inhibitory activity assay for T1～T6
参考文献
1.Cheng，H.S.；Wang，F.L.；Ondetti，M.A.et al.Binding of peptide substrates and inhibitors of angiotensin-converting enzyme.Importance of the COOH-terminal dipeptide sequence.J.Biol.Chem.1980，255，401-407.
2.Duncan，A，C.；Jager，A.K.；Staden，J.Screening of Zulu medicinal plants for angiotensin converting enzyme(ACE)inhibitors.J.Ethnopharm.1999，68，63-70.