技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及磺酰胺取代的磺酰脲和磺酰硫脲衍生物在制备抗糖尿病 药物中的新用途。
背景技术
糖尿病是胰岛素绝对或相对缺乏，并引起糖代谢紊乱、继发脂肪、蛋白质、水、盐等代 谢障碍及多种急、慢性并发症的一种常见的代谢性疾病，发病率高，约占工业化国家总人口 的5％。糖尿病病因很复杂，常伴有血小板聚集性增加、动脉血脂异常、心肌梗塞、脑血管障 碍等血管并发症。糖尿病作为直接死因在患者中仅有1～4％，绝大多数死于慢性并发症。糖尿 病治疗药物近年来已取得较大的发展，如高效的磺酰脲类降糖药、过氧化酶增殖体激活受体 激动剂、胰岛素分泌促进剂等新药相继上市，使糖尿病疾病的治疗有更多的选择。现有的降 糖药虽能促进胰岛素分泌，降低血糖，但是大多存在致低血糖副作用、对胰岛素增敏作用不 强、对心血管并发症治疗作用较差等缺点，因此开发高效理想的降糖药和兼有治疗糖尿病性 并发症的降糖药具有重要意义。
发明内容
磺酰脲类口服降糖药是临床广泛使用的治疗II型糖尿病的药物，通过阻断β胰岛细胞上 的KATP通道，触发胰岛素分泌，导致血糖下降。新型的磺酰脲类口服降糖药格列美脲不仅具 有高效的降糖作用，同时还兼有能提高胰岛素的敏感性，为较好的降血糖药物。本发明以磺 酰脲类降糖药结构为基本骨架，同时将苯磺酰胺基团引入所设计的分子结构中，合成了一系 列新的磺酰胺取代的磺酰脲和磺酰硫脲衍生物，并对它们的降血糖和抗血栓作用进行了测定， 所得到的新的化合物具有降血糖活性，可开发成为新型的降糖药物。
下面是本发明的具体内容：
通式(I)化合物及其药用盐在用于制备抗糖尿病药物中的用途：
其中R1代表：-H，-CH3，-OCH3，-OH，-NH2，卤素，-NHCOCH3；
R2代表：1-8个碳原子的烃基，
R3代表：-H，-CH3，-OCH3，卤素；
X代表：O，S。
其中优选的通式(I)化合物是：
1-[4-[2-(4-乙酰氨基苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰]-3-(反-4-甲基环己基)脲(I1)；
1-[4-[2-(3-甲基-4-乙酰氨基)苯磺酰胺基]乙基苯磺酰]-3-(反-4-甲基环己基)脲(I2)；
1-[4-[2-(4-氯苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰]-3-(反-4-甲基环己基)脲(I3)；
1-[4-[2-(4-溴苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰]-3-(反-4-甲基环己基)脲(I4)；
1-[4-[2-(5-甲基-2-乙酰氨基)苯磺酰胺基]乙基苯磺酰]-3-(反-4-甲基环己基)脲(I5)；
1-[4-[2-(3-甲基-4-乙酰氨基)苯磺酰胺基乙基]苯磺酰]-3-(反-4-甲基环己基)脲(I6)；
1-[4-(2-苯磺酰胺基乙基)苯磺酰]-3-环己基脲(I7)；
1-[4-[2-(4-甲基苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰基]-3-环己基脲(I8)；
1-[4-(2-苯磺酰胺基乙基)苯磺酰基]-3-(反-4-甲基环己基)脲(I9)；
1-[4-(2-苯磺酰胺基乙基)苯磺酰基]-3-(4-氯苯基)硫脲(I10)；
1-[4-[2-(4-甲基苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰基]-3-(4-氯苯基)硫脲(I11)；
1-[4-[2-(4-氯苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰基]-3-(4-氯苯基)硫脲(I12)；
1-[4-(2-苯磺酰胺基乙基)苯磺酰基]-3-(2-甲基苯基)硫脲(I13)；
1-[4-(2-苯磺酰胺基乙基)苯磺酰基]-3-(4-甲基苯基)硫脲(I14)；
1-[4-[2-(4-甲基苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰基]-3-(4-甲基苯基)硫脲(I15)；
1-[4-[2-(4-溴苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰基]-3-(4-甲氧基苯基)硫脲(I16)；
1-[4-[2-(4-甲基苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰基]-3-(4-甲氧基苯基)硫脲(I17)；
1-[4-(2-苯磺酰胺基乙基)苯磺酰基]-3-(4-甲氧基苯基)硫脲(I18)；
1-[4-[2-(4-氯苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰基]-3-(4-甲氧基苯基)硫脲(I19)。
更优选的化合物是：
1-[4-[2-(4-溴苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰]-3-(反-4-甲基环己基)脲(I4)；
1-[4-[2-(4-氯苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰]-3-(反-4-甲基环己基)脲(I3)；
部分优选化合物对应的结构式为：
X R1 R2
I1 O 4-NHCOCH3
I2 O 3-CH3，4-NHCOCH3
I3 o 4-Cl
I4 O 4-Br
I5 O 2-NHCOCH3，5-CH3
I6 O 3-OCH3，4-NHCOCH3
I7 O H
I8 O 4-CH3
I9 O H
I10 S H
I11 S 4-CH3
I12 S 4-Cl
I13 S H
I14 S H
I15 S 4-CH3
I16 S 4-Br
I17 S 4-CH3
I18 S H
I19 S 4-Cl
通式(I)化合物制备方法如下：用4-氨乙基苯磺酰胺与取代的苯磺酰氯反应，生成中间 体(II)，再与相应的异氰酸酯或硫代异氰酸酯反应生成目的化合物(I)。路线如下：
其中关键中间体4-氨乙基苯磺酰胺的制备是通过先将苯乙胺乙酰化，再进行氯磺化、氨 化、水解获得。具体反应路线如下：
本发明的化合物可制备成各种药物制剂，制剂包含作为活性剂的通式(I)化合物和药学 上可接受的载体。药学上可接受的载体是指一种或几种惰性的、非毒性的固体或液体填充物、 稀释剂、助剂等，它们不逆向与活性化合物或病人发生作用。剂型可以是片剂、胶囊、丸剂、 栓剂、软胶囊、口服液、混悬剂、注射液等药剂学上常用的剂型。口服用药片和胶囊含有传 统的赋形剂如填充物、稀释剂、润滑剂、分散剂以及粘合剂。可按照本领域中熟知的方法进 行制备。
以上活性剂的剂量将因配方而异。
一般地，已证明有利的量，为达到所需结果，每千克体重每24小时给药的式(I)化合 物的总量为约0.01-100mg，优选总量约0.1-50mg/kg。如果必要，以几次单剂量的形式给药。
具体实施方式：
实施例1
体外试验：
1.动物和试剂
1.1动物
Sprague-Dawley大鼠，体重280～350g，雌雄兼用，自由饮食，中国药科大学 动物中心提供，许可证号：SCXK(苏)2002-0001。
1.2受试化合物
I1，I2，I3，I4，I5，I6，I7，I8，I11，I12，I13，I14，I15，I16，I17，I18。
1.3试剂与药品
台盼蓝，Chroma进口分装；双硫腙(Dithizone，DTZ)，上海试剂三厂；胶原酶II (collagenase type II)、胶原酶IV(collagenase typeIV)、牛血清白蛋白(FractionV， BSA)，Sigma产品；HEPES、Glutamine(谷氨酰胺)，Merck产品；格列美脲(Glimepiride)， 格列苯脲(Glibenclamide)为天津药物研究院药业有限责任公司产品，均以DMSO助溶后用 KRH孵育液配成1mg/ml的药液，无菌分装4℃保存；胰岛素放射免疫分析药盒(IMK414)、胰 高血糖素放射免疫分析药盒(IMK402)，2-Deoxy-D-[1-3H]Glucose(特异活性370GBq/mmol)， 中国原子能科学研究院同位素研究所；DMEM培养基(无糖型)、新生小牛血清(用时56℃灭 活30min)GIBCO-BRL产品；谷氨酰胺(Glutamine)，Merck公司；D-葡萄糖和胰岛素，Sigma 产品；PPO(2，5-二苯基噁唑)、POPOP[1，4-双2-(5-苯基噁唑基)苯]]，中国医药集团上海 生化试剂公司(进口分装产品)；油红-O(UK)，二甲基硅油、二甲苯、SDS(十二烷基硫酸钠) 及其它化学试剂均为市售分析纯。
胶原酶II液： 胶原酶II溶于PH7.4的KRH液，配成1.5mg/ml，无菌过滤分装，-20℃保 存。
胶原酶IV液：胶原酶IV溶于PH7.4的KRH液，配成1.5mg/ml，无菌过滤分装，-20℃保存。
2.方法
2.1目标化合物刺激离体胰岛释放胰岛素试验
(1)胰岛分离：参文献方法(J.Brunstedt，J.H.Nielsen，A.Lernmark，et al.Isolation of islets from mice and rats.Joseph Larner，Stephenl Pohl(Eds).Methods In Diabetes Research，vol 1.Laboratory Methods(Part C).Academic Press，Inc.New York， 1984：245-258)分离大鼠胰岛，略加修改。腹腔内注射戊巴比妥钠(50mg/kg)麻醉大鼠。 75％(v/v)乙醇擦拭腹部，沿腹中线打开腹腔，并在腹中部作一横向切口，充分暴露胰腺。于 肝门处行胆总管插管，结扎胆总管与胰腺总管汇合入十二指肠处。从胆总管插管处逆行灌注 10ml胶原酶IV(0.75mg/ml)，使胰腺充分膨胀，破坏腺泡组织。打开胸腔，用10ml注射器 抽取心脏血液。迅速摘取胰腺，剔除脂肪和淋巴结，HBSS缓冲液洗二遍，置25ml硅化小烧 杯中，眼科剪剪碎成0.5～lmm3的小块，37℃水浴振荡消化60min。见胰腺小块明显减小并有 混浊产生且用粗口硅化吸管轻轻吹打即可分散成均匀悬液判为消化终点，迅速过80目不锈钢 筛网，加入20ml的4℃预冷HBSS缓冲液稀释终止反应并防止沉淀物聚集粘附消化下来的胰 岛。吸去上清液，再以4℃预冷HBSS缓冲液洗涤二次。参文献方法(Zuhair A.Latif，Jack Noel，Rodolfo Alejandro.A simple method of staining fresh and cultured islets.Transplantation，1988，45(4)：827-830)加入双硫腙染液4℃染色15min，解剖显 微镜下(15×6)手工捡取染成猩红色的圆形或椭圆形颗粒团块(捡取胰岛的过程应在低温下 进行)。
(2)胰岛素刺激释放试验：按文献方法(Bhonde RR，Parab PB，Sheorin VS.An in vitro model for screening oral hypoglycemics.In Vitro Cell Dev Biol Anim，1999， 35(7)：366-368)进行，稍作改进。取24孔培养板，每孔加入0.9mlKRBH孵育液。将挑选出 的大小接近(Ф50-100、Ф100-150μm)的胰岛在解剖显微镜镜下以8个/孔接种入培养板 中，于37℃、5％CO2孵箱中预孵平衡1h。取出加入0.1ml不同浓度各受试药物及溶剂 0.25％(v/v)DMSO，继续孵育4h。取出后在解剖显微镜下吸取上清液，-20℃低温冰箱保存。6 孔/浓度/药物，试验重复二次。
2.2目标化合物刺激刺激葡萄糖转运试验
(1)脂肪细胞分离：参文献方法(Gliemann J.Glucose transport and metabolism in the adipocyte.Joseph Larner，Stephenl Pohl(Eds).Methods In Diabetes Research， vol 1.Laboratory Methods(Part C).Academic Press，Inc.New York，1984：105-118) 分离大鼠脂肪细胞。脱颈椎处死大鼠，75％(v/v)乙醇浸泡后在超净台无菌条件下打开腹腔， 用眼科剪剪下二侧附睾脂肪垫(注意避开血管和附睾)。无菌生理盐水洗涤脂肪垫二次，眼科 剪剪碎成约1mm3的小块，置于50ml圆底塑料管(要求内壁光滑)中，加入胶原酶IV液4ml /鼠，37℃、5％CO2孵箱中消化45min，每10min轻轻振摇一次并密切观察脂肪块的消化情况。 约90％小块明显变小并在振摇后出现明显浑浊时取出，过100目不锈钢网，以20mlKRH缓冲 液冲洗滤网并稀释终止消化，弃未消化物。静置3min，脂肪细胞悬浮在管上层，用14号针 头插入管底吸去下层缓冲液，再加入10ml KRH缓冲液洗涤脂肪细胞，静置弃下层液体，如此 反复3次，最后一次用DMEM培养液洗涤(注意整个操作过程均应动作轻柔尽量避免油滴的产 生)。将悬浮于DMEM培养液中的脂肪细胞取出0.25ml稀释计数，配成终浓度为4×105cells /ml的细胞悬液。
(2)脂肪细胞活率测定：取0.9ml脂肪细胞悬液，0.4％台盼蓝以1∶9与细胞悬液混 合，3min内计数未着色脂肪细胞(活细胞)数占总脂肪细胞数比率。染色结果显示脂肪细胞 存活率为100％。
(3)葡萄糖转运试验：参文献方法(BL Maloff and DH Lockwood.In vitro effects of a sulfonylurea on insulin action in adipocytes.Potentiation of insulin-stimulated hexose transport.J Clin Invest，1981，68(1)：85-90)复制模 型，稍作改进。将已计数的脂肪细胞悬液(5×105cells/ml)轻轻摇匀，取0.5ml加入2ml聚 丙烯塑料培养管中，37℃、5％CO2孵箱中预孵平衡30min。按实验分组加入不同浓度的受试药 物，6管/浓度，37℃孵箱中预处理24h。再加和不加不同浓度的胰岛素，继续温孵4h。按 试验分组加入0.2μCi/ml的2-Deoxy-D-[1-3H]Glucose，孵育1.5h后立即加入250μl的4 ℃预冷二甲基硅油终止反应，10000rpm离心2min，吸去下层培养液。加入100μl的5％SDS 裂解上层脂肪团块，0.5h后放入含5ml闪烁液的10ml闪烁杯内。避光静置12h，液闪计数3H 放射强度(dpm)。
2.3测定方法
液闪计数2-Deoxy-D-[1-3H]Glucose的转运量，单位：dpm。
采用放射免疫分析药盒测定上清液中胰岛素含量，用μIU/ml表示。胰岛素放射免疫分 析药盒(IMK414)为中国原子能科学研究院同位素研究所产品，各技术参数经鉴定符合其说 明书上的质量标准：本底信号比(S/B)大于50，灵敏度为1.5μIU/ml。
2.4统计学处理
数据均以 x±SD表示，组间比较采用student’s t检验。
3.结果
1、目标化合物刺激离体胰岛释放胰岛素
试验显示，助溶剂(0.25％DMSO)不影响离体胰岛的分泌活性，离体胰岛在给予高糖刺 激后胰岛素分泌量较基础分泌量升高了5.49倍，格列美脲(100ug/ml)组升高了2.03倍，格 列苯脲(100ug/ml)组升高了3.35倍。16个目标化合物中I4(100ug/ml)的刺激作用最强，胰 岛素分泌率提高了3.64倍，其次是I3(100ug/ml，3.05倍)、I2(100ug/ml，1.58倍)、I1 (100ug/ml，1.55倍)、I13(10ug/ml，1.36倍)，见表一。
表1.磺酰脲类化合物对大鼠离体胰岛释放胰岛素的影响。 化合物 浓度 (ug/ml) 胰岛素 (uIU/ml) 活性 化合 物 浓度 (ug/ml) 胰岛素 (uIU/ml) 活性 对照 25.12±1.92 1.06 溶剂(0.25％DMSO) 23.65±1.89 1.00 葡萄糖(25mM) 129.85±11.15*** 5.49 格列美脲 100 48.14±3.13*** 2.03 格列苯脲 100 79.40±6.64*** 3.35 I1 100 28.52±2.27* 1.21 I11 100 22.25±2.01 0.94 10 36.67±3.24*** 1.55 10 23.01±2.19 0.97 1 30.18±2.94** 1.28 1 23.89±2.57 1.01 0.1 24.45±2.08 1.03 0.1 21.03±1.42 0.89 0.01 24.65±1.32 1.04 0.01 23.21±2.04 0.98 I2 100 37.32±2.22** 1.58 I12 100 26.07±2.36 1.10 10 27.67±1.21* 1.17 10 26.37±1.64 1.12 1 23.57±1.45 0.99 1 29.46±2.29* 1.25 0.1 22.86±2.19 0.96 0.1 27.37±2.05 1.16 0.01 23.45±2.30 0.99 0.01 25.46±1.54 1.08 I3 100 72.23±5.38*** 3.05 I13 100 26.06±1.60 1.10 10 41.29±3.80*** 1.74 10 32.10±2.16** 1.36 1 38.15±2.44*** 1.61 1 28.94±2.04* 1.22 0.1 32.25±2.56** 1.36 0.1 25.71±1.86 1.09 0.01 28.89±1.22* 1.22 0.01 23.46±1.28 0.99 I4 100 86.08±6.45*** 3.64 I14 100 24.97±1.79 1.06 10 65.21±4.26*** 2.76 10 27.71±1.84* 1.17 1 40.79±3.08*** 1.72 1 27.99±1.35* 1.18 0.1 36.34±2.25*** 1.54 0.1 26.84±1.26 1.13 0.01 29.45±2.76* 1.25 0.01 25.72±2.39 1.09
I5 100 21.13±1.47 0.89 I15 100 20.87±1.91 0.88 10 28.27±1.03* 1.19 10 24.24±1.67 1.02 1 22.86±2.25 0.97 1 21.99±2.03 0.93 0.1 21.75±1.34 0.92 0.1 22.57±1.08 0.95 0.01 23.44±2.02 0.99 0.01 23.15±2.11 0.98 I6 100 24.83±1.64 1.05 I16 100 26.17±2.21 1.11 10 24.47±1.33 1.03 10 24.67±2.02 1.04 1 24.57±2.14 1.04 1 22.25±1.54 0.94 0.1 25.21±1.91 1.07 0.1 23.27±1.87 0.98 0.01 24.56±1.85 1.04 0.01 24.33±2.19 1.03 I8 100 25.93±1.75 1.10 I17 100 23.69±1.06 1.00 10 22.70±1.31 0.96 10 23.50±1.45 0.99 1 22.45±2.04 0.95 1 24.48±1.43 1.04 0.1 21.17±1.83 0.90 0.1 21.42±1.90 0.91 0.01 23.38±1.96 0.99 0.01 23.56±2.13 1.00 I18 100 23.42±2.18 0.99 10 24.98±1.23 1.06 1 22.86±2.53 0.97 0.1 20.53±1.16 0.87 0.01 23.44±2.13 0.99
*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，与溶剂比较。
2.2目标化合物刺激葡萄糖转运试验
格列美脲是已知磺酰脲类药物中胰外作用最明显的一个药物，格列美脲(100μg/ml)处理 后的脂肪细胞对葡萄糖的摄取率较基础摄取率提高了2.5倍，并显著增强胰岛素(1.2nM)的 刺激作用(P＜0.001)，是单用胰岛素(1.2nM)作用强度的2.42倍。对离体脂肪细胞葡萄糖基 础摄取率有明显提高的目标化合物(100μg/ml)有：I4(1.73倍)、I11(1.59倍)、I6(1.58 倍)、I3(1.57倍)。对低浓度胰岛素(1.2nM)作用有协同增强的化合物有：I4(100μg/ml，1.55 倍)、I11(100μg/ml，1.43倍)、I18(10μg/ml，1.38倍)、I2(100μg/ml，1.32倍)，见 表2。
表2.磺酰脲类化合物对大鼠脂肪细胞转运葡萄糖的影响。 化合物 浓度 (ug/ml) D-1-3H-葡萄糖(dpm) -胰岛素(1.2nM) +胰岛素(1.2nM) 对照 4501.23±278.44 5379.33±227.19** 溶剂(0.25％DMSO) 4427.18±179.05 5477.12±136.44** 胰岛素(10nM) 16239.24±1131.40*** 胰岛素(1.2nM) 5477.12±136.44** 100 11068.51±792.67*** 13255.41±916.73### 10 7476.67±516.59*** 8593.72±382.70###
格列美脲 1 5061.24±279.12* 6365.67±378.57## 0.1 4729.10±240.74 5600.29±385.26 0.01 4386.54±225.80 5571.25±261.08 I1 100 6736.82±545.69** 6812.33±428.54## 10 5616.15±218.29** 6200.35±159.65# 1 4215.36±343.88 5087.78±403.47 0.1 4064.91±160.17 5335.49±162.86 0.01 4332.05±236.40 5164.37±321.58 I2 100 5207.81±389.64* 7244.87±322.08## 10 4573.80±386.89 6516.90±505.34# 1 4302.19±328.31 6123.02±202.43# 0.1 4462.98±126.58 5456.29±233.72 0.01 4153.14±276.35 5243.78±307.11 I3 100 6960.26±545.75** 7013.28±327.48 10 6411.70±525.69** 6358.77±467.25 1 5869.85±380.34* 5942.68±226.19 0.1 4498.35±398.94 5319.54±306.41 0.01 4513.27±197.65 5187.66±471.02 I4 100 7674.84±220.06*** 8486.79±303.85### 10 6512.65±288.59** 7979.94±183.76## 1 4871.74±171.54* 5996.43±229.52 0.1 4435.62±152.50 5459.88±464.49 0.01 4562.33±214.35 5401.11±279.47 I5 100 5273.63±297.79* 6097.94±180.18# 10 4819.77±350.45 5876.90±310.46 1 4236.86±205.73 5642.35±188.92 0.1 4580.10±290.58 5512.19±187.54 0.01 4416.63±184.57 5385.26±241.35 I6 100 7037.78±409.57*** 7447.72±486.62 10 6547.93±511.95** 6341.17±470.32 1 5294.78±473.18* 5587.26±307.42 0.1 4456.45±292.07 5545.03±198.22 0.01 4193.20±194.01 5429.62±326.93 I8 100 4458.36±256.10 5297.11±401.64 10 4174.59±394.56 5533.15±364.28 1 4281.30±19.55 5374.21±436.29 0.1 4377.25±248.87 5384.66±213.81 0.01 4221.58±367.82 5189.97±384.67 I11 100 7061.15±175.07*** 7832.17±282.40## 10 6514.04±371.32** 5512.62±454.58 1 5687.31±214.66** 5115.18±201.45 0.1 4448.93±414.29 5171.93±297.96 0.01 4428.37±202.73 5060.89±191.59 100 4763.58±284.30 5764.25±333.16 10 4432.15±355.65 5436.58±284.56
I12 1 4587.26±156.24 5179.30±441.02 0.1 4265.13±230.14 5314.69±257.64 0.01 4066.55±245.69 5277.13±186.75 I13 100 6897.20±225.34** 6758.24±178.53 10 5964.25±233.67** 6120.04±463.22 1 4573.54±364.15 5536.26±343.55 0.1 4447.85±214.67 5487.03±259.64 0.01 4258.46±167.25 5134.72±186.43 I14 100 4663.52±284.63 5761.23±333.33 10 4385.12±199.67 5644.89±410.65 1 4377.95±266.81 5319.50±354.27 0.1 4201.58±312.60 5546.08±257.77 0.01 4465.82±401.29 5109.74±251.86 I15 100 4513.06±197.33 5624.51±300.39 10 4401.01±155.02 5115.32±223.52 1 4428.46±295.45 5627.67±347.18 0.1 4358.93±247.73 5120.37±361.14 0.01 4287.54±187.26 5291.71±245.98 I16 100 4335.26±189.61 5069.25±423.67 10 4026.52±387.24 5234.61±358.10 1 4125.36±225.49 5177.84±334.94 0.1 4230.74±147.65 5200.13±278.15 0.01 4166.48±284.02 5277.39±343.52 I17 I17 100 4550.21±292.13 5573.24±462.15 10 4381.35±369.15 5377.15±246.51 1 4425.16±223.31 5026.34±189.74 0.1 4230.58±348.75 5246.37±423.45 0.01 4028.38±197.46 5433.12±289.51 I18 100 4366.76±231.86 6987.19±609.10## 10 4118.78±411.45 7555.71±316.32### 1 4179.50±322.49 5708.43±159.63 0.1 4062.34±339.14 5662.52±343.55 0.01 4283.64±247.38 5434.24±397.49
*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，与溶剂对照；
#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001，与胰岛素对照(1.2nM)；
+P＜0.05，++P＜0.01，+++P＜0.001，+胰岛素(1.2nM)与-胰岛素(1.2nM)对照；
-胰岛素(1.2nM)表示化合物不加胰岛素(1.2nM)，+胰岛素(1.2nM)表示化合物加胰岛素 (1.2nM)。
实施例2
体内试验：
1.动物
昆明种小白鼠(20-23g)，SD大鼠(200～250g)，雌雄兼用，由江宁青龙山动物养殖场 提供.合格证号：SCXK(苏)2002-0018；家兔，新西兰种，2-2.5kg，雌雄兼用，由江宁青龙山 动物养殖场提供，合格证号：SCXK(苏)2002-0027；清洁级C57BL/6J纯系小鼠，18-22g，雌 雄兼用，合格证号：SCXK(沪)2002-0010，中科院上海实验动物中心提供，受试前在本室适 应三天。
2.方法
2.1化合物对正常小鼠空腹血糖的作用
正常C57BL/6J纯系小鼠50只，随机均分为5组，10只/组：溶媒对照组(0.5％CMC)， 格列美脲组(20mg·kg-1，灌胃)，I4高、中、低剂量组(分别为20，7和2.5mg·kg-1，灌胃)。 按实验分组连续灌胃给药3天，第4天，禁食不禁水12h后，分别在各组小鼠给药前和给药后 不同时间经小鼠眼眶静脉丛取血，葡萄糖氧化酶法测定血糖值。
2.2化合物I4对四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血糖的作用
昆明种小白鼠，20-23g，雌性，禁食过夜12h(不禁水)，所有小鼠均尾静脉 一次性快速注入四氧嘧啶(60mg/kg)，96h后(禁食12h)眼内眦静脉丛取血测空腹 血糖，选用血糖＞11.1mmol/L者用于试验，将小鼠随机分为溶媒对照组(0.5％CMC)， 格列美脲组(20mg·kg-1，ig)，G-004高、低剂量组(分别为20和7mg·kg-1，ig)。 按试验分组，在单次灌胃给药后和连续给药7天后不同时间经眼内眦静脉丛取血，用 葡萄糖氧化酶法测定血糖值。
2.3化合物I4对正常家兔空腹血糖的作用
正常家兔30只，随机均分为5组，6只/组：溶媒对照组(0.5％CMC)，格列美脲组(1.5mg·kg -1，灌胃)，G-003高、中、低剂量组(分别为4.5和1.5和0.5mg·kg-1，灌胃)。按实验分 组连续灌胃给药3天。第4天，禁食不禁水12h后，分别在各组家兔给药前和给药后不同时间 经耳缘静脉丛取血，用葡萄糖氧化酶法测定血糖值。
3.结果
3.1化合物I4对正常小鼠空腹血糖的影响
结果见表3，化合物I4各组(20、7、2.5mg·kg-1)均明显降低正常C57BL/6J纯系小鼠 空腹血糖，并呈显著的剂量相关性，I4高剂量组(20mg·kg-1)降糖幅度几乎达50％，作用 持续6h以上。
表3.化合物I4对C57BL/6J纯系小鼠空腹血糖的影响( x±SD，n＝10)
组别 剂量 血糖浓度(mmol·L-1)
0h 0.5h 1h 2h 4h 6h
对照 6.77±1.60 7.33±1.88 6.91±1.22 6.59±1.46 6.40±1.22 6.35±0.99
格列美脲 20mg·kg-1 7.29±1.41 4.42±0.94** 3.58±1.08**3.62±1.08** 3.95±1.08** 4.14±0.99**
I4 2.5mg·kg-1 7.14±1.60 5.92±1.32 4.66±1.83** 4.84±1.08** 5.17±1.13* 5.46±0.80*
I4 7mg·kg-1 6.73±1.55 5.17±0.98* 4.46±1.22** 4.09±1.08** 4.37±1.51** 4.56±1.13**
I4 20mg·kg-1 6.91±1.79 4.42±0.56** 3.81±0.80** 3.72±0.94** 3.95±0.94** 4.28±1.22**
*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组比较。
3.2化合物I4对四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血糖的作用
结果见表4，化合物I4高，低剂量、格列美脲单次给药对四氧嘧啶糖尿病小鼠空腹血糖 无明显影响，连续(7天)给药，也不明显降低糖尿病小鼠空腹血糖，见表5，但对恢复有- 定的促进作用。
表4化合物I4单次给药对糖尿病小鼠空腹血糖的影响( x±SD，n＝10) 组别 剂量 血糖浓度(mmol·L-1) 0h 1h 2h 4h 对照 32.34±7.84 31.28±6.79 31.36±8.93 25.11±3.05 格列美脲 20mg·kg-1 30.73±7.25 29.60±8.23 27.15±8.23 23.12±7.91 I4 20mg·kg-1 29.77±7.43 26.50±9.09 26.59±9.71 24.61±8.69 I4 7mg·kg-1 29.31±8.39 26.36±8.65 25.48±9.71 22.99±9.62
表5化合物I4连续(7天)给药对糖尿病小鼠空腹血糖的影响( x±SD，n＝8) 组别 剂量 血糖浓度(mmol·L-1) 0h 1h 3h 对照 27.23±8.89 28.36±9.08 27.19±8.33 格列美脲 20mg·kg-1 20.45±10.35 18.44±9.50 17.26±7.76 I4 20mg·kg-1 20.46±10.96 18.30±10.72 16.42±10.63 I4 7mg·kg-1 19.33±7.15 18.63±9.08 16.70±8.14
2.3化合物I4对正常家兔空腹血糖的作用
结果见表6，化合物I4各组(0.5、1.5和4.5mg·kg-1)均明显降低正常家兔空腹血 糖，并呈显著的剂量相关性，I4高剂量组(4.5mg·kg-1)降糖幅度几乎达50％，作用持续6h 以上。
表6化合物I4对正常家兔空腹血糖的影响( x±SD，n＝6)
组别 剂量 血糖浓度(mmol·L-1)
0h 1h 2h 4h 6h 8h
对照 7.28±1.83 7.33±1.93 7.77±1.79 7.38±1.79 6.76±1.88 6.37±1.40
格列美脲 1.5mg·kg-1 6.52±1.74 6.08±2.03 5.55±1.98* 4.63±1.74** 3.81 ±1.50** 3.33±1.50**
I4 0.5mg·kg-1 6.42±1.45 6.37±1.79 6.13±1.88 5.30±1.35* 4.97±1.24* 4.83±1.69*
I4 1.5mg·kg-1 7.05±2.32 6.66±2.56 6.27±1.79 5.40±1.73* 4.68±1.25* 4.58±1.11*
I4 4.5mg·kg-1 6.66±2.56 6.13±2.94 5.16±2.51* 3.91±1.21** 3.33±1.06** 2.94±1.30**
*P＜0.05，**P＜0.01，与对照组比较。
实施例3
N-乙酰苯乙胺
在三颈烧瓶(250ml)中加入35ml苯乙胺和52.5ml的三乙胺，室温搅拌，慢慢滴加26.6ml 醋酐，搅拌10h，加水60ml，用40％盐酸调节pH值近中性(5-6)，用二氯甲烷55ml萃取两 次，萃取液用水洗2次，加入无水NaSO4干燥，过滤得酒红色液体，蒸干得黄色固体，粗品重 38.9g，收率86.0％，mp50-52℃。
4-[2-(N-乙酰基氨)乙基]苯磺酸氯
在二颈烧瓶中加入ClSO3H24.5ml，冰浴机械搅拌，慢慢加入乙酰苯乙胺10g，继续保持冰 浴搅拌，反应6小时后，将反应液倾入大量碎冰中，搅拌，抽滤得白色固体20g(湿重)直 接用于下步反应。
4-[2-(N-乙酰基氨基)乙基]苯磺酸胺
将20g湿重上步产品固体投入于由80ml氨水(25-28％)的烧瓶中搅拌6h。停止搅拌，将 反应液倾入烧瓶中，置于通风橱放置数天，抽滤得白色固体13.2g(89.9％)mp：170-172℃。
4-氨乙基苯磺酸酰胺
将13.2g上步产物加入5.61gNaOH和21.8ml的水中油浴120℃，搅拌回流3h。用浓盐酸 调节PH8-9，释出白色固体，抽滤干燥得固体8.5g，收率78％，mp164-166℃。
实施例4
4-(2-(4-乙酰氨基)苯磺酰胺基)乙基苯磺酰胺(II1)的制备：
将4-氨乙基苯磺酰胺10.0g，无水K2CO38.5g投入有25ml水的反应瓶中，再加入4-乙酰 氨基苯磺酰氯8.8g，室温搅拌3个小时。反应完毕，抽滤得白色固体12.2g，用无水乙醇重 结晶。收率58.3％，mp：122-124℃。
IR(cm-1，KBr)：3273，1527，1321，1154；
1HNMR(DMSO-d6)δ2.139(s，3H，CH3)，2.61-3.19(m，4H，CH2CH2)，6.71-7.90(m，8H， aromaticH)；
MS(ESI，m/z)：398.1(M+H，基峰)，420(M+Na)，436(M+K)
实施例5
4-[2-(3-甲基-4-乙酰氨基苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰胺(II2)的制备：
将1.0g 4-氨乙基苯磺酰胺和1.5g 3-甲基-4-乙酰氨基苯磺酰氯，按II1的制备方法，得 白色固体，收率44.3％，mp110～112℃。
IR(cm-1，KBr)：3235，1667，1528，1318，1160；
1HNMR(DMSO-d6)δ2.148(s，3H，CH3)，2.304(s，3H，Ar-CH3)，2.65-3.22(m，4H，CH2CH2)， 7.18-8.20(m，7H，aromaticH)；
MS(ESI，m/z)：412(M+H，基峰)，434(M+Na)，450(M+K)
实施例6
4-(2-(4-氯苯磺酰胺基)乙基)苯磺酰胺(H3)的制备：
将4-氨乙基苯磺酰胺和4-氯苯磺酰氯，按II1的制备方法，得白色固体，收率63.8％， mp110～112℃。
IR(cm-1，KBr)：3268，1584，1327，1157，1088，557；
1HNMR(DMSO-d6)δ2.80-3.19(m，4H，CH2CH2)，6.96-8.00(m，8H，aromaticH)；
MS(ESI，m/z)：375(M+H)，397(M+Na)，413(M+K，基峰)
实施例7
4-(2-(4-溴苯磺酰胺基)乙基)苯磺酰胺(II4)的制备：
将1.0g 4-氨乙基苯磺酰胺和1.55g 4-溴苯磺酰氯，按II1的制备方法，得1.5g白色固体， 收率71.0％，mp135～136℃。
IR(cm-1，KBr)：3267，1573，1327，1155，1093；
1HNMR(DMSO-d6)δ2.64-3.10(m，4H，CH2CH2)，7.22-7.93(m，8H，aromaticH)；
MS(ESI，m/z)：419(M+H)，441(M+Na，基峰)，457(M+K)。
实施例8
4-[2-(5-甲基-2-乙酰氨基苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰胺(II5)的制备：
将2.0g 4-氨乙基苯磺酰胺和2.9g 5-甲基-2-乙酰氨基苯磺酰氯，按II1的制备方法，得 白色固体，收率60.0％，mp174～176℃。
IR(cm-1，KBr)：3284，1662，1532，1318，1165，593；
1HNMR(DMSO-d6)δ2.095(s，3H，CH3)，2.463(s，3H，Ar-CH3)，2.61-3.17(m，4H，CH2CH2)， 7.00-8.15(m，7H，aromaticH)；
MS(ESI，m/z)：412(M+H)，434(M+Na，基峰)，450(M+K)
实施例9
4-[2-(3-甲氧基-4-乙酰氨基苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰胺(II6)的制备：
将1.0g 4-氨乙基苯磺酰胺和2.0g 3-甲氧基-4-乙酰氨基苯磺酰氯，按II1的制备方法， 得1.4g白色固体，收率40.0％，mp182～185℃。
IR(cm-1，KBr)：3344，3297，1536，1329，1149；
1HNMR(DMSO-d6)δ2.148(s，3H，CH3)，2.304(s，3H，Ar-CH3)，2.65-3.22(m，4H，CH2CH2)， 7.18-8.20(m，7H，aromaticH)；
MS(ESI，m/z)：428(M+H，基峰)，450(M+Na)，466(M+K)
实施例10
4-(2-苯磺酰胺基)乙基苯磺酰胺(II7)的制备：
将4-氨乙基苯磺酰胺3.0g和苯磺酰氯3.2g，按II1的制备方法，得白色固体4.3g，收率 84.3％，mp146～152℃。
实施例11
4-[2-(4-甲基苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰胺(II8)的制备：
将4-氨乙基苯磺酰胺和对甲苯磺酰氯，按II1的制备方法，得白色固体收率71.0％，mp122～ 124℃。
实施例12
1-[4-[2-(4-乙酰氨基苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰]-3-(反-4-甲基环己基)脲(I1)的制备：
将0.7g II1、10ml无水丙酮和0.7g无水碳酸钾放入反应瓶中，搅拌回流6hr，滴入0.42g 4- 甲基环己基异氰酸酯，继续回流6hr，冷却，过滤，丙酮洗涤，所得粗品用甲醇重结晶，得 0.3g产品，mp177～180℃。
IR(cm-1，KBr)：3148，2927，1690，1535，1404，1158，577；
1HNMR(DMSO-d6)δ0.6-1.93(m，13H，-C6H10CH3)，2.136(s，3H，CH3)，2.66-3.18(m，4H， CH2CH2)，6.3(d，1H，NH-C6H10CH3)，6.81-8.10(m，8H，aromaticH)，10.28(s，1H，NH)；
MS(ESI，m/z)：537(M+H，基峰)，559(M+Na)，575(M+K)。
实施例13
1-[4-[2-(3-甲基-4-乙酰氨基苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰]-3-(反-4-甲基环己基)脲(I2) 的制备：
用1.0g II2，用I1相同的方法，制得0.8g I2，收率64.0％，mp123～125℃。
IR(cm-1，KBr)：3283，2927，1678，1530，1157；
1HNMR(DMSO-d6)δ0.71-1.95(m，13H，-C6H10CH3)，2.121(s，3H，COCH3)，2.295(s，3H，ArCH3)， 2.61-3.07(m，4H，CH2CH2)，6.3(d，1H，NH-C6H10CH3)，7.15-8.17(m，7H，aromaticH)；
MS(ESI，m/z)：551(M+H，基峰)，573(M+Na)，589(M+K)。
实施例14
1-[4-[2-(4-氯苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰]-3-(反-4-甲基环己基)脲(I3)的制备：
用1.0g II3，用I1相同的方法，制得0.8g I3，收率58.3％，I93～195℃。
IR(cm-1，KBr)：3232，2927，1687，1336，1160，1093；
1HNMR(DMSO-d6)δ0.75-1.96(m，13H，-C6H10CH3)，2.592-3.07(m，4H，CH2CH2)， 6.13(d，1H，NH-C6H10CH3)，7.18-7.93(m，8H，aromaticH)；
MS(ESI，m/z)：514(M+H，基峰)，536(M+Na)，552(M+K)。
实施例15
1-[4-[2-(4-溴苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰]-3-(反-4-甲基环己基)脲(I4)的制备：G004 收率60.0％，193～195℃
IR(cm-1，KBr)：3259，2927，1690，1336，1161，1090；
1HNMR(DMSO-d6)δ0.75-1.96(m，13H，-C6H10CH3)，2.592-3.07(m，4H，CH2CH2)， 6.13(d，1H，NH-C6H10CH3)，7.18-7.93(m，8H，aromaticH)；
MS(ESI，m/z)：560(M+H，基峰)，582(M+Na)，608(M+K)。
实施例16
1-[4-[2-(5-甲基-2-乙酰氨基苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰]-3-(反-4-甲基环己基)脲(I5) 的制备：
用1.0g II5，用I1相同的方法，制得0.3g I5，收率23.0％，mp137～140℃。
IR(cm-1，KBr)：3156，2927，1675，1533，1159，590；
1HNMR(DMSO-d6)δ0.71-1.95(m，13H，-C6H10CH3)，2.121(s，3H，COCH3)，2.295(s，3H，ArCH3)， 2.61-3.07(m，4H，CH2CH2)，6.3(d，1H，NH-C6H10CH3)，7.15-8.17(m，7H，aromaticH)；
MS(ESI，m/z)：551(M+H，基峰)，573.(M+Na)，589(M+K)。
实施例17
1-[4-[2-(3-甲氧基-4-乙酰氨基苯磺酰胺基)乙基]苯磺酰]-3-(反-4-甲基环己基)脲(I6) 的制备：
用1.4g II6，用I1相同的方法，制得1.5g I6，收率80.0％，mp164～165℃。
IR(cm-1，KBr)：3361，2928，1685，1530，1416，1157，588；
1HNMR(DMSO-d6)δ0.73-1.97(m，13H，-C6H10CH3)，2.184(s，3H，COCH3)，2.60-3.11(m，4H， CH2CH2)，3.947(s，3H，OCH3)，6.0(d，1H，NH-C6H10CH3)，6.9-7.88(m，7H，aromaticH)；
MS(ESI，m/z)：567(M+H，基峰)，589(M+Na)，605(M+K)。