技术领域
本发明关于薯蓣皂苷(Dioscin)在抗肿瘤药物方面的应用及其药物制 剂，属于中药领域。
背景技术
薯蓣皂苷(Dioscin)是一种从薯蓣科植物穿龙薯蓣(Dioscorea nipponica Makino)等植物的根茎中提取分离纯化而获得。是一种已知化合物，薯蓣皂 苷3位上连接的葡萄糖和两个鼠李糖用酸降解后可得到薯蓣皂苷元 (Diosgenin)。将薯蓣皂苷用于抗肿瘤药物方面的应用未见报道。以穿山龙 或盾叶薯蓣、黄山药等为原料制备的薯蓣皂苷元(Diosgenin)具有明显的 抗肿瘤作用，其中对肉瘤-180、肝瘤腹水型、小鼠宫颈癌和艾氏腹水瘤作 用最为明显Ke Hu等报道，原薯蓣皂苷元(protodroscin)对60种人癌细 胞也有非常强的细胞毒作用(plata.medica.2002.68.4.289-384)。从以上报 道结果来看，薯蓣皂昔元或含有薯蓣皂苷配基(diosgenin)的糖苷均有一 定程度的抗肿瘤作用。薯蓣属植物资源极为丰富，其中所含的甾体皂苷量 也较高，毒副作用很低，是一种有开发前途的抗肿瘤药物。
薯蓣皂苷的化学结构式(其英文名称为Dioscin)
发明内容
本发明的目的之一是提供了薯蓣皂苷的药物制剂；本发明的目的之二 是提供了薯蓣皂苷的抗肿瘤新用途。
本发明目的是通过如下技术方案实现的：
本发明的药物制剂含有1％-99％的薯蓣皂苷和99％-1％的赋形剂(包 括其它配用的药物)，优选含有30％-80％的薯蓣皂苷和70％-20％的药用 赋形剂(包括其它配伍用的药物)，最好含有60％-70％的薯蓣皂苷和40％ -30％的赋形剂(包括其它配伍用的药物)。
按药剂学方法，可以将本发明的薯蓣皂苷制备成多种临床药物剂型作 为抗肿瘤药物，包括口服制剂或非肠道给药的剂型。所说的口服制剂选自 于片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、混悬剂、滴丸、口服液体制剂中的任何 一种；所说的非肠道给剂型选自于注射剂、气雾剂、栓剂或皮下给药剂型 当中的一种。
本发明的抗肿瘤药物中的辅料是指常规的赋形剂，如溶剂、崩解剂、 矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂等。本发明抗肿瘤药物中的其它配伍用 的药物，指的是以有效剂量的薯蓣皂苷为一定的药物原料，再配伍其它已 允许合用的中药或化学药品。
本发明的薯蓣皂苷药物制剂具有抗肿瘤作用，是通过以下的药效实验 得到证实的。 实验例1 薯蓣皂苷对体外肿瘤细胞的抑制作用
细胞 MCF-7(人乳腺癌细胞)，NCI-H446(人小细胞肺癌)，MGC-803 (人胃癌细胞)，Swillc(人结肠癌细胞)，U251(人神经胶质瘤细胞)， SGC-7901(人胃癌细胞)，K562(人红白血病细胞)，A375-S2(人黑色素 瘤细胞)，Hela(人宫颈癌细胞)，BEL-7204(人肝癌细胞)、HL-60(白 血病细胞)，均购自吉林省肿瘤医院
试药 薯蓣皂苷(Dioscin)由于吉林天药科技股份有限公司天然药物 研究所中药化学室提供，白色针状结晶；四甲基偶氮唑盐(MTT)、青霉素 G钾盐、硫酸链霉素、HEPES和DMSO为Sigma公司产品；胰酶为Difco 产品；新生牛血清(FBS)为北京元亨圣马生物技术研究所产品；RPMI-1640 培养基为Hyclone产品；
仪器 CK2TRC-3荧光倒置显微镜，OLYMPUS-日本产品；D-63450-CO2培养箱，Hera-德国产品；FCANF129004酶标仪为TECAN-澳大利亚产品。 方法 MTT法将对数生长期细胞消化，离心，记数，以1×105个/mL 密度接种于96孔培养板中，每孔100μL，培养24小时后，加入浓度梯度药 物，同时设溶剂对照和空白对照，培养44小时后，每孔加入20μLMTT(5mg/mL)， 再培养4小时，弃上清，每孔加入150μL二甲基亚砜，振荡10分钟，应用 酶标仪于492nm处测OD值。
表1 MTT法测定十一种肿瘤细胞的抑制率(％)
结果 从表1可以看出，薯蓣皂苷对上述十一种肿瘤细胞均具有非常 强的抑制生长作用并具有明显的量效关系，其中对人黑色素瘤细胞(A375- S2)、人早幼白血病细胞(HL-60)、人宫颈癌细胞(Hela)作用最为显著。 薯蓣皂苷在浓度达8μg/mL时对人黑色素瘤细胞(A375-S2)等八个细胞的 抑制率几乎达100％(98％以上)。 实验例2 薯蓣皂苷整体抗肿瘤作用
动物S180等4种肿瘤腹水传代小鼠，均购自吉林省肿瘤研究所。昆明 小鼠，体重18-22g，购自高新区实验动物中心。
药品 薯蓣皂苷由吉林天药科技股份有限公司天然药物研究所中药化 学室提供，白色针状结晶，纯度为98％以上。注射用环磷酰胺，规格为200mg/ 支，批号为20010102，上海华联制药有限公司产品。
仪器 电子天平，型号为酶特勒-托利多AB204-N
方法实验用小鼠随机分为对照组(ig蒸馏水200mlkg-1)、环磷酰 胺(ip20mgkg-1)、薯蓣皂苷(ig200mg、100mg和50mgkg-1)，选取移植 肿瘤7天、肿瘤生长良好、腹部隆起明显的小鼠，腹部皮肤消毒，用一次 性无毒采血器经腹壁刺入腹腔，抽取腹水，放入无菌烧杯中以生理盐水稀 释成1∶3的癌细胞混悬液，于每只小鼠右腋下接种0.2ml，各组动物于接 种肿瘤次日开始给药，每日一次，连续给药10天。给药结束后，将动物称 重后处死，剥离肿块称重，比较各组肿瘤生长情况(各组动物初始数目均 为10只，表中所列动物数均为去除死亡动物后剩余的数目)。试验表明， 薯蓣皂苷200、100、50mg对S180、HepA、U14和EAC肿瘤细胞均具有明 显的抑制作用，对S180的抑瘤率为39-62％，对HepA抑瘤率为36-66％， 对U14抑瘤率为37-54％，对EAC抑瘤率为38-56％，具体试验结果见表 2-5。
表2薯蓣皂苷对小鼠S180瘤重的影响
剂量 动物数 动物体重(g) 瘤重 抑瘤率 组别
mg.kg-1 (n) 给药前 给药后 (g) (％) 对照组 - 10 20.6±1.68 28.3±1.83 2.08±0.86 环磷酰胺 20 10 20.9±1.72 26.1±2.37 0.78±0.31*** 62.5 薯蓣皂苷 200 9 20.4±1.10 27.2±3.39 0.93±0.35** 55.3 薯蓣皂苷 100 10 20.8±1.47 27.8±2.89 0.98±0.37** 52.3 薯蓣皂苷 50 9 20.5±1.43 28.0±3.18 1.25±0.18* 39.9
注：与对照组比较，***P＜0.001 **P＜0.01 *P＜0.05
表3薯蓣皂苷对小鼠HepA瘤重的影响
剂量 动物数 动物体重(g) 瘤重 抑瘤率 组别
mg.kg-1 (n) 给药前 给药后 (g) (％) 对照组 - 10 19.7±1.76 28.2±1.93 2.13±0.67 环磷酰胺 20 9 19.9±1.60 25.1±2.38 0.71±0.29*** 66.7 薯蓣皂苷 200 10 19.4±1.08 26.2±3.46 0.88±0.28*** 58.7 薯蓣皂苷 100 10 19.7±1.57 26.8±2.90 1.05±0.39*** 50.6 薯蓣皂苷 50 9 19.7±1.42 28.2±3.20 1.36±0.19** 36.1
注：与对照组比较，***P＜0.001 **P＜0.01
表4薯蓣皂苷对小鼠U14瘤重的影响
剂量 动物数 动物体重(g) 瘤重 抑瘤率 组别
mg.kg-1 (n) 给药前 给药后 (g) (％) 对照组 - 10 19.7±1.76 27.4±1.93 1.97±0.76 环磷酰胺 20 10 20.9±1.60 25.1±2.38 0.89±0.24*** 54.8 薯蓣皂苷 200 10 20.4±1.08 25.8±3.46 0.94±0.37*** 52.3 薯蓣皂苷 100 8 20.7±1.57 25.7±2.90 1.02±0.25** 48.2 薯蓣皂苷 50 9 20.6±1.42 28.0±3.20 1.23±0.16* 37.6
注：与对照组比较，***P＜0.001 **P＜0.01 *P＜0.05
表5薯蓣皂苷对小鼠EAC瘤重的影响
剂量 动物数 动物体重(g) 瘤重 抑瘤率 组别
mg.kg-1 (n) 给药前 给药后 (g) (％) 对照组 - 9 20.8±2.03 29.2±1.87 1.97±0.77 环磷酰胺 20 9 20.9±1.60 27.1±2.12 0.85±0.29*** 56.9 薯蓣皂苷 200 10 20.4±1.08 26.5±3.35 0.93±0.25** 52.8 薯蓣皂苷 100 10 20.7±1.57 27.8±2.47 1.05±0.26** 46.7 薯蓣皂苷 50 9 20.3±1.42 27.3±3.29 1.22±0.39* 38.1
注：与对照组比较，***P＜0.001 **P＜0.01 *P＜0.05
上述离体实验和整体实验表明，薯蓣皂苷对离体和整体肿瘤细胞均具 有明显的抑制作用。离体实验表明，在浓度为8μg/mL时对人黑色素瘤细胞 (A375-S2)等八个细胞的抑制率几乎达100％(98％以上)；整体实验表明， 薯蓣皂苷200、100、50mg对S180、HepA、U14和EAC肿瘤细胞均具有明 显的抑制作用，抑瘤率可达36-67％。
具体实施方式实施例1 滴丸的制备
称取300g聚乙二醇4000，在水浴上熔化，加入薯蓣皂苷原料100g， 搅拌均匀，倾入保温管中，调节恒温装置，使药液在80-90C下滴入冷却 过的液体石蜡中(温度±4℃)，滴完后，将药丸倾入滤纸上吸干石蜡油，再 加入少量滑石粉，混匀，得薯蓣皂苷滴丸1000粒。口服，一次2-3粒， 一日三次，饭后服用。 实施例2 微囊片的制备
分别称取硬脂酸15g和21mL作为复方囊材，称取薯蓣皂苷100g作为 囊心物，以压缩空气通过喷雾冻结法成囊，囊径为8-100um。然后将微囊 与微晶纤维素混匀，加10％乙基纤维素醇溶液混合制成囊材，通过18目尼 龙筛制成颗粒，于35℃以下烘干，再放置干燥器内24小时，加1％-2％硬 脂酸镁压片，得薯蓣皂苷微囊片，片重为0.3g，口服，一次1-2片，一日二 次。 实施例3 胶囊剂的制备
薯蓣皂苷原料1000g，药用淀粉1000g，混合均匀，装入0#胶囊，每粒 0.35g，每次口服1-2粒，每日两次。 实施例4 片剂的制备
薯蓣皂苷原料1000g，药用淀粉500g，混合均匀，用适量乙醇制粒， 经整粒机整粒，压片，每片0.25g，口服，每次1-2片，每日两次。 实施例5 颗粒剂的制备
薯蓣皂苷原料100g，淀粉1000g，糖粉400g，混合均匀，用适量乙醇 制粒，干燥、整粒、分装即得。口服，一次5g，一日两次。 实施例6 注射剂的制备
薯蓣皂苷原料10g，丙二醇20ml，聚乙二醇-400 50ml，注射用水300ml， 混合，水浴加热30分钟，加苯甲醇50ml，再用注射用水加至1000ml，在 超声波中处理10分钟，再水浴上加热30分钟，调PH值5.5-6.5，过滤澄 明，灌封，灭菌即得。每支2ml，肌肉注射，一次2ml，一日1-2次。