一种用于防治肝纤维化的制剂.pdf

《一种用于防治肝纤维化的制剂.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种用于防治肝纤维化的制剂.pdf（12页完整版）》请在专利查询网上搜索。

1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201510146787.7 (22)申请日 2015.03.31 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 104721622 A (43)申请公布日 2015.06.24 (73)专利权人 浙江农林大学暨阳学院 地址 311800 浙江省绍兴市诸暨市浦阳路 77号 (72)发明人 袁珂 贾姗姗 林茵 徐润生 郎俭良 周沁萍 赵辉 (74)专利代理机构 杭州浙科专利事务所(普通 合伙) 33213 代理人 张晓红 (51)Int.Cl. A61K 36/899(2006.。

2、01) A61P 11/00(2006.01) 审查员 何梅孜 (54)发明名称 一种用于防治肝纤维化的制剂 (57)摘要 一种用于防治肝纤维化的制剂， 属于中药制 剂技术领域。 其特征在于由桑葚提取物、 香榧叶 提取物、 黑米提取物、 酵母硒按照重量比30-50g: 30-50g:20-40g:300-500 g混合均匀制成。 上 述一种用于防治肝纤维化的制剂， 其原料成本 低， 药效价值高， 功效成分含量高、 使用和携带方 便， 口服吸收迅速、 生物利用度高、 经过动物试验 验证， 表明防治效果明显， 且制备工艺简单， 操作 方便， 生产条件容易控制， 自动化程度和生产效 率高。 权利要求。

3、书2页 说明书9页 CN 104721622 B 2018.03.06 CN 104721622 B 1.一种用于防治肝纤维化的制剂， 其特征在于由桑葚提取物、 香榧叶提取物、 黑米提取 物、 酵母硒按照重量比30-50g: 30-50g : 20-40g: 300-500 g混合均匀制成； 所述桑葚 提取物采用以下方法制备： 取新鲜桑葚， 用压榨机榨汁后， 离心处理或采用 压滤方法分离果汁与果渣， 按照果渣重量为1 kg则含水乙醇用量为2-5升的比例加入50%- 60%的乙醇溶液， 并加入盐酸调节pH 3.0-pH 4.0， 超声提取2-3次， 每次30-80 分钟； 合并果 渣提取液， 采。

4、用闪蒸浓缩装置在50-65， 真空度为0.095 Mpa条件下真空浓缩至原体积的 1/2-1/5， 得果渣浓缩液； 将果汁采用闪蒸浓缩装置在50-65， 真空度为0.092-0.095 Mpa 条件下真空浓缩至原体积的1/3-1/8， 得果汁浓缩液； 合并果渣和果汁浓缩液， 混合均匀， 通 过大孔吸附树脂 Diaion HP 2MGL柱， 用蒸馏水淋洗， 调节0.5-1.5 mL/min的流速至洗脱液 呈无色透明后， 改用pH 3.0-4.0的50-70%的乙醇溶液洗脱， 收集紫红色的色素洗脱液， 洗脱 液流速控制在0.5-1.5 mL/min； 将收集的紫红色洗脱液在旋转蒸发仪中真空浓缩干燥。

5、或冷 冻干燥， 得桑葚提取物干粉； 所述香榧叶提取物采用以下方法制备： 将干燥的香榧叶置破碎提取器的容器中， 按照 香榧叶干物重量为1 kg则含水乙醇用量为4-8升的比例加入50-70乙醇进行室温破碎 提取2-3次， 将原料打碎成匀浆状， 且能通过20-60目筛的粒度， 每次破碎提取时间为1-3分 钟； 将提取液抽滤， 弃去滤渣， 合并的提取液在60-65， 真空度为0.092-0.095 Mpa条件下 采用真空薄膜浓缩装置进行闪蒸浓缩， 至原体积的1/4-1/8； 将浓缩液采用体积比1:1-2的 石油醚萃取2-4次， 弃去石油醚， 按照水： 乙酸乙酯体积比1:1-2的比例将水层再采用乙酸乙 。

6、酯萃取2-5次； 合并萃取液， 在旋转蒸发仪中进行减压浓缩干燥成干粉， 用研钵研细后得到 香榧叶提取物干粉； 所述黑米提取物采用以下方法制备： 将干燥的黑米置破碎提取器的容器中， 按照黑米： 乙醇重量比1:4-8的比例将黑米加入50-70乙醇进行室温破碎提取2-3次， 每次破碎提 取时间为1-3分钟， 将黑米打碎且能通过20-60目筛的粒度； 将提取液抽滤， 合并的滤液在 60-62， 真空度为0.093-0.095 Mpa条件下采用真空薄膜浓缩装置进行闪蒸浓缩至原体积 的1/4-1/8； 然后将浓缩液进行低温真空干燥成干粉， 得到的黑米提取物。 2.如权利要求1所述的一种用于防治肝纤维化的制。

7、剂， 其特征在于桑葚提取物、 香榧叶 提取物、 黑米提取物、 酵母硒的重量比为35-45g: 35-45g : 25-35g: 350-450 g。 3.如权利要求1所述的一种用于防治肝纤维化的制剂， 其特征在于桑葚提取物、 香榧叶 提取物、 黑米提取物、 酵母硒的重量比为38-40g: 38-40g : 30-32g: 400-420 g。 4.如权利要求1所述的一种用于防治肝纤维化的制剂， 其特征在于所述桑葚提取物的 制备方法中： 按照果渣： 乙醇溶液体积比1:3-4的比例将果渣用pH 3.2-pH 3.7的52%-55%的 乙醇溶液超声提取3次， 每次50-60 分钟； 合并果渣提取液浓。

8、缩至原体积的1/3-1/4； 将果汁 采用闪蒸浓缩装置真空浓缩至原体积的1/5-1/6， 得果汁浓缩液； 合并果渣和果汁浓缩液， 混合均匀， 通过大孔吸附树脂 Diaion HP 2MGL柱， 用蒸馏水淋洗， 调节0.8-1.2 mL/min的 流速至洗脱液呈无色透明后， 改用pH 3.2-3.5的55-60%的乙醇溶液洗脱， 收集紫红色的色 素洗脱液， 洗脱液流速控制在0.8-1.2mL/min。 5.如权利要求1所述的一种用于防治肝纤维化的制剂， 其特征在于所述香榧叶提取物 的制备方法中： 按照香榧叶干物重量为1 kg则含水乙醇用量为5-6升的比例加入55-60 乙醇进行室温破碎提取2次；。

9、 提取液在60-65， 真空度为0.092-0.095 Mpa条件下采用真空 权 利 要 求 书 1/2 页 2 CN 104721622 B 2 薄膜浓缩装置进行闪蒸浓缩， 至原体积的1/4-1/8； 将浓缩液采用体积比1:1-2的石油醚萃 取2-4次， 弃去石油醚， 按照水： 乙酸乙酯体积比1:1-2的比例将水层再采用乙酸乙酯萃取2- 5次。 6.如权利要求1所述的一种用于防治肝纤维化的制剂， 其特征在于所述黑米提取物的 制备方法中： 按照黑米： 乙醇重量比1:5-6的比例将黑米加入55-60乙醇进行室温破碎 提取3次， 提取液采用真空薄膜浓缩装置进行闪蒸浓缩至原体积的1/5-1/6。 权。

10、 利 要 求 书 2/2 页 3 CN 104721622 B 3 一种用于防治肝纤维化的制剂 技术领域 0001 本发明属于中药制剂技术领域， 具体为一种用于防治肝纤维化的制剂。 背景技术 0002 肝纤维化是一种世界范围内高发病率、 高死亡率的肝脏疾病， 给人们的生活和健 康带来了严重的影响。 肝纤维化不是病名， 而是一个病理概念。 几乎任何能造成慢性肝损害 的病因都可导致肝纤维化， 它与慢性病毒性肝炎有关， 是由很多慢性肝脏疾病引起， 也就是 说， 慢性乙型肝炎、 慢性丙型肝炎、 脂肪性肝炎 （酒精性或非酒精性） 、 自身免疫性疾病、 免疫 性肝病、 血吸虫病、 药物性肝病等都可以引起肝。

11、纤维化。 所以说肝纤维化是一种慢性、 进行 性、 弥漫性的肝脏病变， 各种肝脏病变长期反复发作， 比如肝炎引起肝细胞变性坏死， 就会 形成纤维组织。 这些纤维组织在肝脏里不是一小块组织病变， 而是弥漫性的。 随着纤维的增 多， 可以妨害肝细胞的营养和代谢， 妨害肝脏的血液循环， 影响肝脏的功能。 肝纤维化是病 情朝着肝硬化恶化的必经阶段， 肝纤维化的危害有很多， 如形成门静脉高压， 肝脾肿大等， 甚至导致肝功能衰竭。 肝纤维化是由各种致病因子所致肝内结缔组织异常增生， 导致肝内 弥漫性细胞外基质过度沉淀的病理过程。 在实验研究中， 由于四氯化碳诱导动物的肝脏氧 化损伤反应和人类非常相似， 因此。

12、四氯化碳常作为诱导肝损伤和肝纤维化的物质。 四氯化 碳在肝细胞内质网经羟化酶作用， 产生自由基， 发生脂质过氧化， 使内质网改变， 溶酶体破 裂和线粒体损伤及钙离子通透变化， 引起肝细胞坏死。 肝纤维化是一种可逆的损伤-修复应 答， 其特征就是肝损伤之后的细胞外基质 （ECM） 增生。 如果肝损伤是急性的， 或者是自限性 的， 则ECM的增生就是暂时的， 肝脏就会恢复到正常状态。 如果这种损伤持续下去， 就会造成 慢性炎症， ECM就会增生， 导致肝实质细胞被瘢痕组织取代。 最终造成肝硬化， 也就是肝纤维 化的晚期阶段， 肝硬化则是一种高死亡率的病症。 不过从肝纤维化到肝硬化的整个过程通 常比。

13、较慢， 从20年到40年不等， 整个过程受遗传与环境两个因素的影响。 目前临床上应用的 药物， 虽在一定程度上起到了治疗作用， 但其副作用影响很大， 因此， 对于从植物中寻找天 然物质治疗肝纤维化日益受到医学界的关注。 发明内容 0003 针对现有技术中存在的上述问题， 本发明的目的在于设计提供一种用于防治肝纤 维化的制剂的技术方案， 其原料成本低， 药效价值高， 功效成分含量高、 使用和携带方便， 口 服吸收迅速、 生物利用度高、 经过动物试验验证， 表明防治效果明显， 且制备工艺简单， 操作 方便， 生产条件容易控制， 自动化程度和生产效率高。 0004 所述的一种用于防治肝纤维化的制剂，。

14、 其特征在于由桑葚提取物、 香榧叶提取物、 黑米提取物、 酵母硒按照重量比30-50g: 30-50g : 20-40g: 300-500 g混合均匀制成； 0005 所述桑椹提取物采用以下方法制备： 取新鲜桑葚， 用压榨机榨汁后， 离心处理或采 用压滤方法分离果汁与果渣， 按照果渣重量为1 kg则含水乙醇用量为2-5升的比例加入 50%-60%的乙醇溶液， 并加入盐酸调节pH 3.0-pH 4.0， 超声提取2-3次， 每次30-80 分钟； 合 说 明 书 1/9 页 4 CN 104721622 B 4 并果渣提取液， 采用闪蒸浓缩装置在50-65， 真空度为0.095 Mpa条件下真空。

15、浓缩至原体 积的1/2-1/5， 得果渣浓缩液； 将果汁采用闪蒸浓缩装置在50-65， 真空度为0.092-0.095 Mpa条件下真空浓缩至原体积的1/3-1/8， 得果汁浓缩液； 合并果渣和果汁浓缩液， 混合均 匀， 通过大孔吸附树脂 Diaion HP 2MGL柱， 用蒸馏水淋洗， 调节0.5-1.5 mL/min的流速至 洗脱液呈无色透明后， 改用pH 3.0-4.0的50-70%的乙醇溶液洗脱， 收集紫红色的色素洗脱 液， 洗脱液流速控制在0.5-1.5 mL/min； 将收集的紫红色洗脱液在旋转蒸发仪中真空浓缩 干燥或冷冻干燥， 得桑葚提取物干粉； 称重计算得率， 样品避光干燥保存。

16、， 得到的桑葚提取 物的收率为0.51-1.42%， 提取物中即花色素的含量达到18.2-36.3%。 0006 所述香榧叶提取物采用以下方法制备： 将干燥的香榧叶置破碎提取器的容器中， 按照香榧叶干物重量为1 kg则含水乙醇用量为4-8升的比例加入50-70乙醇进行室温 破碎提取2-3次， 将原料打碎成匀浆状， 且能通过20-60目筛的粒度， 每次破碎提取时间为1- 3分钟； 将提取液抽滤， 弃去滤渣， 合并的提取液在60-65， 真空度为0.092-0.095 Mpa条件 下采用真空薄膜浓缩装置进行闪蒸浓缩， 至原体积的1/4-1/8； 将浓缩液采用体积比1:1-2 的石油醚萃取2-4次，。

17、 弃去石油醚， 按照水： 乙酸乙酯体积比1:1-2的比例将水层再采用乙酸 乙酯萃取2-5次； 合并萃取液， 在旋转蒸发仪中进行减压浓缩干燥成干粉， 用研钵研细后得 到香榧叶提取物干粉； 提取物的收率达到8.2-12.4。 0007 所述黑米提取物采用以下方法制备： 将干燥的黑米置破碎提取器的容器中， 按照 黑米： 乙醇重量比1:4-8的比例将黑米加入50-70乙醇进行室温破碎提取2-3次， 每次破 碎提取时间为1-3分钟， 将黑米打碎且能通过20-60目筛的粒度； 将提取液抽滤， 合并的滤液 在60-62， 真空度为0.093-0.095 Mpa条件下采用真空薄膜浓缩装置进行闪蒸浓缩至原体 积。

18、的1/4-1/8； 然后将浓缩液进行低温真空干燥成干粉， 得到的黑米提取物， 得到的黑米提 取物的收率为8.3-18.4%。 0008 所述的一种用于防治肝纤维化的制剂， 其特征在于桑葚提取物、 香榧叶提取物、 黑 米提取物、 酵母硒的重量比为35-45g: 35-45g : 25-35g: 350-450 g。 0009 所述的一种用于防治肝纤维化的制剂， 其特征在于桑葚提取物、 香榧叶提取物、 黑 米提取物、 酵母硒的重量比为38-40g: 38-40g : 30-32g: 400-420 g。 0010 所述的一种用于防治肝纤维化的制剂， 其特征在于所述桑椹提取物的制备方法 中： 按照果。

19、渣： 乙醇溶液体积比1:3-4的比例将果渣用pH 3.2-pH 3.7的52%-55%的乙醇溶液 超声提取3次， 每次50-60 分钟； 合并果渣提取液浓缩至原体积的1/3-1/4； 将果汁采用闪蒸 浓缩装置真空浓缩至原体积的1/5-1/6， 得果汁浓缩液； 合并果渣和果汁浓缩液， 混合均匀， 通过大孔吸附树脂 Diaion HP 2MGL柱， 用蒸馏水淋洗， 调节0.8-1.2 mL/min的流速至洗脱 液呈无色透明后， 改用pH 3.2-3.5的55-60%的乙醇溶液洗脱， 收集紫红色的色素洗脱液， 洗 脱液流速控制在0.8-1.2mL/min。 0011 所述的一种用于防治肝纤维化的制剂。

20、， 其特征在于所述香榧叶提取物的制备方法 中： 按照香榧叶干物重量为1 kg则含水乙醇用量为5-6升的比例加入55-60乙醇进行室 温破碎提取2次； 提取液在60-65， 真空度为0.092-0.095 Mpa条件下采用真空薄膜浓缩装 置进行闪蒸浓缩， 至原体积的1/4-1/8； 将浓缩液采用体积比1:1-2的石油醚萃取2-4次， 弃 去石油醚， 按照水： 乙酸乙酯体积比1:1-2的比例将水层再采用乙酸乙酯萃取2-5次。 0012 所述的一种用于防治肝纤维化的制剂， 其特征在于所述黑米提取物的制备方法 说 明 书 2/9 页 5 CN 104721622 B 5 中： 按照黑米： 乙醇重量比1。

21、:5-6的比例将黑米加入55-60乙醇进行室温破碎提取3次， 提取液采用真空薄膜浓缩装置进行闪蒸浓缩至原体积的1/5-1/6。 0013 桑椹为又名桑枣、 桑果等， 是桑科桑属多年生木本植物桑树的成熟果实， 主要分布 在温带地区及亚热带、 热带山区。 目前我国已经选育出一批高产优质的桑果品种。 桑葚酸甜 可口， 营养价值丰富， 受到消费者青睐。 据报道称桑葚中除含有人体所需的大量氨基酸、 多 种维生素， 还原糖外， 还含有多种黄酮、 酚酸等营养成分， 特别是花青素是桑葚功效成分中 的重要物质之一， 花青素是一种花色素以糖苷键结合而成的衍生物， 研究表明， 其具有很好 的抗疲劳、 抗氧化、 清除。

22、自由基， 增强免疫等方面的作用。 0014 香榧为红豆杉科榧属常绿乔木植物， 是我国特有的珍贵经济干果类树种， 香榧又 名细榧、 真香榧、 枫桥香榧， 榧属植物共有7种， 其中香榧是经济价值最高的一种， 主要分布 在浙江诸暨。 香榧全身都是宝， 是集果用、 油用、 药用、 材用、 绿化、 观赏为一体的多用途优良 经济树种。 香榧的叶子也有很高的营养价值， 目前尚未得到充分利用， 造成了大量的资源浪 费。 因此， 对香榧果实、 叶子、 假种皮等部位的精深技术加工及系列产品的开发， 将具有很大 的应用前景。 0015 现代医学证实， 黑米具有滋阴补肾， 健脾暖肝、 补益脾胃， 益气活血， 养肝明目。

23、等疗 效。 经常食用黑米， 有利于防治头昏目眩、 贫血、 白发、 眼疾、 腰膝酸软、 肺燥咳嗽、 大便秘结、 肾虚水肿、 食欲不振、 脾胃虚弱等症。 黑米外皮层中含有花青素类色素， 这种色素具有很强 的抗氧化抗衰老作用。 此外， 这种色素中还富含黄酮类活性物质， 具有较强的抗衰老、 预防 动脉硬化的作用。 黑米中含膳食纤维较多， 淀粉消化速度比较慢， 因此， 吃黑米不会像吃白 米那样造成血糖的剧烈波动。 黑米中的钾、 镁等矿物质还有利于控制血压、 减少患心脑血管 疾病的风险， 所以， 糖尿病人和心血管疾病患者可以把食用黑米作为膳食调养的一部分， 用 于控制血压、 减少患心脑血管疾病的风险。 0。

24、016 微量元素硒的作用有很多， 如提高人体免疫力， 抗氧化抗衰老， 参与糖尿病的治 疗， 防癌抗癌， 保护眼睛， 保护修复细胞， 提高红细胞的携氧能力， 防治心血管类的疾病， 解 毒防毒抗污染， 保护肝脏等作用。 在食品和生产中， 已广泛使用有机硒制品作为微量元素硒 的补充剂。 目前一些发达国家生产和应用硒等微量元素制剂已经达到相当的规模。 有机硒 制品， 包括富硒螺旋藻、 硒酵母等的营养保健价值是同行业产品中难以替代的。 富硒酵母是 利用酵母开发出来的一种有机态硒制剂， 它是通过硒富集在生长酵母的细胞蛋白结构内生 产的， 富硒酵母已证明远比无机硒安全、 稳定、 易吸收、 有效且少污染的特点。

25、并具有多方面 的保健功能， 如生物利用度高、 毒性低、 疗效确切等优点， 具有保护细胞膜完整性， 清除自由 基， 加快脂质过氧化物分解、 抗氧化、 增强机体免疫功能、 心肌功能等药理作用。 0017 所述的一种用于防治肝纤维化的制剂， 可以根据需要制成所需的剂型。 片剂制剂 的制备， 需要加入适量糖粉、 淀粉、 羧甲基纤维素钠、 硬脂酸镁、 乙醇等辅料做为赋形剂， 通 过辅料的处理、 粉碎、 过筛、 混合、 制粒、 干燥、 压片、 再干燥等工序完成； 对应颗粒剂剂型的 制备， 需要加入少量的淀粉和糊精等辅料做为赋形剂， 再加入少量的润湿剂， 通过辅料的处 理、 制粒、 干燥、 整粒等工序完成；。

26、 具体的制备工艺属于常规工艺， 在此不再赘述。 0018 上述一种用于防治肝纤维化的制剂， 具有以下有益效果： 0019 1） 桑葚、 香榧叶和黑米来源特别丰富， 价格低廉； 特别是桑葚果渣， 资源利用成本 低， 药效价值高； 说 明 书 3/9 页 6 CN 104721622 B 6 0020 2） 本发明制备的天然有效物质的制剂， 各组分的配比具有协同增效效果， 功效成 分含量高， 使用和携带方便， 口服吸收迅速， 生物利用度高， 经过动物试验验证表明防治效 果明显； 0021 3） 本发明制备工艺简单， 操作方便， 生产条件容易控制， 自动化程度和生产效率 高， 绿色安全， 防治效果显。

27、著， 生产成本低， 可工业化生产， 为防治肝纤维化和利用天然资源 开辟了新途径。 0022 本专利申请中涉及的百分含量除另有说明的外， 其余的均为有效成分的纯物质的 重量百分含量。 具体实施方式 0023 以下结合具体实施例和相应的试验对本发明作进一步说明。 0024 实施例1 0025 该用于防治肝纤维化的制剂， 由桑葚提取物、 香榧叶提取物、 黑米提取物、 酵母硒 按照重量比50g: 30g : 20g: 500 g混合均匀制成； 0026 所述的桑椹提取物的制备方法如下： 取新鲜桑葚， 用压榨机榨汁后， 离心处理或采 用压滤方法分离果汁与果渣； 按照果渣重量为1 kg则含水乙醇用量为4升。

28、的比例加入55%的 乙醇溶液， 并加入盐酸调节pH 4.0， 超声提取3次， 每次60 分钟； 合并果渣提取液， 采用闪蒸 浓缩装置在60， 真空度为0.095 Mpa条件下真空浓缩至原体积的1/4， 得果渣浓缩液； 将果 汁采用闪蒸浓缩装置在60， 真空度为0.095 Mpa条件下真空浓缩至原体积的1/4， 得果汁 浓缩液； 合并果渣和果汁浓缩液， 混合均匀， 通过大孔吸附树脂 Diaion HP 2MGL柱， 用蒸馏 水淋洗， 调节1.0 mL/min的流速至洗脱液呈无色透明后， 改用pH 3.5的65%的乙醇溶液洗 脱， 收集紫红色的色素洗脱液， 洗脱液流速控制在1.5 mL/min。 。

29、将收集的紫红色洗脱液在旋 转蒸发仪中真空浓缩干燥或冷冻干燥， 得桑葚提取物干粉， 称重计算得率， 样品避光干燥保 存； 得到的桑葚提取物的收率为1.25%， 提取物中即花色素的含量达到26.3%。 0027 香榧叶提取物的制备方法如下： 将干燥的香榧叶置破碎提取器的容器中， 加入 70乙醇进行室温破碎提取2次， 将原料打碎成匀浆状， 且能通过20目筛的粒度； 若香榧叶 干物重量为1 kg则含水乙醇用量为5升， 每次破碎提取时间为2分钟； 将提取液抽滤， 弃去滤 渣， 合并的提取液在60， 真空度为0.095 Mpa条件下采用真空薄膜浓缩装置进行闪蒸浓 缩， 至原体积的1/5； 将浓缩液采用体积。

30、比1:1的石油醚萃取4次， 弃去石油醚， 水层再采用体 积比1: 2的乙酸乙酯萃取4次。 合并萃取液， 在旋转蒸发仪中进行减压浓缩干燥成干粉， 用 研钵研细后得到香榧叶提取物干粉， 提取物的收率达到11.3。 0028 黑米提取物的制备方法如下： 将干燥的黑米置破碎提取器的容器中， 加入重量比 1:6的60乙醇进行室温破碎提取2次， 每次破碎提取时间为3分钟， 将黑米打碎且能通过20 目筛的粒度； 将提取液抽滤， 合并的滤液在60， 真空度为0.095 Mpa条件下采用真空薄膜 浓缩装置进行闪蒸浓缩至原体积的1/6； 然后将浓缩液进行低温真空干燥成干粉， 得到的黑 米提取物的收率为12.5%。。

31、 0029 实施例2 0030 该用于防治肝纤维化的制剂， 由桑葚提取物、 香榧叶提取物、 黑米提取物、 酵母硒 按照重量比40g: 40g : 20g: 400 g混合均匀制成； 说 明 书 4/9 页 7 CN 104721622 B 7 0031 所述的桑椹提取物的制备方法如下： 取新鲜桑葚， 用压榨机榨汁后， 离心处理或采 用压滤方法分离果汁与果渣； 按照果渣重量为1 kg则含水乙醇用量为5升的比例加入50%的 乙醇溶液， 并加入盐酸调节pH 3.5， 超声提取2次， 每次40 分钟； 合并果渣提取液， 采用闪蒸 浓缩装置在65， 真空度为0.095 Mpa条件下真空浓缩至原体积的1/。

32、5， 得果渣浓缩液； 将果 汁采用闪蒸浓缩装置在65， 真空度为0.095 Mpa条件下真空浓缩至原体积的1/4， 得果汁 浓缩液； 合并果渣和果汁浓缩液， 混合均匀， 通过大孔吸附树脂 Diaion HP 2MGL柱， 用蒸馏 水淋洗， 调节1.5 mL/min的流速至洗脱液呈无色透明后， 改用pH4.0的60%的乙醇溶液洗脱， 收集紫红色的色素洗脱液， 洗脱液流速控制在1.5 mL/min。 将收集的紫红色洗脱液在旋转 蒸发仪中真空浓缩干燥或冷冻干燥， 得桑葚提取物干粉， 称重计算得率， 样品避光干燥保 存； 得到的桑葚提取物的收率为1.15%， 提取物中即花色素的含量达到24.9%。 0。

33、032 香榧叶提取物的制备方法如下： 将干燥的香榧叶置破碎提取器的容器中， 加入 60乙醇进行室温破碎提取3次， 将原料打碎成匀浆状， 且能通过20目筛的粒度； 若香榧叶 干物重量为1 kg则含水乙醇用量为6升， 每次破碎提取时间为3分钟； 将提取液抽滤， 弃去滤 渣， 合并的提取液在60， 真空度为0.095 Mpa条件下采用真空薄膜浓缩装置进行闪蒸浓 缩， 至原体积的1/6； 将浓缩液采用体积比1: 2的石油醚萃取3次， 弃去石油醚， 水层再采用 体积比1:2的乙酸乙酯萃取5次； 合并萃取液， 在旋转蒸发仪中进行减压浓缩干燥成干粉， 用 研钵研细后得到香榧叶提取物干粉， 提取物的收率达到1。

34、2.1。 0033 黑米提取物的制备方法如下： 将干燥的黑米置破碎提取器的容器中， 加入重量比 1:8的70乙醇进行室温破碎提取次， 每次破碎提取时间为2分钟， 将黑米打碎且能通过20 目筛的粒度； 将提取液抽滤， 合并的滤液在60， 真空度为0.095 Mpa条件下采用真空薄膜 浓缩装置进行闪蒸浓缩至原体积的1/8； 然后将浓缩液进行低温真空干燥成干粉， 得到的黑 米提取物的收率为16.6%。 0034 实施例3 0035 该用于防治肝纤维化的制剂， 由桑葚提取物、 香榧叶提取物、 黑米提取物、 酵母硒 按照重量比45g: 35g : 20g: 500 g混合均匀制成； 0036 所述的桑椹。

35、提取物的制备方法如下： 取新鲜桑葚， 用压榨机榨汁后， 离心处理或采 用压滤方法分离果汁与果渣； 按照果渣重量为1 kg则含水乙醇用量为3升的比例加入50%的 乙醇溶液， 并加入盐酸调节pH 4.0， 超声提取2次， 每次40 分钟； 合并果渣提取液， 采用闪蒸 浓缩装置在65， 真空度为0.095 Mpa条件下真空浓缩至原体积的1/5， 得果渣浓缩液； 将果 汁采用闪蒸浓缩装置在60， 真空度为0.095 Mpa条件下真空浓缩至原体积的1/6， 得果汁 浓缩液； 合并果渣和果汁浓缩液， 混合均匀， 通过大孔吸附树脂 Diaion HP 2MGL柱， 用蒸馏 水淋洗， 调节0.5 mL/min。

36、的流速至洗脱液呈无色透明后， 改用pH 3.5的60%的乙醇溶液洗 脱， 收集紫红色的色素洗脱液， 洗脱液流速控制在1.0 mL/min； 将收集的紫红色洗脱液在旋 转蒸发仪中真空浓缩干燥或冷冻干燥， 得桑葚提取物干粉， 称重计算得率， 样品避光干燥保 存； 得到的桑葚提取物的收率为1.13%， 提取物中即花色素的含量达到21.4%。 0037 香榧叶提取物的制备方法如下： 将干燥的香榧叶置破碎提取器的容器中， 加入 65乙醇进行室温破碎提取2次， 将原料打碎成匀浆状， 且能通过20目筛的粒度； 若香榧叶 干物重量为1 kg则含水乙醇用量为8升， 每次破碎提取时间为2分钟； 将提取液抽滤， 弃。

37、去滤 渣， 合并的提取液在60， 真空度为0.095 Mpa条件下采用真空薄膜浓缩装置进行闪蒸浓 说 明 书 5/9 页 8 CN 104721622 B 8 缩， 至原体积的1/8； 将浓缩液采用体积比1:1.5的石油醚萃取3次， 弃去石油醚， 水层再采用 体积比1:1.5的乙酸乙酯萃取3次； 合并萃取液， 在旋转蒸发仪中进行减压浓缩干燥成干粉， 用研钵研细后得到香榧叶提取物干粉， 提取物的收率达到10.8。 0038 黑米提取物的制备方法如下： 将干燥的黑米置破碎提取器的容器中， 加入重量比 1:8的55乙醇进行室温破碎提取2次， 每次破碎提取时间为1分钟， 将黑米打碎且能通过20 目筛的。

38、粒度； 将提取液抽滤， 合并的滤液在60， 真空度为0.095 Mpa条件下采用真空薄膜 浓缩装置进行闪蒸浓缩至原体积的1/8； 然后将浓缩液进行低温真空干燥成干粉， 得到的黑 米提取物的收率为18.1%。 0039 实施例4 0040 该用于防治肝纤维化的制剂， 由桑葚提取物、 香榧叶提取物、 黑米提取物、 酵母硒 按照重量比40g: 30g : 30g:400 g混合均匀制成； 0041 所述的桑椹提取物的制备方法如下： 取新鲜桑葚， 用压榨机榨汁后， 离心处理或采 用压滤方法分离果汁与果渣； 按照果渣重量为1 kg则含水乙醇用量为3升的比例加入60%的 乙醇溶液， 并加入盐酸调节pH 3。

39、.0， 超声提取3次， 每次50 分钟； 合并果渣提取液， 采用闪蒸 浓缩装置在60， 真空度为0.095 Mpa条件下真空浓缩至原体积的1/4， 得果渣浓缩液； 将果 汁采用闪蒸浓缩装置在60， 真空度为0.095 Mpa条件下真空浓缩至原体积的1/4， 得果汁 浓缩液； 合并果渣和果汁浓缩液， 混合均匀， 通过大孔吸附树脂 Diaion HP 2MGL柱， 用蒸馏 水淋洗， 调节1.0 mL/min的流速至洗脱液呈无色透明后， 改用pH4.0的55%的乙醇溶液洗脱， 收集紫红色的色素洗脱液， 洗脱液流速控制在1.5 mL/min。 将收集的紫红色洗脱液在旋转 蒸发仪中真空浓缩干燥或冷冻干燥。

40、， 得桑葚提取物干粉， 称重计算得率， 样品避光干燥保 存； 得到的桑葚提取物的收率为1.22%， 提取物中即花色素的含量达到27.5%。 0042 香榧叶提取物的制备方法如下： 将干燥的香榧叶置破碎提取器的容器中， 加入 65乙醇进行室温破碎提取2次， 将原料打碎成匀浆状， 且能通过40目筛的粒度； 若香榧叶 干物重量为1 kg则含水乙醇用量为7升， 每次破碎提取时间为1分钟； 将提取液抽滤， 弃去滤 渣， 合并的提取液在60， 真空度为0.095 Mpa条件下采用真空薄膜浓缩装置进行闪蒸浓 缩， 至原体积的1/7； 将浓缩液采用体积比1: 1的石油醚萃取3次， 弃去石油醚， 水层再采用 体。

41、积比1:2的乙酸乙酯萃取3次； 合并萃取液， 在旋转蒸发仪中进行减压浓缩干燥成干粉， 用 研钵研细后得到香榧叶提取物干粉， 提取物的收率达到9.4。 0043 黑米提取物的制备方法如下： 将干燥的黑米置破碎提取器的容器中， 加入重量比 1:7的65乙醇进行室温破碎提取次， 每次破碎提取时间为3分钟， 将黑米打碎且能通过20 目筛的粒度； 将提取液抽滤， 合并的滤液在60， 真空度为0.095 Mpa条件下采用真空薄膜 浓缩装置进行闪蒸浓缩至原体积的1/7； 然后将浓缩液进行低温真空干燥成干粉， 得到的黑 米提取物的收率为15.8%。 0044 以下通过相应的试验对本发明作进一步说明。 0045。

42、 试验一： 本发明实施例1-4对四氯化碳诱导的大鼠抗肝纤维化的试验研究。 0046 谷丙转氨酶 （ALT） 试剂盒、 谷草转氨酶 （AST） 试剂盒、 羟脯氨酸 （HYP） 试剂盒(南京 建成)， 透明质酸酶 （HA） 试剂盒、 III型前胶原 （PCIII） 试剂盒 （上海） 。 0047 雄性大鼠， 体重180-200g,清洁级 （购自浙江省实验动物中心） 。 实验前一周饲以足 够的水和标准鼠料供自由食用。 实验动物随机分为6组， 每组10只， 即正常组、 模型组、 阳性 说 明 书 6/9 页 9 CN 104721622 B 9 组 （秋水仙碱1mg/kg） 、 药物高剂量组800mg。

43、/kg、 中剂量组400mg/kg、 低剂量组200mg/kg。 除 正常组给予等体积的生理盐水外， 其余5组大鼠均腹腔注射20%四氯化碳 （溶于花生油） ， 连 续注射6周， 每周2次， 造成大鼠肝纤维化模型。 造模后第6周末开始灌胃， ， 阳性组给予秋水 仙碱0.2mg/kg， 药物组分别给予800mg/kg, 400mg/kg， 200mg/kg剂量灌胃， 同时模型组和空 白组给予等体积的生理盐水， 连续2周。 于末次给药及生理盐水后24h， 用10%水合氯醛麻醉 大鼠， 之后处死大鼠腹腔取血， 分离血清， 置于-80冰箱中， 供生化指标分析。 取出肝脏， 脾 脏， 进行称重。 将肝脏置。

44、于冷的生理盐水中清洗， 称重， 取部分放-80冰箱中， 供生化指标 分析， 一部分置于10%中性甲醛溶液固定， 做病理切片分析。 0048 统计学处理： 数据用平均值标准差的形式表示， 结果使用方差分析， 显著性检验 均使用SPSS19.0中的t检验， 以P0.05为有显著性差异， P0.01为有极显著差异。 0049 大鼠肝重、 脾脏重量的测定： 见表1和表2。 从表1可以看出， 与对照组相比， 模型组 大鼠的肝脏重量， 由于肝纤维化而明显变小； 与模型组相比， 给药组大鼠的肝脏重量有所升 高， 且有显著性差异。 从表2看出， 模型组大鼠的脾脏重显著高于其它各组， 有显著性差异； 与模型组相。

45、比， 给药组大鼠的脾脏重量有所下降， 说明四氯化碳诱导大鼠肝纤维化后脾脏 重量减小。 以上结果表明， 实施例1-4可以显著改善四氯化碳诱导的大鼠肝重、 脾脏的重量， 高浓度药物组的影响效果最显著。 0050 0051 0052 血清中ALT、 AST活性测定： 血清AST和ALT活性测定是国内外广泛应用的反映肝细 胞损伤的指标， 在肝功能受损及肝纤维化时， 血清AST和ALT升高。 血清中ALT、 AST的含量用 ALT试剂盒、 AST试剂盒,采用Infinite M 200酶标仪(瑞士Tecan)， 根据说明书进行测定， 见 表3和表4。 从表中数据看出， 与对照组相比， 模型组大鼠血清中谷。

46、丙转氨酶和血清谷草转氨 酶显著上升， 有显著性差异。 与模型组相比， 给药组和阳性组大鼠的血清谷丙转氨酶和血清 谷草转氨酶显著降低， 特别是给药组的高和中剂量组降低最明显， 表明实施例1-4对四氯化 碳诱导的大鼠血清ALT和AST有明显的降酶作用， 能缓解肝纤维化的症状， 进而保护肝脏。 说 明 书 7/9 页 10 CN 104721622 B 10 0053 0054 0055 血清中HYP、 HA、 PCIII的测定： 羟脯氨酸 （HYP） 的量能反映结缔组织疾病的胶原代 谢情况， 肝纤维化时， 肝内主要增加的成分为胶原纤维， 羟脯氨酸为胶原纤维所特有， 测定 肝羟脯氨酸的含量， 可以判。

47、断肝纤维化程度。 血清中HYP、 HA、 PCIII的含量用HYP试剂盒， HA、 PCIII试剂盒采用Infinite M 200酶标仪(瑞士Tecan)， 根据说明书进行测定， 见表5-7。 由 表5可知， 与对照组相比， 模型组大鼠血清中的HYP显著升高； 与模型组相比， 给药组大鼠血 清中HYP显著降低， 特别是中和低剂量组降低明显， 且差异极显著。 以上结果表明， 实施例1- 4可以有效的降低四氯化碳诱导的大鼠血清中HYP的含量， 即使得肝纤维化程度得到减轻。 0056 0057 血清HA、 PCIII水平检测可以观察肝纤维化病情演变情况以及临床治疗效果， 提 高肝纤维化诊断的准确性。

48、和可靠性。 透明质酸(HA)是构成肝细胞外基质的主要成分之一， 主要在肝脏代谢， 随肝炎的发展， 从急性肝炎发展至肝硬化， HA的水平逐步升高， 晚期肝硬 化时有广泛的结蒂组织增生， 肝损害也严重， HA可明显增高， HA升高幅度与肝纤维化改变 呈正相关。 PCIII （III型前胶原蛋白） 随胶原合成的活跃而增加， 与肝纤维化形成的活动程 度有密切相关性。 由表6-7可知， 与正常组相比， 模型组大鼠血清中的HA、 PCIII显著升高， 同 时， 与模型组相比， 给药组大鼠血清中的HA、 PCIII显著降低， 且具有显著性差异， 与以上实 验结果相对应， 特别是低剂量组可以有效的降低四氯化碳诱导的大鼠血清中HA、 PCIII的活 性。 以上结果表明， 实施例1-4可以有效的降低四氯化碳诱导的大鼠血清中HA、 PCIII的含 量， 表明经过给药组治疗后， 大鼠肝纤维化病情得到明显缓解。 说 明 书 8/9 页 11 CN 104721622 B 11 0058 0059 说 明 书 9/9 页 12 CN 104721622 B 12 。