技术领域
本发明涉及护肤精华液，尤其是一种基于人间充质干细胞分泌活性因子的护肤精华液及其制备方法。
背景技术
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是一组源于基质的异质细胞群，可以从人体大多数组织获取。它们具有自我更新能力、组织修复、免疫调节能力，可以向中胚层谱系分化，例如：脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞等，此外还能够向其它胚层谱系细胞分化，例如向表皮细胞/血管内皮细胞分化。
间充质干细胞培养体系中含有多种大量的活性成分，如：干细胞生长因子(SCF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、内皮细胞生长因子(VEGF)、表皮细胞生长因子(EGF)、细胞集落刺激因子、白细胞介素(IL)、胶原蛋白、透明质酸等80余种活性物质。精华液基础配方成分，另外添加促进皮肤修复的寡肽-1能促进细胞的增殖分化，以新生细胞代替衰老细胞和死亡细胞，使肌肤保持最佳生理状态，是决定肌肤活力和健康的源泉，寡肽-2能够促进成纤维细胞增殖分化，具有深层修复作用，可用于新产生的痘坑、激光后、点斑点痣祛痘后修复，红血丝修复。调理肤质：改善细胞生长的内环境，促进弹性纤维和胶原蛋白的合成，调理肌肤纹理，还原肤色红润光泽，使皮肤柔软润滑、富有弹性，寡肽-5能够促进表皮角质细胞生长，修复受损细胞，加速细胞的新陈代谢，增加皮肤的免疫力和抵抗力，使肌肤回复健康，亮白状态。可用于皮肤的紧致修复，解决各种皮肤问题。目前，已经有将间充质干细胞分泌的活性因子应用于皮肤的修复及治疗的报道。但是用于化妆品中用于修复面部以及身体各种皮肤问题的修复没有报道。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，提供一种基于人间充质干细胞分泌活性因子的护肤精华液及其制备方法，利用干细胞分泌的多种细胞因子用于皮肤各种问题的修复、保湿，使皮肤细腻有光泽。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种基于人间充质干细胞分泌活性因子的护肤精华液的制备方法，包括以下步骤：
(1)人间充质干细胞培养：从细胞库中选取P2-P6的人间充质干细胞复苏，接种批次记为第一批次、第二批次、第三批次，接种密度分别为最大融合度的50％-60％、35％-45％、20％-30％；细胞接种完成，放于二氧化碳培养箱培养，温度37℃，二氧化碳体积比浓度5％；
(2)第一批次细胞融合度达到70％-80％时，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养；
(3)饥饿培养12-24小时后，第一批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清备用；
(4)取培养的第二批次细胞，当细胞融合度达到70％-80％，以生理盐水清洗第二批次细胞2次，用步骤(3)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(5)饥饿培养12-24小时后，第二批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清备用；
(6)取培养的第三批次细胞，当细胞融合度达到70％-80％，以生理盐水清洗第三批次细胞2次，用步骤(5)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(7)饥饿培养12-24小时后，第三批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清，得到高浓度间充质干细胞活性因子提取物；
(8)干细胞活性因子提取物与精华液基础配方按照比例进行配比，提取物：精华液基础配方质量比为1:5到1:100；
所述精华液基础配方如下，百分比为质量百分比：
所述人间充质干细胞包括人脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、月经血间充质干细胞或牙髓间充质干细胞。
上述制备方法制得的基于人间充质干细胞分泌活性因子的护肤精华液。
本发明的有益效果是：将细胞进行饥饿培养，使得细胞分泌的各种活性成分的浓度都得到了提高，可促进皮肤的损伤修复，并起到消除炎症，促进皮肤新陈代谢等作用。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明：
本发明的一种基于人间充质干细胞分泌活性因子的护肤精华液的制备方法，包括以下步骤：
(1)人间充质干细胞培养：从细胞库中选取P2-P6的人间充质干细胞复苏，接种批次记为第一批次、第二批次、第三批次，接种密度分别为最大融合度的50％-60％、35％-45％、20％-30％；细胞接种完成，放于二氧化碳培养箱培养，温度37℃，二氧化碳体积比浓度5％；
(2)第一批次细胞融合度达到70％-80％时，以生理盐水清洗细胞2次，用复方电解质注射液进行饥饿培养；
(3)饥饿培养12-24小时后，第一批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清备用；
(4)取培养的第二批次细胞，当细胞融合度达到70％-80％，以生理盐水清洗第二批次细胞2次，用步骤(3)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(5)饥饿培养12-24小时后，第二批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清备用；
(6)取培养的第三批次细胞，当细胞融合度达到70％-80％，以生理盐水清洗第三批次细胞2次，用步骤(5)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(7)饥饿培养12-24小时后，第三批次细胞融合度达90％-95％，收取细胞培养上清，3000-4500g条件下离心5-8min除去沉淀，取离心后上清，得到高浓度间充质干细胞活性因子提取物；
(8)干细胞活性因子提取物与精华液基础配方按照比例进行配比，提取物：精华液基础配方质量比为1:5到1:100；
所述精华液基础配方如下，百分比为质量百分比：
所述人间充质干细胞包括人脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、月经血间充质干细胞或牙髓间充质干细胞。
上述制备方法制得的基于人间充质干细胞分泌活性因子的护肤精华液。
本发明间充质干细胞在培养过程中会分泌多种大量的细胞因子，这些人间充质干细胞分泌的活性细胞因子能够促进损伤皮肤组织的结构重建与再生修复，减少疤痕组织的产生；可调节局部组织微环境，促进血管新生，改善局部供血，从而达到缓解缺血症状、促进组织新生的效果；还可调节局部组织的免疫功能，减少创面组织的细菌感染及炎症反应，对于皮肤状态的调节，皮肤各种问题的解决修复有很好的效果。
其中人间充质干细胞活性因子为饥饿培养后提取，其余成分为精华液基础配方成分，另外添加促进皮肤修复的寡肽-1能促进细胞的增殖分化，以新生细胞代替衰老细胞和死亡细胞，使肌肤保持最佳生理状态，是决定肌肤活力和健康的源泉，寡肽-2能够促进成纤维细胞增殖分化，具有深层修复作用，可用于新产生的痘坑、激光后、点斑点痣祛痘后修复，红血丝修复。调理肤质：改善细胞生长的内环境，促进弹性纤维和胶原蛋白的合成，调理肌肤纹理，还原肤色红润光泽，使皮肤柔软润滑、富有弹性，寡肽-5能够促进表皮角质细胞生长，修复受损细胞，加速细胞的新陈代谢，增加皮肤的免疫力和抵抗力，使肌肤回复健康，亮白状态。可用于皮肤的紧致修复，解决各种皮肤问题。
实施例1
本发明的基于人间充质干细胞分泌活性因子的护肤精华液的制备方法，包括以下步骤：
(1)间充质干细胞培养：从细胞库中选取P2的脐带间充质干细胞复苏，接种批次记为第一批次、第二批次、第三批次，接种密度分别为最大融合度的60％、40％、25％；细胞接种完成，放于二氧化碳培养箱培养，温度37℃，二氧化碳体积比浓度5％；
(2)24小时后，第一批次细胞融合度达到75％时，以生理盐水清洗细胞2次，用40ml复方电解质注射液(中国大冢制药有限公司生产的复方电解质葡萄糖MG3注射液)进行饥饿培养；
(3)饥饿培养20小时后，第一批次细胞融合度达90％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心6min除去沉淀，取离心后上清备用；
(4)取培养的第二批次细胞，细胞融合度达到75％，以生理盐水清洗第二批次细胞2次，用步骤(3)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(5)饥饿培养20小时后，第二批次细胞融合度达95％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心6min除去沉淀，取离心后上清备用；
(6)取培养的第三批次细胞，细胞融合度达到80％，以生理盐水清洗第三批次细胞2次，用步骤(5)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(7)饥饿培养20小时后，第三批次细胞融合度达95％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心6min除去沉淀，取离心后上清，得到高浓度间充质干细胞提取物。
(8)把收集的提取物按照质量比1:50的比例与基础配方进行混合，基础配方为：
名称 原料质量百分比％ 水 75.085 甘油 20 甜菜碱 2 丁二醇 1 尿囊素 0.5 水解胶原 0.5 生育酚 0.5 卡波姆 0.1 羟苯甲脂 0.2 三乙醇胺 0.1 寡肽1 0.005 寡肽2 0.005 寡肽5 0.005
张XX,女性，52岁，由于平时只注重脸部保养，而忽视了颈部的护理，导致脖子上有三条特别明显的颈纹和几条比较淡的小细纹，自从发现这个问题后开始使用各种祛除颈纹的产品，大约有一年的时间，未见明显效果，经朋友介绍使用了这款精华液，使用大约一月不到两个月的时间颈纹明显变淡，连续使用三个月以后颈纹淡到几乎看不到。
实施例2
本发明的基于人间充质干细胞分泌活性因子的护肤精华液的制备方法，包括以下步骤：
(1)间充质干细胞培养：从细胞库中选取P4的脂肪间充质干细胞复苏，接种批次记为第一批次、第二批次、第三批次，接种密度分别为最大融合度的65％、45％、30％；细胞接种完成，放于二氧化碳培养箱培养，温度37℃，二氧化碳体积比浓度5％；
(2)20小时后，第一批次细胞融合度达到75％时，以生理盐水清洗细胞2次，用40ml复方电解质注射液进行饥饿培养；
(3)饥饿培养24小时后，第一批次细胞融合度达90％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心6min除去沉淀，取离心后上清备用；
(4)取培养的第二批次细胞，细胞融合度达到75％，以生理盐水清洗第二批次细胞2次，用步骤(3)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(5)饥饿培养24小时后，第二批次细胞融合度达95％，收取细胞培养上清，4000g条件下离心6min除去沉淀，取离心后上清备用；
(6)取培养的第三批次细胞，细胞融合度达到80％，以生理盐水清洗第三批次细胞2次，用步骤(5)中细胞培养上清进行饥饿培养；
(7)饥饿培养24小时后，第三批次细胞融合度达95％，收取细胞培养上清，3500g条件下离心6min除去沉淀，取离心后上清，得到高浓度间充质干细胞提取物。
(8)把收集的提取物按照质量比1:30的比例与基础配方进行混合，基础配方为：
黄XX，女性，32岁，由于刚刚生完二胎，脸部妊娠斑特别明显，而且面积较大，分布不均。修完产假出来工作时正好为夏天，由于日晒的因素更加重了脸部的妊娠斑的颜色，甚是苦恼，开始使用各种大牌子的祛斑产品，效果甚微。偶然的机会在网络上看到了本款产品，抱着试试看的态度买了一瓶，使用大约4周后，妊娠斑明显变淡。大约两个月后妊娠斑几乎消失，稍微涂点修饰化妆品后根本看不来。
张XX，女性，42岁。由于过度注重眼部保养，常年使用国际大牌眼霜，导致眼部周围营养富集过剩，在眼周产生了很多小脂肪粒，由于眼部比较敏感，不能强硬挤出来，导致脂肪粒越积越多，本来想保持眼部年轻结果反而显得老，非常苦恼，由于目前市面上没有专门针对眼部脂肪粒的产品，也不敢再使用眼霜，偶然的一次机会接触到了我们的产品，使用大约不到一个月的时间脂肪粒明显减少，连个月后几乎完全消失。
综上所述，本发明的内容并不局限在上述的实施例中，相同领域内的有识之士可以在本发明的技术指导思想之内可以轻易提出其他的实施例，但这种实施例都包括在本发明的范围之内。