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1、(10)授权公告号 CN 102100836 B (45)授权公告日 2012.07.04 CN 102100836 B *CN102100836B* (21)申请号 201110025260.0 (22)申请日 2011.01.24 A61K 36/8965(2006.01) A61P 35/00(2006.01) (73)专利权人 四川国康药业有限公司 地址 610091 四川省成都市青羊区文家场蛟 龙工业港高新区 A 区 18 座 (72)发明人 石万棋 李剑忠 左治国 张萍 邓聪 (74)专利代理机构 成都高远知识产权代理事务 所 ( 普通合伙 ) 51222 代理人 李高峡 CN 1。
2、01028418 A,2007.09.05, 全文 . CN 1857596 A,2006.11.08, 全文 . 张杲等 . 金国梁辨治肿瘤经验介绍 .山西 中医 .2008, 第 24 卷 ( 第 10 期 ), 第 4-5 页 . 王锦云 . 中医 “扶正培本” 法治疗恶性肿瘤的 研究 . 肿瘤学杂志 .1980,( 第 01 期 ), 第 58-66 页 . (54) 发明名称 一种治疗肿瘤的药物组合物及其制备方法和 用途 (57) 摘要 本发明提供了一种治疗肿瘤的药物组合物， 它是由下述重量配比的原料药制备而成的药剂 ： 乌骨藤50500份、 白花蛇舌草30450份、 石刁 柏 10。
3、 250 份、 黄芪 10 250 份、 杜仲 10 250 份。本发明提供了该药物组合物的制备方法和用 途。本发明药物用于治疗肿瘤， 可用于治疗肺癌、 肝癌、 胃癌或食道癌， 药效明显优于单独使用的药 材， 为临床提供了一种新的用药选择。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 胡嘉蕴 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 5 页 1/1 页 2 1. 一种治疗肿瘤的药物组合物， 其特征在于 ： 它是由下述重量配比的原料药制备而成 的药剂 ： 乌骨藤 50 500 份、 白花蛇舌草 30 450 份、。
4、 石刁柏 10 250 份、 黄芪 10 250 份、 杜仲 10 250 份。 2. 根据权利要求 1 所述的治疗肿瘤的药物组合物， 其特征在于 ： 它是由下述重量配比 的原料药制备而成的药剂 ： 乌骨藤 450 份、 白花蛇舌草 300 份、 石刁柏 150 份、 黄芪 150 份、 杜仲 150 份。 3、 根据权利要求1或2所述的药物组合物， 其特征在于 ： 它是由乌骨藤、 白花蛇舌草、 石刁柏、 黄芪、 杜仲的水或有机溶剂提取物为活性成分， 加入药学上可接受的辅料或辅助性 成分制备成药学上常用的药剂。 4、 根据权利要求 3 所述的药物组合物， 其特征在于 ： 所述的药剂是片剂、 胶。
5、囊剂、 颗粒 剂、 丸剂或口服液。 5、 一种制备权利要求 1 所述的药物组合物的方法， 它包括如下步骤 ： a、 称取下述重量配比的原料 ： 乌骨藤 50 500 份、 白花蛇舌草 30 450 份、 石刁柏 10 250 份、 黄芪 10 250 份、 杜仲 10 250 份 ； b、 取乌骨藤粉碎成 10 目 12 目的颗粒， 再用水浸泡后与白花蛇舌草、 杜仲用水提取， 合并提取液， 滤过、 浓缩成浸膏， 备用 ； c、 取石刁柏粉碎成 150 目 200 目极细粉， 备用 ； d、 取黄芪加水提取， 滤过， 滤液浓缩至在 50时测相对密度为 1.26 的浸膏， 加醇使乙 醇含量为 70。
6、%， 搅匀， 静置 24 小时， 收集沉淀， 得黄芪多糖浸膏， 上清液回收乙醇， 浓缩成在 38时测相对密度为 1.36 的浸膏 ； e、 将b步骤的浸膏和d步骤制备黄芪多糖浸膏及石刁柏极细粉、 混合均匀， 加入药学上 可接受的辅料或辅助性成分， 制备成药学上常用的制剂。 6、 一种制备权利要求 1 所述的药物组合物的方法， 它包括如下步骤 ： a、 称取下述重量配比的原料 ： 乌骨藤 50 500 份、 白花蛇舌草 30 450 份、 石刁柏 10 250 份、 黄芪 10 250 份、 杜仲 10 250 份 ； b、 取乌骨藤粉碎成 10 目 12 目的颗粒， 用水浸泡 24 小时后与白。
7、花蛇舌草、 杜仲、 黄芪 加水提取， 合并提取液， 滤过、 浓缩成浸膏， 备用 ； c、 取石刁柏粉碎成 150 目 200 目极细粉， 备用 ； d、 将上述浸膏及石刁柏极细粉、 混合均匀， 加入药学上可接受的辅料或辅助性成分， 制 备成药学上常用的制剂。 7、 权利要求 1-4 任意一项所述的组合物在制备治疗肿瘤的药物中的用途。 8、 根据权利要求 7 所述的用途， 其特征在于 ： 所述的药物是治疗肺癌、 肝癌、 胃癌或食 道癌的药物。 权 利 要 求 书 CN 102100836 B 2 1/5 页 3 一种治疗肿瘤的药物组合物及其制备方法和用途 技术领域 0001 本发明涉及一种治疗肿。
8、瘤的药物组合物， 属药物领域。 背景技术 0002 肿瘤 (Tumor) 是机体在各种致癌因素作用下， 局部组织的某一个细胞在基因水平 上失去对其生长的正常调控， 导致其克隆性异常增生而形成的新生物。 一般认为， 肿瘤细胞 是单克隆性的， 即一个肿瘤中的所有瘤细胞均是一个突变的细胞的后代。一般将肿瘤分为 良性和恶性两大类。所有的恶性肿瘤总称为癌症 (cancer)。 发明内容 0003 本发明的技术方案是提供了一种治疗肿瘤的药物组合物。 本发明的另一技术方案 是提供了一种治疗肿瘤的药物组合物的制备方法和用途。 0004 本发明所述的药物组合物， 它是由下述重量配比的原料药制备而成的药剂 ： 0。
9、005 乌骨藤 50 500 份、 白花蛇舌草 30 450 份、 石刁柏 10 250 份、 黄芪 10 250 份、 杜仲 10 250 份。 0006 进一步优选地， 它是由下述重量配比的原料药制备而成的药剂 ： 0007 乌骨藤 450 份、 白花蛇舌草 300 份、 石刁柏 150 份、 黄芪 150 份、 杜仲 150 份。 0008 本发明药物是由乌骨藤、 白花蛇舌草、 石刁柏、 黄芪、 杜仲的水或有机溶剂提取物 为活性成分， 加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成药学上常用的药剂。 0009 其中， 所述的药剂是片剂、 胶囊剂、 颗粒剂、 丸剂或口服液。 0010 本发明还提。
10、供了一种制备所述的药物组合物的方法， 它包括如下步骤 ： 0011 a、 称取下述重量配比的原料 ： 0012 乌骨藤 50 500 份、 白花蛇舌草 30 450 份、 石刁柏 10 250 份、 黄芪 10 250 份、 杜仲 10 250 份 ； 0013 b、 取乌骨藤粉碎成10目12目的颗粒， 再用水浸泡后与白花蛇舌草、 杜仲用水提 取， 合并提取液， 滤过、 浓缩成浸膏， 备用 ； 0014 c、 取石刁柏粉碎成 150 目 200 目极细粉， 备用 ； 0015 d、 取黄芪加水煎提取， 滤过， 滤液浓缩相对密度为 1.26(50 ) 的浸膏， 加醇使乙 醇含量为 70， 搅匀，。
11、 静置 24 小时， 收集沉淀， 得黄芪多糖浸膏， 上清液回收乙醇， 浓缩成相 对密度为 1.36(38 ) 的浸膏 ； 0016 e、 将上述浸膏、 黄芪多糖浸膏及石刁柏超细粉、 混合均匀， 加入药学上可接受的辅 料或辅助性成分， 制备成药学上常用的制剂。 0017 本发明还提供了一种制备所述的药物组合物的方法， 它包括如下步骤 ： 0018 a、 称取下述重量配比的原料 ： 0019 乌骨藤 50 500 份、 白花蛇舌草 30 450 份、 石刁柏 10 250 份、 黄芪 10 250 份、 杜仲 10 250 份 ； 说 明 书 CN 102100836 B 3 2/5 页 4 00。
12、20 b、 取乌骨藤粉碎成 10 目 12 目的颗粒， 用水浸泡 24 小时后与白花蛇舌草、 杜仲、 黄芪加水提取， 合并提取液， 滤过、 浓缩成浸膏， 备用 ； 0021 c、 取石刁柏粉碎成 150 目 200 目极细粉， 备用 ； 0022 d、 将上述浸膏及石刁柏极细粉、 混合均匀， 加入药学上可接受的辅料或辅助性成 分， 制备成药学上常用的制剂。 0023 本发明还提供了所述的组合物在制备治疗肿瘤的药物中的用途。 0024 其中， 所述的药物是治疗肺癌、 肝癌、 胃癌或食道癌的药物。 0025 本发明药物用于治疗肿瘤， 可用于治疗肺癌、 肝癌、 胃癌或食道癌， 药效明显优于 单独使用。
13、的药材， 为临床提供了一种新的用药选择。 具体实施方式 0026 实施例 1 本发明药物的制备 0027 乌骨藤 450g 白花蛇舌草 300g 石刁柏 150g 黄芪 150g 杜仲 150g 0028 取乌骨腾藤粉碎成 10 目 12 目的颗粒， 再用水浸泡 24 小时后与白花蛇舌草、 杜 仲用水提取， 合并提取液， 滤过、 浓缩成浸膏， 备用 ； 取石刁柏粉碎成150目200目极细粉， 备用 ； 取黄芪经水提取二次， 合并煎煮液， 滤过， 滤液浓缩相对密度为 1.26(50 ) 的浸膏， 加醇使乙醇含量为 70， 搅匀， 静置 24 小时， 收集沉淀， 得黄芪多糖浸膏， 上清液回收乙醇，。
14、 浓缩成相对密度为 1.36(38 ) 的浸膏， 用于其他品种的生产 ； 将上述浸膏、 黄芪多糖浸膏 及石刁柏超细粉、 混合均匀， 干燥， 粉碎成细粉， 加入适量辅料， 混匀， 过筛后装胶囊， 即得。 0029 实施例 2 本发明药物的制备 0030 乌骨藤 450g 白花蛇舌草 300g 石刁柏 150g 黄芪 150g 杜仲 150g 0031 取乌骨腾藤粉碎成 10 目 12 目的颗粒， 用水浸泡 24 小时后与白花蛇舌草、 杜仲、 黄芪加水提取， 合并提取液， 滤过、 浓缩成浸膏， 备用 ； 取石刁柏粉碎成 150 目 200 目极细 粉， 备用 ； 将上述浸膏及石刁柏极细粉、 混合均。
15、匀， 干燥， 粉碎成细粉， 加入适量辅料， 混匀， 过筛后装胶囊或制成其他剂型， 即得。 0032 实施例 3 本发明药物的制备 0033 取乌骨藤50g、 白花蛇舌草30g、 石刁柏10g、 黄芪10g、 杜仲10g， 按实施例1的方法 制备， 加入适量辅料， 压片， 得片剂。 0034 实施例 4 本发明药物的制备 0035 取乌骨藤 500g、 白花蛇舌草 450g、 石刁柏 250g、 黄芪 250g、 杜仲 250g， 按实施例 2 的方法制备， 加入适量辅料， 整粒、 制粒， 得颗粒剂。 0036 以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。 0037 试验例 1 本发明药物抗癌实验 。
16、0038 1. 实验材料 0039 1.1 实验动物 0040 ICR 小鼠， 清洁级， 体重 18-22g， 雌雄各半。由云南省实验动物中心提供。小鼠肉 瘤细胞系 S-180， 人胃癌细胞 N3和人肺癌细胞 A549， 由四川福临生物有限公司提供。复方 氟尿嘧啶注射液， 为白求恩医科大学制药厂生产。 0041 1.2 试剂 说 明 书 CN 102100836 B 4 3/5 页 5 0042 RPMI-1640 培养液， 胎牛血清 ( 北京元亨圣马生物技术研究所 )， 四甲基偶氮唑盐 (MTT)， 二甲基亚砜 (DMSO)。 0043 2. 实验 0044 2.1 抗肿瘤实验 0045 将。
17、220只小鼠随机分成11组， 每组20只， 雌雄各半。 以传代10d的腹水瘤小鼠为瘤 源动物， 颈椎脱臼处死， 在无菌操作下抽取腹水瘤液， 放入无菌烧杯中， 用生理盐水稀释成 1/4 的瘤细胞悬液。以 0.2mL/20g 的用量分别接种于每只小鼠右前肢腋窝皮下。分别灌胃 (ig)本发明药物(由实施例1制备)， 另一组为对照组(灌蒸馏水)。 剂量为0.5mL/20g d， 连续灌胃 15d。于灌胃结束后的次日进行解剖称取瘤重， 计算抑瘤率。 0046 表 1 本发明药物对荷瘤 S180小鼠肿瘤的抑制作用 0047 0048 结论 ： 本发明药物对肿瘤细胞生长抑制很好， 说明本发明药物有很好的抗癌。
18、药性， 其抗癌药性比单独中药提取液药性强。 0049 2.2 本发明药物对多种人癌细胞的体外增殖抑制作用 0050 取对数生长期的癌细胞 N3、 A549 细胞， 以 1105个 /mL 密度埋 96 孔板， 每孔 100L， 埋板12h后加药。 本发明药物设3个浓度， 分别为100、 500、 2500g/mL， 阳性对照药 复方氟尿嘧啶设 10、 50g/mL 等浓度， 每个浓度设 3 个重复。给药 48h 后， 小心吸弃孔内培 养液， 每孔以磷酸盐缓冲液洗一次， 再将上清液吸弃。每孔加培养液 100L， MTT 液 10L， 37， 5 CO2饱湿继续孵育 24h 至细胞生长旺盛贴壁后，。
19、 去掉培养液， 换成不含胎牛血清的 培养液。而后将细胞分组， 另设 RPMI-1640 培养液 ( 含 10胎牛血清 ) 不加药物和细胞只 加 DMSO 的调零孔组。随后小心吸弃孔内培养液。每孔加入 150lDMSO， 振荡 10min。用酶 标仪在 492nm 处测吸光度值 A， 求出 IC50值。 0051 细胞生长抑制率按下列公式计算 ： 0052 生长抑制率 ( 对照组平均 A 值 - 用药组平均 A 值 )/ 对照组平均 A 值 100 0053 表 2 本发明药物癌细胞 N3与 A549 细胞的增殖抑制作用 0054 说 明 书 CN 102100836 B 5 4/5 页 6 0。
20、055 结论 ： 本发明药物对两种体外培养的人癌细胞均有增殖抑制作用， 说明本发明药 物有很好的抗癌药性。 0056 试验例 2 本发明药物抗食道癌的药理研究 0057 1 实验试剂与材料人食管癌 EC9706 细胞株， 由中国医学科学院肿瘤研究所分子肿 瘤学国家重点实验室提供 ； 顺铂注射液 (2ml 10mg)， 云南个旧生物药业有限公司 ； eIF4E 多克隆抗体， 南京金斯瑞生物科技有限公司 ； 免疫组化 SP 检测试剂盒， 福州迈新生物技术 开发有限公司。 0058 2 实验步骤 0059 2.1 细胞分组培养将人食管癌 EC9706 细胞培养于 37含有 5 C02孵育箱中 24h。
21、 后加入 10l 的终浓度分别为 20g/ml、 40g/ml、 80g/ml 复方中药提取液、 空白对照 组、 顺铂阳性对照组 (3g/ml)、 培养液 DMEM 对照组共 6 组， 各组分别于加药 30h 后收集细 胞， 每组设 16 个复孔。 0060 2.2 免疫组化实验方法参照免疫组化 SP 试剂盒说明书进行操作。每次实验均以 PBS 代替一抗作阴性对照。以已知 eIF4E 蛋白阳性表达的食管鳞癌组织作阳性对照。 0061 2.3eIF4E 蛋白在食管癌 EC9706 细胞中的表达和评定 0062 eIF4E 蛋白免疫细胞化学染色阳性信号位于 EC9706 细胞胞浆， 呈棕黄色颗粒 。
22、； 阴 性对照组无阳性信号显示 ； 阳性对照有阳性信号显示。其评定如下表 ： 0063 表 3 免疫组化信号阳性结果的分级和评分标准 0064 0065 2.4 实验结果 0066 用不同浓度本发明中药提取液对 EC9706 作用 30h 后 eIF4E 蛋白表达结果见下表 ： 0067 表 4 不同浓度提取液对 EC9706 作用 30h 后 eIF4E 蛋白表达结果比较 0068 说 明 书 CN 102100836 B 6 5/5 页 7 0069 结论 ： 本发明中药提取后对 EC9706 细胞抑制作用随药物作用浓度的增高而增强， 即对人体食管癌有很好的疗效。 0070 试验例 3 本。
23、发明药物抗肝癌实验 0071 1. 实验动物昆明种小鼠， (202)g， 雌雄各半， 共 100 只。由四川大学动物实验中 心提供。小鼠肝癌 H22细胞株由四川福临生物有限公司提供。 0072 2. 方法 ： 将昆明种小鼠， 分为 5 组， 每组雌雄各半， 一组为正常对照组， 其余 4 组 将接种小鼠肝癌细胞 H22， 调细胞浓度为 2107/ml， 无菌条件下每只腹腔接种细胞悬液 0.2ml， 24h 后观察， 已接种小鼠分生理盐水组、 本发明中药提取液 I 组、 本发明中药提取液 II 组、 本发明中药提取液 III 组。生理盐水组 ： 每日给予腹腔注射生理盐水 0.2ml 1 次 /d，。
24、 灌胃生理盐水 0.4ml 2 次 /d ； 本发明中药提取液 I 组 ： 每日给予腹腔注射 10mg/kg 提取液 0.2ml 1 次 /d， 灌胃生理盐水 0.4ml 2 次 /d ； 本发明中药提取液 II 组 ： 每日给予腹腔注射 20mg/kg 提取液 0.2m11 次 /d， 灌胃生理盐水 0.4ml 2 次 /d ； 本发明中药提取液 III 组 ： 每 日给予腹腔注射 40mg/kg 提取液 0.2ml 1 次 /d， 灌胃生理盐水 0.4ml 2 次 /d。 0073 3. 实验结果。经给药 10 天后称量各组小鼠体重并处死小鼠 ： 剥离肿瘤组织和胸 腺、 脾脏并称重， 计算抑瘤率、 器官指数， 结果见下表。 0074 表 5 本发明中药提取液对感染肝癌细胞 H22抑瘤效果和器官指数影响 0075 0076 结论 ： 由实验结果可知本发明中药提取液对肝癌细胞 H22有抑瘤效果， 本发明中药 提取液对肝细胞癌有一定治疗效果。 说 明 书 CN 102100836 B 7 。