技术领域
本发明涉及一种总黄酮的提取方法，尤其是涉及一种药用红树植物老鼠簕总黄酮的提取 方法。
背景技术
老鼠簕(Acanthus illicifolius L)为爵床科(Acanthaceae)，老鼠簕属药用红树植物，生长 于海岸带潮间带，主要分布于印度、菲律宾、马来西亚等东南亚热带、亚热带国家或地区， 我国广东、广西、福建和海南亦有分布。该植物为灌木或亚灌木，是《全国中草药汇编》(1978 年)收录的重要的海洋高等药用植物([1]彭兴，龙盛京.老鼠簕的化学成分研究[J].中草 药2006，37(7)：971-973)。民间广泛用于治疗急慢性肝炎、哮喘、风湿、麻痹症、蛇伤等， 有镇痛和抗炎作用([2]Babu B H，Shylesh B S，Padikkala J.Antioxidant and hepatoprotective effect ofAcanthus ilicifolius[J].Fitoterapia，2001，72：272-277)。《中药大辞典》中记载，其性味 微咸、凉，根或全株入药。现代药理研究已经发现老鼠簕具有护肝、抗氧化和抗肿瘤的作用 ([3]王友绍，何磊，王清吉，等.药用红树植物的化学成分及其药理研究进展[J].中国海 洋药物，2004，2：26-31)。研究还发现，老鼠簕植物体内含有多种药物活性成分，其中黄酮 类化合物是主要活性成分之一([4]霍长虹，赵玉英，梁鸿，等.老鼠簕化学成分的研究 [J].2005，30(10)：763-765)。由于红树植物较高的单宁含量给次生代谢产物的提取和分离 带来了困难，因此寻找一个简便而有效的总黄酮提取方法，对开展药用红树植物老鼠簕的资 源开发与利用研究具有十分重要的意义。传统的提取总黄酮提取方法包括直接浸提法和索氏 提取法，它们存在的主要缺点是提取率较低，或者是需要较多的能耗。
发明内容
本发明的目的是提供一种提取率高的药用红树植物老鼠簕总黄酮的提取方法。
本发明包括以下步骤：
1)原料前处理：取老鼠簕植株全草，或老鼠簕植株的根、茎和叶中的至少1种，洗净， 干燥，粉碎，粉碎后得到老鼠簕粉料A，待用；
2)超声提取：将老鼠簕粉料A和溶剂I装入提取器，混匀后将提取器置于超声波仪中进 行首次提取，70～90℃下提取至少30min，得悬浮液，将悬浮液过滤，使液渣分离，得到老 鼠簕总黄酮粗提取液I和残渣I；将残渣I和溶剂II装入提取器，将提取器置于超声波仪中进 行第二次提取，80～95℃温度下提取至少40min，提取后的混合物过滤，得到老鼠簕总黄酮 粗提液II和残渣II，残渣II弃用；
3)浓缩：将老鼠簕粗提液I和老鼠簕粗提液II混合得混合液，将混合液减压蒸馏，得到 浓缩液即为药用红树植物老鼠簕总黄酮。
所述的溶剂I按体积百分比为浓度50％～70％的乙醇，溶剂II按体积百分比为浓度60％～ 80％的乙醇。
老鼠簕粉料A的质量(kg)与提取液I的体积(L)的比例为1∶(5～8)。
残渣I的质量(kg)与溶剂II的体积(L)的比例为1∶(10～15)。
在步骤1)中，粉碎后的老鼠簕粉料A的粒径最好小于0.2mm。
在步骤2)中，所述的过滤最好为抽滤。
在步骤3)中，减压蒸馏的温度最好为60～65℃，减压蒸馏的压力最好为6.9×104Pa。
本发明具有以下突出优点和显著的效果：
1)老鼠簕是海洋高等植物用红树植物药，其总黄酮具有重要的药用效果，目前还未见有 关相应的提取方法的报道。
2)本提取法所得的老鼠簕总黄酮的提取率高。例如，以对老鼠簕叶的总黄酮提取为例， 直接浸提法的提取率＜2.30％，索氏提取法的提取率＜3.72％，本发明提取率可稳定在3.82％左 右，多次提取的差别＜0.4％。
3)本提取法以超声提取为主，提取温度较低(≤95℃)，提取程序简单，比传统的索氏 提取法具有高效节能的效果。
4)本提取法的重复性好，多次重复试验的提取率差异能控制在0.2％以内。
5)本提取工艺温度适中，不会因提高温度而影响提取物老鼠簕总黄酮的活性。
具体实施方式
实施例1
1、原料前处理：采集花期老鼠簕植株的鲜叶，洗净后阳光下晒干，粉碎机粉碎过筛，物 料粒径小于0.2mm，得老鼠簕粉料A；
2、超声提取：取5.0g老鼠簕粉料A及40mL溶剂I装入提取器，混合均匀后将提取器 置于超声波仪中进行首次提取，80℃下提取45min，提取后抽滤，得到老鼠簕叶总黄酮粗提 液I和残渣I；将残渣I装入提取器，倒入75mL溶剂II，残渣I的质量与溶剂II的体积的比 例为约1∶15，将提取器置于超声波仪中进行第二次提取，85℃温度下提取60min，提取后的 混合物抽滤，得到老鼠簕总黄酮粗提液II和残渣II，残渣II弃用；
3、浓缩：将老鼠簕粗提液I和老鼠簕粗提液II混合得混合液，将混合液置于60℃和6.9 ×104Pa条件下减压蒸馏，得到浓缩液老鼠簕叶总黄酮，经比色法测定总量189.0mg，换算成 5g干叶总含量为部3.78％。
对照：索氏提取测定总含量为3.2％；水提取测定总含量为1.8％。
溶剂I和溶剂II按体积百分比分别是浓度为50％和80％的乙醇。
实施例2
1、原料采集与前处理：同实施例1；
2、超声提取：取5.0g老鼠簕叶粉料A及25mL溶剂I装入提取器，混合均匀后将提取 器置于超声波仪中进行首次提取，70℃下提取45min，提取后过滤，得到老鼠簕叶总黄酮粗 提液I和残渣I；将残渣I装入提取器，倒入50mL溶剂II，残渣I的质量与溶剂II的体积比 例约为1∶10，将提取器置于超声波仪中进行第二次提取，95℃温度下提取45min，提取后的 混合物过滤，得到老鼠簕总黄酮粗提液II和残渣II，残渣II弃用；
3、浓缩：将老鼠簕粗提液I和老鼠簕粗提液II混合得混合液，将混合液置于65℃和6.9 ×104Pa条件下减压蒸馏，得到浓缩液老鼠簕叶总黄酮，经比色法测定总量191.0mg，换算成 5g干叶总含量为部3.82％。
对照：索氏提取测定总含量为3.20％；水提取测定总含量为1.82％。
实施例2的溶剂I和溶剂II按体积百分比分别是浓度为70％和60％的乙醇。
实施例3
1、原料采集与前处理：采集花期老鼠簕植株的鲜根，取5.0g老鼠簕鲜根粉料A及30mL 溶剂I装入提取器，前处理同实施例1。
2、除残渣I的质量(kg)与溶剂II的体积(L)的比例换为1∶15外，其余同实施例2。
3、浓缩：减压蒸馏浓缩，条件同实施例2，经测定浓缩液含老鼠簕根总黄酮量223.0mg， 换算成5.0g干根总含量为部4.46％。
对照：索氏提取测定总含量为3.88％；水提取测定总含量为2.6％。
实施例3的溶剂I和溶剂II与实施例2相同。
实施例4
1、原料前处理：取老鼠簕植株的茎叶混合料，前处理同实施例1；
2、除残渣I的质量(kg)与溶剂II的体积(L)的比例换为1∶12外，其余同实施例2。
3、浓缩：减压蒸馏的温度为62℃，减压蒸馏的压力为6.9×104Pa。经测定茎叶总黄酮 干重含量为4.06％。
对照：索氏提取测定总含量为3.96％；水提取测定总含量为2.8％。
所述的溶剂I按体积百分比为浓度60％的乙醇，溶剂II按体积百分比为浓度70％的乙醇。