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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201580018344.8 (22)申请日 2015.04.03 (30)优先权数据 10-2014-0040400 2014.04.04 KR (85)PCT国际申请进入国家阶段日 2016.09.30 (86)PCT国际申请的申请数据 PCT/KR2015/003385 2015.04.03 (87)PCT国际申请的公布数据 WO2015/152688 KO 2015.10.08 (71)申请人 首尔大学校产学协力团 地址 韩国首尔市 申请人 约翰霍普金斯大学 (72)发明。
2、人 洪秉熙 柳济民 高汉锡 金动勋 (74)专利代理机构 北京度衡知识产权代理有限 公司 11601 代理人 杨黎峰 钟锦舜 (51)Int.Cl. A61K 47/62(2017.01) A61K 33/44(2006.01) A61P 25/28(2006.01) (54)发明名称 用于预防或治疗神经退行性疾病的基于石 墨烯纳米结构体的药物组合物 (57)摘要 本 发 明 涉 及 含 有 石 墨 烯 纳 米 结 构 体 (graphene nanostructure)作为有效成分的用 于预防或治疗神经退行性疾病的药物组合物。 权利要求书1页 说明书7页 附图18页 CN 106470706。
3、 A 2017.03.01 CN 106470706 A 1.一种用于预防或治疗神经退行性疾病的药物组合物， 其含有石墨烯纳米结构体作为 有效成分。 2.根据权利要求1所述的用于预防或治疗神经退行性疾病的药物组合物， 其中， 所述药 物组合物进一步包含药学上可接受的载体或赋形剂。 3.根据权利要求1所述的用于预防或治疗神经退行性疾病的药物组合物， 其中， 所述神 经退行性神经疾病选自由阿尔茨海默病、 帕金森病、 亨廷顿病、 艾滋病痴呆症、 脑卒中、 老年 全身性淀粉样变病、 原发性全身性淀粉样变病、 继发性全身性淀粉样变病、 II型糖尿病、 肌 萎缩性淀粉样变病、 血液透析-相关淀粉样变病、 。
4、传染性海绵状脑病及多发性硬化症组成的 组中。 4.根据权利要求2所述的用于预防或治疗神经退行性疾病的药物组合物， 其中， 所述载 体或赋形剂选自由凡士林、 绵羊油、 聚乙二醇、 醇及它们的组合组成的组中。 5.根据权利要求1所述的用于预防或治疗神经退行性疾病的药物组合物， 其中， 所述石 墨烯纳米结构体包括石墨、 石墨烯或石墨烯量子点。 6.根据权利要求1所述的用于预防或治疗神经退行性疾病的药物组合物， 其中， 所述石 墨烯纳米结构体抑制由蛋白质的错误折叠引起的纤丝形成。 7.根据权利要求1所述的用于预防或治疗神经退行性疾病的药物组合物， 其中， 所述石 墨烯纳米结构体是抑制错误折叠的蛋白质的。
5、转移。 8.根据权利要求1所述的用于预防或治疗神经退行性疾病的药物组合物， 其中， 所述石 墨烯纳米结构体不在体内蓄积。 9.根据权利要求1所述的用于预防或治疗神经退行性疾病的药物组合物， 其中， 所述石 墨烯纳米结构体的末端的官能团结合以神经蛋白质为靶标的物质。 10.根据权利要求1所述的用于预防或治疗神经退行性疾病的药物组合物， 其中， 远红 外激光照射使所述石墨烯纳米结构体产生光热效应。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106470706 A 2 用于预防或治疗神经退行性疾病的基于石墨烯纳米结构体的 药物组合物 技术领域 0001 本发明涉及含有石墨烯纳米结构体(graphen。
6、e nanostructure)作为有效成分的 用于预防或治疗神经退行性疾病的药物组合物。 背景技术 0002 已知蛋白质的错误折叠(misfolding)不仅引起蛋白质的功能丧失， 而且由于非正 常蛋白质在细胞内蓄积而产生毒性， 由此引发阿尔茨海默病、 帕金森病、 亨廷顿病、 肌萎缩 侧索硬化症、 癌、 囊包性纤维症、 II型糖尿病等多种疾病。 即 ， 由 于蛋白 质稳态 (proteostasis)失衡， 而导致蛋白质的错误折叠和细胞内的非正常蓄积。 0003 目前为止， 神经退行性疾病的发病原因还没有百分之百地被揭晓， 但是已知神经 蛋白质的聚集是其主要原因。 纤丝结构构成的蛋白质逐渐转。
7、移(transmission)至周边的神 经元， 最终使大脑特定部位的神经元全部坏死， 从而使得该部分负责的功能无法执行。 至于 帕金森病， 病情随着产生叫做多巴胺的神经递质的神经元逐渐坏死而发展。 现在给帕金森 病患者开出的处方中最常见的药物是叫做信尼麦(Sinemet)的药物， 诸如此类的其他帕金 森病治疗剂仅仅是通过投入在神经细胞内变为多巴胺的左旋多巴(Levodopa， L-DOPA)而暂 时缓解症状而已， 并不具有从根本上治疗或延缓的功能。 最终药物的效果随着病情的发展 而减少， 直至死亡。 0004 所进行的蛋白质的错误折叠相关的研究中， 作为抗淀粉样蛋白化合物(anti- amy。
8、loid compound)的种类中的一种的刚果红(Congo Red)等虽然具有防止由蛋白质的错 误折叠引起的纤丝形成的效果， 但是具有如下缺陷： 对人体的毒性大， 且不具有抑制错误折 叠的蛋白质的转移以延缓疾病的发展的效果。 此外， 现有的药物具有尺寸均匀的一种特定 形态， 因此从热力学方面(熵)来讲对疾病的治疗并不表现出特别的好处。 0005 从而， 虽然为治疗蛋白质的错误折叠而进行了很多研究(韩国公开专利第10- 2009-0019790号)， 但是就无人体毒性且表现出优异的抑制性能的治疗剂而言， 还没有显著 成果。 发明内容 0006 技术问题 0007 本发明旨在提供一种含有石墨烯。
9、纳米结构体作为有效成分的用于神经退行性疾 病或治疗的药物组合物。 0008 但是本发明所要解决的技术问题不限于以上所述的技术问题， 本领域技术人员通 过下面的记载能够明确地理解没有记载的其他技术问题。 0009 技术方案 0010 本发明的一方面， 提供一种含有石墨烯纳米结构体作为有效成分的用于预防或治 疗神经退行性疾病的药物组合物。 说 明 书 1/7 页 3 CN 106470706 A 3 0011 发明效果 0012 根据本发明实施方式的含有石墨烯纳米结构体作为有效成分的用于预防或治疗 神经退行性疾病的药物组合物， 是将石墨烯纳米结构体用于神经退行性疾病的预防和治疗 的首次尝试。 石墨。
10、烯纳米结构体对人体无毒性， 也不会在体内蓄积， 还表现出对蛋白质的错 误折叠引起的纤丝形成抑制80等卓越的效果， 在抑制错误折叠的蛋白质的转移以延缓病 情的发展的方面也很有效。 此外， 于现有的治疗剂不同， 石墨烯纳米结构体不局限于一种特 定形态， 各个石墨烯纳米结构体的分子量、 分子式、 形态等均不同， 从热力学方面来说从根 本上阻碍结晶的形成， 因此使得疾病的根本性的治疗变得可能。 不仅如此， 石墨烯纳米结构 体在UV-vis(紫外-可见)区域产生荧光， 且具有如下优点： 当适当调节这种荧光强度时， 能 够追踪(tracking)待作用为药物的石墨烯纳米结构体在体内如何移动。 此外， 由于。
11、在与石 墨烯纳米结构体的末端结合的功能团上连接以神经蛋白质为靶标的物质， 因此具有能够追 踪神经蛋白质的优点。 当通过上述方法将石墨烯纳米结构体诱导至神经蛋白质附近后照射 对细胞损害较小的远红外激光时， 可以通过石墨烯纳米结构体的光热效应来抑制纤丝化和 聚集现象。 附图说明 0013 图1是根据本发明一实施例的石墨烯量子点的TEM(透射电子显微镜)和AFM(原子 力显微镜)图像。 0014 图2是根据本发明一实施例的石墨烯量子点的PL(光致发光)分析结果图表。 0015 图3是根据本发明一实施例的石墨烯量子点的FT-IR(傅里叶变换红外)分析结果 图表。 0016 图4是根据本发明一实施例的石。
12、墨烯量子点的ZETA(界达)电位测定结果图表。 0017 图5是根据本发明一实施例的石墨烯量子点抑制纤丝化的效果的示意图。 0018 图6a和图6b分别是根据本发明实施例的石墨烯纳米结构体的神经元存活率的分 析结果的图像(a)和图表(b)。 0019 图7a和图7b分别是表示根据本发明实施例的石墨烯纳米结构体对活性氧簇生成 的抑制活性的8-OHG(核算氧化8-羟基鸟苷)染色分析结果的图像(a)和图表(b)。 0020 图8a和图8b分别是用于确认根据本发明一实施例的石墨烯纳米结构体对a-syn ( -突触核蛋白)转移的抑制的实验模拟图(a)及其结果的图像(b)。 0021 图9是根据本发明实施。
13、例的石墨烯纳米结构体对纤丝化的抑制的TEM分析结果的 示意图。 0022 图10是根据本发明一实施例的石墨烯量子点对纤丝化的抑制的AFM分析结果的示 意图。 0023 图11a和图11b分别是根据本发明实施例的石墨烯纳米结构体对纤丝化的抑制的 高清晰TEM分析结果示意图。 0024 图12是采用BN-PAGE(蓝绿温和胶聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析注入根据本发明一实 施例的石墨烯纳米结构体后的PFFs(预形成的纤丝)状态的结果示意图。 0025 图13是根据本发明一实施例的石墨烯纳米结构体和和刚果红的发光特性的示意 图。 说 明 书 2/7 页 4 CN 106470706 A 4 0026 图1。
14、4是根据本发明一实施例的石墨烯纳米结构体的光热特性的图表。 0027 图15是根据本发明一实施例制备的样品的FT-IR图谱。 0028 图16是根据本发明一实施例制备的样品的荧光发光测定结果的示意图。 具体实施方式 0029 下面结合附图详细说明本发明的实施方式和实施例， 以使本领域技术人员能够容 易实施本发明。 0030 但是本发明能够以各种不同形态实施， 并不限于在此说明的实施方式和实施例。 此外， 为了明确说明本发明， 在附图中省略了与说明无关的部分， 且在说明书全文中对类似 的部分使用了类似的附图标记。 0031 本发明说明书全文中， 记载某一部件位于其他部件之 “上” 时， 不仅包括。
15、该部件与 其他部件相接的情况， 还包括这两个部件之间存在另一其他部件的情况。 0032 本发明说明书全文中， 记载某一部分 “包含” 某一构成要素时， 在没有特别的相反 说明的情况下， 意味着还可以包含其他构成要素， 而不是排除其他构成要素。 本说明书中使 用的表示程度的 “约” 、“实质上” 等用语， 在已给出所提及的含义所固有的制造及物质允许 误差的情况下， 解释为该数值或接近该数值的含义， 以防止某些非善意的侵权人对为了帮 助理解本发明而提及准确或绝对的数值的公开内容的不当使用。 此外， 本发明说明书全文 中 “的步骤” 不表示 “为的步骤” 。 0033 本发明说明书全文中， 马库什形。
16、式的表达中包含的用语 “它们的组合” 表示在马库 什形式表达所记载的构成要素组成的组中选择的一个以上的混合或组合， 即表示包含从上 述构成要素组成的组中选择的一个以上。 0034 本发明说明书全文中，“石墨烯量子点(graphene quantum dots， GQDs)” 是指氧化 石墨烯(graphene oxides)或还原的氧化石墨烯(reduced graphene oxides)的纳米尺寸 的片段。 0035 本发明说明书全文中， 用语 “石墨烯” 表示复数个碳原子相互通过共价键连接而形 成多环芳香族分子， 上述共价键连接的碳原子形成6元环的基本重复单元， 但是也可以进一 步包括5。
17、元环和/或7元环。 0036 本发明说明书全文中， 用语 “氧化石墨烯” 还可以称为石墨烯氧化物(graphene oxides)， 可简称为 “GOs” 。 石墨烯上可以包括结合有羧基、 羟基或环氧基等含氧功能团的结 构， 但不限于此。 0037 本发明说明书全文中， 用语 “还原氧化石墨烯” 是指经过还原过程而氧比重减少的 氧化石墨烯， 也称为还原的石墨烯氧化物(reduced graphene oxides)， 可简称为 “rGOs” ， 但不限于此。 0038 下面， 详细说明本发明的实施方式， 但本发明可不限于此。 0039 本发明的第一方面提供含有石墨烯纳米结构体(graphene。
18、 nanostructure)作为 有效成分的用于预防或治疗神经退行性疾病的药物组合物。 0040 根据本发明一实施方式， 所述药物组合物可以进一步包含药学上可接受的载体或 赋形剂， 但可不限于此。 所述药学上可接受的载体或赋形剂只要能够用于药物组合物就不 受限制， 例如， 可以包含选自由凡士林、 绵羊油、 聚乙二醇、 醇及它们的组合组成的组中的一 说 明 书 3/7 页 5 CN 106470706 A 5 种， 但可不限于此。 0041 根据本发明一实施方式， 所述神经退行性神经疾病是有关蛋白质的错误折叠的疾 病， 例如， 可以选自由阿尔茨海默病、 帕金森病、 亨廷顿病、 艾滋病痴呆症、 。
19、脑卒中、 老年全身 性淀粉样变病、 原发性全身性淀粉样变病、 继发性全身性淀粉样变病、 II型糖尿病、 肌萎缩 性淀粉样变病、 血液透析-相关淀粉样变病、 传染性海绵状脑病及多发性硬化症组成的组 中， 但可不限于此。 0042 根据本发明一实施方式， 所述石墨烯纳米结构体可以包括石墨、 石墨烯或石墨烯 量子点， 但可不限于此。 0043 所述石墨烯量子点例如可以为约120nm、 约520nm、 约1020nm、 约1520nm、 约115nm、 约110nm或约15nm范围的大小， 但可不限于此。 0044 根据本发明一实施方式， 所述石墨烯纳米结构体例如可以包括约1100nm、 约10 10。
20、0nm、 约30100nm、 约50100nm、 约70100nm、 约90100nm、 约190nm、 约170nm、 约150nm、 约130nm或约110nm范围的不同尺寸的石墨烯纳米结构体， 但可不限于此。 0045 根据本发明一实施方式， 所述石墨烯纳米结构体能够抑制蛋白质的错误折叠 (misfolding)引起的纤丝形成， 此外， 还能够抑制错误蛋白质的转移(transmission)， 但可 不限于此。 0046 根据本发明一实施方式， 所述石墨烯纳米结构体不会在体内蓄积， 对人体不显示 毒性。 0047 根据本发明一实施方式， 所述石墨烯纳米结构体可以通过防止纤丝状态的蛋白质 。
21、引起的线粒体功能障碍的机制， 抑制神经元内的活性氧簇生成， 但可不限于此。 0048 根据本发明以实施方式， 所述石墨烯纳米结构体的末端的官能团可以结合以神经 蛋白质为靶标的物质， 例如作为抗淀粉样变病的物质的刚果红或作为淀粉样变病探测染料 (detecting dye)的硫黄素(thioflavin)T或S等， 但可不限于此。 0049 根据本发明的所述官能团可以是含有氧原子的官能团， 例如-OH、 -COOH、 -CO等， 但可不限于此。 0050 根据本发明一实施方式， 所述石墨烯纳米结构体可以在远红外激光照射下产生光 热效应， 但可不限于此。 0051 根据本发明一实施方式， 本发明的。
22、药物组合物由于在石墨烯纳米结构体的末端结 合的官能团上连接以神经蛋白质为靶标的物质， 因此具有能够追踪神经蛋白质的优点。 当 通过上述方式将石墨烯纳米结构体诱导至神经蛋白质附近后， 照射对细胞损害较小的远红 外激光时， 能够通过石墨烯纳米结构体的光热效应抑制纤丝化和聚集现象。 0052 实施本发明的形式 0053 下面通过实施例进一步具体地说明本发明， 但本发明的范围并不限于这些实施 例。 0054 实施例 0055 制备例1 0056 参考2012年发表于纳米快报(Nano Letters)上的论文Nano lett， 12， 844-849 (2012)制备了GQDs。 将碳纤维加入到以3。
23、:1的比例混合有硫酸和硝酸的溶液中， 在80下 加热24小时(热氧化工艺， thermo-oxidation process)。 反应完成后， 经透析过程、 真空过 说 明 书 4/7 页 6 CN 106470706 A 6 滤等进行纯化， 用旋转蒸发仪最终获得粉末形态的GQDs。 由此获得的GQDs的形态为在结构 上具有非常多样的尺寸(约520nm)的粒子(参照图1)。 制备的GQDs的其他特征还有： 在UV (紫外光)灯下产生了荧光(发射： 490nm和550nm)(JASCO FP-8300荧光分光仪)(参照图2)， 且当照射808nm NIR激光时， 产生了光热(phototherm。
24、al)效应。 通过观察FT-IR分析图谱 (Thermo Scientific Nicolet iS 10FT-IR分光仪)， GQDs末端的羧基(-COOH)在1724cm-1， 芳香族CC峰在1614cm-1被观测到(参照图3)。 最后， 通过ZETA电位(Malvern Zetasizer Nano ZS)分析的表面电荷显示为在约-20mV(参照图4)。 0057 制备例2 0058 通过下列反应式的反应， 制备了在上述制备的石墨烯纳米结构体(GQDs)末端的官 能团上结合有作为以神经蛋白质为靶标的物质的刚果红的物质。 通过将所述刚果红的量分 别设置为不同(100微克/m、 250微克/。
25、ml和500微克/ml)而制备了样品1、 2和3。 0059 0060 试验例1 0061 使用叫做PFFs(pre-formed fibrils)的 -突触核蛋白(alpha-synuclein)实验模 型确定石墨烯量子点对纤丝化的抑制效果。 具体地， 在神经元中注入PFFs后经一周的时间 就会形成纤丝， 这最终导致了神经元的坏死。 纤丝化会引起 -突触核蛋白的磷酸化， 这可以 通过如图5中所示的染色的图像来确认。 可确认到， 向神经元仅注入PFFs(1微克/ml)时茂密 的p- -syn(磷酸化的 -突触核蛋白)在注入GQDs(1微克/ml)之后消失到几乎没有注入任何 试剂的水平(参照图5。
26、)。 如图5所示， 将p- -syn减少了约80， 实际上这可以被解释为达到 了完全抑制了纤丝化的水平。 此外， 神经元的存活率也增加了约20(参照图6b)。 仅注入 GQDs时的神经元的存活率(用TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸缺口末 端标记)检测分析)相比仅注入PBS(磷酸盐缓冲液)培养基的情况， 反而显示更好的效果， 从 而确认GQDs对神经元没有毒性(参照图6a及图6b)。 图6a中左侧表示受损细胞染色为红色的 TUNEL检测， 中间部分是细胞核内的DNA染色为蓝色的DAPI(4 ,6-二脒基-2-苯基吲哚)染 色， 右侧是它们的定量(quantification)。
27、。 0062 此外， 作为有关所使用的石墨烯纳米结构体通过防止纤丝状态蛋白质所引起的线 粒体功能障碍的机制而抑制神经元内的活性氧簇的生成的实验， 用8-OHG(作为DNA氧化的 主要产物的核酸氧化8-羟基鸟苷(8-oxo-2 -deoxyguanosine)对预培养的神经元染色后 进行分析(参照图7a)。 如图7a所示， 由于加入石墨烯纳米结构体， 受活性氧簇的影响而生成 说 明 书 5/7 页 7 CN 106470706 A 7 的8-OHG的量显著降低。 有关线粒体功能障碍的实验是通过细胞的基础呼吸速率(basal respiratory rate)、 最大呼吸速率(maximal re。
28、spiratory rate)和线粒体的Complex I (复合物-I)活性分析而确认的(参照图7b)。 如图7b的图表所示， 向神经元仅注入PFFs时的 线粒体的呼吸速率显著降低， 且Complex I活性也减少； 但是GQDs和PFFs一同注入到神经元 时， 恢复到正常水平。 在该试验例中的对线粒体功能障碍的分析结果被认为是与图6a的神 经元存活率相符合的重要结果。 0063 试验例2 0064 虽然单纯地抑制纤丝化并提高神经元的存活率也重要， 但是为了神经退行性疾病 的治疗及缓解疾病的发展速度， 防止向周边的神经元转移(transmission)也非常重要。 为 了确认这一事实， 安装。
29、微流控装置(microfluidic device)， 观察在将GQDs放入哪一腔室时 能够阻断转移过程。 图8a是简单的实验的模拟图， 图8b示出该实验的结果。 至于C1(腔室1)， 向第一个腔室的神经元注入GQDs； 至于C2(腔室2)， 向第二个腔室的神经元注入GQDs， 然后 确认到 -突触核蛋白的纤丝化向周边的神经元扩散。 至于仅有PFFs而没有GQDs的阳性对照 组， 观察到已纤丝化的 -突触核蛋白从第一个腔室转移至第三个腔室。 至于向第一个腔室 的神经元加入GQDs的第二个装置， 观察到纤丝化程度一开始就不大， 由此在第二和第三腔 室的神经元中也几乎没有 -突触核蛋白的纤丝化。 。
30、至于向中间的腔室的神经元加入GQDs的 最后一个装置， 观察到虽然在第一个腔室中进行了一定程度的纤丝化， 但是加入GQDs的第 二个腔室的神经元开始其纤丝化的量显著减少， 接下来的最后的腔室的神经元中几乎没有 发生纤丝化。 在该装置中初期的纤丝化程度与作为阳性对照组仅加入PFFs的装置不同的原 因被认为在于， 由于设备自身的误差而在设备中无法为各神经元完全分离GQDs。 0065 试验例3 0066 按照与细胞内实验相同的方式进行取样(在37对1微克/ml的GQDs和1微克/ml的 PFFs进行孵化后在二氧化硅基材上点样)， 并通过OM(optical microscope， 光学显微镜)分 。
31、析GQDs对纤丝化的抑制， 结果仅孵化PFFs时观察到推测为纤丝聚集的大团块(参照图9的 (a)和(b)， 相反与GQDs一同孵化时观察到了疑似GQDs和 -突触核蛋白的低聚体聚集的图 像(参照图9的(c)和(d)。 上述结果中的总 -突触核蛋白和GQDs的量有些过量， 且没有获得 能够明确他们的结构的清晰图像， 但是可以确认的是上述两个样品的结果明显不同。 0067 按照与OM分析相同的取样方式准备样品， 通过AFM(atomic force microscope， 原 子力显微镜)分析GQDs对纤丝化的抑制， 结果仅孵化PFFs时观察到纤丝和PFFs聚集的路易 小体(lewy body)的。
32、形成(参照图10的(b)， 相反与GQDs一同孵化时观察到了疑似GQDs和 - 突触核蛋白的低聚体聚集的图像(参照图10的(d)。 0068 按照与上述OM和AFM分析相同的方法， 在TEM(transmission electron microscopy， 透射电子显微镜)格子(grid)上点样， 通过高分辨率电子显微镜(high resolution-transmission electron microscope)进行分析。 图11a是在TEM格子上仅点样 PFFs后分析的数据。 从图像中可以看出， 形成了又厚又长的纤丝束。 相反一同放入GQDs的样 品中， 如AFM图像中所示， 可以获。
33、得疑似GQDs和 -突触核蛋白聚集的图像(参照图11b)。 0069 虽然如图9至图11所示的图像中显示在PFFs中注入GQDs时和没有注入GQDs时的显 著的差异， 但是这些图像是在干燥的状态下所获得的， 因此在显示注入GQDs后的准确的 PFFs状态方面具有局限性。 为了更详细的分析而进行了BN-PAGE(blue native 说 明 书 6/7 页 8 CN 106470706 A 8 polyacrylamide gel electrophoresis， 蓝绿温和胶聚丙烯酰胺凝胶电泳)分析的结果， 确 认到惊人的事实(参照图12)。 在图12中， 1号列是空白对照组， 即仅加入GQD。
34、s的情况； 2号和4 号列是仅加入PFFs的情况； 3号和5号列是将作为同时加入PFFs和GQDs的样品的凝胶放入的 情况， 结果可确认到， 加入GQDs时在对应于 -突触核蛋白单体(14.46kDa)的区域中检测到 的量较多。 这是表明在PFFs中加入GQDs的话不仅能够阻断PFFs纤丝化， 而且还使其返回为 单体的重要数据。 0070 试验例4 0071 对在上述制备例1中制备的GQDs和刚果红溶液(对照组)照射红外线激光后在暗处 拍摄了荧光发光现象， 其结果如图13所示。 0072 此外， 如图14所示， 当照射NIR(近红外线)激光时 ， 相比刚果红或蒸馏水 (distilled wa。
35、ter)表现出更高的光热效应， 并且随着GQDs的浓度(500微克/ml、 250微克/ ml、 100微克/ml)增加， 温度也增加。 0073 试验例5 0074 使用多种样品(上述制备例1和2中制备的GQDs、 样品1、 样品2、 样品3和作为比较例 的刚果红溶液)， 进行了FT-IR分析、 荧光发光测定实验。 0075 参照示出FT-IR分析图谱的图15， 可以看到在与刚果红(congo red,CR)的-NH2对 应的峰3419cm-1处， 峰值随着刚果红的浓度增加而减少； 在与GQDs末端的羧基(-COOH)对应 的峰1710cm-1处， 峰值也是随着刚果红的浓度增加而减少； 与肽。
36、键(-CONH)对应的峰1660cm -1是随着GQDs和刚果红的结合而逐渐生成； 与芳香族CC对应的峰1614cm-1按照预想的那 样在所有的样品中维持。 0076 另外， 测定了根据上述样品的波长的荧光发光特性后示于图16中。 其中， 刚果红作 为对照组使用， 样品1的荧光发光峰值显示为最高。 0077 上述的本发明的说明仅是示例性的， 本领域技术人员应当理解的是， 在不变更本 发明的技术构思和必要特征的情况下， 也可以容易地变型为其他具体形态。 因此记载的实 施例应当被理解为在任何方面都是示例性的而不是限定性的。 例如， 以单一型态说明的各 个构成要素也可以分布实施， 同样， 分布说明的。
37、构成要素也可以以结合的形态实施。 0078 本发明的范围应由随附的权利要求书来呈现而不是由上述的详细说明来呈现， 由 权利要求书的含义、 范围及其等同概念导出的所有的变更或变形的形态， 均应理解为包含 在本发明的范围内。 说 明 书 7/7 页 9 CN 106470706 A 9 图1 图2 说 明 书 附 图 1/18 页 10 CN 106470706 A 10 图3 说 明 书 附 图 2/18 页 11 CN 106470706 A 11 图4 说 明 书 附 图 3/18 页 12 CN 106470706 A 12 图5 说 明 书 附 图 4/18 页 13 CN 106470。
38、706 A 13 图6a 说 明 书 附 图 5/18 页 14 CN 106470706 A 14 图6b 说 明 书 附 图 6/18 页 15 CN 106470706 A 15 图7a 说 明 书 附 图 7/18 页 16 CN 106470706 A 16 图7b 说 明 书 附 图 8/18 页 17 CN 106470706 A 17 图8a 说 明 书 附 图 9/18 页 18 CN 106470706 A 18 图8b 说 明 书 附 图 10/18 页 19 CN 106470706 A 19 图9 说 明 书 附 图 11/18 页 20 CN 106470706 A。
39、 20 图10 说 明 书 附 图 12/18 页 21 CN 106470706 A 21 图11a 说 明 书 附 图 13/18 页 22 CN 106470706 A 22 图11b 说 明 书 附 图 14/18 页 23 CN 106470706 A 23 图12 图13 说 明 书 附 图 15/18 页 24 CN 106470706 A 24 图14 说 明 书 附 图 16/18 页 25 CN 106470706 A 25 图15 说 明 书 附 图 17/18 页 26 CN 106470706 A 26 图16 说 明 书 附 图 18/18 页 27 CN 106470706 A 27 。