一种油用牡丹的组织培养基及其培养方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201610385679.X (22)申请日 2016.06.03 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 105941156 A (43)申请公布日 2016.09.21 (73)专利权人 句容康盛园生态农业发展有限公 司 地址 212400 江苏省镇江市句容是华阳镇 北相村 (72)发明人 秦恒志 李贤兰 夏杨 刘庆 刘珂 秦相根 夏晓荣 李绪清 (74)专利代理机构 南京申云知识产权代理事务 所(普通合伙) 32274 代理人 王云 (51)Int.Cl. A01H。

2、 4/00(2006.01) (56)对比文件 CN 103355165 A,2013.10.23,权利要求2. CN 104206417 A,2014.12.17,全文. CN 104770103 A,2015.07.15,全文. 范小峰等.三种牡丹组织培养比较研究. 北 方园艺 .2010, (第4期),摘要， 1.1 实验材料， 1.3 培养基及培养条件. 审查员 陈佩 (54)发明名称 一种油用牡丹的组织培养基及其培养方法 (57)摘要 本发明公开了一种油用牡丹的组织培养基， 包括： 改良MS+0 .50 .8mgL-1IAA+0 .3 0.5mgL-1 IBA+0.50.6mgL-1。

3、NAA+0.20.3 gL-1 活性炭+23gL-1蔗糖， pH=5.65.8。 本发明同 时公开了其培养方法。 本发明步骤简单， 易于操 作， 通过改良基本培养基及成分、 调整培养条件 等配套措施， 使得试管苗的出芽率超过了98%， 且 移栽苗成活率高， 生长快， 大大缩短了油用牡丹 培养的周期， 降低了生产升本， 提高了用牡丹的 经济价值。 权利要求书1页 说明书4页 CN 105941156 B 2018.05.25 CN 105941156 B 1.一种油用牡丹的组织培养基， 其特征在于， 包括： 改良MS+0.50.8mgL-1IAA +0.3 0.5mgL-1 IBA +0.50.。

4、6mgL-1NAA +0.20.3 gL-1活性炭+23gL-1蔗糖， pH=5.6 5.8， 所述的改良MS包括常量营养元素、 微量营养元素和有机试剂， 所述的常量营养元素的 组分和其对应的浓度为： 硝酸钾1800 mg/L； 硝酸铵1650 mg/L； 二水氯化钙350mg/L； 无水磷 酸二氢钾300mg/L； 七水硫酸镁： 360 mg/L； 乙二胺四乙酸二钠20.5mg/L,所述的微量营养元 素的组分和其对应的浓度为： 四水硫酸锰18.6 mg/L； 七水硫酸锌7.5mg/L； 硼酸4.8 mg/L； 碘化钾1.5mg/L； 钼酸钠0.5mg/L； 六水氯化钴0.1 mg/L， 所述。

5、的有机试剂的组分和其对应的 浓度为： 盐酸硫胺素0.5 mg/L； 烟酸0.5 mg/L； 甘氨酸： 0.5 mg/L； 盐酸吡哆醇0.5 mg/L； 肌 醇100.0 mg/L。 2.一种油用牡丹的组织培养方法， 其特征在于， 包括以下步骤： （1） 选取油用牡丹的深黄色果实作为外植体； （2） 对外植体进行消毒： 首先， 用清水冲洗外植体3-5次， 每次5-8min， 然后利用纯净水 冲洗外植体2-3次， 每次8-10min， 重新结束后， 将外植体移至超净工作台进行消毒处理； （3） 播种： 利用无菌纸吸干外植体表面的水分， 然后用消毒刀具将外植体剪开， 将外植 体的种子放入油用牡丹的组。

6、织培养基中进行组织培养， 培养条件为： 温度为20-25， 光照 时间为10-12h/d， 光照强度为1000lx， 培养3-4个月至长出幼苗， 苗高4-5cm时， 进行移栽； （4） 移栽： 打开瓶盖， 静置7-10d后， 取出试管苗， 用清水洗去基部的培养基， 保持室内 温度为20-25， 置于培养室内， 并通过薄膜袋保湿， 15d后去除薄膜袋， 每天浇水一次， 30d 后移栽到试验区， 进行常规管理。 3.根据权利要求2所述的一种油用牡丹的组织培养方法， 其特征在于， 步骤 （2） 所述的 消毒处理方法为： 首先用75%的酒精对外植体进行消毒30-45s， 然后用无菌水冲洗外植体2- 3。

7、次， 冲洗时间为每次3-5min， 最后用浓度为0.1%的升汞消毒6-8min， 再用无菌水冲洗外植 体2-3次， 冲洗时间为每次3-5min。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 105941156 B 2 一种油用牡丹的组织培养基及其培养方法 技术领域 0001 本发明涉及一种油用牡丹的组织培养基及其培养方法， 属于植物生物学技术领 域。 背景技术 0002 油用牡丹是一种新兴的木本油料作物， 具备突出的“三高一低“的特点:高产出(五 年生亩产可达300公斤， 亩综合效益可达万元)、 高含油率(籽含油率22%)、 高品质(不饱和脂 肪酸含量92%)、 低成本(油用牡丹耐旱耐贫瘠， 适。

8、合荒山绿化造林、 林下种植;一年种百年 收， 成本低)。 现在用于商业生产中的油用牡丹仅有凤丹和紫斑两个品种， 且是适合中国绝 大部分区域种植、 高产籽油用牡丹的原种， 其中， 凤丹籽含油22%以上， 高于国产大豆17.5% 的含油率， 同时牡丹籽油还含有众多的药用牡丹有效成分。 0003 牡丹可通过播种、 分株、 嫁接、 扦插、 压条和组培等方法进行繁殖。 油用牡丹一般采 用播种繁殖的方法进行， 种籽播种苗当年一般只有顶芽生长， 当年生长量小， 仅5 10cm。 油 用牡丹的经济部位为果实， 而牡丹是单生枝顶并结果， 因此油用牡丹的发枝数量对产量的 形成具有重要意义。 1年生的牡丹苗从根颈向。

9、上一般只有一个顶芽生长， 而且当年生长长度 仅5 10cm， 根颈处对生有一对隐芽， 若不进行人工干预不会萌发。 发明内容 0004 为了解决上述问题， 本发明的目的在于提供一种步骤简单、 萌芽率高及成长快的 油用牡丹的组织培养基及其培养方法。 0005 为解决上述技术问题， 本发明的技术方案为： 0006 一种油用牡丹的组织培养基， ， 包括： 改良MS+0.50.8mgL-1IAA +0.30.5mgL -1 IBA +0.50.6mgL-1NAA +0.20.3 gL-1活性炭+23gL-1蔗糖， pH=5.6 5.8。 0007 进一步， 上述的改良MS包括常量营养元素、 微量营养元素。

10、和有机试剂。 0008 其中， 常量营养元素的组分和其对应的浓度为： 硝酸钾1800 mg/L； 硝酸铵1650 mg/L； 二水氯化钙350mg/L； 无水磷酸二氢钾300mg/L； 七水硫酸镁： 360 mg/L； 乙二胺四乙酸 二钠20.5mg/L。 0009 微量营养元素的组分和其对应的浓度为： 四水硫酸锰18.6 mg/L； 七水硫酸锌 7.5mg/L； 硼酸4.8 mg/L； 碘化钾1.5mg/L； 钼酸钠0.5mg/L； 六水氯化钴0.1 mg/L。 0010 有机试剂的组分和其对应的浓度为： 盐酸硫胺素0.5 mg/L； 烟酸0.5 mg/L； 甘氨 酸： 0.5 mg/L； 。

11、盐酸吡哆醇0.5 mg/L； 肌醇100.0 mg/L。 0011 更进一步， 一种油用牡丹的组织培养方法， 包括以下步骤： 0012 （1） 选取油用牡丹的深黄色果实作为外植体； 0013 （2） 对外植体进行消毒： 首先， 用清水冲洗外植体3-5次， 每次5-8min， 然后利用纯 净水冲洗外植体2-3次， 每次8-10min， 重新结束后， 将外植体移至超净工作台进行消毒处 理； 说 明 书 1/4 页 3 CN 105941156 B 3 0014 （3） 播种： 利用无菌纸吸干外植体表面的水分， 然后用消毒刀具将外植体剪开， 将 外植体的种子放入油用牡丹的组织培养基中进行组织培养， 。

12、培养条件为： 温度为20-25， 光照时间为10-12h/d， 光照强度为1000lx， 培养3-4个月至长出幼苗， 苗高4-5cm时， 进行移 栽； 0015 （4） 移栽： 打开瓶盖， 静置7-10d后， 取出试管苗， 用清水洗去基部的培养基， 保持 室内温度为20-25， 置于培养室内， 并通过薄膜袋保湿， 15d后去除薄膜袋， 每天浇水一次， 30d后移栽到试验区， 进行常规管理。 0016 且步骤 （2） 所述的消毒处理方法为： 首先用75%的酒精对外植体进行消毒30-45s， 然后用无菌水冲洗外植体2-3次， 冲洗时间为每次3-5min， 最后用浓度为0.1%的升汞消毒6- 8mi。

13、n， 再用无菌水冲洗外植体2-3次， 冲洗时间为每次3-5min。 0017 本发明的有益效果为： 本发明步骤简单， 易于操作， 通过改良基本培养基及成分、 调整培养条件等配套措施， 使得试管苗的出芽率超过了98%， 且移栽苗成活率高， 生长快， 大 大缩短了油用牡丹培养的周期， 降低了生产升本， 提高了用牡丹的经济价值。 具体实施方式 0018 下面结合具体实施例对本发明进行详细的说明。 0019 本发明以下所有实施例采用的改良MS均包括常量营养元素、 微量营养元素和有机 试剂。 0020 且常量营养元素的组分和其对应的浓度为： 硝酸钾1800 mg/L； 硝酸铵1650 mg/L； 二水氯。

14、化钙350mg/L； 无水磷酸二氢钾300mg/L； 七水硫酸镁： 360 mg/L； 乙二胺四乙酸二钠 20.5mg/L。 0021 微量营养元素的组分和其对应的浓度为： 四水硫酸锰18.6 mg/L； 七水硫酸锌 7.5mg/L； 硼酸4.8 mg/L； 碘化钾1.5mg/L； 钼酸钠0.5mg/L； 六水氯化钴0.1 mg/L。 0022 有机试剂的组分和其对应的浓度为： 盐酸硫胺素0.5 mg/L； 烟酸0.5 mg/L； 甘氨 酸： 0.5 mg/L； 盐酸吡哆醇0.5 mg/L； 肌醇100.0 mg/L。 0023 实施例1： 0024 （1） 选取油用牡丹的深黄色果实作为外植体。

15、； 0025 （2） 对外植体进行消毒： 首先， 用清水冲洗外植体4次， 每次6min， 然后利用纯净水 冲洗外植体2次， 每次9min， 重新结束后， 将外植体移至超净工作台进行消毒处理， 具体步骤 为： 首先用75%的酒精对外植体进行消毒40s， 然后用无菌水冲洗外植体3次， 冲洗时间为每 次4min， 最后用浓度为0.1%的升汞消毒7min， 再用无菌水冲洗外植体3次， 冲洗时间为每次 4min； 0026 （3） 播种： 利用无菌纸吸干外植体表面的水分， 然后用消毒刀具将外植体剪开， 将 外植体的种子放入油用牡丹的组织培养基中进行组织培养， 所述的组织培养基包括改良MS +0.6mgL。

16、-1IAA +0.4mgL-1 IBA +0.6mgL-1NAA +0.2gL-1活性炭+2.5gL-1蔗糖， pH=5.7， 且培 养条件为： 温度为22， 光照时间为11h/d， 光照强度为1000lx， 培养27d后出芽， 苗高5cm时， 进行移栽； 0027 （4） 移栽： 打开瓶盖， 静置8d后， 取出试管苗， 用清水洗去基部的培养基， 保持室内 温度为22， 置于培养室内， 并通过薄膜袋保湿， 15d后去除薄膜袋， 每天浇水一次， 30d后 说 明 书 2/4 页 4 CN 105941156 B 4 移栽到试验区， 进行常规管理。 0028 实施例2： 0029 （1） 选取油用。

17、牡丹的深黄色果实作为外植体； 0030 （2） 对外植体进行消毒： 首先， 用清水冲洗外植体3次， 每次8min， 然后利用纯净水 冲洗外植体2次， 每次10min， 重新结束后， 将外植体移至超净工作台进行消毒处理， 具体步 骤为： 首先用75%的酒精对外植体进行消毒30s， 然后用无菌水冲洗外植体2次， 冲洗时间为 每次5min， 最后用浓度为0.1%的升汞消毒6min， 再用无菌水冲洗外植体2次， 冲洗时间为每 次5min； 0031 （3） 播种： 利用无菌纸吸干外植体表面的水分， 然后用消毒刀具将外植体剪开， 将 外植体的种子放入油用牡丹的组织培养基中进行组织培养， 所述的组织培养基。

18、包括改良MS +0.5mgL-1IAA +0.3mgL-1 IBA +0.5mgL-1NAA +0.2gL-1活性炭+2gL-1蔗糖， pH=5.6， 且培养 条件为： 温度为20， 光照时间为10h/d， 光照强度为1000lx， 培养30d后出芽， 苗高4cm时， 进 行移栽； 0032 （4） 移栽： 打开瓶盖， 静置7d后， 取出试管苗， 用清水洗去基部的培养基， 保持室内 温度为20， 置于培养室内， 并通过薄膜袋保湿， 15d后去除薄膜袋， 每天浇水一次， 30d后 移栽到试验区， 进行常规管理。 0033 实施例3： 0034 （1） 选取油用牡丹的深黄色果实作为外植体； 003。

19、5 （2） 对外植体进行消毒： 首先， 用清水冲洗外植体5次， 每次5min， 然后利用纯净水 冲洗外植体3次， 每次8min， 重新结束后， 将外植体移至超净工作台进行消毒处理， 具体步骤 为： 首先用75%的酒精对外植体进行消毒45s， 然后用无菌水冲洗外植体3次， 冲洗时间为每 次3min， 最后用浓度为0.1%的升汞消毒8min， 再用无菌水冲洗外植体3次， 冲洗时间为每次 3min； 0036 （3） 播种： 利用无菌纸吸干外植体表面的水分， 然后用消毒刀具将外植体剪开， 将 外植体的种子放入油用牡丹的组织培养基中进行组织培养， 所述的组织培养基包括改良MS +0.8mgL-1IAA。

20、 +0.5mgL-1 IBA +0.6mgL-1NAA +0.3 gL-1活性炭+3gL-1蔗糖， pH=5.8， 且培 养条件为： 温度为25， 光照时间为12h/d， 光照强度为1000lx， 培养29d后出芽， 苗高5cm时， 进行移栽； 0037 （4） 移栽： 打开瓶盖， 静置10d后， 取出试管苗， 用清水洗去基部的培养基， 保持室 内温度为25， 置于培养室内， 并通过薄膜袋保湿， 15d后去除薄膜袋， 每天浇水一次， 30d 后移栽到试验区， 进行常规管理。 0038 利用上述实施例1-3所述的方法和培养基分别对160棵油用牡丹外植体进行组织 培养并移栽育苗， 同时利用常规种子播种方法进行育苗， 并于其出芽率、 出芽时间、 移栽成 活率的统计表如表1所示： 0039 表1： 说 明 书 3/4 页 5 CN 105941156 B 5 0040 0041 由表1可知： 通过本发明所述培养基进行组织培养的油用牡丹在出芽率、 出芽时 间、 移栽成活率等方面均显著优于传统的种子播种育苗的方法， 大大缩短了油用牡丹培养 的周期， 降低了生产升本， 提高了用牡丹的经济价值。 0042 以上具体实施方式不以任何形式限制本发明， 凡是以等同替换或等效变换的方式 所获得的技术方案， 均落在本发明的保护范围内。 说 明 书 4/4 页 6 CN 105941156 B 6 。