一种发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法.pdf

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201711269281.0 (22)申请日 2017.12.05 (71)申请人 台州职业技术学院 地址 318000 浙江省台州市椒江区学院路 788号 (72)发明人 郝之奎 金则新 徐峰 潘万贵 林海波 郝玉坤 罗梓允 徐若冰 魏春 段文凯 廖祥儒 (74)专利代理机构 台州市方信知识产权代理有 限公司 33263 代理人 孙圣贵 魏谦 (51)Int.Cl. A01N 65/46(2009.01) A01N 65/20(2009.01) A01N 63/02(2006.。

2、01) A01N 43/16(2006.01) A01N 43/90(2006.01) A01P 7/04(2006.01) A01P 21/00(2006.01) (54)发明名称 一种发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物 制剂的方法 (57)摘要 本发明涉及一种发酵中药复合原料制备杀 小菜蛾生物制剂的方法， 属于生物发酵技术领 域。 为了解决现有的针对性差的问题， 提供一种 发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方 法， 包括选取苦楝、 苦参和百部中药原料清洗干 净后， 进行粉碎处理后， 加入发酵罐内， 再加水稀 释成发酵底物； 灭菌后， 活化的地衣芽孢杆菌按 照108cfu/mL109cfu。

3、/mL的量接种到灭菌后的 发酵底物， 进行发酵处理， 得到发酵液； 滤除去沉 淀物， 得到杀小菜蛾生物制剂。 本发明得到的生 物制剂中能够同时含有川楝素、 苦参碱和百部定 碱及异百部定碱实现提高对小菜蛾的杀虫功能， 且对疏菜植物本身具有促进生长的效果。 权利要求书1页 说明书7页 CN 108041102 A 2018.05.18 CN 108041102 A 1.一种发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法， 其特征在于， 该方法包括以 下步骤： A、 选取苦楝、 苦参和百部中药原料清洗干净后， 进行粉碎处理后， 加入发酵罐内， 再加 水稀释成发酵底物； B、 将得到的发酵底物进行灭菌处理。

4、后， 再将经活化的地衣芽孢杆菌按照108cfu/mL 109cfu/mL的量接种到灭菌后的发酵底物， 使发酵温度在2535的条件下进行发酵处 理， 得到发酵液； C、 将得到的发酵液进行过滤除去沉淀物， 得到杀小菜蛾生物制剂。 2.根据权利要求1所述发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法， 其特征在于， 步骤A中所述苦楝： 苦参： 百部： 水的质量比为1： 0.50.7： 0.70.9： 1015。 3.根据权利要求1所述发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法， 其特征在于， 步骤A中所述粉碎处理添加有冰粉， 所述冰粉的添加量为苦楝质量的2.05.0。 4.根据权利要求3所述发酵中药复。

5、合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法， 其特征在于， 所述冰粉的温度为-30-10。 5.根据权利要求1所述发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法， 其特征在于， 步骤B中所述灭菌后向发酵底物中添加入碳源， 所述碳源的添加量为苦楝的加入量的5 10。 6.根据权利要求5所述发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法， 其特征在于， 所述碳源选自葡萄糖、 果糖和蔗糖中的一种或几种。 7.根据权利要求1-6任意一项所述发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法， 其特征在于， 步骤B中所述发酵处理的时间为710天。 8.根据权利要求1-6任意一项所述发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法， 其。

6、特征在于， 步骤B中所述发酵处理时体系的pH值为6.57.5。 9.根据权利要求1-6任意一项所述发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法， 其特征在于， 步骤C中所述杀小菜蛾生物制剂中含有川楝素、 苦参碱、 百部定碱和异百部定 碱成分。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 108041102 A 2 一种发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法， 属于生物发酵 技术领域。 背景技术 0002 小菜蛾(Plutel la xylostel la)为鳞翅目菜蛾科昆虫， 别名小青虫、 两头尖、 方 块蛾、 吊尸。

7、虫等， 属于世界性迁飞害虫。 小菜蛾具有发生世代多， 繁殖能力强、 寄主范围广、 抗药性水平高， 难于防治等特点。 主要为害甘蓝、 紫甘蓝、 青花菜、 薹菜、 芥菜、 花椰菜、 白菜、 油菜、 萝 卜等十字花科植物， 且每年全世界用于防治小菜蛾的费用高达10亿美元。 目前， 对于 小菜蛾的危害主要使用化学农药对小菜蛾进行防治， 不仅污染环境， 还易造成植物药害， 还 容易引起人畜中毒。 因此， 生物性小菜蛾杀虫剂的研发受到关注。 0003 一般采用化学农药进行杀虫是社会公认的灭虫方式， 但是， 采用化学农药均有一 定的毒性， 喷洒到植物上长期存在毒性残留的问题。 在蔬菜种植的过程中， 杀虫剂的。

8、使用是 相当普度的， 这就会因采用化学农药而导致的各种副作用， 不利于人体的健康。 随着人们生 存环境和自然生态的保护意识日益增强对于化学农药这些高农药残留的杀虫剂受到的限 制。 因此， 减少农药使用， 以生物农药替代化学农药已成为目前杀虫剂的发展趋势。 0004 目前， 发现的苦楝、 苦参和百部等植物材料具体较好的杀虫效果， 根据现有的研究 情况， 发展了苦楝具有杀虫的效果， 其中的川楝素对菜青虫等具有很强的胃毒作用， 可以破 坏中肠组织， 阻断神经传导而导致害虫麻痹、 昏迷、 死亡。 而苦参含有许多次生代谢产物， 苦 参醚提物及醇提物对金黄色葡萄球菌有较强的抑菌作用； 苦参水浸剂对堇色毛癣。

9、菌、 同心 性毛癣菌、 许兰毛癣菌、 奥杜盎小芽孢癣菌等有抑制作用。 苦参碱可麻痹神经中枢， 使虫体 蛋白质凝固， 封闭虫体气孔， 使害虫窒息而死； 百部含百部碱、 百部定碱、 异百部定碱、 原百 部碱、 百部宁碱、 华百部碱对叶百部碱、 霍多林碱、 直立百部碱等多种次生代谢产物， 对蚊蝇 幼虫、 头虱、 阴虱、 衣虱及臭虫等均有杀灭作用， 高浓度百部在体外有杀死鼠蛲虫的作用。 因 此， 目前也有研究表明通过采用发酵的方式来制取生物制剂的杀虫剂。 如中国专利申请(公 开号： CN106867947A)公开了一种以苦楝为原料经微生物发酵制备杀虫剂的方法， 该方法包 括将解淀粉芽孢杆菌、 短小芽孢。

10、杆菌、 苏云金杆菌分别接种于种子培养基中进行培养成活 按比例配成混合菌， 再将苦楝经过乙醇和水处理后， 粉碎加水、 灭菌后放入发酵罐中， 将上 述混合菌接种， 并在37培养3-12天后， 得到相应的发酵液， 过滤后， 得到的发酵液即可杀 虫剂。 虽然， 其通过生物发酵的方式能够在一定程度上避免失活和有机溶剂污染的问题， 但 是， 其采用多种生物菌共存的方式进行发酵， 存在成本高， 多种菌共存的条件复杂等问题， 且其仅是针对单一植物的发酵培养。 发明内容 0005 本发明针对以上现有技术中存在的缺陷， 提供一种发酵中药复合原料制备杀小菜 蛾生物制剂的方法， 解决的问题是如何实现兼具改善植物生长和。

11、高活性的杀小菜蛾虫性 说 明 书 1/7 页 3 CN 108041102 A 3 能。 0006 本发明的目的是通过以下技术方案得以实现的， 一种发酵中药复合原料制备杀小 菜蛾生物制剂的方法， 其特征在于， 该方法包括以下步骤： 0007 A、 选取苦楝、 苦参和百部中药原料清洗干净后， 进行粉碎处理后， 加入发酵罐内， 再加水稀释成发酵底物； 0008 B、 将得到的发酵底物进行灭菌处理后， 再将经活化的地衣芽孢杆菌按照108cfu/ mL109cfu/mL的量接种到灭菌后的发酵底物， 使发酵温度在2535的条件下进行发 酵处理， 得到发酵液； 0009 C、 将得到的发酵液进行过滤除去沉。

12、淀物， 得到杀小菜蛾生物制剂。 0010 通过以单一的地衣芽孢杆菌作为微生物， 使能够以苦楝、 苦参和百部三种中药的 混合原料同时作为底物进行发酵培养， 能够有效避免多种优势微生物菌株的共存而产生相 互竞争的问题， 且采用单一的地衣芽孢杆菌进行发酵培养， 使能够更好的利用发酵底物的 营养物质， 能够使苦楝、 苦参和百部中的活性成分均被有效的释放出来， 从而使得到的发酵 液作为生物杀虫剂时能够有效的对小菜蛾进行杀灭的功能， 且地衣芽孢杆菌本身具有促生 作用， 能够使采用本杀虫生物制剂时对植物如蔬菜等具有促进生长的效果， 提高植物的生 长能力； 同时， 通过发酵的方式还能够保证发酵液中活性物质的活。

13、性， 增加其杀小菜蛾的功 能。 0011 在上述发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法中， 作为优选， 步骤A中所 述苦楝： 苦参： 百部： 水的质量比为1： 0.50.7： 0.70.9： 1015。 为了使通过发酵之后得 到的发酵液中各活性物质的成分对小菜蛾具有更好的杀虫能力， 尤其使从苦楝中得到的川 楝素和从苦参中得到的苦参碱占有较高的比例， 提高对小菜蛾具有更好的阻断神经和麻痹 神经的效果。 0012 在上述发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法中， 作为优选， 步骤A中所 述粉碎处理添加有冰粉， 所述冰粉的添加量为苦楝质量的2.05.0。 由于冰粉具有一 定的硬度和棱角， 在。

14、粉碎的过程中能够对植物组织细胞壁起到破坏作用， 从而使更好的释 放细胞内的活性成分； 同时， 能够使植物组织粉碎的更彻底， 提高地衣芽孢杆菌对它们的有 效利用， 且采用的冰粉溶化后直接形成水当然发酵液原料， 也不会对原料产生其副作用。 作 为进一步的优选， 所述冰粉的温度为-30-10。 提高冰粉的硬度， 使具有更好的刺破能 力。 0013 在上述发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法中， 作为优选， 步骤B中所 述灭菌后向发酵底物中添加入碳源， 所述碳源的添加量为苦楝的加入量的510。 通过 在前期加入少量的碳源， 能够提高地衣芽孢杆菌的生长繁殖， 繁殖生长的大量地衣芽孢杆 菌能够更充分。

15、和快速的利用加入了苦楝、 苦参和百部原料。 作为进一步的优选， 所述碳源选 自葡萄糖、 果糖和蔗糖中的一种或几种。 有利于提高地衣芽孢杆菌的利用效率。 0014 在上述发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法中， 作为优选， 步骤B中所 述发酵处理的时间为710天。 目的是为了充分的利用发酵底物的营养成分， 提高植物组织 细胞中活性成分的释放。 0015 在上述发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法中， 作为优选， 步骤B中所 述发酵处理时体系的pH值为6.57.5。 使发酵培养的环境更有利于地衣芽孢杆菌的生长。 说 明 书 2/7 页 4 CN 108041102 A 4 0016 在。

16、上述发酵中药复合原料制备杀小菜蛾生物制剂的方法中， 作为优选， 步骤C中所 述杀小菜蛾生物制剂中含有川楝素、 苦参碱、 百部定碱和异百部定碱成分。 通过采用本发明 的地衣芽孢杆菌作为促生菌进行发酵培养， 能够使苦楝、 苦参和百部中的有效活性成分川 楝素、 苦参碱、 百部定碱和异百部定碱更好的释放， 从而使得到的发酵液对小菜蛾具有较好 的杀虫能力， 且具有针对性强的效果。 0017 综上所述， 本发明与现有技术相比， 具有以下优点： 0018 本发明通过以单一的地衣芽孢杆菌作为唯一的微生物菌发酵， 使能够同时对苦 楝、 苦参和百部进行一次性发酵培养， 且有效的利用它们作为营养成分进行生长， 从而。

17、使有 利于其中的活性成分的释放， 使生物制剂中能够同时含有川楝素、 苦参碱和百部定碱及异 百部定碱实现提高了对小菜蛾的杀虫功能， 且采用的地衣芽孢杆菌对疏菜植物本身具有促 进生长的效果， 在使用本生物制剂的同时对疏菜植物具有促进生长的效果。 具体实施方式 0019 下面通过具体实施例， 对本发明的技术方案作进一步具体的说明， 但是本发明并 不限于这些实施例。 0020 实施例1 0021 按照苦楝中药原料、 苦参中药原料和百部中药原料的用量比例选取各自的中药原 料， 先选取生长健康的新鲜苦楝中药原料， 使苦楝的干重为900g， 用清水清洗干净后， 再采 用粉碎机进行粉碎处理成苦楝浆液,粉碎过程。

18、中可加入少量的水以避免过热而破坏活性成 分， 采用新鲜的苦楝本身带有一部分水， 也是为了起到防止过热的效果； 再选取新鲜的苦参 中药原料， 使苦参的干重为700g， 用清水清洗干净后， 再采用粉碎机进行粉碎处理成苦参浆 液， 最后再选取新鲜的百部中药原料， 使百部的干重为630g， 用清洗干净后， 再进行粉碎处 理成百部浆液， 然后， 将上述得到的三种浆液加入发酵罐内进行混合， 再加入水稀释成10L 体积的含水的发酵底物； 将得到的发酵底物进行灭菌处理后， 灭菌处理采用的温度为80， 灭菌处理的时间为15分钟， 灭菌处理后， 再将经活化的地衣芽孢杆菌按照109cfu/mL的量接 种到灭菌后的发。

19、酵底物， 这里地衣芽孢杆菌直接通过购买得到即可， 具体的活性采用常规 的种子培养基进行培养活化处理， 得到含活化的地衣芽孢杆菌液， 具体的种子培养基配方 成分如下： 蛋白胨： 10g/L； 酶母膏： 5g/L； 氯化钠： 10g/L,其余为水， 将得到的培养液取一定 量使接种量达到要求加入上述发酵底物的溶液中即可， 接种完成后， 控制发酵体系的发酵 温度在2530的条件下， 并使体系的pH值控制在7.17.3的范围内进行发酵处理10 天， 发酵结束后， 得到相应的发酵液； 再将得到的发酵液进行滤心过滤除去沉淀物， 即可得 到杀小菜蛾生物制剂。 将得到的生物制剂进行分析， 具体分析结果如下： 0。

20、022 本生物制剂中含有川楝素、 苦参碱、 百部定碱和异百部定碱成分较高， 且川楝素： 苦参碱： 百部定碱： 异百部定碱的含量比比为1： 0.5： 0.2： 0.4。 从含量情况还可以分析出， 其 中苦楝中川楝素的提取率高达60以上， 苦参中苦参碱的提取率达到40以上， 百部中百 部定碱和异百部定碱的总提取达到50以上。 0023 采用本发明得到的生物进行杀小菜蛾实验， 将受小菜蛾危害的疏菜植物采用本生 物制剂(直接将得到的液体生物制剂采用水稀释到100倍后)进行喷洒杀虫处理。 发现喷洒 本生物制剂后， 两天内均能够将小菜蛾基本上全部杀灭， 杀灭率达到95以上， 五天以上基 说 明 书 3/7。

21、 页 5 CN 108041102 A 5 本上能够完全杀灭， 具有很好的杀小菜蛾的效果； 且喷洒后， 疏菜的生长情况更好， 疏菜具 采选用青菜等绿叶的疏菜， 可见具有一定的促生作用效果。 0024 实施例2 0025 按照苦楝中药原料、 苦参中药原料和百部中药原料的用量比例选取各自的中药原 料， 先选取生长健康的新鲜苦楝中药原料， 用清水清洗干净后， 先将苦楝切断成小颗粒物， 再采用粉碎机进行粉碎处理成苦楝浆液； 再选取新鲜的苦参中药原料， 用清水清洗干净后， 再采用粉碎机进行粉碎处理成苦参浆液， 最后再选取新鲜的百部中药原料， 用清洗干净后， 再进行粉碎处理成百部浆液， 然后， 将上述得到。

22、的三种浆液加入发酵罐内进行混合， 再加入 水稀释成含水的发酵底物； 各成分的加入量按照苦楝： 苦参： 百部： 水的质量比为1： 0.5： 0.7： 10， 这里苦楝、 苦参和百部的质量按照干重进行折算， 将得到的发酵底物进行灭菌处理 后， 灭菌处理采用的温度为85， 灭菌处理的时间为10分钟， 灭菌处理后， 再将经活化的地 衣芽孢杆菌按照108cfu/mL的量接种到灭菌后的发酵底物， 这里地衣芽孢杆菌直接通过购 买得到即可， 具体的活性采用常规的种子培养基进行培养活化处理， 得到含活化的地衣芽 孢杆菌液， 本实施例的地衣芽孢杆菌的活化同实施例1的一致， 接种完成后， 控制发酵体系 的发酵温度在。

23、3035的条件下， 并使体系的pH值控制在6.57.0的范围内进行发酵处 理7天， 发酵结束后， 得到相应的发酵液； 先进行粗滤， 除去发酵液中较大的固体残留物， 再 进行精滤， 即可得到杀小菜蛾生物制剂。 0026 本生物制剂中含有川楝素、 苦参碱、 百部定碱和异百部定碱成分较高， 且川楝素： 苦参碱： 百部定碱： 异百部定碱的含量比比为1： 0.4： 0.3： 0.5。 从含量情况还可以分析出， 其 中苦楝中川楝素的提取率高达60以上， 苦参中苦参碱的提取率达到40以上， 百部中百 部定碱和异百部定碱的总提取达到50以上。 0027 采用本发明得到的生物进行杀小菜蛾实验， 将受小菜蛾危害的。

24、疏菜植物采用本生 物制剂(直接将得到的液体生物制剂采用水稀释到200倍后)进行喷洒杀虫处理。 发现喷洒 本生物制剂后， 两天内均能够将小菜蛾基本上全部杀灭， 杀灭率达到93以上， 五天以上基 本上能够完全杀灭， 具有很好的杀小菜蛾的效果， 且喷洒后， 疏菜的生长情况更好， 疏菜具 采选用青菜等绿叶的疏菜， 可见具有一定的促生作用效果。 0028 实施例3 0029 按照苦楝中药原料、 苦参中药原料和百部中药原料的用量比例选取各自的中药原 料， 先选取生长健康的新鲜苦楝中药原料， 用清水清洗干净后， 先将苦楝切断成小颗粒物， 再采用粉碎机进行粉碎处理成苦楝浆液； 再选取新鲜的苦参中药原料， 用清。

25、水清洗干净后， 再采用粉碎机进行粉碎处理成苦参浆液， 最后再选取新鲜的百部中药原料， 用清洗干净后， 再进行粉碎处理成百部浆液， 然后， 将上述得到的三种浆液加入发酵罐内进行混合， 再加入 水稀释成含水的发酵底物； 各成分的加入量按照苦楝： 苦参： 百部： 水的质量比为1： 0.7： 0.9： 15， 这里苦楝、 苦参和百部的质量按照干重进行折算， 将得到的发酵底物进行灭菌处理 后， 灭菌处理采用的温度为80， 灭菌处理的时间为15分钟， 灭菌处理后， 选加入蔗糖， 使蔗 糖的加入量为苦楝加入重量的5， 最好按照苦楝的干重进行折算， 再将经活化的地衣芽孢 杆菌按照1.5x 108cfu/mL的。

26、量接种到灭菌后的发酵底物， 这里地衣芽孢杆菌直接通过购买 得到即可， 接种完成后， 控制发酵体系的发酵温度在2832的条件下， 并使体系的pH值 控制在7.17.5的范围内进行发酵处理8天， 发酵结束后， 得到相应的发酵液； 先进行粗滤， 说 明 书 4/7 页 6 CN 108041102 A 6 除去发酵液中较大的固体残留物， 再进行精滤， 即可得到杀小菜蛾生物制剂。 0030 本生物制剂中含有川楝素、 苦参碱、 百部定碱和异百部定碱成分较高， 且川楝素： 苦参碱： 百部定碱： 异百部定碱的含量比比为1： 0.4： 0.3： 0.5。 从含量情况还可以分析出， 其 中苦楝中川楝素的提取率高。

27、达60以上， 苦参中苦参碱的提取率达到40以上， 百部中百 部定碱和异百部定碱的总提取达到50以上。 0031 采用本发明得到的生物进行杀小菜蛾实验， 将受小菜蛾危害的疏菜植物采用本生 物制剂(直接将得到的液体生物制剂采用水稀释到200倍后)进行喷洒杀虫处理。 发现喷洒 本生物制剂后， 两天内均能够将小菜蛾基本上全部杀灭， 杀灭率达到93以上， 五天以上基 本上能够完全杀灭， 具有很好的杀小菜蛾的效果， 且喷洒后， 疏菜的生长情况更好， 疏菜具 采选用青菜等绿叶的疏菜， 可见具有一定的促生作用效果。 0032 实施例4 0033 将分别经过清水清洗处理干净后的苦楝中药原料、 苦参中药原料和百部。

28、中药原 料， 按照苦楝中药原料、 苦参中药原料和百部中药原料的用量比例选取各自的中药原料， 将 三种中药原料选进行剪碎成小颗粒物， 再加入冰粉， 初始加入的冰粉的温度为-30,使冰 粉的加入量为苦楝干重的5.0， 然后进行强力搅拌粉碎处理， 搅拌速度控制在10000转/分 钟左右， 得到直接混合后的混合浆料， 再加入水稀释成含水的发酵底物； 使各成分的加入量 按照苦楝： 苦参： 百部： 水的质量比为1： 0.6： 0.7： 12， 这里苦楝、 苦参和百部的质量按照干重 进行折算， 将得到的发酵底物进行灭菌处理后， 灭菌处理采用的温度为80， 灭菌处理的时 间为20分钟， 灭菌处理后， 选加入葡。

29、萄糖， 使葡萄糖的加入量为苦楝加入重量的10， 最好 按照苦楝的干重进行折算， 再将经活化的地衣芽孢杆菌按照1.2x 108cfu/mL的量接种到灭 菌后的发酵底物， 这里地衣芽孢杆菌直接通过购买得到即可， 一般相当于经活化的地衣芽 孢杆菌培养液100mL左右， 接种完成后， 控制发酵体系的发酵温度在3033的条件下， 并使体系的pH值控制在7.17.5的范围内进行发酵处理9天， 发酵结束后， 得到相应的发酵 液； 先进行粗滤， 除去发酵液中较大的固体残留物， 再进行精滤， 即可得到杀小菜蛾生物制 剂。 0034 本生物制剂中含有川楝素、 苦参碱、 百部定碱和异百部定碱成分较高， 且川楝素： 。

30、苦参碱： 百部定碱： 异百部定碱的含量比比为1： 0.6： 0.4： 0.6。 从含量情况还可以分析出， 其 中苦楝中川楝素的提取率高达75以上， 苦参中苦参碱的提取率达到60以上， 百部中百 部定碱和异百部定碱的总提取达到60以上。 0035 采用本发明得到的生物进行杀小菜蛾实验， 将受小菜蛾危害的疏菜植物采用本生 物制剂(直接将得到的液体生物制剂采用水稀释到200倍后)进行喷洒杀虫处理。 发现喷洒 本生物制剂后， 两天内均能够将小菜蛾基本上全部杀灭， 杀灭率达到93以上， 五天以上基 本上能够完全杀灭， 具有很好的杀小菜蛾的效果， 且喷洒后， 疏菜的生长情况更好， 疏菜具 采选用青菜等绿叶。

31、的疏菜， 可见具有一定的促生作用效果。 0036 实施例5 0037 将分别经过清水清洗处理干净后的苦楝中药原料、 苦参中药原料和百部中药原 料， 按照苦楝中药原料、 苦参中药原料和百部中药原料的用量比例选取各自的中药原料， 将 三种中药原料选进行剪碎成小颗粒物， 再加入冰粉， 初始加入的冰粉的温度为-10,使冰 粉的加入量为苦楝干重的2.0， 然后进行强力搅拌粉碎处理， 搅拌速度控制在8000转/分 说 明 书 5/7 页 7 CN 108041102 A 7 钟左右， 得到直接混合后的混合浆料， 再加入水稀释成含水的发酵底物； 使各成分的加入量 按照苦楝： 苦参： 百部： 水的质量比为1：。

32、 0.6： 0.8： 13， 这里苦楝、 苦参和百部的质量按照干重 进行折算， 将得到的发酵底物进行灭菌处理后， 灭菌处理采用的温度为90， 灭菌处理的时 间为10分钟， 灭菌处理后， 选加入蔗糖， 使蔗糖的加入量为苦楝加入重量的8， 最好按照苦 楝的干重进行折算， 再将经活化的地衣芽孢杆菌按照3.0x 108cfu/mL的量接种到灭菌后的 发酵底物， 这里地衣芽孢杆菌直接通过购买得到即可， 一般相当于经活化的地衣芽孢杆菌 培养液100mL左右， 接种完成后， 控制发酵体系的发酵温度在3033的条件下， 并使体 系的pH值控制在7.17.5的范围内进行发酵处理9天， 发酵结束后， 得到相应的发。

33、酵液； 先 进行粗滤， 除去发酵液中较大的固体残留物， 再进行精滤， 即可得到杀小菜蛾生物制剂。 0038 本生物制剂中含有川楝素、 苦参碱、 百部定碱和异百部定碱成分较高， 且川楝素： 苦参碱： 百部定碱： 异百部定碱的含量比比为1： 0.5： 0.4： 0.5。 从含量情况还可以分析出， 其 中苦楝中川楝素的提取率高达75以上， 苦参中苦参碱的提取率达到60以上， 百部中百 部定碱和异百部定碱的总提取达到60以上。 0039 采用本发明得到的生物进行杀小菜蛾实验， 将受小菜蛾危害的疏菜植物采用本生 物制剂(直接将得到的液体生物制剂采用水稀释到500倍后)进行喷洒杀虫处理。 发现喷洒 本生物。

34、制剂后， 两天内均能够将小菜蛾基本上全部杀灭， 杀灭率达到90以上， 五天以上基 本上能够完全杀灭， 具有很好的杀小菜蛾的效果， 且喷洒后， 疏菜的生长情况更好， 疏菜具 采选用青菜等绿叶的疏菜， 可见具有一定的促生作用效果。 0040 比较例1 0041 本比较例选用单一的苏云金杆菌作为微生物菌进行具体的比例实施， 苏云金杆菌 通过市售购买即可。 0042 按照苦楝中药原料、 苦参中药原料和百部中药原料的用量比例选取各自的中药原 料， 先选取生长健康的新鲜苦楝中药原料， 使苦楝的干重为900g， 用清水清洗干净后， 再采 用粉碎机进行粉碎处理成苦楝浆液,粉碎过程中可加入少量的水以避免过热而破。

35、坏活性成 分， 采用新鲜的苦楝本身带有一部分水， 也是为了起到防止过热的效果； 再选取新鲜的苦参 中药原料， 使苦参的干重为700g， 用清水清洗干净后， 再采用粉碎机进行粉碎处理成苦参浆 液， 最后再选取新鲜的百部中药原料， 使百部的干重为630g， 用清洗干净后， 再进行粉碎处 理成百部浆液， 然后， 将上述得到的三种浆液加入发酵罐内进行混合， 再加入水稀释成10L 体积的含水的发酵底物； 将得到的发酵底物进行灭菌处理后， 灭菌处理采用的温度为80， 灭菌处理的时间为15分钟， 灭菌处理后， 再将经活化的苏云金杆菌按照109cfu/mL的量接种 到灭菌后的发酵底物， 具体的活性采用常规的种。

36、子培养基进行培养活化处理， 得到含活化 的地衣芽孢杆菌液， 具体的种子培养基配方成分如下： 蛋白胨： 10g/L； 酶母膏： 5g/L； 氯化 钠： 10g/L,其余为水， 将得到的培养液取一定量使接种量达到要求加入上述发酵底物的溶 液中即可， 接种完成后， 控制发酵体系的发酵温度在2530的条件下， 并使体系的pH值 控制在7.17.3的范围内进行发酵处理10天， 发酵结束后， 得到相应的发酵液； 再将得到的 发酵液进行滤心过滤除去沉淀物， 即可得到杀小菜蛾生物制剂。 将得到的生物制剂进行分 析， 具体分析结果如下： 0043 本生物制剂中含有川楝素、 苦参碱、 百部定碱和异百部定碱成分较高。

37、， 且川楝素： 苦参碱： 百部定碱： 异百部定碱的含量比比为1： 0.1： 0.05： 0.1， 含量比例相当较大， 从含量 说 明 书 6/7 页 8 CN 108041102 A 8 情况还可以分析出， 其中苦楝中川楝素的提取率高达40以上， 苦参中苦参碱的提取率达 到10以上， 百部中百部定碱和异百部定碱的总提取达到15以上。 0044 采用本发明得到的生物进行杀小菜蛾实验， 将受小菜蛾危害的疏菜植物采用本生 物制剂(直接将得到的液体生物制剂采用水稀释到100倍后)进行喷洒杀虫处理。 发现喷洒 本生物制剂后， 两天内均能够将小菜蛾基本上全部杀灭， 杀灭率达到70以上， 五天以上基 本上也。

38、只能够达到85左右， 杀小菜蛾的效果相对较差； 且喷洒后， 疏菜的生长情况一般， 疏菜具采选用青菜等绿叶的疏菜， 没有明显的促进生长的效果。 0045 比较例2 0046 本比较例选用单一的短小芽孢杆菌作为微生物菌进行具体的比例实施， 短小芽孢 杆菌通过市售购买即可， 具体的实施方式同比较例1一致， 区别仅在于采用短小芽孢杆菌代 替苏云金杆菌。 得到相应的生物制剂。 0047 本生物制剂中含有川楝素、 苦参碱、 百部定碱和异百部定碱成分较高， 且川楝素： 苦参碱： 百部定碱： 异百部定碱的含量比比为1： 0.2： 0.1： 0.1， 含量比例相当较大， 从含量情 况还可以分析出， 其中苦楝中川。

39、楝素的提取率高达45以上， 苦参中苦参碱的提取率达到 15以上， 百部中百部定碱和异百部定碱的总提取达到15以上。 0048 采用本发明得到的生物进行杀小菜蛾实验， 将受小菜蛾危害的疏菜植物采用本生 物制剂(直接将得到的液体生物制剂采用水稀释到100倍后)进行喷洒杀虫处理。 发现喷洒 本生物制剂后， 两天内均能够将小菜蛾基本上全部杀灭， 杀灭率达到75以上， 五天以上基 本上也只能够达到85左右， 杀小菜蛾的效果相对较差； 且喷洒后， 疏菜的生长情况一般， 疏菜具采选用青菜等绿叶的疏菜， 没有明显的促进生长的效果。 0049 本发明中所描述的具体实施例仅是对本发明精神作举例说明。 本发明所属技术领 域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替 代， 但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。 0050 尽管对本发明已作出了详细的说明并引证了一些具体实施例， 但是对本领域熟练 技术人员来说， 只要不离开本发明的精神和范围可作各种变化或修正是显然的。 说 明 书 7/7 页 9 CN 108041102 A 9 。