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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201611157501.6 (22)申请日 2016.12.15 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 106718905 A (43)申请公布日 2017.05.31 (73)专利权人 六盘水黔丰农业发展有限公司 地址 553000 贵州省六盘水市水城县双水 祥和人家7号楼 (72)发明人 曹强 周明辉 任广标 蔡凤相 刘芳 (74)专利代理机构 贵阳中新专利商标事务所 52100 代理人 张行超 (51)Int.Cl. A01H 4/00(2006.01) (56。
2、)对比文件 于金平等.捕蝇草组织培养与快速繁殖研 究. 江苏农业科学 .2008, (第1期), 审查员 马彧博 (54)发明名称 一种捕蝇草组织培养育苗方法 (57)摘要 本发明公开了一种捕蝇草组织培养育苗方 法， 包括以下步骤：（1） 培养基制备、（2） 外植体制 备、（3） 诱导培养、（4） 生根培养以及 （5） 套袋驯 化。 本发明解决了传统播种繁殖、 叶插繁殖成功 率极低、 繁殖效率缓慢等问题， 运用采用本发明 所述的方法进行捕蝇草组织培养育苗， 培养基繁 殖系数达到45， 繁殖一批仅需46个月的时间， 具有繁殖系数高、 繁殖速度快的特点， 而且繁育 出来的种苗具有与母体相同的植物特。
3、征， 抗性 好。 大大解决了捕蝇草繁殖困难的问题， 有利于 捕蝇草进行规模化、 工厂化生产。 权利要求书1页 说明书3页 CN 106718905 B 2018.10.02 CN 106718905 B 1.一种捕蝇草组织培养育苗方法， 其特征在于， 包括以下步骤： （1） 培养基制备： 培养基包括诱导增殖培养基和生根培养基， 诱导增殖培养基为2/3MS+ 6-BA0. 1mg/L+IBA0.2mg/ml+蔗糖30g/L+琼脂5g/L+ph5.9； 生根培养基为1/2MS+NAA0.1mg/ L+蔗糖30g/L+活性碳0.2g/L+琼脂5g/L+pH5 .9； 将配制好的诱导增殖培养基和生根培。
4、养基 分别以每瓶80ml装入培养瓶中， 采用121、 0.5MPa进行灭菌25min后冷却凝固备用； （2） 外植体制备： 在春夏季节， 选用成熟健壮4年以上的捕蝇草作为外植体母体， 取新发 出且鲜绿的芽头作为外植体， 并进行消毒、 清洗； （3） 诱导培养： 接种器具进行灭菌， 双手消毒后， 将步骤 （2） 中制备得到的外植体放 在 超净工作台内， 按无菌操作要求把外植体置于步骤 （1） 制备得到的诱导增殖培养基中， 外植 体伤口处接触到诱导增殖培养基， 盖好培养瓶盖后放置于消毒后的培养室内进行培养30 天， 即可诱导培养出完整小植株； （4） 生根培养： 将诱导培养得到的完整小植株在超净工。
5、作台内按无菌要求转接入步骤 （1） 制备得到的生根培养基中进行生根培养23个月； （5） 套袋驯化： 将生根培养得到幼苗取出， 用1000倍多菌灵浸泡10min后流水冲洗后种 植于泥炭土与珍珠岩混合基质中， 用透光的袋子罩住整株植株， 放置在散光通风处闷养20- 30天后取走袋子即可。 2.根据权利要求1所述的一种捕蝇草组织培养育苗方法， 其特征在于： 步骤 （2） 中外植 体消毒、 清洗步骤是： 先用流水冲洗30min， 之后用吸水纸吸干水份， 然后于超净工作台上用 75%的乙醇浸泡13min， 期间不断摇晃外植体， 再用无菌水冲洗35遍后用无菌镊子取出放 置在浓度为0.10.2%升汞中浸泡。
6、35min， 期间不断摇晃外植体， 再用无菌水冲洗58遍后用 无菌镊子取出放置在无菌吸水纸上吸干水份， 即可。 3.根据权利要求1所述的一种捕蝇草组织培养育苗方法， 其特征在于： 步骤 （3） 中， 进行 诱导培养时， 培养室温度控制在25， 湿度4050%， 光照4500Lux每天10小时。 4.根据权利要求1所述的一种捕蝇草组织培养育苗方法， 其特征在于： 步骤 （4） 中， 生根 培养的温度控制在25， 光照5500Lux每天12小时。 5.根据权利要求1所述的一种捕蝇草组织培养育苗方法， 其特征在于： 步骤 （5） 中， 泥炭 土与珍珠岩混合基质中泥炭土与珍珠岩的体积比为4:1。 权 。
7、利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106718905 B 2 一种捕蝇草组织培养育苗方法 技术领域 0001 本发明涉及植物组织培养育苗技术领域， 具体涉及一种捕蝇草组织培养育苗方 法。 背景技术 0002 捕蝇草 （Dionaea muscipula） ， 英文名称为Venus Flytrap， 是原产于北美洲的一 种多年生草本植物， 是一种非常有趣的食虫植物。 随着人们生活水平日益改善， 越来越多的 花友开始种植捕蝇草。 然而， 在原产地的捕蝇草在生存上却受到人类活动的威胁。 人口快速 增加因而剥夺捕蝇草的生存空间， 而且因为人为干预、 自然野火的发生， 使得这些原产地开 始长出一些小。
8、型灌木， 遮蔽捕蝇草的阳光， 造成一些捕蝇草品种的濒临灭绝。 0003 捕蝇草的繁殖方式主要是播种繁殖和叶插繁殖。 0004 采用播种繁殖存在的问题为： 捕蝇草可以自花授粉， 但通常得进行人工授粉才确 实会结果， 捕蝇草因雌雄蕊不会一起成熟， 人工授粉较难成功， 捕蝇草的种子不耐保存， 且 种子非常细小直径不到一毫米， 不易保存， 极易损坏。 0005 采用叶插繁殖存在的问题为： 采用叶插繁殖新芽形成很慢， 并且不同品种对温湿 度， 光照等要求不一样， 叶插繁殖难以成功。 0006 采用传统播种繁殖、 叶插繁殖， 有着成功率极低， 繁殖效率缓慢等缺点， 难以满足 捕蝇草市场需求。 目前， 关于。
9、捕蝇草的繁殖研究很少， 国内进行工厂化生产捕蝇草的企业很 少， 还没有一种关于捕蝇草组织培养育苗的方法， 因此在一定程度上制约了捕蝇草的工厂 化生产。 发明内容 0007 本发明要解决的技术问题是： 提供一种捕蝇草组织培养育苗方法， 提高捕蝇草组 培苗栽培的成活率， 节约成本， 为捕蝇草工厂化生产提供关键技术。 0008 本发明的目的是通过以下技术方案实现的： 0009 一种捕蝇草组织培养育苗方法， 包括以下步骤： 0010 （1） 培养基制备： 培养基包括诱导增殖培养基和生根培养基， 诱导增殖培养基为2/ 3MS+6-BA01mg/L+IBA0.2mg/ml+蔗糖30g/L+琼脂5g/L+p。
10、h5.9； 生根培养基为1/2MS+ NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+活性碳0.2g/L+琼脂5g/L+ph5.9； 将配制好的诱导增殖培养基和生 根培养基分别以每瓶80ml装入培养瓶中， 采用121、 0.5MPa进行灭菌25min后冷却凝固备 用； 0011 （2） 外植体制备： 在春夏季节， 选用成熟健壮4年以上的捕蝇草作为外植体母体， 取 新发出且鲜绿的芽头作为外植体， 并进行消毒、 清洗； 0012 （3） 诱导培养： 接种器具进行灭菌， 双手消毒后， 将步骤 （2） 中制备得到的外植体在 超净工作台内， 按无菌操作要求把外植体置于步骤 （1） 制备得到的诱导增殖培养基中， 外。
11、植 体伤口处接触到诱导增殖培养基， 盖好培养瓶盖后放置于消毒后的培养室内进行培养30 说 明 书 1/3 页 3 CN 106718905 B 3 天， 即可诱导培养出完整小植株； 0013 （4） 生根培养： 将诱导培养得到的完整小植株在超净工作台内按无菌要求转接入 步骤 （1） 制备得到的生根培养基中进行生根培养23个月； 0014 （5） 套袋驯化： 将生根培养得到幼苗取出， 用1000倍多菌灵浸泡10min后流水冲洗 后种植于泥炭土与珍珠岩混合基质中， 用透光的袋子罩住整株植株， 放置在散光通风处闷 养20-30天后取走袋子即可。 0015 优选的， 步骤 （2） 中外植体消毒、 清洗。
12、步骤是： 先用流水冲洗30min， 之后用吸水纸 吸干水份， 然后于超净工作台上用75%的乙醇浸泡13min， 期间不断摇晃外植体， 再用无菌 水冲洗35遍后用无菌镊子取出放置在浓度为0.10.2%升汞中浸泡35min， 期间不断摇晃 外植体， 再用无菌水冲洗58遍后用无菌镊子取出放置在无菌吸水纸上吸干水份， 即可。 0016 优选的， 步骤 （3） 中， 进行诱导培养时， 培养室温度控制在25， 湿度4050%， 光照 4500Lux每天10小时。 0017 优选的， 步骤 （4） 中， 生根培养的温度控制在25， 光照5500Lux每天12小时。 0018 优选的， 步骤 （5） 中， 泥。
13、炭土与珍珠岩混合基质中泥炭土与珍珠岩的体积比为4:1。 0019 本发明的有益效果： 采用上述方法后， 本发明解决了传统播种繁殖、 叶插繁殖成功 率极低、 繁殖效率缓慢等问题， 运用本发明进行捕蝇草组织培养育苗， 培养基繁殖系数达到 45， 繁殖一批仅需46个月的时间， 具有繁殖系数高、 繁殖速度快的特点， 而且繁育出来的 种苗具有与母体相同的植物特征， 抗性好。 大大解决了捕蝇草繁殖困难的问题， 有利于捕蝇 草进行规模化、 工厂化生产。 具体实施方式 0020 下面结合具体的实施例对发明进行进一步介绍： 0021 一种捕蝇草组织培养育苗方法， 包括以下步骤： 0022 （1） 培养基制备： 。
14、培养基包括诱导增殖培养基和生根培养基， 诱导增殖培养基为2/ 3MS+6-BA01mg/L+IBA0.2mg/ml+蔗糖30g/L+琼脂5g/L+ph5.9； 生根培养基为1/2MS+ NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+活性碳0.2g/L+琼脂5g/L+ph5.9； 将配制好的诱导增殖培养基和生 根培养基分别以每瓶80ml装入培养瓶中， 采用121、 0.5MPa进行灭菌25min后冷却凝固备 用； 0023 （2） 外植体制备： 在春夏季节， 选用成熟健壮4年以上的捕蝇草作为外植体母体， 取 新发出且鲜绿的芽头作为外植体， 并进行消毒、 清洗； 其中， 外植体消毒、 清洗步骤是： 先用 。
15、流水冲洗30min， 之后用吸水纸吸干水份， 然后于超净工作台上用75%的乙醇浸泡13min， 期 间不断摇晃外植体， 再用无菌水冲洗35遍后用无菌镊子取出放置在浓度为0.10.2%升汞 中浸泡35min， 期间不断摇晃外植体， 再用无菌水冲洗58遍后用无菌镊子取出放置在无菌 吸水纸上吸干水份， 即可； 0024 （3） 诱导培养： 接种器具进行灭菌， 双手消毒后， 将步骤 （2） 中制备得到的外植体在 超净工作台内， 按无菌操作要求把外植体置于步骤 （1） 制备得到的诱导增殖培养基中， 外植 体伤口处接触到诱导增殖培养基， 盖好培养瓶盖后放置于消毒后的培养室内进行培养30 天， 培养室温度控。
16、制在25， 湿度4050%， 光照4500Lux每天10小时， 即可诱导培养出完整小 植株； 说 明 书 2/3 页 4 CN 106718905 B 4 0025 （4） 生根培养： 将诱导培养得到的完整小植株在超净工作台内按无菌要求转接入 步骤 （1） 制备得到的生根培养基中进行生根培养23个月， 生根培养的温度控制在25， 光 照5500Lux每天12小时； 0026 （5） 套袋驯化： 将生根培养得到幼苗取出， 用1000倍多菌灵浸泡10min后流水冲洗 后种植于泥炭土与珍珠岩混合基质中， 泥炭土与珍珠岩的体积比为4:1， 用透光的袋子罩住 整株植株， 放置在散光通风处闷养20-30天后取走袋子即可。 0027 以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明， 不能认定 本发明的具体实施只局限于这些说明。 对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说， 在 不脱离本发明构思的前提下， 还可以做出若干简单推演或替换， 都应当视为属于本发明的 保护范围。 说 明 书 3/3 页 5 CN 106718905 B 5 。