技术领域
本发明涉及一种包含miRNA或植物提取物的、用于使皮肤、尤其是人体皮肤脱色的饮料。
背景技术
皮肤的色素沉着尤其对女人而言是个美学问题，但相当多的男人也对该问题变得愈发敏感。例如，不均匀的色素沉着可能以老年斑的形式或以色素沉着不规则性的形式出现。
三种色素通过它们的表面分布而造成皮肤颜色：胡萝卜素、血红素和黑色素。
在这三种色素中，黑色素是皮肤中最丰富的色素：它在皮肤中的含量水平和确切组成(真黑素或褐黑素)决定其颜色。在参与黑素生成的各种酶(包括酪氨酸酶)的帮助下，黑色素从酪氨酸产生。
为了使肤色均一，现在已知将脱色化妆品组合物应用于皮肤，例如美白霜。这些乳霜尤其包含脱色活性剂。
这些活性剂的例子有氢醌、曲酸或壬二酸。
然而，依然需要提供更有效的和更易于施用的用于皮肤脱色的新型产品。
此外，考虑到消费者对无毒的、非免疫原性的和生物可降解的产品的不断增加的需求，以及对于源自化学工业的化合物的日益严格的监管约束，理想的是这些产品是天然来源的。
已经证实，某些人类miRNA能够减少参与黑色素生成的酶的黑色素产生(FR1161950)。
此外，Zhang等人已经证实，小鼠中的某些基因的表达可以用植物miRNA来调节(Zhang等.Exogenous plant MIR168a specifica11y targets mammalian LDLRAP1：evidence of cross-kingdom regulation by microRNA.CellRes.2012Jan；22(1)：107-26)。
申请人现已证实，当用植物产生的人类miRNA的模拟物处理人黑色素细胞时，该细胞的黑色素水平下降；并且口服特定的植物miRNA改变了皮肤的人黑色素细胞中的黑色素水平。
发明内容
因此，本发明的主题是一种尤其针对人类皮肤的脱色饮料，其包含选自ppt-miR1039-5p、zma-miR528a*、osa-miR4128e-5p以及hsa-mir330的至少一种植物miRNA。
词语“微RNA(miRNA)”理解为指长度约为21个核苷酸的非编码RNA。已经证实它们在基因表达的转录后调节中发挥关键作用，例如通过影响翻译的水平或使目标mRNA失稳定(Friedman RC等，Most mammalian mRNAs are conserved targets of microRNAs.Genome Res.2009，19：92-105)。
目前知道的miRNA被特别地记录在www.mirbase.org中。
ppt-miR1039-5p是存在于小立碗藓(Physcomitrella patens)(一种北半球常见的苔藓物种)的整个植株(尤其是假根、叶、茎和分生组织)的提取物中的miRNA。miRNA ppt-miR1039-5p在mirbase中的登记号是MIMAT0005148，且其序列为5’-UCU UUG GGU CUU UCU CUC CUG-3’(SEQ ID NO：1)。
zma-miR528a*是存在于玉米(Maize)的整个植株(尤其是根、叶、茎、分生组织、种子、花和果实)的提取物中的miRNA。miRNA zma-miR528a*在mirbase中的登记号是MIMAT0015362，且其序列为5’-CCU GUG CCU GCC UCU UCC AUU-3’(SEQ ID NO：2)。
osa-miR1428e-5p是存在于水稻(Oryza sativa)(一种原产于亚洲的稻物种)的整个植株(尤其是根、叶、茎、分生组织、种子、花和果实)的提取物中的miRNA。miRNA osa-miR4128e-5p在mirbase中的登记号是MIMAT0007784，且其序列为5’-AAU UCA CAG GCC CUA UCU UGU G-3’(SEQ ID NO：3)。
miRNA hsa-mir330是存在于人RNA中的miRNA。miRNA hsa-mir330在mirbase中的登记号是MI0000803，且其序列为5’-CUU UGG CGA UCA CUG CCU CUC UGG GCC UGU GUC UUA GGC UCU GCA AGA UCA ACC GAG CAA AGC ACA CGG CCU GCA GAG AGG CAG CGC UCU GCC C-3’(SEQ IDNO：4)。
本发明的饮料可以有利地包含占饮料总重量的0.0001％到10％重量、优选0.001％到1％重量比例范围的所述miRNA。
本发明的主题也涉及一种包含至少一种选自小立碗藓、玉米和水稻的植物提取物的脱色饮料。
本发明的饮料可以有利地包含三种植物提取物：小立碗藓、玉米和水稻。
本发明的饮料可以有利地包含占饮料总重量的0.0001％到10％重量、优选0.001％到1％重量比例范围的所述植物提取物。
可用于本发明的植物提取物可以源自整个植株，尤其是根、叶、茎、分生组织、种子、花和果实。
所述提取物可以在任何溶剂的帮助下，优选使用水性溶剂、醇溶剂或油溶剂得到。
词语“水性溶剂”被理解为指主要含水的溶剂。
词语“醇溶剂”被理解为指任选地在水的存在下，选自一元醇类(如甲醇、乙醇或异丙醇)以及二醇类(如丙二醇或二丙二醇)的溶剂。
词语“油溶剂”被理解为指选自食用油的溶剂。
除前述miRNA之外，本发明的饮料也可以包含至少一种食品领域中的常用添加剂。
特别地，根据优选实施方式，本发明的饮料可以包含，但不限于下述一种或多种添加剂：
-一种或多种甜味剂，例如葡萄糖和/或甜味剂替代品如阿斯巴甜、三氯蔗糖、山梨糖醇、其他多元醇或乙酰磺胺酸钾。所述甜味剂和/或甜味剂替代品可以以饮料总重量的大约0.001％到30％重量的量存在于饮料中；
-一种或多种质构剂和/或胶凝剂，例如黄原胶、角叉菜胶、果胶或纤维素化合物。所述质构剂和/或胶凝剂可以以饮料总重量的大约0.001％到30％重量的量存在于饮料中；
-一种或多种营养物质，例如矿物质(Ca2+，Mg2+...)、维生素(A，B，C，D，K...)、益生菌、果汁和花蜜、椰汁，或抗氧化剂如石榴提取物。所述营养物质可以以饮料总重量的大约0.001％到30％重量的量存在于饮 料中；
-一种或多种乳化剂。所述乳化剂可以以饮料总重量的大约0.001％到30％重量的量存在于饮料中；
-一种或多种防腐剂，例如交联酚类或杀生物剂(山梨酸酯、丙酸酯或苯甲酸酯)。所述防腐剂可以以饮料总重量的大约0.001％到30％重量的量存在于饮料中；
-一种或多种酸，例如柠檬酸。所述酸可以以饮料总重量的大约0.001％到30％重量的量存在于饮料中；
-一种或多种着色剂和/或食用调味剂。所述着色剂和/或食用调味剂可以以饮料总重量的大约0.001％到30％重量的量存在于饮料中；
-一种或多种香料和/或口味增强剂。所述香料和/或口味增强剂可以以饮料总重量的大约0.001％到30％重量的量存在于饮料中；
-一种或多种氨基酸和/或蛋白质，例如胶原蛋白或弹性蛋白。所述氨基酸和/或蛋白质可以以饮料总重量的大约0.001％到30％重量的量存在于饮料中；
-咖啡因，其可以以饮料总重量的大约0.001％到30％重量的量存在于本饮料中；
-及其混合物，但不限于该列举的种类。
上述添加剂的实例被特别引述于“食品与饮料添加剂——美国工业研究和对2014年、2019年的预测(Freedonia集团)(Food and Beverage Additives-US Industry Study with Forecasts for2014&2019(Freedonia group))”中，其描述了通常用于食品工业的广泛食品添加剂，这些食品添加剂适合被用作本发明的脱色饮料的附加成分。
本发明的主题也涉及本发明的脱色饮料用于使皮肤(尤其是人体皮肤)脱色的用途。
例如，本发明的饮料可以每天饮用一次或两次，在饭前和/或饭后饮用。
该饮料可以以多种方式提供给消费者，例如易拉罐、瓶子或纸盒。
附图简要说明
图1显示了用ppt-miR1039-5p或对照miR处理的MNT1细胞的 酪氨酸酶的蛋白质印迹分析。
实施例
实施例1：ppt-miR1039-5p的处理
材料和方法
细胞
在37℃以及5％二氧化碳的潮湿气氛中，在含10％胎牛血清(#10270，Gibco)、1％青霉素-链霉素(#15140，Gibco)和1％L-谷氨酰胺(#25030，Gibco)的RPMI1640培养基(#21875，Gibco)中培养人黑素瘤MNT-1色素细胞(Reish等，1995)。
miRNA的模拟物
第-1日，在六孔板(#353046，Falcon)的每个孔中接种4×105的MNT-1细胞。
第零日，利用5微升的Lipofectamine2000(#1668-019，Invitrogen)，用50和100nM的miRNA模拟物(ppt-miR1039-5p，Qiagen MSY0005148)转染细胞。
第一日，更换培养基。
第三日，细胞被胰蛋白酶化，并以每个孔4×105细胞接种。
第四日，用50nM的miRNA模拟物(见第零日)再次转染细胞。
第五日，更换培养基。
第七日，细胞被胰蛋白酶化，并以每个孔4×105细胞接种。
第八日，一个六孔板用于RNA的细胞裂解，另一个用于蛋白质的细胞裂解。
蛋白质印迹
用75微升的放射免疫沉淀(RIPA)缓冲液(1％NP40、0.5％脱氧胆酸钠、PBS中的0.1％SDS)以及蛋白酶抑制剂(Roche)在4℃下从六孔板提取蛋白质30分钟。蛋白质溶解产物在4℃下和以14000rpm离心30分钟。上清液被转移至预冷却的1.5毫升微量离心管中，并被置于冰上。蛋白质浓度用BCA蛋白分析法(ThermoFisher)测定。在10％SDS-聚丙 烯酰胺凝胶上分离蛋白质(50微克)，并在室温下以100伏特下一小时将蛋白质转移到ProTron硝酸纤维素膜(Whatman)上。所述膜在缓冲Tris盐溶液(SCT)中用5％的脱脂奶粉饱和。在0.5％(v/v)的Tween/SCT(TTBS)中用稀释的第一抗体(见下)探测所述薄膜过夜，然后将所述薄膜在TTBS中洗涤三次，每次5分钟。第二抗体在TTBS中以1∶10,000稀释，并在室温下应用一小时。之后，所述薄膜在TTBS中洗涤三次，每次10分钟，并利用Amersham Hyperfilm(GE Healthcare)以化学发光溶液SuperSignal WestPico(Thermoscientific)显影。
使用的第一抗体如下：
-山羊多克隆抗Tyr(C-19)，SC-7833(Santa Cruz)，稀释1/1000
-小鼠单克隆抗β-肌动蛋白(CA-15)，A5441(Sigma)，稀释1/7500
使用的第二抗体如下：
-抗小鼠IgG HRP，W402B(Promega)，稀释1/10000
-抗山羊IgG HRP，705-035-147(Jackson ImmunoResearch)，稀释1/10000。
结果
应注意到，添加50nM的ppt-miR1039-5p相对于对照分析降低了酪氨酸酶的量，且在加入100nM的ppt-miR1039-5p的情况下观察到的酪氨酸量的更多下降(图1)。这些结果显示，ppt-miR1039-5p降低MNT1细胞中的酪氨酸酶量。
实施例2：脱色饮料的组合物
制得具有下述组成a)或b)的脱色饮料：
miRNA(ppt-miR1039-5p) 0.1％
组成a)
组成b)