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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710684662.9 (22)申请日 2017.08.11 (71)申请人 云南中医学院 地址 650500 云南省昆明市呈贡区呈贡新 城雨花片区1076号 (72)发明人 徐福荣 李维蛟 浦仕彪 古今 马晓惠 李文春 董鲜 (74)专利代理机构 昆明合众智信知识产权事务 所 53113 代理人 康珉 (51)Int.Cl. A01N 65/38(2009.01) A01P 3/00(2006.01) (54)发明名称 黄花蒿烟草醋液抑制三七根腐病原真菌的 应用 (57)。
2、摘要 本发明公开一种黄花蒿烟草醋液抑制三七 根腐病原真菌的应用。 在所述应用中， 黄花蒿烟 草醋液稀释25倍液至100倍液时， 对三七根腐病 原真菌尖孢镰刀菌抑制率达到79.17100。 权利要求书1页 说明书6页 附图1页 CN 107318897 A 2017.11.07 CN 107318897 A 1.黄花蒿烟草醋液抑制三七根腐病原真菌的应用。 2.根据权利要求1所述的应用， 其特征在于： 所述黄花蒿烟草醋液通过将黄花蒿秸秆和 烟草秸秆混合后按照植物醋液的常规制备方法制备得到的醋液。 3.根据权利要求2所述的应用， 其特征在于： 所述将黄花蒿秸秆和烟草秸秆混合为按黄 花蒿秸秆： 烟草秸。
3、秆的质量比为12:12的比例混合。 4.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于： 所述将黄花蒿秸秆和烟草秸秆混合为按黄 花蒿秸秆： 烟草秸秆的质量比为1:1的比例混合。 5.根据权利要求3所述的应用， 其特征在于： 所述将黄花蒿秸秆和烟草秸秆混合为按黄 花蒿秸秆： 烟草秸秆的质量比为2:1的比例混合。 6.根据权利要求1至5中任一权利要求所述的应用， 其特征在于： 所述的三七根腐病原 真菌为尖孢镰刀菌。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 107318897 A 2 黄花蒿烟草醋液抑制三七根腐病原真菌的应用 技术领域 0001 本发明属植物源材料防控中草药病害技术领域。 尤其涉及黄花蒿秸。
4、秆与烟草秸秆 混合为原料的黄花蒿烟草醋液抑制三七根腐病原真菌的应用。 背景技术 0002 黄花蒿(Artemisia annua Linn)又叫黄蒿， 是菊科蒿属的一年生草本植物， 广泛 分布在国内各省， 为中国传统中草药， 其有效成分青蒿素在抗疟方面与传统的奎宁类抗疟 药物具有不同的作用机理， 但是尽管黄花蒿对人类的医疗健康起到了功不可没的贡献， 由 于其生长繁殖特别迅速， 生境适应性强， 我国东部、 南部省区生长在路旁、 荒地、 山坡、 林缘 等处， 其他省区还生长在草原、 森林草原、 干河谷、 半荒漠及砾质坡地等， 也见于盐渍化的土 壤上， 往往在春末夏初大量萌发， 进而发展为优势杂草，。
5、 为了防控其作为杂草对农田、 草原 或者森林的危害， 也需对其潜在的其它利用价值进行研究开发。 0003 烟叶收获后， 残留大量的烟秆、 烟根等烟株残体， 若不及时清除， 很容易污染烟草 种植区环境。 烟草(Nicotiana tabacum)秸秆木质化程度高， 非常难腐解， 其资源化利用一 直是个难题。 近些年烟草主产区出现了较为严重的焚烧秸秆污染。 每到烟草收获之后,为了 处理烟草秸秆， 部分地区燃烧烟草秸秆达到浓烟滚滚的局面,这种处理方式不仅浪费了宝 贵的自然资源,造成了环境污染,也造成了事故多发,对高速公路、 铁路的交通安全及民航 航班的起降安全等构成了极大威胁,并对人类健康和安全造成。
6、了严重危害,已成为一大社 会问题。 为了解决人类资源、 环境和发展之间的关系问题,高效合理地利用烟草秸秆， 对其 潜在的利用价值进行研究开发， 也是降低其负面影响的重要措施。 0004 中药是中国传统的药材， 是中国优秀文化的重要组成部分。 中草药属于中药材的 最重要的部分， 由于多数中草药的经济部位和药用部位是中草药的根部， 随着药用植物种 植面积的迅速增加， 以及大多品种的野生资源的驯化为栽培品种的规模化种植， 根部腐烂 演变成为直接影响药材产量、 品质及商品价值的最严重病害， 极大的影响中草药的价值。 再 者中草药病害问题日益突出， 由于土壤中的微生物组成非常复杂， 故病原涉及种类很多，。
7、 真 菌、 细菌、 线虫均可引起中草药根部腐烂， 其中真菌危害最为严重， 可引起多种中草药根部 腐烂， 如尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)能引起枸杞、 竹节参、 玉竹、 丹参、 三七等中草药 根部腐烂， 是危害性最大的病原之一。 三七根腐病常年发病率为520， 严重时则达 70， 白芷根腐病发病率为30左右， 有时也达80。 为了控制其病害加大了化学农药的过 度使用， 进而加剧了中草药品质合格的风险性和对环境的友好性， 这已成为中药材生产的 主要障碍。 0005 经文献检索， 未见与本发明相同的公开报道。 发明内容 0006 本发明目的是克服现有技术中还没有黄花蒿烟草醋液抑制。
8、中草药根腐病原的缺 陷， 使烟草秸秆和黄花蒿秸秆得到更多的利用。 说 明 书 1/6 页 3 CN 107318897 A 3 0007 为实现上述目的， 本发明的技术方案如下： 0008 1.黄花蒿烟草醋液抑制三七根腐病原真菌的应用。 0009 2.根据技术方案1所述的应用， 所述黄花蒿烟草醋液是通过将黄花蒿秸秆和烟草 秸秆混合后按照植物醋液的常规制备方法制备得到的醋液。 0010 3.根据技术方案2所述的应用， 所述将黄花蒿秸秆和烟草秸秆混合为按黄花蒿秸 秆： 烟草秸秆的质量比为12:12的比例混合。 0011 4.根据技术方案3所述的应用， 所述将黄花蒿秸秆和烟草秸秆混合为按黄花蒿秸 秆。
9、： 烟草秸秆的质量比为1:1的比例混合。 0012 5.根据技术方案3所述的应用， 所述将黄花蒿秸秆和烟草秸秆混合为按黄花蒿秸 秆： 烟草秸秆的质量比为2:1的比例混合。 0013 6.根据技术方案1至5中任一技术方案所述的应用， 所述的三七根腐病原真菌为尖 孢镰刀菌。 0014 本发明的有益效果： 0015 本发明首次利用黄花蒿烟草醋液抑制三七根腐病原真菌尖孢镰刀菌。 在其应用 中， 黄花蒿烟草醋液稀释25倍液至100倍液时， 对三七根腐病原真菌尖孢镰刀菌抑制率达到 79.17100， 而黄花蒿秸秆单剂醋液稀释25倍液至100倍液对尖孢镰刀菌抑制率为 44.4447.22， 烟草秸秆单剂醋液。
10、稀释25倍液至100倍液对尖孢镰刀菌抑制率为 37.5041.67， 本发明用黄花蒿烟草醋液稀释25倍液至100倍液时， 比黄花蒿秸秆单剂 醋液稀释25倍液至100倍液对尖孢镰刀菌抑制率提高78.15111.77， 比烟草秸秆单剂 醋液稀释25倍液至100倍液对尖孢镰刀菌抑制率提高111.12139.98。 0016 在本发明应用中黄花蒿秸秆： 烟草秸秆质量比为2： 1的黄花蒿烟草醋液稀释25倍 液至100倍对三七根腐病原真菌尖孢镰刀菌抑制率为10098.61， 在黄花蒿秸秆： 烟草 秸秆质量比为2： 1的黄花蒿烟草醋液稀释100倍时， 对三七根腐病原真菌尖孢镰刀菌的抑制 率为98.6， 而用。
11、黄花蒿秸秆单剂醋液稀释100倍或烟草秸秆单剂醋液稀释100倍时分别对 三七根腐病原真菌尖孢镰刀菌的抑制率为44.44、 37.5， 本发明用黄花蒿秸秆： 烟草秸 秆质量比为2： 1的黄花蒿烟草醋液100倍液对三七根腐病原真菌尖孢镰刀菌的抑制率比黄 花蒿秸秆单剂醋100倍液或烟草秸秆单剂醋100倍液对三七根腐病原真菌尖孢镰刀菌的抑 制率分别提高了121.89、 162.96。 附图说明 0017 图1： 制备黄花蒿烟草醋液的设备示意图。 0018 图中各标记依次表示： 1干馏釜； 2加热器； 3排气阀门； 4导气管阀门； 5 冷凝管进气导管； 6冷凝管； 7冷凝管出水口； 8圆底三口烧瓶的排气导。
12、管； 9圆底三 口烧瓶； 10圆底烧瓶； 11-冷凝水槽出水口； 12制冷水阀门； 13冷凝管进水管； 14冷 凝水槽； 15圆底三口烧瓶的入液口； 16温度计。 具体实施方式 0019 以下实施例无特殊说明为常规方法。 0020 实施例1黄花蒿烟草醋液的制备 说 明 书 2/6 页 4 CN 107318897 A 4 0021 一、 采用制备醋液的常规设备及植物醋液的常规制备方法制备黄花蒿烟草醋液， 黄花蒿秸秆： 烟草秸秆的质量比分别为1:1或2:1或1:2的比例混合的秸秆制备黄花蒿烟草 醋液均按如下步骤进行： 0022 a.将黄花蒿秸秆和烟草秸秆分别切成小段(可切成5cm-8cm的小段)。
13、， 按黄花蒿秸 秆： 烟草秸秆的质量比为1:1或2:1或1:2的比例， 将黄花蒿秸秆小段和烟草秸秆小段混合后 装入干馏釜1中； 0023 b.加好干馏釜1上的密封圈， 安装好干馏釜1的盖子， 拧紧其螺栓； 0024 c.打开干馏釜1上的排气阀门3； 0025 d.打开加热器2， 对干馏釜1进行加热； 0026 e.在温度计16达到90-100时， 关闭排气阀门3； 0027 f.打开制冷水阀门12， 打开干馏釜1上的导气管阀门4； 0028 g.控制加热器2的热度， 常压下， 利用温度计16测量干馏釜1的温度， 冷凝收取90 300所有馏分； 0029 h.关闭干馏釜1上的导气管阀门4， 打开。
14、排气阀门3， 关闭加热器2； 0030 i.关闭制冷水阀门12， 取下圆底三口烧瓶9， 圆底三口烧瓶9收集的液体(即醋液) 为所述的黄花蒿烟草醋液， 将其置于棕色瓶中保留。 黄花蒿秸秆： 烟草秸秆的质量比分别为 1:1或2:1或1:2的比例混合分别得到三种醋液： 黄花蒿秸秆： 烟草秸秆质量比为1:1的黄花 蒿烟草醋液， 黄花蒿秸秆： 烟草秸秆质量比为2： 1的黄花蒿烟草醋液， 黄花蒿秸秆： 烟草秸秆 质量比为1： 2黄花蒿烟草醋液。 0031 实施例2黄花蒿烟草醋液抑制三七根腐病原真菌的应用实验 0032 实施例2中所用的三七根腐病原真菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)， 。
15、其分 离鉴定培养方法参考方中达主编.植病研究方法(第三版).2004,北京： 中国农业出版社； C Booth.The genus Fusarium.Commonwealth Agricultura,1971； 魏景超.真菌鉴定手册.上 海:上海科学技术出版社,1979。 0033 处理1、 处理2和处理3均是用所述的黄花蒿烟草醋液进行实验， 0034 处理1、 处理2和处理3所不同的是： 0035 处理1： 所用的黄花蒿烟草醋液是将黄花蒿秸秆小段和烟草秸秆小段按黄花蒿秸 秆： 烟草秸秆的质量比为1:1的比例混合后装入干馏釜1， 然后按实施例1所述的黄花蒿烟草 醋液的制备方法制备得到的黄花蒿烟。
16、草醋液。 0036 处理2： 所用的黄花蒿烟草烟雾是将黄花蒿秸秆小段和烟草秸秆小段按黄花蒿秸 秆： 烟草秸秆的质量比为2:1的比例混合后装入干馏釜1， 然后按实施例1所述的黄花蒿烟草 醋液的制备方法制备得到的黄花蒿烟草醋液。 0037 处理3： 所用的黄花蒿烟草醋液是将黄花蒿秸秆小段和烟草秸秆小段按黄花蒿秸 秆： 烟草秸秆的质量比为1:2的比例混合后装入干馏釜1， 然后按实施例1所述的黄花蒿烟草 醋液的制备方法制备得到的黄花蒿烟草醋液。 0038 处理4： 只用黄花蒿秸秆单剂醋液进行实验。 0039 处理5： 只用烟草秸秆单剂醋液进行实验。 0040 处理4中黄花蒿秸秆单剂醋液的制备方法除实施。
17、例1中步骤a.装入干馏釜1的秸秆 只是黄花蒿秸秆外， 其余操作与实施例1所述的黄花蒿烟草醋液的制备方法相同。 说 明 书 3/6 页 5 CN 107318897 A 5 0041 处理5中烟草秸秆单剂醋液的制备方法除实施例1中步骤a.装入干馏釜1的秸秆只 是烟草秸秆外， 其余操作与实施例1所述的黄花蒿烟草醋液的制备方法相同。 0042 处理1、 处理2、 处理3、 处理4和处理5除如上所述所用的醋液不同外， 均按如下方法 进行实验操作： 0043 利用上述方法制备获得的醋液， 按照如下醋液与PDA培养基的质量比， 分别配制醋 液稀释倍数为25倍液， 50倍液， 75倍液， 100倍液， 15。
18、0倍液和200倍液的含醋液的PDA培养基， 即醋液： PDA培养基的质量比1： 24， 醋液： PDA培养基的质量比1： 49， 醋液： PDA培养基的 质量比1： 74， 醋液： PDA培养基的质量比1： 99， 醋液： PDA培养基的质量比1： 149， 醋液： PDA培养基的质量比1： 199。 每一种醋液制备上述25倍液， 50倍液， 75倍液， 100倍液， 150倍 液和200倍液的6个不同醋液稀释倍数的含醋液的PDA培养基， 分别各装入一个培养皿， 每个 培养皿装入10毫升的含醋液的PDA培养基。 0044 在无菌条件下， 用同一型号的打孔器(0.5cm， 灭菌处理)在培养纯化鉴。
19、定的尖孢镰 刀菌的菌落边缘打孔， 用解剖刀分别挑取用打孔器打孔的菌落大小一致， 活性一致的尖孢 镰刀菌菌落， 转接到上述装有含醋液的PDA培养基的培养皿中， 每个培养皿转接1个尖孢镰 刀菌菌落， 盖上培养皿盖， 放于培养箱培养5天， 测量记录菌落生长直径， 计算抑制效果。 0045 处理6是空白对照实验。 处理6： 在无菌条件下， 按上述方法转接1个尖孢镰刀菌菌 落到只盛有10毫升PDA培养基的培养皿中， 盖上培养皿盖， 直接放于培养箱培养5天， 测量记 录菌落生长直径。 0046 每个处理作3次重复。 0047 试验结果： 不同稀释浓度的醋液对尖孢镰刀菌均有抑制效果， 但随着稀释倍数的 增加。
20、， 抑制效果减小。 在同一稀释倍数下， 黄花蒿秸秆： 烟草秸秆质量比为2： 1时的黄花蒿烟 草醋液抑制效果最好。 0048 实施例2的实验结果详见表1。 0049 表1黄花蒿烟草醋液抑制三七根腐病原真菌效果比较(菌落直径cm) 说 明 书 4/6 页 6 CN 107318897 A 6 0050 0051 尖孢镰刀菌抑制率计算公式： 0052 尖孢镰刀菌抑制率 处理的菌落直径-未处理的菌落直径 /未处理的菌落直 径X100。 0053 表1表明： 0054 处理1： 黄花蒿秸秆： 烟草秸秆质量比为1： 1的黄花蒿烟草醋液稀释25倍液， 50倍 液， 75倍液， 100倍液， 150倍液和20。
21、0倍液对尖孢镰刀菌抑制率分别为88.89、 88.89、 87.5、 83.33、 83.33、 81.94。 0055 处理2： 黄花蒿秸秆： 烟草秸秆质量比为2： 1的黄花蒿烟草醋液稀释25倍液， 50倍 液， 75倍液， 100倍液， 150倍液和200倍液对尖孢镰刀菌抑制率分别为100、 100、 98.61、 98.61、 97.22、 97.22。 0056 处理3： 黄花蒿秸秆： 烟草秸秆质量比为1： 2的黄花蒿烟草醋液稀释25倍液， 50倍 液， 75倍液， 100倍液， 150倍液和200倍液对尖孢镰刀菌抑制率分别为86.11、 86.11、 86.11、 79.17、 75。
22、.00、 72.22。 0057 处理4： 黄花蒿秸秆单剂醋液稀释25倍液， 50倍液， 75倍液， 100倍液， 150倍液和200 倍液对尖孢镰刀菌抑制率分别为47.22、 47.22、 47.22、 44.44、 44.44、 37.50。 0058 处理5： 烟草秸秆单剂醋液稀释25倍液， 50倍液， 75倍液， 100倍液， 150倍液和200倍 说 明 书 5/6 页 7 CN 107318897 A 7 液对尖孢镰刀菌抑制率分别为41.67、 41.67、 41.67、 37.50、 26.39、 23.61。 0059 黄花蒿烟草醋液稀释25倍液至100倍液时， 对三七根腐病原。
23、真菌尖孢镰刀菌抑制 率达到79.17100， 而黄花蒿秸秆单剂醋液稀释25倍液至100倍液对尖孢镰刀菌抑制 率为44.4447.22， 黄花蒿烟草醋液稀释25倍液至100倍液时， 比黄花蒿秸秆单剂醋液 稀释25倍液至100倍液对尖孢镰刀菌抑制率提高78.15111.77。 而烟草秸秆单剂醋液 稀释25倍液至100倍液对尖孢镰刀菌抑制率为37.5041.67， 黄花蒿烟草醋液稀释25 倍液至100倍液时， 比烟草秸秆单剂醋液稀释25倍液至100倍液对尖孢镰刀菌抑制率提高 111.12139.98。 0060 黄花蒿秸秆： 烟草秸秆质量比为2： 1的黄花蒿烟草醋液对三七根腐病原真菌尖孢 镰刀菌抑制率效果最好， 对三七根腐病原真菌尖孢镰刀菌抑制率效果达到98.61 100， 其稀释100倍液时， 对三七根腐病原真菌尖孢镰刀菌抑制率效果达到98.61， 而用 黄花蒿秸秆单剂醋液100倍液或烟草秸秆单剂醋液100倍液分别对三七根腐病原真菌尖孢 镰刀菌抑制率为44.44、 37.5， 比黄花蒿秸秆单剂醋液100倍液对尖孢镰刀菌抑制率提 高121.89； 比烟草秸秆单剂醋液100倍液对尖孢镰刀菌抑制率提高162.96。 说 明 书 6/6 页 8 CN 107318897 A 8 图1 说 明 书 附 图 1/1 页 9 CN 107318897 A 9 。