一种迷迭香提取物的制备方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 102599610 A (43)申请公布日 2012.07.25 CN 102599610 A *CN102599610A* (21)申请号 201210068018.6 (22)申请日 2012.03.15 A23L 3/3472(2006.01) (71)申请人 长沙雅莹生物科技有限公司 地址 410100 湖南省长沙市芙蓉区车站北路 168 号都市先锋 1608 室 (72)发明人 向小四 (74)专利代理机构 长沙正奇专利事务所有限责 任公司 43113 代理人 郭立中 (54) 发明名称 一种迷迭香提取物的制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种迷迭香提取。

2、物的制备方 法， 该方法以植物迷迭香为原料， 以一定工艺条 件制备迷迭香提取物， 该提取物含有多种抗氧化 成分， 包括一定比例的鼠尾草酸、 鼠尾草酚、 迷迭 香酚、 熊果酸、 迷迭香酸等， 经碘量比色法测定迷 迭香提取物抗氧化活性和电子顺磁共振技术研究 该提取物清除OH 自由基活性， 发现具有显著的 抗氧化作用。本发明还公开了使用该方法制备的 迷迭香提取物在制备食品添加剂抗氧化剂中的应 用。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书 1 页 说明书 5 页 1/1 页 2 1. 一种迷迭香提取物的制备方法。

3、， 包括如下步骤 ： （1） 迷迭香精油的提取 ； （2） 迷迭香脂溶性成分和水溶性成分的分离提取 ； 其中， 步骤 （1） 所述的迷迭香精油提取可以采用水蒸气蒸馏法或正己烷提取法提取 ； 其中， 步骤 （2） 所述的迷迭香脂溶性成分和水溶性成分的分离提取是先将经步骤 （1） 提取后所得的残渣用 50的乙醇超声波提取 40 min， 过滤， 重复一次， 并将两次滤液合并， 备用 ； 然后采用水溶解法分离、 石油醚萃取法或浓缩法来分离脂溶性成分和水溶性成分。 2. 如权利要求 1 所述的制备方法， 其特征在于， 步骤 （1） 所述的迷迭香精油是将迷迭香 干叶以水蒸气蒸馏法提取后用石油醚萃取， 回。

4、收石油醚所得。 3. 如权利要求 1 所述的制备方法， 其特征在于， 步骤 （1） 所述的迷迭香精油是将迷迭香 干药材以正己烷回流连续提取 6 h， 过滤正己烷提取液， 回收正己烷所得。 4. 用权利要求 1 所述的方法制备的迷迭香提取物在食品添加剂抗氧化剂中的应用。 权 利 要 求 书 CN 102599610 A 2 1/5 页 3 一种迷迭香提取物的制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种植物提取物的制备方法， 尤其涉及一种迷迭香提取物的制备方 法。 背景技术 0002 迷迭香 （Rosemary officinal L.） 原产于地中海沿岸， 主产于西班牙、 土耳其、 法 国、 南。

5、斯拉夫等国， 属唇形科常绿灌木植物。近年来由于对其优良的抗氧化性能的发现， 目 前在美国、 印度等地有大规模种植。中国于 1981 年由中科院从西班牙引种进来， 许多地方 也有规模种植。 0003 迷迭香在欧洲作为食用调香佐料应用已有千余年的历史了， 其安性已经得到全世 界的广泛认可。但作为抗氧化剂的应用还只是近十年的历史。由于其抗氧化性能高， 安全 性可靠， 热稳定性好， 生产成本低， 安全无污染， 目前有逐步取代人工合成抗氧剂的趋势。 0004 现今在全世界使用量最大的抗氧化剂还是化学合成品， 主要是 BHA、 BHT 和 TBHQ， 特别是 TBHQ 应用量最大， 由于其抗氧化性能比较 。

6、BHA 和 BHT 要高得多， 被广泛用在油脂及 含油脂产品中， 在中国同类产品中， 其市场份额更是占到 80% 以上。 0005 随着人们生活水平的日益提高， 食品的安全性问题越来越引起人们的重视。大剂 量的动的实验表明， BHA、 BHT 和 TBHQ 能引起非常明显的肝肿大， 及一些消化道疾病， BHT 还 使肝微粒体酶活性增加。美国 FDA 早在 1977 年就取消了 BHT 的安全认可， 日本于 1972 年 就作出食品中禁止使用 BHA 的决定， 现在已经对 TBHQ 作了明确的限制性使用规定， 许多北 欧国家也相继对上述化学合成抗氧化剂作了禁止性使用规定， 西欧国家对其使用量作了。

7、极 其严格的规定， 如 TBHQ 在食品中使用量不得超过 0.02% 等。 0006 从上述发达国家的规定可以看出， 化学合成的食品抗氧化剂即将走入历史， 取代 它们的将是安全、 高效、 价格低廉的天然抗氧化剂， 能替代 TBHQ 的天然抗氧化剂将有广阔 的市场。 0007 对于迷迭香的研究， 最早起源于 1952 年， J.R.chipaul 首先对三十余种香料植物 中抗氧化性能进行了比较和筛选， 发现迷迭香有最佳的抗氧化效果， 1969 年开如鉴定出其 中抗氧化有效成分 Carnosol， 1982 年发现效果更强的有效成分 Rosemanol， 随后几年先后 鉴定出了十几种有效成分。中国。

8、于 1987 年由西安医学院赵新先生首先研究了迷迭香中有 效成分 Carnosol 对清除人体自由基的作用， 结果证明效果明显。我们进一步的研究表明， 当有效成分Carnosic acid的含量达50%以上时， 其抗氧化效果就可以超过TBHQ， 成为效果 最佳的抗氧化剂， 为替代 TBHQ 市场提供了实验依据。 0008 国内有一些天然抗氧化剂产品， 但大都包装成产品提取物， 不作为抗氧化产品， 如 葡萄籽提取物、 松树皮提取物、 甘草提取物等。只有茶多酚算是很成功的抗氧化剂产品， 但 我们研究比较发现， 95% 以上含量的茶多酚 （高规格产品） ， 其抗氧化效果确无法与 20% 含量 的迷迭。

9、香产品相比， 更不用说替代TBHQ了， 天然维生素A只有与大量增效剂合并使用， 才能 有抗氧化价值， 而且价格还不菲。其它提取物由于抗氧化性能很一般， 油溶性又不好， 无法 说 明 书 CN 102599610 A 3 2/5 页 4 作为抗氧化剂使用。 以上产品由于各种各样的原因， 无法得到市场的广泛认同， 也就无法替 代很高效的 TBHQ 的市场了。 发明内容 0009 本发明旨提供一种迷迭香提取物的制备方法， 用该方法制备的迷迭香提取物具有 显著的抗氧化作用。 0010 为达到上述目的， 本发明提供的技术方案为 : 一种迷迭香提取物的制备方法， 包括如下步骤 ： （1） 迷迭香精油的提取。

10、 ； （2） 迷迭香脂溶性成分和水溶性成分的分离提取 ； 其中， 步骤 （1） 所述的迷迭香精油提取可以采用水蒸气蒸馏法或正己烷提取法提取 ； 其中， 步骤 （2） 所述的迷迭香脂溶性成分和水溶性成分的分离提取是先将经步骤 （1） 提取后所得的残渣用 50的乙醇超声波提取 40 min， 过滤， 重复一次， 并将两次滤液合并， 备用 ； 然后采用水溶解法分离、 石油醚萃取法或浓缩法来分离脂溶性成分和水溶性成分。 0011 以下对本发明作出进一步说明 ： 1 迷迭香精油的提取 1.1 水蒸气蒸馏法 1.1.1 将迷迭香干叶去杂， 粉碎， 用水蒸气蒸馏方法提取挥发油称取准备好的迷迭香 干叶置于圆底。

11、烧瓶中， 加入 10 倍量的水， 共水蒸馏， 蒸馏时间 3 h油水分离， 得直接粗油， 用无水硫酸钠脱水， 得直接精油 ； 馏出水用等体积石油醚萃取， 分离后， 用无水硫酸钠干燥， 回收石油醚， 得到萃取精油则可得迷迭香总精油。 0012 1.2 溶剂提取法 取迷迭香干药材用正己烷回流连续提取 6 h， 过滤正己烷提取液， 回收正己烷得黄色迷 迭香精油。 0013 迷迭香脂溶性成分和水溶性成分的分离提取 上述步骤 1 所得残渣用 50的乙醇超声波提取 40 min 后过滤， 重复一次。将 2 次滤液 合并， 备用。 0014 2.1 水溶解法分离 2.1.1 样品的制备 ： 取上述提取液浓缩至。

12、膏状， 在 60真空干燥得粉末， 测得总酚含 量。 0015 2.1.2 溶剂用量的选择 ： 称取干燥后的样品， 分别按料1 ： 60加水超声波溶解， 在3 000 r min 下离心 20 min， 将上清液和沉淀分离后， 真空干燥， 称重。 0016 2.1.3 取干燥后的粉末加 8 倍量水超声波溶解， 离心分离 20 min 后真空干燥。分 别测定所得水溶性和脂溶性抗氧化剂的得率。 0017 2.2 石油醚萃取法 2.2.1 萃取次数的选择 ： 取提取液于分液漏斗中， 用石油醚萃取 2 次， 将萃取物 60真 空干燥 6 h。测定每次萃取后所得脂溶性部分的重量。 0018 2.2.2 取。

13、提取液， 用适量石油醚萃取两次， 将萃取物和萃余液浓缩后真空干燥。 分 别测定所得水溶性和脂溶性抗氧化剂的得率。 说 明 书 CN 102599610 A 4 3/5 页 5 0019 2.3 浓缩法分离 2.3.1 浓缩倍数的选择 ： 将提取液浓缩 4 倍后， 于 3 000 r min 下离心 20 min 后置 于冰箱中冷藏 24 h， 然后再离心 1 次， 将上清液继续置于冰箱中， 沉淀真空干燥。 0020 2.3.2 取500 mL提取液， 浓缩4倍后置于冰箱中冷藏24 h， 然后再离心1次， 将沉 淀和上清液浓缩后真空干燥。分别测定所得水溶性和脂溶性抗氧化剂的得率。经测定所得 提取。

14、物里抗氧化剂含量达 60% 以上。 0021 经实验证明， 上述迷迭香提取物具有显著的抗氧化作用， 结果如下 ： 1 碘量比色法测定迷迭香提取物抗氧化活性 1.1 天然提取物的添加与均质处理 准确称取按以上工艺制备的提取物， 分别加人适量的乙醇使之溶解， 然后分别按油质 量的 002， 006， 010， 014混入油中， 搅拌均匀。 0022 1.2 样品的加速氧化 采用水浴高温诱导菜籽油发生过氧化反应， 将已添加好抗氧化物的油脂置于恒温水浴 锅中 (60左右 ) 条件下加速氧化。 0023 1.3 抗氧化性能的测定 1.3.1 碘量滴定法 测定油脂 POV 准确称取试样1 0000g于碘量。

15、瓶中， 并向其中加入20mL V(三氯甲烷) ： (冰乙酸)=2 ： 3混合液溶解， 使试样完全溶解后， 加入0 5mL饱和碘化钾溶液， 立即加塞密封， 并轻轻震荡 05min。然后在暗处放置 10min。然后加入 50mL 蒸馏水， 摇匀， 立即用硫代硫酸钠标准溶 液 (0002mol L) 滴定至淡黄色， 加入 05mL 05淀粉指示液， 继续滴至蓝色消失为 终点。平行测定 2 次， 同时做空白实验。 0024 1.3.2 碘量比色法测定油脂 POV 1.3.2.1 标准曲线绘制 取已标定的 KII ： 标准溶液 1.00mL， 于 50mL 具塞试管中， 并向其中加入 5mL 三氯甲 烷。

16、一冰乙酸 (2 ： 3)， 分别加入1 0mL 1淀粉溶液， 加水定容至50mL， 静置5min， 待分层后， 取上层清液在 1cm 比色皿中， 以零管作参比， 在波长为 585nm 条件下测定其吸光度， 根据碘 量一吸光度绘制标准曲线。 0025 1.3.2.2 油脂 POV 的测定 精密称取试样 00001g 于 50mL 具塞试管中， 加入 500mL 三氯甲烷一冰乙酸 (2 ： 3) 溶解后， 加入 050mL 饱和 KI 混匀， 加盖摇匀 30s， 并置于暗处反应 5min。取出加水稀释， 加入 lmL 1淀粉溶液， 加水定容至 50ml 轻轻摇匀， 静置 30min， 取上清液于 。

17、1cm 比色皿中， 在波长为 585nm 处以空白作参比， 测定其吸光度。 0026 由实验结果得出在滴定法中相同浓度下各物质的抗氧化性强弱顺序为 ： 迷迭香抗 氧化剂 空白。 0027 本发明的提取物是以植物迷迭香为原药 , 用有机溶剂分步萃取所获得的提取物， 经碘量比色法测定迷迭香提取物抗氧化活性和电子顺磁共振技术研究该提取物清除OH 自由基活性， 发现其具有显著的抗氧化作用。用本发明的方法制备的迷迭香提取物能够应 用于食品添加剂抗氧化剂中。 0028 说 明 书 CN 102599610 A 5 4/5 页 6 具体实施方式 0029 下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明。 003。

18、0 实施例 1 收集迷迭香嫩茎及叶片， 自然荫干后粉碎， 取粉碎后原料 50g， 加人 250ml 有机溶剂， 热 w流2小时， 过滤， 添加溶剂， 重复抽提2次， 蒸干溶剂， 热水洗涤， 干燥， 称10g干燥后产品溶 于100ml 乙醇(60)， 加人20g活性炭， 在60下搅拌15分钟过滤,40干燥粉碎得淡黄 色粉末状抗氧化剂。各种溶剂提取的抗氧化剂的收率及抗氧化效果如下 ： 实施例 2 电子顺磁共振技术研究迷迭香水溶性成分清除OH 自由基活性 1 样品处理称取 100 g 迷迭香干叶， 10 倍量水加热回流提取， 过滤， 将滤液干燥得浸 膏。 0031 1.1 样品液配制称取 1g 浸膏。

19、， 超声波定容， 配成 10 ms m1 的溶液， 并进行稀释， 依次得到 50， 25， 10， 05 mg ml 的样品液。 0032 1.2 OH 自由基产生体系 005 mol L PBS(pH=7.4) 溶液， 1.0 mmol LFeSO4(NH4)2S04， 0.9 mol L DMPO， 6 H2O2。将以上 4 种溶液和样品液或去离子水 ( 空 白对照)各10 注入Eppendorf管， 记录反应时间， 并立即混合均匀， 将反应液打入石英毛细 管， 外加保护管放入谐振腔进行测定。 0033 1.3 EPR 测试参数中心磁场 (CF) ： 3 480 G， 扫描宽度 (SW) 。

20、： 500 G， 扫描时间 (sT) ： 5.12s， 调制幅度 (MA) ： 1G， 调制频率 (MF) ： 100 kHz， 微波功率 (MP) ： 20 mW， 测试温度 (T) ： 室温。 0034 2 结果 清除率 E=(h0-hi) h0。hi为含样品体系中OH 自由基的信号强度测量值 ； h0为空白 体系中OH 自由基的信号强度测量值。各浓度样品的OH 自由基清除率如下 ： 说 明 书 CN 102599610 A 6 5/5 页 7 由上可知迷迭香水溶性成分清除 OH 自由基的效果较好， 在样品浓度为 25 mg ml 时， 自由基清除率可达 73.5。 0035 上述实施例仅仅是为清楚的说明本发明所作的举例， 而并非对实施方式的限定。对于 所属领域的普通技术人员来说， 在上述说明的基础上还可以做出其他不同形式的变化或变 动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变 动仍处于本发明的保护范围之中。 说 明 书 CN 102599610 A 7 。