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一种红叶金银木快速繁殖方法.pdf

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文档编号：7301314

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1、(10)授权公告号 CN 102217542 B (45)授权公告日 2012.09.05 CN 102217542 B *CN102217542B* (21)申请号 201110134199.3 (22)申请日 2011.05.23 A01H 4/00(2006.01) (73)专利权人北京农业职业学院地址 102442 北京市房山区长阳镇稻田南里 5 号 (72)发明人石进朝陈兰芬左利娟张耀川 (74)专利代理机构北京永创新实专利事务所 11121 代理人姜荣丽 CN 101485292 A,2009.07.22, 李春华 . 金银木叶中黄酮类化合物的提取 .河北农业大学。

2、学报 .2003, 第 26 卷 ( 第 3 期 ), (54) 发明名称一种红叶金银木快速繁殖方法 (57) 摘要本发明公开了一种红叶金银木快速繁殖方法，属于植物快速繁殖技术领域，所述的繁殖方法通过外植体的采集；继代培养；生根培养；练苗培养和大田移栽的步骤流程，获得的红叶金银木具有成苗量多，繁殖系数高的优点，能够在短期内快速繁殖红叶金银木苗木，所述的繁殖方法具有保持红叶金银木红色叶片性状稳定的优点。 (51)Int.Cl. (56)对比文件审查员艾欣权利要求书 1 页说明书 8 页附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发。

3、明专利权利要求书 1 页说明书 8 页附图 1 页 1/1 页 2 1. 一种红叶金银木快速繁殖方法，其特征在于包括如下步骤：第一步，外植体的采集；选择在日光温室内生长的红叶金银木新梢半木质化带芽枝段，先用 70% 的 C2H5OH 处理 1min，再用 HgCl2消毒 4-5min，无菌蒸馏水进行消毒；第二步，继代培养；将上述的消毒过的红叶金银木新梢半木质化带芽枝段在继代培养基 MS+6-BA 0.3mgL-1+NAA0.1mgL-1培养 30 天；培养条件为：温度 (251)，光照度 2000lx，光照时间 12hd-1；第三步，生根培养。

4、；继代培养 30 天后，转入生根培养基 1/2MS+IBA0.2mgL-1上培养 30 天；第四步，炼苗培养；在生根培养 30 天后，将生长健壮的试管苗打开瓶口， 3 天后，选择直径 0.5mm 的红叶金银木试管苗移栽到装有蛭石的育苗盘中进行炼苗培养；第五步，大田移栽；在育苗盘中炼苗培养 40 45 天后，当育苗盘中苗木高度为 25 30cm 时，即移植到露地栽培。 2. 根据权利要求 1 所述的一种红叶金银木快速繁殖方法，其特征在于：第四步中红叶金银木试管苗移栽的时期为 9 月至次年 5 月，成活率 73.3%-86.7%。 3. 根据权利要求。

5、 1 所述的一种红叶金银木快速繁殖方法，其特征在于：所述的炼苗培养中，空气湿度保持 90%，光照强度 5000 10000lx。权利要求书 CN 102217542 B 2 1/8 页 3 一种红叶金银木快速繁殖方法技术领域 0001 本发明属于植物快速繁殖技术领域，具体是指一种红叶金银木快速繁殖的方法。背景技术 0002 金银木 (Lonicera maackii) 为忍冬科 (Caprifoliaceae) 忍冬属一落叶灌木树种，具有喜光、抗旱、适应性强、管理粗放的特点，在中国北方园林造景中广泛应用。春季观花，秋季观果，全株入药，具有较高的观。

6、赏与药用价值，见参考文献【1】：曾令杰，邢俊波，李萍 . 忍冬科的植物化学分类学研究的初探 . 中国中药杂志， 2003， 25(3) ： 184-187 ；参考文献【2】：李昉 . 野生植物金银忍冬营养成分的测定 J. 化学与生物工程， 2007， 24(1) ： 77-78 ；参考文献【3】：陈月开 . 金银木的黄酮类物质分析 J. 山西大学学报：自然科学版， 2006， 29(3) ： 305-307。红叶金银木是金银木一自然变异类型，特征是：叶片春季34月为红色， 511月新生叶为红色，老叶渐变为红绿色、暗红色、绿色。连续多年观测红色。

7、叶特征具有较强的稳定性，具有较高的观赏价值，为北京地区一乡土彩色树种。 0003 目前对于红叶金银木的繁殖主要采用扦插方法，由于母本数量少，成苗率少，繁殖系数小等因素，限制了这一优良彩色树种红叶金银木的生产推广。发明内容 0004 本发明中为了解决现有技术中红叶金银木观赏价值高，但是不易繁殖的问题，提供了一种红叶金银木快速繁殖方法，该繁殖方法为规模化快速推广生产利用这一乡土彩色树种奠定了基础。 0005 本发明提供的红叶金银木快速繁殖方法，在红叶金银木组织培养时，适宜的外植体材料为日光温室内生长的红叶金银木新梢半木质化带芽枝段，诱导出不定芽的发生。先用 7。

8、0的 C2H5OH 处理 1min，再用 HgCl2消毒 4-5min 为最好，外植体发芽率最高可达 60-63.3。木质化带芽枝段、成熟叶片、叶柄均不适宜作为外植体的材料。红叶金银木组织培养的不同培养阶段的适宜培养基分别为：继代培养基为 MS+6-BA 0.3mgL-1+NAA0.1mgL-1，生根培养基为 1/2MS+IBA0.2mgL-1。开瓶炼苗 3d 后，选用直径 0.5mm 的红叶金银木试管苗移栽，能够获得 76.7的成活率。在一年中不同时期移栽生根试管苗成活率为 73.3 -86.7，红叶金银木试管苗移植的最佳时期为 9 月至次年 5 月， 7 月份移植。

9、时成活率最低。所述的繁殖方法具体通过如下步骤流程实现： 0006 第一步，外植体的采集； 0007 选择在日光温室内生长的红叶金银木新梢半木质化带芽枝段，先用 70的 C2H5OH 处理 1min，再用 HgCl2消毒 4-5min，无菌蒸馏水进行消毒。 0008 第二步，继代培养； 0009 将上述的消毒过的红叶金银木新梢半木质化带芽枝段在继代培养基 MS+6-BA 0.3mgL-1+NAA0.1mgL-1培养 30 天。 0010 第三步，生根培养；说明书 CN 102217542 B 3 2/8 页 4 0011 继代培养 30 天后，转入生根培养基 1/2M。

10、S+IBA0.2mgL-1上培养。13 天后开始长出根芽，经过 30 天培养，根长达到 3.6cm，有 6 条发达、健壮的根，即可进行炼苗培养移栽。 0012 第四步，练苗培养； 0013 在生根培养 30 天后，将生长健壮的试管苗打开瓶口， 3 天后，选择直径 0.5mm 的红叶金银木试管苗移栽到装有蛭石的育苗盘中，能够获得 76.7的成活率。试管苗移栽初期对环境条件特别是水分要求较严格，空气湿度要控制在 90左右，光照强度 5000 10000lx，才能保证较高的移栽成活率。 0014 第五步，大田移栽； 0015 日光温室炼苗培养 40 45 天后，。

11、当育苗盘中小苗苗木高度为 25 30cm 时，即可移植到露地栽培。当年苗木生长高度可达 50-70cm。 0016 本发明的优点在于： 0017 (1) 本发明具有成苗量多，繁殖系数高的优点，能够在短期内快速繁殖红叶金银木苗木。 0018 (2) 本发明具有保持红叶金银木红色叶片性状稳定的优点。附图说明 0019 图 1 为本发明的红叶金银木繁殖方法流程图。具体实施方式 0020 下面结合附图和实施例对本发明提供的红叶金银木快速繁殖方法进行详细说明。 0021 本发明提供一种红叶金银木快速繁殖方法，方法流程如图 1 所示，具体通过如下步骤实现： 0022 第一步，外植。

12、体的采集； 0023 选择在日光温室内生长的红叶金银木新梢半木质化带芽枝段，先用 70的 C2H5OH 处理 1min，再用 HgCl2消毒 4-5min，无菌蒸馏水进行消毒。 0024 第二步，继代培养； 0025 将上述的消毒过的红叶金银木新梢半木质化带芽枝段在继代培养基 MS+6-BA 0.3mgL-1+NAA0.1mgL-1培养 30 天。 0026 第三步，生根培养； 0027 继代培养 30 天后，转入生根培养基 1/2MS+IBA0.2mgL-1上培养。当红叶金银木继代苗长到 5 6cm 时，转入生根培养基中， 13 天后开始长出根芽，经过 30 天生根培。

13、养，根长达到 3.6cm，有 6 条发达、健壮的根，即可进行炼苗移栽。 0028 第四步，练苗培养； 0029 在生根培养30天后，将生长健壮的试管苗打开瓶口，日光温室炼苗培养3天后，选择直径0.5mm的红叶金银木试管苗移栽到装有蛭石的育苗盘中，日光温室炼苗培养40 45 天，能够获得 76.7的成活率。试管苗移栽初期对环境条件特别是水分要求较严格，空气湿度要控制在 90左右，光照强度 5000 10000lx，才能保证较高的移栽成活率。 0030 第五步，大田移栽； 0031 日光温室炼苗培养 40 45 天后，当育苗盘中小苗苗木高度为 25 30cm。

14、时，即可说明书 CN 102217542 B 4 3/8 页 5 移植到露地栽培。当年苗木生长高度可达 50-70cm。 0032 对于上述本发明提供的红叶金银木快速繁殖方法，本发明还进行了如下的试验过程，试验过程中得到了红叶金银木繁殖的优选参数，更有利于红叶金银木的繁殖的发展进步，试验过程如下： 0033 一、材料： 0034 为 1-5 年生红叶金银木 (Lonicera maackii Hongye ) 植株。试验选取红叶金银木木质化带芽枝段、半木质化带芽枝段、带芽幼嫩枝段、叶片、叶柄作为外植体材料。 0035 二、方法： 0036 1. 红叶金。

15、银木适宜外植体筛选； 0037 在 6 月份从日光温室的红叶金银木上选取长约 1.5cm 带一对腋芽的木质化枝段、半木质化带芽枝段、带芽幼嫩枝段、叶片、叶柄 5 个部位各 30 个为外植体材料，用流水冲洗材料 2h，将红叶金银木外植体清洗干净。将外植体转入超净工作台，用 70 C2H5OH 清洗 0.5-1min，用无菌水清洗 1-2 次，用 1的 HgCl2清洗 4-5min，用无菌水清洗 6-7 次进行消毒。在 MS 培养基上进行初代培养，培养条件为：温度 (251)，光照度 2000lx，光照时间 12hd-1。30 天后，依据发芽率大小确定适宜的外。

16、植体。结果见表 1。 0038 表 1 红叶金银木不同外植体材料与初代发芽率的关系 0039 0040 表 1 显示：红叶金银木木质化带芽枝段、半木质化带芽枝段、带芽幼嫩枝段、叶片、叶柄5个部位中， 30天后只有半木质化带芽枝段能够在MS培养基上诱导出腋芽的发生。用红叶金银木木质化带芽枝段作外植体取材部位，全部污染，带芽幼嫩枝段在消毒过程中被杀死，而不发芽。叶片、叶柄虽然污染率较低，但诱导不出腋芽的发生。因此，红叶金银木适宜的外植体材料为半木质化带芽枝段。 0041 2. 外植体的消毒试验： 0042 2.1 不同消毒方法对外植体发芽率的影响； 0043 在。

17、4月份分别从日光温室内及露地培育的红叶金银木植株上选取长约1.5cm半木质化带芽枝段作为外植体材料，用自来流水冲洗材料 2h，使得外植体表面清洁。采用 0.1 HgCl23-8min、 70 C2H5OH 60s+HgCl23-8min 不同消毒时间进行消毒，共计设置 12 个处理。每个处理样品 30 个。培养条件为：温度 (251)，光照度 2000lx，光照时间 12hd-1。结果见表 2。 0044 表 2 不同消毒方法对红叶金银木外植体发芽率的影响 0045 说明书 CN 102217542 B 5 4/8 页 6 0046 0047 表 2 显示：在生长期。

18、的 4 月份从日光温室采集的半木质化红叶金银木带芽枝段进行的 12 个处理消毒试验， 0.1 HgCl2处理 4-5min 时外植体污染率、杀死率、发芽率分别为 26.7、 23.3-23.6、 46.7-50， 3min 处理样本的污染率、杀死率、发芽率分别为 100、 0、 0， 7-8min 时分别为 0、 100、 0。以外植体发芽率最高为依据，单独以 0.1 HgCl2对外植体消毒时，适宜的消毒时间为 4-5min。而如果选择先用 70 C2H5OH 消毒 60s，再用 0.1 HgCl2消毒，外植体发芽率最高 (60 -63.3 ) 时的消毒时间为 4-5min。

19、。可见，从日光温室中采集的外植体适宜的消毒方法是：先用 70 C2H5OH 处理 60s，再用 0.1 HgCl2处理说明书 CN 102217542 B 6 5/8 页 7 4-5min，外植体有较高的发芽率。 0048 而在4月份从露地采集外植体样本， 0.1HgCl2处理6min时外植体发芽率为4，其余处理样本的发芽率均为 0。如果选择先用 70 C2H5OH 处理 60s，在用 0.1 HgCl2处理 3-8min，外植体发芽率最高 (6.7-10 ) 的消毒时间为 4-5min。因此，在露地采集的红叶金银木外植体消毒时，先用 70 C2H5OH 处理 6。

20、0s，再用 0.1 HgCl2处理 4-5min 为宜。 0049 通过以上试验可看出，以红叶金银木半木质化带芽枝段为外植体的材料时，宜从日光温室内生长的红叶金银木植株上采集，采用 70 C2H5OH 60s+0.1 HgCl24-5min 对外植体进行消毒处理，能够获得 60 -63.3的发芽率。 0050 2.2 不同外植体采集时期对外植体发芽率的影响； 0051 分别在 2009 年 8 月 12 日、 10 月 13 日、 12 月 14 日， 2010 年 2 月 11 日、 4 月 12 日、 6 月 15 日分别从日光温室、露地采集红叶金银木半木质化带芽枝段 3。

21、0 个作为外植体，按照 70 C2H5OH 60s+0.1 HgCl24-5min 对外植体进行消毒，结果见表 3。 0052 表 3 不同采集时期红叶金银木外植体的发芽率 0053 0054 表 3 显示：连续一年从日光温室中采集的红叶金银木半木质化带芽枝段发芽率变化在 53.3 -80之间。而露地样本的发芽率只有 6，且只在早春 4 月采集时，外植体才有腋芽萌发，其它时期采集的红叶金银木外植体没有腋芽生出，均因污染死亡。这与金银木枝条密生柔毛，露地样本比日光温室样本不易消毒彻底有关。因此，在进行红叶金银木外植体采集时，可在一年四季从日光温室中栽培的植株上采。

22、集，能够获得较高的萌芽率。不宜从露地栽培的植株上采集。 0055 3. 继代培养基 ( 也叫增殖分化培养基 ) 的筛选： 0056 不同浓度生长调节剂对红叶金银木生长的影响。以 MS 为增值分化基本培养基，在其中加入不同浓度的 6-BA 及 NAA，每个处理样品 30 个。当初代苗生长高度达 5-6cm 时接近瓶盖时，切成 2cm 的小段转入增殖培养基培养， 30d 后调查增殖苗的生长高度、节间距大小及生长势 3 项指标。依此判断适宜的 6-BA 及 NAA 添加浓度。结果见表 4。 0057 表 4 不同浓度生长调节物质对红叶金银木试管苗增殖生长的影响 0058 说明。

23、书 CN 102217542 B 7 6/8 页 8 0059 通过在 MS 基本培养基上，调整不同激素 (6-BA、 NAA) 的浓度能够促进腋芽的生长。表 4 可以看出：当 6-BA 为 0.3mgL-1， NAA 为 0.1mgL-1时 ( 编号 A2)， 30d 后苗木粗壮，节间距中等，叶色深绿，高生长量大，长势最好。当 6-BA 为 0.2mgL-1， NAA 为 0.2mgL-1时 ( 编号 A5)，长势中等，节间距较小，叶色绿。6-BA 为 0.2mgL-1， NAA 为 0.05mgL-1，苗木生长势弱，高生长量小，节间距小 ( 编号 A7)。表。

24、明 6-BA 有利于腋芽增殖与茎增粗生长。从增殖苗生长高度及生长势综合分析，适宜的增殖培养基即继代培养基为 MS+6-BA0.3mgL-1+NAA0.1mgL-1。 0060 4. 生根培养基的筛选； 0061 以 1/2MS 为生根基本培养基，在其中加入不同浓度的 IBA 及 NAA，每个处理样品 30 个。将继代苗接种进行生根培养， 30d后调查各处理的试管苗的生根时间、平均生根数量、生根长度、根生长势，依此判断适宜的 IBA 及 NAA 添加浓度。结果见表 5。 0062 表 5 不同浓度生长素对试管苗生根的影响 0063 0064 通过对 6 种生根培养基在生根时。

25、间、生根数量、根生长量及生长势的综合分析， IBA 浓度为 0.2mgL-1，开始生根时间为 13d，平均根数 6 条，平均根长最大 ( 为 3.6cm)，比 IBA 浓度为 1.0mgL-1、 0.5mgL-1对红叶金银木试管苗生根好。编号 B6 NAA 浓度为说明书 CN 102217542 B 8 7/8 页 9 0.2mg L-1时，根生长量最小，为 1.5cm，生长势弱，不利于移栽成活。当 NAA 增至 0.5mg L-1 时，生根变得细长了。IBA、 NAA 能够显著的促进生根，受研究材料本身内源激素水平的影响，其适宜的生根浓度水平不一。表 5 显。

26、示，红叶金银木试管苗适宜的生根培养基为： 1/2MS+IBA0.2mgL-1。 0065 5. 炼苗与移栽； 0066 当红叶金银木生根试管苗生长高达 5-6cm，有 4-5 对正常叶片时，进行开瓶时间 (0-5d)、不同直径苗 ( 0.3mm、 0.3-0.5mm、 0.5-1mm) 移栽及不同时期移栽试验。以栽植成活率确定适宜的开瓶炼苗时间、适宜的生根苗栽植直径及栽植时期。 0067 5.1 开瓶炼苗时间对试管苗移栽成活率的影响； 0068 试验中设计开瓶炼苗 0、 3d、 5d 后移栽，依据移栽成活率，确定开瓶炼苗的适宜时间，结果见表 6。 0069 表 6 开。

27、瓶炼苗时间对试管苗移栽成活率的影响 0070 0071 开瓶是对生根试管苗进行适应性锻炼的过程，适宜的开瓶锻炼时间能够显著的提高生根试管苗栽植成活率。由表 6 可看出，不开瓶炼苗红叶金银木的移栽成活率 0，而打开瓶口 5d，移栽成活率为 53.3，开瓶 3d 的试管苗移栽成活率最高，达 86.6。可见，开瓶 3d 后进行红叶金银木试管苗移栽时最合适。 0072 5.2 红叶金银木试管苗直径对移栽成活率的影响 0073 选择0.3mm、 0.3-0.5mm及0.5-1mm三种规格直径的红叶金银木试管苗移植在蛭石中培养时，成活率见表 7。 0074 表 7 试管苗直径对移栽成。

28、活率的影响 0075 0076 表 7 显示：红叶金银木试管苗直径与移栽成活率成正相关。直径为 0.5-1mm 的红叶金银木试管苗移栽后，不仅生长快，而且有大量根毛生长。因此，在进行红叶金银木试管苗移栽时，选用直径 0.5mm 的红叶金银木能够获得 76.7的成活率。 0077 5.3 移栽时期对红叶金银木试管苗移栽成活率的影响； 0078 2009 年 9 月 10 日、 12 月 12 日， 2010 年 3 月 14 日、 5 月 11 日、 7 月 15 日把红叶金银木试管苗移栽到蛭石基质中培养时，成活率见表 8。说明书 CN 102217542 B 9 8。

29、/8 页 10 0079 表 8 不同移栽时期对试管苗移栽成活率的影响 0080 0081 表 8 显示：在一年中不同时期移栽生根试管苗成活率的大小顺序是 9 月 3 月 12 月 5 月 7 月，红叶金银木试管苗移植的最佳时期为 9 月至次年 5 月，能够获得 73.3 -86.7的成活率， 7 月份移植时成活率最低。苗木移栽成活率与气温、栽培基质、管理措施等密切相关， 9 月至次年 5 月份日光温室内的温度在 10 -30，有利于移栽成活， 7 月份日光温室中的稳定常常达到 35以上，即使采用降温措施，温度也在 30以上，致使成活率不高。 0082 采用上述的试验过程对红叶金银木的繁殖方法的各项适宜参数进行了筛选，所获得的红叶金银木的成活率大于 70，可以大量的采用上述方法进行红叶金银木的繁殖。说明书 CN 102217542 B 10 1/1 页 11 图 1 说明书附图 CN 102217542 B 11 。

摘要
申请专利号：	CN201110134199.3	申请日：	20110523
公开号：	CN102217542B	公开日：	20120905
当前法律状态：		有效性：	失效
法律详情：
IPC分类号：	A01H4/00	主分类号：	A01H4/00
申请人：	北京农业职业学院
发明人：	石进朝,陈兰芬,左利娟,张耀川
地址：	102442 北京市房山区长阳镇稻田南里5号
优先权：	CN201110134199A
专利代理机构：	北京永创新实专利事务所	代理人：	姜荣丽
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内容摘要

本发明公开了一种红叶金银木快速繁殖方法，属于植物快速繁殖技术领域，所述的繁殖方法通过外植体的采集；继代培养；生根培养；练苗培养和大田移栽的步骤流程，获得的红叶金银木具有成苗量多，繁殖系数高的优点，能够在短期内快速繁殖红叶金银木苗木，所述的繁殖方法具有保持红叶金银木红色叶片性状稳定的优点。

权利要求书

1.一种红叶金银木快速繁殖方法，其特征在于包括如下步骤：第一步，外植体的采集；选择在日光温室内生长的红叶金银木新梢半木质化带芽枝段，先用70%的CHOH处理1min，再用HgCl消毒4-5min，无菌蒸馏水进行消毒；第二步，继代培养；将上述的消毒过的红叶金银木新梢半木质化带芽枝段在继代培养基MS+6-BA 0.3mg·L+NAA0.1mg·L培养30天；培养条件为：温度(25±1)℃，光照度2000lx，光照时间12h·d；第三步，生根培养；继代培养30天后，转入生根培养基1/2MS+IBA0.2mg·L上培养30天；第四步，炼苗培养；在生根培养30天后，将生长健壮的试管苗打开瓶口，3天后，选择直径≥0.5mm的红叶金银木试管苗移栽到装有蛭石的育苗盘中进行炼苗培养；第五步，大田移栽；在育苗盘中炼苗培养40～45天后，当育苗盘中苗木高度为25～30cm时，即移植到露地栽培。 2.根据权利要求1所述的一种红叶金银木快速繁殖方法，其特征在于：第四步中红叶金银木试管苗移栽的时期为9月至次年5月，成活率73.3%-86.7%。 3.根据权利要求1所述的一种红叶金银木快速繁殖方法，其特征在于：所述的炼苗培养中，空气湿度保持90%，光照强度5000～10000lx。

说明书

技术领域

本发明属于植物快速繁殖技术领域，具体是指一种红叶金银木快速繁殖的方法。

背景技术

金银木(Lonicera maackii)为忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬属一落叶灌木树种，具有喜光、抗旱、适应性强、管理粗放的特点，在中国北方园林造景中广泛应用。春季观花，秋季观果，全株入药，具有较高的观赏与药用价值，见参考文献【1】：曾令杰，邢俊波，李萍.忍冬科的植物化学分类学研究的初探.中国中药杂志，2003，25(3)：184-187；参考文献【2】：李昉.野生植物金银忍冬营养成分的测定[J].化学与生物工程，2007，24(1)：77-78；参考文献【3】：陈月开. 金银木的黄酮类物质分析[J].山西大学学报：自然科学版，2006，29(3)：305-307。红叶金银木是金银木一自然变异类型，特征是：叶片春季3～4月为红色，5～11月新生叶为红色，老叶渐变为红绿色、暗红色、绿色。连续多年观测红色叶特征具有较强的稳定性，具有较高的观赏价值，为北京地区一乡土彩色树种。

目前对于红叶金银木的繁殖主要采用扦插方法，由于母本数量少，成苗率少，繁殖系数小等因素，限制了这一优良彩色树种——红叶金银木的生产推广。

发明内容

本发明中为了解决现有技术中红叶金银木观赏价值高，但是不易繁殖的问题，提供了一种红叶金银木快速繁殖方法，该繁殖方法为规模化快速推广生产利用这一乡土彩色树种奠定了基础。

本发明提供的红叶金银木快速繁殖方法，在红叶金银木组织培养时，适宜的外植体材料为日光温室内生长的红叶金银木新梢半木质化带芽枝段，诱导出不定芽的发生。先用70％的 C2H5OH处理1min，再用HgCl2消毒4-5min为最好，外植体发芽率最高可达60-63.3％。木质化带芽枝段、成熟叶片、叶柄均不适宜作为外植体的材料。红叶金银木组织培养的不同培养阶段的适宜培养基分别为：继代培养基为MS+6-BA 0.3mg·L-1+NAA0.1mg·L-1，生根培养基为1/2MS+IBA0.2mg·L-1。开瓶炼苗3d后，选用直径≥0.5mm的红叶金银木试管苗移栽，能够获得76.7％的成活率。在一年中不同时期移栽生根试管苗成活率为73.3％-86.7％，红叶金银木试管苗移植的最佳时期为9月至次年5月，7月份移植时成活率最低。所述的繁殖方法具体通过如下步骤流程实现：

第一步，外植体的采集；

选择在日光温室内生长的红叶金银木新梢半木质化带芽枝段，先用70％的C2H5OH处理 1min，再用HgCl2消毒4-5min，无菌蒸馏水进行消毒。

第二步，继代培养；

将上述的消毒过的红叶金银木新梢半木质化带芽枝段在继代培养基MS+6-BA 0.3 mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培养30天。

第三步，生根培养；

继代培养30天后，转入生根培养基1/2MS+IBA0.2mg·L-1上培养。13天后开始长出根芽，经过30天培养，根长达到3.6cm，有6条发达、健壮的根，即可进行炼苗培养移栽。

第四步，练苗培养；

在生根培养30天后，将生长健壮的试管苗打开瓶口，3天后，选择直径≥0.5mm的红叶金银木试管苗移栽到装有蛭石的育苗盘中，能够获得76.7％的成活率。试管苗移栽初期对环境条件特别是水分要求较严格，空气湿度要控制在90％左右，光照强度5000～10000lx，才能保证较高的移栽成活率。

第五步，大田移栽；

日光温室炼苗培养40～45天后，当育苗盘中小苗苗木高度为25～30cm时，即可移植到露地栽培。当年苗木生长高度可达50-70cm。

本发明的优点在于：

(1)本发明具有成苗量多，繁殖系数高的优点，能够在短期内快速繁殖红叶金银木苗木。

(2)本发明具有保持红叶金银木红色叶片性状稳定的优点。

附图说明

图1为本发明的红叶金银木繁殖方法流程图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明提供的红叶金银木快速繁殖方法进行详细说明。

本发明提供一种红叶金银木快速繁殖方法，方法流程如图1所示，具体通过如下步骤实现：

第一步，外植体的采集；

选择在日光温室内生长的红叶金银木新梢半木质化带芽枝段，先用70％的C2H5OH处理 1min，再用HgCl2消毒4-5min，无菌蒸馏水进行消毒。

第二步，继代培养；

将上述的消毒过的红叶金银木新梢半木质化带芽枝段在继代培养基MS+6-BA 0.3 mg·L-1+NAA0.1mg·L-1培养30天。

第三步，生根培养；

继代培养30天后，转入生根培养基1/2MS+IBA0.2mg·L-1上培养。当红叶金银木继代苗长到5～6cm时，转入生根培养基中，13天后开始长出根芽，经过30天生根培养，根长达到 3.6cm，有6条发达、健壮的根，即可进行炼苗移栽。

第四步，练苗培养；

在生根培养30天后，将生长健壮的试管苗打开瓶口，日光温室炼苗培养3天后，选择直径≥0.5mm的红叶金银木试管苗移栽到装有蛭石的育苗盘中，日光温室炼苗培养40～45天，能够获得76.7％的成活率。试管苗移栽初期对环境条件特别是水分要求较严格，空气湿度要控制在90％左右，光照强度5000～10000lx，才能保证较高的移栽成活率。

第五步，大田移栽；

日光温室炼苗培养40～45天后，当育苗盘中小苗苗木高度为25～30cm时，即可移植到露地栽培。当年苗木生长高度可达50-70cm。

对于上述本发明提供的红叶金银木快速繁殖方法，本发明还进行了如下的试验过程，试验过程中得到了红叶金银木繁殖的优选参数，更有利于红叶金银木的繁殖的发展进步，试验过程如下：

一、材料：

为1-5年生红叶金银木(Lonicera maackii‘Hongye’)植株。试验选取红叶金银木木质化带芽枝段、半木质化带芽枝段、带芽幼嫩枝段、叶片、叶柄作为外植体材料。

二、方法：

1.红叶金银木适宜外植体筛选；

在6月份从日光温室的红叶金银木上选取长约1.5cm带一对腋芽的木质化枝段、半木质化带芽枝段、带芽幼嫩枝段、叶片、叶柄5个部位各30个为外植体材料，用流水冲洗材料 2h，将红叶金银木外植体清洗干净。将外植体转入超净工作台，用70％C2H5OH清洗0.5-1min，用无菌水清洗1-2次，用1％的HgCl2清洗4-5min，用无菌水清洗6-7次进行消毒。在MS培养基上进行初代培养，培养条件为：温度(25±1)℃，光照度2000lx，光照时间12h·d-1。30天后，依据发芽率大小确定适宜的外植体。结果见表1。

表1红叶金银木不同外植体材料与初代发芽率的关系

表1显示：红叶金银木木质化带芽枝段、半木质化带芽枝段、带芽幼嫩枝段、叶片、叶柄5个部位中，30天后只有半木质化带芽枝段能够在MS培养基上诱导出腋芽的发生。用红叶金银木木质化带芽枝段作外植体取材部位，全部污染，带芽幼嫩枝段在消毒过程中被杀死，而不发芽。叶片、叶柄虽然污染率较低，但诱导不出腋芽的发生。因此，红叶金银木适宜的外植体材料为半木质化带芽枝段。

2.外植体的消毒试验：

2.1不同消毒方法对外植体发芽率的影响；

在4月份分别从日光温室内及露地培育的红叶金银木植株上选取长约1.5cm半木质化带芽枝段作为外植体材料，用自来流水冲洗材料2h，使得外植体表面清洁。采用0.1％HgCl23-8min、70％C2H5OH 60s+HgCl23-8min不同消毒时间进行消毒，共计设置12个处理。每个处理样品30个。培养条件为：温度(25±1)℃，光照度2000lx，光照时间12h·d-1。结果见表2。

表2不同消毒方法对红叶金银木外植体发芽率的影响

表2显示：在生长期的4月份从日光温室采集的半木质化红叶金银木带芽枝段进行的12 个处理消毒试验，0.1％HgCl2处理4-5min时外植体污染率、杀死率、发芽率分别为26.7％、 23.3-23.6％、46.7-50％，3min处理样本的污染率、杀死率、发芽率分别为100％、0、0，7-8min 时分别为0、100％、0％。以外植体发芽率最高为依据，单独以0.1％HgCl2对外植体消毒时，适宜的消毒时间为4-5min。而如果选择先用70％C2H5OH消毒60s，再用0.1％HgCl2消毒，外植体发芽率最高(60％-63.3％)时的消毒时间为4-5min。可见，从日光温室中采集的外植体适宜的消毒方法是：先用70％C2H5OH处理60s，再用0.1％HgCl2处理4-5min，外植体有较高的发芽率。

而在4月份从露地采集外植体样本，0.1％HgCl2处理6min时外植体发芽率为4％，其余处理样本的发芽率均为0。如果选择先用70％C2H5OH处理60s，在用0.1％HgCl2处理3-8min，外植体发芽率最高(6.7-10％)的消毒时间为4-5min。因此，在露地采集的红叶金银木外植体消毒时，先用70％C2H5OH处理60s，再用0.1％HgCl2处理4-5min为宜。

通过以上试验可看出，以红叶金银木半木质化带芽枝段为外植体的材料时，宜从日光温室内生长的红叶金银木植株上采集，采用70％C2H5OH 60s+0.1％HgCl24-5min对外植体进行消毒处理，能够获得60％-63.3％的发芽率。

2.2不同外植体采集时期对外植体发芽率的影响；

分别在2009年8月12日、10月13日、12月14日，2010年2月11日、4月12日、6 月15日分别从日光温室、露地采集红叶金银木半木质化带芽枝段30个作为外植体，按照70％ C2H5OH 60s+0.1％HgCl24-5min对外植体进行消毒，结果见表3。

表3不同采集时期红叶金银木外植体的发芽率

表3显示：连续一年从日光温室中采集的红叶金银木半木质化带芽枝段发芽率变化在 53.3％-80％之间。而露地样本的发芽率只有6％，且只在早春4月采集时，外植体才有腋芽萌发，其它时期采集的红叶金银木外植体没有腋芽生出，均因污染死亡。这与金银木枝条密生柔毛，露地样本比日光温室样本不易消毒彻底有关。因此，在进行红叶金银木外植体采集时，可在一年四季从日光温室中栽培的植株上采集，能够获得较高的萌芽率。不宜从露地栽培的植株上采集。

3.继代培养基(也叫增殖分化培养基)的筛选：

不同浓度生长调节剂对红叶金银木生长的影响。以MS为增值分化基本培养基，在其中加入不同浓度的6-BA及NAA，每个处理样品30个。当初代苗生长高度达5-6cm时接近瓶盖时，切成2cm的小段转入增殖培养基培养，30d后调查增殖苗的生长高度、节间距大小及生长势3项指标。依此判断适宜的6-BA及NAA添加浓度。结果见表4。

表4不同浓度生长调节物质对红叶金银木试管苗增殖生长的影响

通过在MS基本培养基上，调整不同激素(6-BA、NAA)的浓度能够促进腋芽的生长。表4可以看出：当6-BA为0.3mg·L-1，NAA为0.1mg·L-1时(编号A2)，30d后苗木粗壮，节间距中等，叶色深绿，高生长量大，长势最好。当6-BA为0.2mg·L-1，NAA为0.2mg·L-1时(编号A5)，长势中等，节间距较小，叶色绿。6-BA为0.2mg·L-1，NAA为0.05mg·L-1，苗木生长势弱，高生长量小，节间距小(编号A7)。表明6-BA有利于腋芽增殖与茎增粗生长。从增殖苗生长高度及生长势综合分析，适宜的增殖培养基即继代培养基为 MS+6-BA0.3mg·L-1+NAA0.1mg·L-1。

4.生根培养基的筛选；

以1/2MS为生根基本培养基，在其中加入不同浓度的IBA及NAA，每个处理样品30个。将继代苗接种进行生根培养，30d后调查各处理的试管苗的生根时间、平均生根数量、生根长度、根生长势，依此判断适宜的IBA及NAA添加浓度。结果见表5。

表5不同浓度生长素对试管苗生根的影响

通过对6种生根培养基在生根时间、生根数量、根生长量及生长势的综合分析，IBA浓度为0.2mg·L-1，开始生根时间为13d，平均根数6条，平均根长最大(为3.6cm)，比IBA浓度为1.0mg·L-1、0.5mg·L-1对红叶金银木试管苗生根好。编号B6 NAA浓度为0.2mg·L-1时，根生长量最小，为1.5cm，生长势弱，不利于移栽成活。当NAA增至0.5mg·L-1时，生根变得细长了。IBA、NAA能够显著的促进生根，受研究材料本身内源激素水平的影响，其适宜的生根浓度水平不一。表5显示，红叶金银木试管苗适宜的生根培养基为： 1/2MS+IBA0.2mg·L-1。

5.炼苗与移栽；

当红叶金银木生根试管苗生长高达5-6cm，有4-5对正常叶片时，进行开瓶时间(0-5d)、不同直径苗(＜0.3mm、0.3-0.5mm、0.5-1mm)移栽及不同时期移栽试验。以栽植成活率确定适宜的开瓶炼苗时间、适宜的生根苗栽植直径及栽植时期。

5.1开瓶炼苗时间对试管苗移栽成活率的影响；

试验中设计开瓶炼苗0、3d、5d后移栽，依据移栽成活率，确定开瓶炼苗的适宜时间，结果见表6。

表6开瓶炼苗时间对试管苗移栽成活率的影响

开瓶是对生根试管苗进行适应性锻炼的过程，适宜的开瓶锻炼时间能够显著的提高生根试管苗栽植成活率。由表6可看出，不开瓶炼苗红叶金银木的移栽成活率0，而打开瓶口5d，移栽成活率为53.3％，开瓶3d的试管苗移栽成活率最高，达86.6％。可见，开瓶3d后进行红叶金银木试管苗移栽时最合适。

5.2红叶金银木试管苗直径对移栽成活率的影响

选择＜0.3mm、0.3-0.5mm及0.5-1mm三种规格直径的红叶金银木试管苗移植在蛭石中培养时，成活率见表7。

表7试管苗直径对移栽成活率的影响

表7显示：红叶金银木试管苗直径与移栽成活率成正相关。直径为0.5-1mm的红叶金银木试管苗移栽后，不仅生长快，而且有大量根毛生长。因此，在进行红叶金银木试管苗移栽时，选用直径≥0.5mm的红叶金银木能够获得76.7％的成活率。

5.3移栽时期对红叶金银木试管苗移栽成活率的影响；

2009年9月10日、12月12日，2010年3月14日、5月11日、7月15日把红叶金银木试管苗移栽到蛭石基质中培养时，成活率见表8。

表8不同移栽时期对试管苗移栽成活率的影响

表8显示：在一年中不同时期移栽生根试管苗成活率的大小顺序是9月＞3月＞12月＞5 月＞7月，红叶金银木试管苗移植的最佳时期为9月至次年5月，能够获得73.3％-86.7％的成活率，7月份移植时成活率最低。苗木移栽成活率与气温、栽培基质、管理措施等密切相关， 9月至次年5月份日光温室内的温度在10℃-30℃，有利于移栽成活，7月份日光温室中的稳定常常达到35℃以上，即使采用降温措施，温度也在30℃以上，致使成活率不高。

采用上述的试验过程对红叶金银木的繁殖方法的各项适宜参数进行了筛选，所获得的红叶金银木的成活率大于70％，可以大量的采用上述方法进行红叶金银木的繁殖。